灰树花多糖对宫颈癌细胞增殖和转移的影响及机制

目的探讨灰树花多糖对宫颈癌Caski细胞增殖、凋亡、侵袭迁移及PI3K/AKT(磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B)信号通路的影响。方法 50、100、200μg/mL灰树花多糖处理Caski细胞48 h,通过MTT比色法、Transwell小室及Annexin V-FITC/PI双染法分别检测细胞增殖、侵袭迁移及凋亡率,Western blot检测AKT、p-AKT、PCNA(增殖细胞核抗原)、Cleaved caspase-3(裂解的半胱天冬酶3)和E-cadherin蛋白(上皮钙黏蛋白)表达。使用PI3K/AKT信号通路抑制剂LY294002(10μmol/L)单独或联合灰树花多糖(10μmol/L LY294002和200μg/mL灰树花多糖)处理Caski细胞48 h,检测各组细胞增殖、侵袭迁移、凋亡及AKT、p-AKT、PCNA、Cleaved caspase-3和E-cadherin蛋白表达。结果随着灰树花多糖质量浓度增加细胞增殖、侵袭和迁移能力降低,凋亡率升高,p-AKT和PCNA表达降低,Cleaved caspase-3和E-cadherin表达升高(P0.05)。LY294002可增强灰树花多糖对Caski细胞增殖、侵袭迁移、凋亡及p-AKT、PCNA、Cleaved caspase-3和E-cadherin表达的影响。结论灰树花多糖可通过阻断PI3K/AKT信号通路抑制宫颈癌Caski细胞增殖、侵袭和迁移,促进细胞凋亡。     

芹菜素诱导人卵巢癌细胞凋亡作用及机制研究

目的研究芹菜素(API)对人卵巢癌细胞凋亡的影响及其机制。方法培养人卵巢癌SKOV3细胞株,加入不同浓度的API,孵育48 h。PI染色流式细胞术(FCM)分析测定凋亡率;罗丹明染色FCM分析测定细胞线粒体跨膜电位(Δψm);caspase-9分光光度法检测试剂盒测定caspase-9活性;Western印迹检测线粒体凋亡信号转导通路相关蛋白的表达,包括bax、bcl-2、caspase-9和caspase-3。结果API(20,40和80μmol/L)作用48 h能呈浓度依赖性地诱导SKOV3细胞凋亡。而且,API也能降低SKOV3细胞的Δψm,增加caspase-9活性,促进细胞色素c(Cyt c)释放,上调bax、caspase-9和caspase-3蛋白的表达,同时下调bcl-2蛋白表达,且呈剂量依赖性。结论API通过活化线粒体信号转导途径诱导人卵巢癌细胞凋亡。     

鼠尾草酚抑制卵巢癌生长及其机制研究

目的:研究鼠尾草酚对卵巢癌生长的影响及其机制。方法:不同浓度的鼠尾草酚(2.5μmol·L~(-1)、5μmol·L~(-1)、10μmol·L~(-1))作用卵巢癌细胞株SKOV3 24 h后,CCK-8法检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞凋亡;Western blot检测SKOV3细胞中PI3K、P-Akt、FOXO3a(Forkhead box O3,FOXO3a)、X连锁凋亡抑制蛋白(X-linked inhibitor of apoptosis protein,XIAP)、Akt蛋白的表达。建立起裸鼠卵巢癌皮下移植瘤模型,观察不同浓度的鼠尾草酚对卵巢癌皮下移植瘤生长的影响;免疫组织化学法检测肿瘤组织中FOXO3a、XIAP阳性表达。结果:与对照组相比,鼠尾草酚可明显抑制卵巢癌SKOV3细胞生长,并显著增加癌细胞凋亡率,呈浓度依赖性;鼠尾草酚可下调PI3K、P-Akt、XIAP蛋白表达,同时上调FOXO3a。鼠尾草酚各剂量组卵巢癌组织中XIAP阳性表达率均低于对照组,而FOXO3a阳性表达率均高于对照组。结论:鼠尾草酚可抑制卵巢癌细胞的生长,其机制可能通过PI3K/Akt信号通路,诱导其凋亡。     

龙葵碱调控Bcl-2与Bax蛋白表达及caspase-3活性诱导HepG2细胞凋亡的研究

目的 探讨龙葵碱诱导HepG2细胞凋亡的作用机制.方法 透射电镜观察凋亡细胞形态变化,原位缺口末端榆测法(TUNEL法)检测DNA断裂情况,流式细胞术检测细胞凋亡率,间接免疫荧光法激光共聚焦扫描显微术检测Bcl-2与Bax蛋白表达,比色法检测caspase-3活性的变化.结果 在透射电镜下观察,龙葵碱组细胞出现细胞固缩,染色质致密,核凝聚固缩,染色体断裂形成核碎块,凋亡小体形成等细胞凋亡特征形态.TUNEL法发现龙葵碱高、中、低剂量组HepG2细胞均有绿色荧光,阴性对照组无荧光.流式细胞术分析表明0.4、2、10μmol/L龙葵碱作用HepG2细胞24 h凋亡率分别为4.0%、8.5%、20.1%.同时,龙葵碱升高caspase-3活性,下调Bcl-2蛋白表达,上调Bax蛋白表达.结论 龙葵碱通过降低Bcl-2/Bax的值,激活caspase-3酶活性诱导HepG2细胞凋亡.     

