中药黄芩苷对人牙周膜成纤维细胞保护作用的实验研究

目的研究中药黄芩有效成分黄芩苷对脂多糖（LPS）抑制人牙周膜成纤维细胞（HPLFs）活性及对LPS损伤HPLFs超微结构的影响，并初步探讨其可能的作用机理。方法采用原代培养人牙周膜成纤维细胞技术、四唑盐（MTT）比色试验和透射电子显微镜技术（TEM）。结果LPS浓度为100μg／ml时明显抑制细胞活性，同时加入LPS和黄芩苷后，细胞活性明显增强（P〈0．05）。100μg／ml LPS对HPLFs各超微结构均有不同程度的损伤，特别是线粒体损伤严重，同时加入LPS扣黄芩苷（10μg／ml）后，与LPS组比较，超微结构损伤减轻，细胞器结构表现也较正常。结论中药黄芩苷能显著促进成纤维细胞的增殖，对LPS抑制HPLFs活性和LPS损伤HPLFs超微结构具有保护作用，其作用机制可能与降解LPS及作用于细胞膜表面阻止LPS进入细胞内部有关。     

高糖状态对脂多糖诱导人牙龈上皮细胞表达炎症因子的影响

目的：研究高糖状态对脂多糖（lipopolysaccharide,LPS）诱导人牙龈上皮细胞（humangingivalepithelial cells,HGECs）表达炎症因子的影响。方法原代培养HGECs,取第3代细胞分别在含5．5 mmol／L D－葡萄糖（对照组）、含25 mmol／L D－葡萄糖（高糖组）培养基中培养48 h后,加入0μg／mL、1μg／mL、5μg／mL和10μg／mL的LPS,2 h、4 h和8 h时荧光定量逆转录聚合酶链反应检测炎症因子白细胞介素－6（interleukin-6, IL-6）、白细胞介素－8（interleukin-8,IL-8）、白细胞介素－1β（interleukin-1,IL-1β）的mRNA表达,ELISA法检测细胞培养上清液中IL-8的表达。结果在5μg／mL LPS 刺激8 h 后,高糖组和对照组 HGECs 炎症因子转录水平 IL-6分别为13．20±0．84和8．85±0．53（t＝7．60,P＝0．002）,IL-8分别为14．88±1．54和8．12±0．46（t＝7．281,P＝0．002）, IL-1β分别为1．69±0．19和1．27±0．11（t＝3．348,P＝0．029）,两组比较差异均具有统计学意义（P＜0．05）;两组细胞培养上清液中IL-8的表达分别为（134．0±10．8） pg／mL和（103．0±11．0） pg／mL,差异具有统计学意义（t＝3．480,P＝0．025）。结论高糖状态可增强LPS诱导HGECs炎症因子IL-6、IL-8、IL-1β的表达。     

红芪多糖对人牙周膜细胞增殖及分泌IL－1β、IL－6的影响

目的：研究红芪多糖（HPS）对人牙周膜细胞（hPDLCs）增殖及分泌IL－1β、IL－6的影响。方法：采用改良组织块酶消化法培养人牙周膜细胞,经免疫组化SP法进行鉴定,MTT法检测细胞增殖情况,荧光实时定量PCR和酶联免疫法检测红芪多糖对LPS作用的hPDLCs分泌IL－1β、IL－6的影响。结果：10μg／mL HPS能够促进人牙周膜细胞增殖（P＜0．05）;10μg／mL LPS可显著刺激人牙周膜细胞分泌IL－1β、IL－6（P＜0．01）,而给予10μg／mL HPS能抑制LPS刺激人牙周膜细胞分泌IL－1β、IL－6,且与LPS组具有显著性差异（P＜0．01）。结论：适宜浓度的红芪多糖能够促进体外培养的人牙周膜细胞增殖,并抑制LPS作用的人牙周膜细胞分泌IL－1β、IL－6。     

