体外诱导兔骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化

目的 探讨体外成骨诱导的兔骨髓间充质干细胞(BMSCs)的形态和功能特征.方法 体外培养获取生长状态良好的兔BMSCs,进行成骨诱导,观察并检测成骨细胞的生物学特性.结果 BMSCs可在成骨条件培养液下诱导为成骨细胞.经鉴定,碱性磷酸酶和矿化结节染色阳性,激光共聚焦显微镜下成骨细胞鬼笔环肽显示骨架F-actin为红色荧光.结论 BMSCs在体外可定向诱导为成骨细胞,有希望成为理想的种子细胞应用于临床.     

柚皮苷对兔骨髓间充质干细胞分化为成骨细胞的影响

目的观察柚皮苷(骨碎补的有效成分)对兔骨髓间充质干细胞(BMSCs)分化为成骨细胞的影响。方法将体外培养的兔BMSCs分为对照组(标准培养液)、柚皮苷组(不同浓度柚皮苷+标准培养液)、普通组(地塞米松10-8mol/L+β-甘油磷酸钠10 mmol/L+维生素C 50μg/L+标准培养液)和联合组(不同浓度柚皮苷+普通组)。倒置相差显微镜观察生长情况,MTT法检测不同浓度柚皮苷对兔BMSCs增殖的影响;扫描电镜、茜素红染色法和von Kossa银染色法观察各组细胞钙化情况。结果柚皮苷10-5mmol/L明显促进兔BMSCs增殖。培养3周后,联合组钙结节增多、钙化面积扩大最明显,柚皮苷组可见钙结节;对照组未见钙化。结论柚皮苷可促进兔BMSCs向成骨细胞分化。     

咯利普兰在骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化中的作用

目的 研究咯利普兰在体外骨髓间充质干细胞向成骨细胞诱导分化过程中的作用.方法 体外分离培养小鼠股骨骨髓间充质干细胞,随机分为咯利普兰10 μmol/L组(A组)和对照组(B组).骨髓间充质干细胞向成骨诱导分化后,检测碱性磷酸酶(ALP)活性;Western blot检测Runx2和骨钙素表达;茜素红染色观察钙结节形成情况.结果 与B组相比,A组ALP活性及Runx2、骨钙素表达均增加(P＜0.01或P＜0.05),钙结节形成更加明显.结论 咯利普兰能提高体外骨髓间充质干细胞向成骨细胞诱导分化的能力.     

诱导人骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化

目的探讨人骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)向成骨细胞诱导分化的能力。方法选用不同代次的MSCs,使用条件培养基,观察细胞的形态变化,采用细胞化学和免疫组化的方法检测碱性磷酸酶、钙盐沉积及Ⅰ型胶原的表达。结果MSCs在条件培养基中,15d后可见细胞变为多边形,碱性磷酸酶和Ⅰ型胶原染色阳性,形成钙结节,表现成骨细胞分化特点。结论在一定培养条件下成功诱导人MSCs向成骨细胞分化。在骨组织工程学方面MSCs作为种子细胞具有潜在的应用价值。     

骨髓间充质干细胞的分离、培养及生物学特性

目的 探讨大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)的体外分离培养方法并鉴定其生物学特性.方法 采用全骨髓贴壁细胞培养法进行BMSCs的分离培养,倒置相差显微镜下观察细胞形态及生长特性,绘制细胞生长曲线,并检测细胞在不同诱导条件下向成脂肪细胞和成骨细胞分化的能力.结果 原代大鼠BMSCs培养24 h后镜下观察大部分细胞已经贴壁,传至第三代,细胞形态均一,呈梭形、螺旋样排列.经过约2 d的适应期,3～7 d进入对数生长期,7 d后进入平台期;成骨细胞诱导18 d,茜素红染色可见明显钙结节,成脂肪细胞诱导2周后油红O染色可见明显脂质沉淀.结论 全骨髓贴壁细胞培养法操作简单、快速,可以获取形态均一、纯度较高的BMSCs.     