七叶皂苷对卵巢癌细胞的杀伤及其药理学机制研究

目的:探讨七叶皂苷对人卵巢癌细胞SKOV3增殖与凋亡的影响及其药理学机制。方法:MTT法比较七叶皂苷处理组与对照组细胞增殖能力,同时采用实时荧光定量PCR、Western blott检测各组细胞中p53和Caspase3的表达情况,通过流式细胞术检测七叶皂苷对细胞凋亡的影响。结果:七叶皂苷能明显抑制卵巢癌细胞株SKOV3的增殖(P0.01),并随着浓度增大,抑制效果增强。实时荧光定量PCR、Western blott检测发现七叶皂苷处理能够促进细胞中p53和Caspase3的mRNA和Caspase3蛋白的表达(P0.01)。流式细胞术结果显示七叶皂苷能诱导卵巢癌细胞株SKOV3凋亡(P0.01)。结论:七叶皂苷能够抑制人卵巢癌细胞SKOV3的增殖,并诱导其凋亡。     

龙葵碱调控与蛋白表达及活性诱导细胞凋亡的研究

探讨龙葵碱诱导HepG2细胞凋亡的作用机制。方法透射电镜观察凋亡细胞形态变化,原位缺口末端检测法(TUNEL法)检测DNA断裂情况,流式细胞术检测细胞凋亡率,间接免疫荧光法激光共聚焦扫描显微术检测Bcl-2与Bax蛋白表达,比色法检测caspase-3活性的变化。结果在透射电镜下观察,龙葵碱组细胞出现细胞固缩,染色质致密,核凝聚固缩,染色体断裂形成核碎块,凋亡小体形成等细胞凋亡特征形态。TUNEL法发现龙葵碱高、中、低剂量组HepG2细胞均有绿色荧光,阴性对照组无荧光。流式细胞术分析表明0.4、2、10μmol/L龙葵碱作用HepG2细胞24h凋亡率分别为4.0%、8.5%、20.1%。同时,龙葵碱升高caspase-3活性,下调Bcl-2蛋白表达,上调Bax蛋白表达。     

雷公藤红素通过活性氧诱导人卵巢癌SKOV3细胞凋亡的研究

目的研究雷公藤红素通过细胞内活性氧(Reactive oxidative species,ROS)诱导人卵巢癌SKOV3细胞凋亡的作用机制。方法通过MTT比色法检测雷公藤红素对人卵巢癌SKOV3细胞增殖的抑制作用;通过Hoechst 33258染色荧光显微镜观察SKOV3细胞凋亡的形态学变化;通过流式细胞术检测SKOV3细胞凋亡及ROS水平;Western blot法检测凋亡相关蛋白bcl-2、cleaved caspase-3、cleaved caspase-9蛋白的表达。结果雷公藤红素对卵巢癌SKOV3细胞具有明显的增殖抑制作用,且呈时间/剂量依赖关系(P0.05);雷公藤红素可显著增加细胞内ROS水平,诱导卵巢癌SKOV3细胞凋亡,并上调cleaved caspase-3、cleaved caspase-9蛋白的表达,下调抗凋亡蛋白bcl-2的表达(P0.05)。结论雷公藤红素可通过提高细胞内ROS水平,诱导人卵巢癌SKOV3细胞凋亡,为卵巢癌治疗及预后方面的研究提供了新思路。     