TGF-β1对老年人牙周膜细胞分化功能的影响

目的：探讨转化生长因子-β1（TGF-β1）对老年人牙周膜细胞碱性磷酸酶活性和骨钙素分泌的影响。方法：将不同浓度的TGF-β1（0．5μg／L，1μg／L，2μg／L）与体外培养的老年人牙周膜细胞-同培养后，采用酶动力学方法和放射免疫法检测碱性磷酸酶活性和骨钙素分泌水平，并与青年人牙周膜细胞进行比较。结果：①在老年组，TGF-β1各浓度组细胞裂解液和培养液中碱性磷酸酶活性均明显高于对照组（P〈0．05，P〈0．01）。老年组和青年组差值比较，除TGF-β1（0．5μg／L）组细胞培养液外，无论是细胞裂解液还是培养液中碱性磷酸酶活性青年组均明显高于老年组（P〈0．05，P〈0．01）。②在老年组，只有7d时的TGF—β1（0．5μg／L）组骨钙素分泌高于对照组（P〈0．05）；在青年组，7d时各组和21d时TGF—β1（1μg／L）组骨钙素分泌均明显高于对照组（P〈0．05，P〈0．01）。老年组和青年组差值比较，7d时TGF-β1（1μg／L）、（2μg／L）组和21d时的TGF-β1（0．5μg／L）、（1μg／L）组骨钙素分泌青年组明显高于老年组。结论：合适浓度的TGF-β1不仅可以促进青年人而且可以促进老年人牙周膜细胞向成骨样细胞转化，增强其成骨能力；其对青年人牙周膜细胞的作用强于老年人。     

盐酸米诺环素对脂多糖诱导人牙周膜成纤维细胞白细胞介素-1β mRNA 表达的影响

目的研究盐酸米诺环素对内毒素脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)作用下人牙周膜成纤维细胞白细胞介素-1β(interleukin 1β,IL-1β)mRNA表达的影响。方法培养人牙周膜成纤维细胞,实验分为5组:对照组(未加药品)、模型组(加入10μg/mL LPS)、低剂量干预组(加入10μg/mL LPS和50μg/mL盐酸米诺环素)、中剂量干预组(加入10μg/mL LPS和100μg/mL盐酸米诺环素)、高剂量干预组(加入10μg/mL LPS和200μg/mL盐酸米诺环素)。实时荧光定量PCR检测盐酸米诺环素对LPS作用下人牙周膜成纤维细胞IL-1βmRNA表达的影响。结果 IL-1βmRNA相对表达量:模型组高于对照组,对照组高于3个剂量干预组,其差异均有统计学意义(P<0.01);但高剂量干预组、中剂量干预组、低剂量干预组3组间的相对表达量,组间比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论盐酸米诺环素能够降低LPS作用下人牙周膜成纤维细胞IL-1βmRNA的表达,这可能是盐酸米诺环素治疗牙周炎的作用机制之一;本研究未发现盐酸米诺环素对LPS作用下人牙周膜成纤维细胞IL-1βmRNA表达的干预作用与药物剂量之间存在正相关关系。     

中药黄芩苷对脂多糖刺激人牙周膜成纤维细胞分泌肿瘤坏死因子-α的影响

目的研究中药黄芩苷对脂多糖（LPS）刺激人牙周膜成纤维细胞（HPLFs）分泌肿瘤坏死因子-α（TNF-α）的影响。方法采用原代培养HPLFs技术和酶联免疫检测方法（ELISA），检测培养上清液中TNF-α的水平。结果0．001～10μg／ml黄芩苷和2μg／ml地塞米松均可显著抑制LPS刺激HPLFs分泌TNF-α的活性（P〈0．01），而不同浓度组之间比较，抑制作用无显著性差异（P〉0．05）。结论黄芩苷对LPS刺激HPLFs合成和分泌TNF-α有显著抑制作用，与地塞米松抗炎效果相近，作用机制与抑制TNF-α等炎性细胞因子过度产生有关，揭示了黄芩苷可能的抗炎作用机制。     

茶多酚对脂多糖诱导人牙周膜成纤维细胞凋亡及炎症因子的影响

目的:探讨茶多酚对脂多糖(LPS)诱导人牙周膜成纤维细胞(HPDLFs)凋亡及肿瘤坏死因子-α-(TNF-α)、白介素6(IL-6)分泌的影响。方法:体外培养HPDLFs,MTT法筛选茶多酚浓度梯度,再分别用LPS(1μg/ml)和LPS(1μg/m1)+茶多酚(10μg/ml、50μg/ml、100μg/ml)刺激HPDLFs,流式细胞仪检测细胞凋亡,Elisa法检测TNF一α、IL-6分泌。结果:LPS可显著诱导HPDLFs凋亡,上调TNF一α、IL-6表达。茶多酚可显著降低LPS诱导的细胞凋亡和TNF-α、IL-6表达,且呈量效依赖性。结论:茶多酚可通过有效降低LPS诱导的细胞凋亡和TNF一α、IL-6表达。     