成人骨髓间充质干细胞多向分化潜能特性

目的 探讨体外不同诱导条件下成人骨髓间充质干细胞(MSCs)向成骨细胞、脂肪细胞分化的能力.方法 采用地塞米松、胰岛素、β-磷酸甘油、抗坏血酸等诱导培养液对体外分离培养的成人骨髓MSCs进行成骨细胞及脂肪细胞的定向诱导并进行鉴定.结果 成人骨髓MSCs向成骨细胞诱导后可见钙盐分泌,茜素S与钙盐结合成红色,四环素标记后可见到黄色发光的钙化结节;而向脂肪细胞诱导后则可见含有多量脂滴的脂肪细胞,苏丹Ⅳ染色脂滴呈红色,苏木精染色细胞核呈蓝色.结论 成人骨髓MSCs在体外一定条件下可以诱导分化为成骨细胞和脂肪细胞,具有多向分化潜能.     

大鼠骨髓间充质干细胞的体外分离与培养

目的 建立体外分离纯化及培养扩增大鼠骨髓间充质干细胞的方法.方法 应用全骨髓贴壁培养法分离培养大鼠骨髓间充质干细胞,并进行细胞传代培养.倒置显微镜下观察细胞形态及生长特征,测定细胞生长曲线,通过流式细胞仪检测细胞表面标志物,取第3代细胞分别加入成骨、成脂诱导剂并采用碱性磷酸酶染色及Von Kossa染色鉴定成骨能力,以油红O染色鉴定成脂能力.结果 获取的大鼠骨髓间充质干细胞形态呈均一成纤维细胞样,并呈集落样生长.传至第3代细胞纯度可达97%以上,其细胞表型CD29、CD44、CD105、CD166呈阳性表达,CD34、CD80、CD86呈阴性表达.经成骨诱导后细胞碱性磷酸酶染色及Von Kossa染色呈阳性,成脂诱导后细胞油红O染色呈现阳性.结论 应用全骨髓贴壁法可以分离培养出高纯度的大鼠bMSCs,培养的细胞扩增迅速、生物学特性稳定,是一种较为理想的体外分离扩增bMSCs的培养体系.     

兔骨髓间充质干细胞诱导分化为成骨细胞的实验研究

目的 探讨兔骨髓间充质干细胞(MSCs)体外培养、定向诱导分化为成骨细胞的途径.方法 抽取兔骨髓,以全骨髓贴壁培养法进行体外培养,贴壁细胞传代.取第3代细胞诱导培养,倒置显微镜下观察细胞形态.培养16 d后,用5-溴-4-氯-3-吲哚磷酸盐(BCIP)/氯化硝基四氮唑蓝(NBT)底物显色试剂检测碱性磷酸酶(AP),茜素红染色检测钙结节.结果 全骨髓贴壁培养法可获得MSCs,原代和传代培养的MSCs具有活跃的增殖能力.诱导培养后,AP检测与钙结节染色均为强阳性.结论 兔骨髓中培养出的MSCs可以定向分化为成骨细胞,可用作骨组织工程中的种子细胞.     

骨髓间充质干细胞对胶质瘤C6细胞增殖的影响

目的探讨大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)对胶质瘤C6细胞体外增殖的影响。方法从大鼠骨髓中分离MSCs,体外培养和鉴定。取MSCs培养上清液,按照1/5,2/5,3/5的比例加入到C6培养基中,用MTT实验和BrdU标记指数(BrdU LI)评估C6细胞增殖。将MSCs与C6按照1∶1,1∶2,2∶1比例共培养。结果大鼠MSCs贴壁生长,有较强的增殖能力。经硫代甘油和巯基乙醇诱导分化后,分化为神经元或胶质细胞样细胞。C6培养基中加入MSCs培养上清液后,活性受到明显抑制,BrdU LI明显减低(P<0.05)。C6与MSCs共培养后,生长明显受到抑制,BrdU LI明显降低,尤其在MSCs周围,表现更加明显。结论大鼠MSCs在体外有明显的抑制胶质瘤C6增殖作用。     