胡桃醌对类风湿关节炎关节成纤维样滑膜细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨胡桃醌对类风湿关节炎关节成纤维样滑膜细胞(RA-FLSs)增殖和凋亡的影响。方法不同浓度胡桃醌(0、5、10、20、30、40、50μmol/L)孵育RA-FLSs 24 h,胡桃醌(30μmol/L)分别和不同终质量浓度Akt激动剂SC79(0、0.1、0.5、0.8、1.0、1.5、1.8μg/mL)同时孵育RA-FLSs 24 h。BrdU和MTT法分别检测RA-FLSs的增殖能力和细胞活力,Annexin-V FITC/PI法和caspase-3活性检测试剂盒检测RA-FLSs凋亡,Western blot法检测Akt磷酸化和p21蛋白表达。结果与0μmol/L胡桃醌比较,胡桃醌(30、40、50μmol/L)显著抑制RA-FLSs细胞活力和增殖能力,促进其凋亡和caspase-3活性(P0.01);30μmol/L胡桃醌能显著抑制Akt磷酸化,促进p21蛋白表达(P0.01)。与30μmol/L胡桃醌比较,SC79(1.0μg/mL)与30μmol/L胡桃醌共同处理时,p21蛋白表达显著下降,并能促进RA-FLSs细胞凋亡,抑制其增殖(P0.01)。结论胡桃醌可通过调节Akt磷酸化来调控p21表达,进而调节RA-FLSs增殖和凋亡过程,为类风湿关节炎的治疗提供价值。     

迷迭香酸抑制自噬诱导HepG2细胞凋亡的作用研究

目的:观察迷迭香酸(RA)对HepG2细胞凋亡和自噬的作用,探讨自噬与凋亡之间的相互作用。方法:用不同浓度迷迭香酸作用于HepG2细胞24h、48h、72h。MTT法检测细胞存活率,观察迷迭香酸对HepG2细胞核形态的影响,流式细胞术检测细胞凋亡变化,台盼蓝染色法观察细胞自噬泡情况,透射电镜观察HepG2细胞的自噬变化,蛋白质印迹法检测凋亡相关蛋白Cleaved Caspase-3、Bcl-2和自噬相关蛋白(LC3)、p62的表达水平。采用迷迭香酸+3-甲基腺嘌呤(3-MA,自噬抑制剂)或迷迭香酸+雷帕霉素(RAP,自噬诱导剂)分别培养处理HepG2细胞,观察细胞增殖、细胞凋亡情况及相关蛋白表达变化。结果:与对照组相比,迷迭香酸(6.25、12.5、25、50、100、200μmol/L)均能降低HepG2细胞的存活率,诱导HepG2细胞发生凋亡,具有量效和时效关系,减少细胞内自噬泡和自噬小体,降低LC3Ⅱ/LC3Ⅰ的比值,减少Bcl-2的表达,增加Cleaved Caspase-3、p62蛋白的表达。与迷迭香酸25μmol/L处理组相比,迷迭香酸25μmol/L+3-MA 1.0μM/mL应用可诱导HepG2细胞凋亡增加,可进一步减少细胞内自噬泡和自噬小体数目,降低LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值,进一步抑制HepG2细胞的自噬水平,减少Bcl-2的表达,增加Cleaved Caspase-3和p62表达;迷迭香酸25μmol/L+RAP 1.0μM/mL处理HepG2细胞,增加细胞内自噬泡和自噬小体数目,升高LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值,可以抑制和逆转迷迭香酸诱导的细胞自噬水平下降,增加Bcl-2的表达,减少Cleaved Caspase-3和p62表达,细胞凋亡水平下降,这说明抑制或增强自噬时,迷迭香酸能改变对HepG2细胞的凋亡影响作用。结论:迷迭香酸可通过抑制自噬促进HepG2细胞的凋亡。     

迷迭香酸对人结肠癌HCT-8细胞增殖和凋亡的影响及分子机制研究

目的研究迷迭香酸对人结肠癌HCT-8细胞增殖和凋亡的影响,并探究相关机制。方法采用CCK-8法检测不同浓度迷迭香酸作用不同时间后HCT-8细胞的增殖情况;根据CCK-8法结果确定迷迭香酸15、45、75μmol/L作用72 h,考察HCT-8细胞的凋亡和相关基因及蛋白的表达;通过流式细胞术检测HCT-8细胞的凋亡率;采用实时荧光定量PCR(RT-q PCR)法检测p53、Bax和Puma基因的m RNA表达;通过Western blotting法检测p53、Bax、Puma和active Caspase-9的蛋白表达水平。结果迷迭香酸能够抑制HCT-8细胞的增殖,并呈时间和浓度依赖性。15、45μmol/L的迷迭香酸主要诱导HCT-8细胞早期凋亡(P0.01),75μmol/L的迷迭香酸主要诱导HCT-8细胞晚期凋亡(P0.01)。迷迭香酸可以使Puma的m RNA表达上调,并呈浓度依赖性;45、75μmol/L的迷迭香酸可以使p53和Bax的m RNA表达升高(P0.05)。迷迭香酸可以上调Puma、Bax和active Caspase-9的蛋白表达水平,并呈浓度依赖性;75μmol/L的迷迭香酸可以使p53的蛋白表达明显升高(P0.05)。结论迷迭香酸对HCT-8细胞具有明显的增殖抑制作用,并且是通过诱导凋亡实现的,促凋亡蛋白p53、Puma、Bax和active Caspase-9诱导了凋亡的发生。     