乳铁蛋白对人牙周膜细胞增殖迁移分化的影响

目的：观察乳铁蛋白（lactoferrin,LF）对体外培养的人牙周膜细胞（HPDLCs）增殖、迁移和成骨分化的影响。方法：原代培养并鉴定人牙周膜细胞,稳定传代后用 MTT 比色法、Transwell 法及划痕试验检测浓度分别为0、10、20μg／ml 的乳铁蛋白对牙周膜细胞增殖和迁移的影响;矿化条件下,0、10、20μg／ml 的乳铁蛋白作用牙周膜细胞后,茜素红染色法和实时荧光定量 PCR 检测矿化能力及成骨相关基因的表达。结果：10、20μg／ml 乳铁蛋白均能促进 HPDLCs 增殖、迁移（P ＜0．05）。10、20μg／ml 乳铁蛋白组矿化结节数量增多（P ＜0．05）,碱性磷酸酶（ALP）、骨钙蛋白（OCN）、骨桥蛋白（OPN）表达量均有升高（P ＜0．05）。结论：乳铁蛋白能够促进人牙周膜细胞增殖、迁移与成骨分化。     

������ŵ���ض�֬����������������Ĥ����άϸ��IL-6 mRNA���Ӱ���о�

目的研究盐酸米诺环素对脂多糖（LPS）作用下人牙周膜成纤维细胞（HPDLF）的白细胞介素-6（IL-6）mRNA表达的影响。方法本研究于2011年10月至2012年2月在井冈山大学医学院重点实验室进行。培养HPDLF并分为以下5组：对照组（未加药）、高剂量组（0．01g／LLPS＋0．2班盐酸米诺环素）、低剂量组（0．0lg／LLPS＋0．05g/L盐酸米诺环素）、中剂量组（0．01g／LLPS＋0．1g／L盐酸米诺环素）、模型组（0．0lg／LLPS）,每组均复种3孔。实时荧光定量PCR检测各组HPDLF中的IL-6mRNA表达情况。结果对照组、高剂量组、低剂量组、中剂量组、模型组的IL-6mRNA相对表达量分别为：0．61±0．08、0．62±0．10、0．88±0．17、0．49±0．21、1．88±0．07。模型组IL-6mRNA的相对表达量高于对照组、高剂量组、低剂量组、中剂量组,且差异有统计学意义（P〈0．01）。对照组及低、中、高剂量组的IL-6mRNA相对表达量两两比较,差异均无统计学意义（P〉0．05）。结论盐酸米诺环素能够降低LPS作用下HPDLF中的IL-6mRNA的表达,这可能是盐酸米诺环素治疗牙周炙的作用机制之一。     

茶多酚对炎性牙周膜细胞生物活性的影响

目的观察茶多酚对内毒素脂多糖(LPS)作用的人牙周膜细胞增殖和碱性磷酸酶活性的影响,为茶多酚在牙周疾病的防治中提供一定依据。方法体外培养人牙周膜细胞,采用MTT比色法观察茶多酚对LPS作用的人牙周膜细胞增殖活性的影响,通过碱性磷酸酶(ALP)活性测定法观察茶多酚对人牙周膜细胞的分化作用。结果100μg/ml LPS可抑制人牙周膜细胞的增殖活性和碱性磷酸酶活性。加入LPS同时分别给予50～1100μg/ml不同浓度茶多酚,能对抗LPS的抑制作用,增强人牙周膜细胞的增殖活性和碱性磷酸酶活性,其中在800μg/ml作用24h时促进作用达到最强。结论茶多酚可对抗内毒素对人牙周膜细胞的毒性作用,促进细胞的增殖和骨向分化。     