骨髓间充质干细胞治疗心肌梗死的研究进展

<正>心肌梗死(myocardial infarction,MI)是指心肌的缺血性坏死,已成为当今社会严重威胁人类健康的疾病之一。尽管临床上保守的药物治疗、经皮冠状动脉介入治疗(PCI)和外科冠状动脉旁路移植手术等治疗方法的不断提高,但都无法逆转梗死期坏的心肌坏死。     

骨髓间充质干细胞对与平滑肌细胞共培养体系中细胞增殖和自身分化的影响

目的探讨骨髓间充质干细胞（marrow mesenchymal stem cells,MSCs）对联合培养细胞增殖及自身表达平滑肌肌动蛋白（smooth muscle alpha—aetin,α-actin SM）的影响。方法建立MSCs与平滑肌细胞（smooth muscle cells,SMCs）直接共培养体系,对MSCs与SMCs直接共培养组和单纯SMCs组及MSCs组在不同时间点细胞计数。对共培养组和单纯MSCs组行4’6’－二乙酰基－2－苯基吲哚（DAPI）（5ng／ml）标记,利用抗α—actin SM荧光抗体,检测2组MSCs胞浆内-aetin SM表达。结果共培养组细胞计数较单独SMCs培养组明显减少,以第4天为著（P〈0．01）,与SMCs共培养5d,MSCs在共培养组较单纯MSCs组表达α-actin SM阳性率明显降低（P〈0．05）。结论在无干预因素情况下,MSCs与SMCs直接共培养明显抑制共培养体系中细胞增殖,且抑制MSCs表达仪-α ctin SM。     

瑞舒伐他汀对猪骨髓间充质干细胞增殖、凋亡及分泌功能的影响

目的观察不同浓度的瑞舒伐他汀在体外水平对猪骨髓间充质干细胞(BMSCs)增殖、凋亡及细胞分泌功能的影响。方法分离培养猪BMSCs,取第3代细胞随机分为对照组和不同浓度瑞舒伐他汀(0.001、0.01、0.1、1.0μmol/L)干预组。MTT比色法检测各组细胞增殖情况,膜联蛋白V-异硫氰酸荧光素/碘化丙啶(Annexin V-FITC/PI)流式细胞术检测各组抗凋亡情况,ELISA法测定细胞上清液中血管内皮生长因子(VEGF)和碱性成纤维生长因子(bFGF)含量。结果与对照组相比,瑞舒伐他汀在一定浓度范围内(0.001～0.1μmol/L)可促进BMSCs增殖,抑制其凋亡,在0.01～1.0μmol/L内增加BMSCs VEGF和bFGF的分泌(P<0.05);当瑞舒伐他汀浓度升高至1.0μmol/L时则未见促增殖和抑制凋亡的作用(P>0.05)。结论瑞舒伐他汀在一定浓度范围内可促进猪BMSCs增殖,抑制其凋亡,并对VEGF和bFGF的分泌有促进作用。     

葛根素对脐带间质干细胞增殖与成骨分化的作用

葛根素是从豆科植物野葛的干燥根中提取的一种异黄酮类化合物[1]。已广泛应用于临床,可治疗多种疾病,如冠心病、心绞痛、心肌梗死等[2?4]。文献报道葛根素能够促进大鼠成骨细胞增殖,抑制破骨细胞的骨吸收活性,且能够促进大鼠骨髓间质干细胞     