釉基质蛋白对牙周细胞覆盖体外创面的影响

目的：评价体外创面模型环境中,釉基质蛋白对牙周膜细胞、牙龈成纤维细胞覆盖创面能力的影响。方法：利用在盖玻片上形成的人牙周膜和牙龈成纤维细胞的融合培养物,以机械方法去除7mm宽的细胞层条带,形成体外创面模型。受损培养物在含有10％胎牛血清的培养液中继续培养2、6、9d,同时以100μg／ml的釉基质蛋白分别刺激牙周膜、牙龈成纤维细胞,并与不加釉基质蛋白者作对照。玻片经同定后作甲紫染色。以计算机辅助图像分析系统对细胞覆盖体外创面的面积进行百分比定量,采用SAS6、12软件包进行样本均数的t检验。结果：对照组组内牙周膜、牙龈成纤维细胞覆盖创面的面积存在差异,牙龈成纤维细胞覆盖创面面积在创面形成后第9天显著高于牙周膜细胞,差异有显著性（P〈0.05）。在加用100μg／ml釉基质蛋白的条件下,牙周膜细胞覆盖体外创面的面积较对照组明显增加．创面形成后第6、9天,牙周膜、牙龈成纤维细胞覆盖体外创面面积均无显著差异（P〉0．05）。结论：牙龈成纤维细胞覆盖创面的能力高于牙周膜细胞。釉基质蛋白有增进创面愈合,特别是牙周膜细胞创面覆盖的作用。     

罗红霉素对人牙周膜成纤维细胞TNF-α、IL-6释放的影响

目的:探讨罗红霉素对脂多糖诱导的人牙周膜成纤维细胞肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)释放的影响。方法:采用ELISA方法,检测在不同剂量的罗红霉素作用下,脂多糖诱导的人牙周膜细胞中IL-6、TNF-α释放的变化。结果:LPS刺激后人牙周膜细胞TNF-α的释放显著高于正常对照组(360 pg/m l vs 80 pg/m l,3 h,P<0.05)。与L组相比,罗红霉素组(20μg/m l)TNF-α水平12 h显著降低,3~6 h与L组无明显差异,而12 h(520 pg/m l vs 710 pg/m l)、24 h(220 pg/m l vs 680 pg/m l)显著降低(P<0.05)。LPS组IL-6水平显著高于正常对照组(360 pg/m l vs 105 pg/m l,P<0.05),罗红霉素组(20μg/m l)IL-6分泌量在6 h(420 pg/m l vs 670 pg/m l)、12 h(590 pg/m l vs 810 pg/m l)和24 h(340 pg/m l vs 630 pg/m l)较L组均显著降低(P<0.05)。结论:罗红霉素能显著抑制LPS刺激后人牙周膜细胞IL-6、TNF-α的释放。     

LPS对人牙周膜细胞Toll样受体4及下游炎症因子表达的影响

目的：观察革兰氏阴性菌外膜成分脂多糖（LPS）对牙周膜细胞（PDLCs）Toll样受体4（TLR4）及下游炎症因子表达的影响。方法：用浓度为10μg／mL的LPS对牙周膜细胞进行刺激,Western Blot检测牙周膜细胞上TLR4受体表达,同时ELISA检测培养基上清中炎症因子TNF－α、IL－1β的含量。结果：加入LPS后,牙周膜细胞上TLR4蛋白表达增强,炎症因子TNF－α、IL－1β含量增多,且随LPS的刺激时间增加而呈上升趋势。结论：LPS促进PDLCs的TLR4表达,并导致炎症因子分泌增加,TLR4信号通路在牙周炎发病过程中具有重要作用。     

甲壳胺对老年人牙周膜细胞分化功能的影响

目的：探讨甲壳胺（Chi）对老年人牙周膜细胞碱性磷酸酶活性和骨钙素分泌的影响。方法：将不同浓度的Chi（0．05g／L，0．1g／L，0．2g／L）分别与体外培养的老年人牙周膜细胞一同培养后，采用酶动力学方法和放射免疫法检测老年人牙周膜细胞碱性磷酸酶活性和骨钙素分泌水平，并与青年人牙周膜细胞进行比较。结果：①在老年组，Chi（0．05g／L）组细胞裂解液中和Chi（0．1g／L）及Chi（0．2g／L）组细胞培养液中碱性磷酸酶活性明显高于对照组（P〈0．05，P〈0．01）。老年组和青年组差值比较，甲壳胺各组无论是细胞裂解液还是培养液中碱性磷酸酶活性青年组均明显高于老年组（P〈0．05，P〈0．01）。②在老年组，只有21d时的Chi（0．1g／L）组、Chi（0．2g／L）组骨钙素分泌高于对照组（P〈0．05）。在青年组，7d时Chi（0．05g／L）和Chi（0．1g／L）组、14d时Chi（0．1g／L）组及21d时Chi（0．1g／L）组骨钙素分泌均明显强于对照组（P〈0．05，P〈0．01）。老年组和青年组差值比较，7d和21d时Chi（0．05g／L）、（0．1g／L）组骨钙素分泌青年组明显高于老年组。结论：一定浓度的甲壳胺不论对青年人还是老年人的牙周膜细胞向成骨样细胞转化和成骨能力均有明显的增强作用，对青年人牙周膜细胞的作用程度强于老年人。     

2-羟丙基三甲基氯化铵脱乙酰壳多糖和碱性成纤维细胞生长因子对白细胞介素-1β和肿瘤坏死因子-α的影响

目的观察在脂多糖（LPS）刺激下,2-羟丙基三甲基氯化铵脱乙酰壳多糖（HTCC）和碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）对人牙周膜成纤维细胞（hPDLF）分泌白细胞介素（IL）-1β和肿瘤坏死因子（TNF）-α的影响。方法在50mg&#183;L-1的LPS刺激下,采用酶联免疫吸附测定观察质量浓度为1g&#183;L-1的HTCC和100μg&#183;L-1的bFGF对50mg&#183;L-1的LPS刺激hPDLF分别于24、48和72h分泌IL-1β和TNF-α的质量浓度变化。结果1g&#183;L-1的HTCC具有促进LPS刺激hPDLF分泌IL-1β和TNF-α的作用,分泌量48h达高峰。在100μg&#183;L-1的bFGF的作用下,LPS介导的hPDLF分泌IL-1β和TNF-α的质量浓度明显下降。HTCC与bFGF联合较单独应用时,IL-1β和TNF-α的质量浓度下降显著（P≤0.001）。结论HTCC对LPS介导hPDLF分泌IL-1β和TNF-α具有促进作用,HTCC与bFGF联合应用能有效地抑制IL-1β和TNF-α的分泌。     

蜂胶对人牙周膜成纤维细胞作用的实验研究

目的:探讨蜂胶水提液对人牙周膜成纤维细胞(HPDLFs)生长增殖、骨向分化的影响,寻找蜂胶促增殖及分化作用的最佳浓度。方法:将不同浓度的蜂胶水提液加入体外培养的HPDLFs中,设置阳性对照和空白对照,通过检测HPDLFs的增殖(MTT法)、碱性磷酸酶活性及骨钙素含量,观察蜂胶水提取液对HPDLFs的增殖和分化的影响。结果:10~150μg/ml浓度的蜂胶水提液对体外培养HPDLFs的增殖均有促进作用,100μg/ml浓度时促增殖作用最明显。10~200μg/ml蜂胶水提液均可提高HPDLFs的碱性磷酸酶活性、促进HPDLFs的骨钙素合成(P<0.05),其中以100μg/ml蜂胶水提液作用最显著(P<0.01)。结论:低浓度的蜂胶水提液能促进HPDLFs增殖和向成骨细胞方向分化。     