毛冬青甲素对大鼠骨髓间充质干细胞增殖及迁移的影响

目的观察毛冬青甲素(ilexonin A,IA)对大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)增殖的影响,并探讨IA是否通过上调CXCR4的表达促进大鼠BMSCs迁移。方法采用MTT比色法检测IA(3.125、6.25、12.5、25、50、100、200、400、800 mg·L^-1)预处理BMSCs 24、48、72 h,观察对BMSCs增殖的影响,确定最佳药物浓度和最佳作用时间。用最佳浓度的IA干预第3代BMSCs 48 h,Transwell检测BMSCs迁移能力,Western blot法检测CXCR4的表达水平。结果 MTT结果显示,IA孵育BMSCs 24、48 h,与对照组相比,100~800 mg·L^-1组的细胞增殖明显减少(P<0.05);IA孵育BMSCs 48h,与对照组相比,6.25、3.125 mg·L^-1组细胞增殖明显增加(P<0.05);IA孵育BMSCs 72 h,与对照组相比,12.5~800mg·L^-1组细胞增殖明显减少(P<0.05),提示IA 6.25、3.125 mg·L^-1剂量组于48 h预处理BMSCs是最优选择。Transwell细胞迁移实验表明,IA(6.25、3.125 mg·L^-1)预处理BMSCs 48 h明显增强BMSCs运动迁移能力(P<0.05),且迁移与IA浓度无关,CXCR4拮抗剂AMD3100可完全阻断其促迁移效应。Western blot显示,IA(6.25、3.125 mg·L^-1)预处理BMSCs 48 h,上调CXCR4蛋白表达(P<0.05)。结论 IA可以促进BMSCs的增殖,并通过上调CXCR4的表达,提高BMSCs的迁移能力。     

氟伐他汀调控 Sirt3对过氧化氢诱导的骨髓间充质干细胞增殖凋亡的影响

目的 探讨氟伐他汀对过氧化氢诱导的骨髓间充质干细胞(BMSCs)增殖凋亡的影响及作用机制.方法 用400μmol/L的过氧化氢处理BMSCs作为模型组;BMSCs用400μmol/L的过氧化氢培养的同时分别加入0.01、0.1、1μmol/L氟伐他汀作为干预组;未添加任何物质正常培养的细胞作为正常组;将si-NC、si-Sirt3转染至BMSCs中再用400μmol/L的过氧化氢、0.1μmol/L氟伐他汀处理作为干预组2+si-NC组、干预组2+si-Sirt3组.蛋白质印迹(Western Blotting)法检测Sirt3蛋白表达水平;四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)检测细胞存活率;流式细胞术检测细胞凋亡.结果 与正常组相比,模型组BMSCs细胞存活率降低[(41.57±4.32)％比(100.40±10.23)％],细胞凋亡率升高[(38.57±4.04)％比(8.28±0.92)％],Sirt3表达水平降低[(0.31±0.03)比(1.01±0.10)],均差异有统计学意义(P<0.05);与模型组相比,氟伐他汀干预组细胞存活率明显升高细胞凋亡率降低,Sirt3表达水平升高,均差异有统计学意义(P<0.05).提示抑制Sirt3能逆转氟伐他汀对过氧化氢诱导的BMSCs细胞增殖抑制和凋亡促进作用.结论 氟伐他汀能抑制过氧化氢诱导的BMSCs细胞凋亡,其机制可能与上调Sirt3有关.     

间充质干细胞的体内生物分布及其成药性研究进展

间充质干细胞（MSCs）是一类来源于中胚层的多能干细胞,具有多向分化潜能、促进干细胞植入、造血支持、免疫调控及自我复制的生物学特性,是干细胞家族重要成员。由于其免疫调节、血管再生、组织修复等作用,MSCs已逐渐成为多项治疗领域的研究热点之一,并在自身免疫性疾病、组织损伤以及各种替代治疗领域成为一种非常有潜力、有前景的治疗药物。当机体组织损伤或发生炎性细胞浸润时,外源性给予的MSCs进入机体后可归巢至病变部位,并与体内的多种细胞发生相互作用,恢复机体正常生理功能、维持机体微环境稳态,修复病变组织器官。通过综述MSCs进入体内后的分布、归巢特性及相关影响因素、体内外检测方法及其作为药物开发的成药性研究进展,为干细胞从医疗技术转化为药物提供指导。