柚皮苷对脂多糖诱导的人牙周膜成纤维细胞增殖及炎症因子表达的影响

目的探讨柚皮苷(naringin,NRG)对脂多糖诱导的人牙周膜成纤维细胞增殖及炎症因子表达的影响。方法以脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)(100μg/mL)诱导人牙周膜成纤维细胞(human periodontal ligament fibroblast,HPDLF)损伤,采用MTT法检测NRG对LPS诱导HPDLF损伤的保护作用,利用ELISA法和Western blotting法检测NRG对LPS诱导的HPDLF中白介素(interleukin,IL)-6、IL-8、IL-1β等炎症因子蛋白表达的影响,同时利用Real-time PCR方法检测NRG对LPS诱导的HPDLF组IL-6、IL-8、IL-1β等炎症因子基因表达的影响。结果经LPS(100μg/mL)刺激后,HPDLF增殖受到抑制,与CON组比较,LPS组细胞存活率显著降低,细胞周期进程受到抑制,差异具有统计学意义(P<0.05);不同浓度的NRG(40,20,10μg/mL)可显著抑制LPS诱导的HPDLF损伤,并可降低细胞内炎症因子表达;与LSP组比较,LPS+NRG 40μg/mL组、LPS+NRG 20μg/mL组、LPS+NRG 10μg/mL组HPDLF存活率显著提升,细胞周期进程加快,抑制IL-6、IL-8、IL-1β蛋白及基因表达水平均显著降低,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论NRG对LPS诱导的HPDLF损伤具有保护作用,并可通过抑制LPS诱导的HPDLF中IL-6、IL-8、IL-1β的蛋白及基因表达水平,促进HPDLF增殖。     

茶多酚对脂多糖介导下人牙周膜成纤维细胞 MMP-1、MMP-2表达的影响

目的：观察茶多酚（TP）在脂多糖（LPS）介导下对人牙周膜成纤维细胞（HPDLCs）MMP-1、MMP-2表达的影响。方法：体外培养 HPDLCs,在培养液中添加 TP（200μg/ml）作用于脂多糖（100μg/ml）介导的 HPDLCs,培养24、48、72 h,ELISA法检测 HPDLCs 分泌 MMP-1和 MMP-2的量。荧光实时定量 PCR 法检测 HPDLCs 中 MMP-1和 MMP-2 mRNA 的表达。结果：在 LPS 介导下 HPDLCs MMP-1和 MMP-2分泌量和基因表达升高,TP 可抑制 LPS 介导下 HPDLCs MMP-1和 MMP-2表达。结论：TP 可抑制 LPS 介导的人牙周膜细胞的胶原降解。     

HGF在人牙周膜成纤维细胞中的表达

目的：观察HGF在人牙周膜成纤维细胞中的表达及探讨转化生长因子-β1（TGF-β1）、白细胞介素-1β（IL-1β）与HGF之间的关系。方法：分别采用IL-1β梯度浓度、最佳干预浓度和TGF-β1梯度浓度干预第5代人牙周膜成纤维细胞,并运用酶联免疫技术检测人牙周膜成纤维细胞的上清液中HGF的表达。结果：经IL-1β单独作用,人牙周膜成纤维细胞的上清液中HGF的含量较空白对照组高,并优选出IL-1β的最佳干预浓度为10 ng/mL。当一定浓度的TGF-β1和10 ng/mL的IL-1β联合干预人牙周膜成纤维细胞,该细胞上清液中HGF的含量较单独IL-1β作用组低。结论：TGF-β1能够抑制IL-1β诱导的人牙周膜成纤维细胞分泌HGF。     

依那西普对牙龈卟啉菌内毒素作用下原代培养牙周膜细胞影响的实验研究

目的　观察依那西普（Etanercept）对牙龈卟啉菌内毒素（lipopolysaccharide,LPS)作用下体外培养的人牙周膜细胞(HPDLCs)的增殖能力的影响。方法　体外原代培养人牙周膜细胞,经免疫细胞化学鉴定,加入LPS和1 μg/ml Etanercept+LPS,LPS浓度分别为10、50、100、200、300 μg/ml检测（吸光度）A值。采用MTT法测定细胞增殖能力。结果　 人牙周膜细胞原代细胞生长状态良好。第3代细胞进行鉴定,Vimentin染色呈阳性,Ck(pan)染色呈阴性。MTT法检测加入梯度浓度的LPS 24 h后,HPDLCs增殖率随着LPS浓度的增加,对HPDLCs的增殖抑制逐渐增强,200 μg/ml LPS能最大程度抑制HPDLCS的增殖,抑制率为46.21%(P<0.01)。Etanercept + LPS组对HPDLCs细胞作用相对增殖率与LPS组比较（P＜0.01）,能明显抑制LPS对HPDLCs的抑制作用。结论　TNF-α抑制剂Etanercept能明显抑制牙周膜细胞在内毒素刺激下的死亡。