谈人参在《伤寒论》中的应用

人参为五加科植物人参的根。最早见于《神农本草经》,列为上品,书云:“人参味甘微寒,主补五脏,安精神,定魂魄,止惊悸,除邪,明目,开心,益智。”其味甘、微苦,性微温。归脾(胃)、肺、心经。具有大补元气,补脾益肺,益气生津,宁心安神之功效。在《伤寒论》中,仲景应用人参共40次,入     

阴阳升降理论探析与启迪

通过梳理《内经》及相关医家关于阴阳升降的论述,探讨阴阳升降的内容及阴阳升降的不同内涵。从阐述人体生理变化和脏腑特点、阐述疾病的病机、解释治则治法和方药配伍应用等方面分析阴阳升降对临床的启迪作用。     

非酒精性脂肪肝诊治的问题及对策

目的探讨非酒精性脂肪肝临床治疗中有效对策。方法结合近代非酒精性脂肪肝治疗研究现状部分问题,运用中医辨证和辨病论治结合现代药理学研究进展方法,防治非酒精性脂肪肝。结果中西医结合防治此病有效。结论中西医结合辨证和辨病结合论治防治此病为有效对策。     

《金匮要略·血痹虚劳病脉证并治》虚劳病精气神调治原则与方法

从中医精气神辨识角度认识虚劳病,总结虚劳病病因病机。通过观察面容、形态、神色、五官、舌象、脉象等辨识精气神状态,确立虚劳病精气神调治原则。在精气神辨识理论指导下,对《金匮要略·血痹虚劳病脉证并治》相关条文、方药进行解析,总结虚劳病相关治则治法。根据精气神调养原则,为虚劳病临床应用提供指导。     

五脏补血法理论及临床应用探讨

血液的生成与五脏关系密切,据此确立五脏补血法:养心补血法、健脾补血法、润肺补血法、滋肝补血法、益肾补血法。     

全蝎配伍蜂房之祛风攻毒作用探析

通过梳理古本草文献中全蝎、蜂房的有关记载和现代临床对该药对的配伍应用,探讨并阐释该药对祛风攻毒增效的作用机制,认为全蝎配蜂房,药力迅捷,内走脏腑,外达肢节,透骨搜风,既可祛风通络止痛,又可攻毒散结消痈.尤其适宜于治疗风湿顽痹、痈疽恶疮、癌肿等.     

高脂血症诊治研究中问题及策略

目的:探讨高脂血症诊临床治疗中有效对策。方法:结合近代高脂血症诊治疗研究现状部分问题,运用中医辨证和辨病论治结合现代药理学研究进展方法,防治高脂血症。结果:中西医结合防治此病有效。结论:中西医结合辨证和辨病结合论治防治此病为有效对策。     

从“方药离合”看中医学的方药共荣

通过对历代方剂与本草的应用演变和发展过程的论述,揭示了中医方药共荣关系,并以黄柏、升麻等药为例,强调方药配伍运用是方药共荣的核心环节.随后,结合中医发展的现实环境,分析了坚持方药共荣的正确方向,对于防止重药轻方的错误倾向,提高中医临床疗效,启迪现代研究思路,均具有重要的学术价值和现实意义.     

丹栀逍遥散及其提取物镇静催眠作用研究

目的探讨丹栀逍遥散原方及提取物镇静催眠作用。方法将小鼠分为14组,正常对照组、原方组及各组分低中高剂量组,通过测定小鼠自主活动次数,采用戊巴比妥钠延长睡眠时间实验、戊巴比妥钠阈下剂量镇静催眠协同作用实验观察丹栀逍遥散原方及各提取物镇静催眠作用。结果丹栀逍遥散原方及提取物均无改变小鼠自主活动的功能,表明均无中枢兴奋性作用;丹栀逍遥散石油醚提取液高、中剂量具有显著延长戊巴比妥钠致小鼠睡眠时间的作用(P<0.01或P<0.05),石油醚提取液高剂量能明显增加阈下剂量戊巴比妥钠睡眠小鼠个数(P<0.01)。结论丹栀逍遥散石油醚提取部位可能为丹栀逍遥散的中枢抑制作用的有效部位。     

小青龙汤因机证治浅析

小青龙汤为温阳宣肺、蠲痰涤饮之剂,凡见哮喘、咳嗽、痰、饱胀、喘息和四肢水肿等因"外感风寒,内有寒饮"所致者,均可辨证应用小青龙汤。临证应用时注意:①寒邪不必拘泥外感;②"三水"的变化要审清;③但见寒饮,有无表证均可用此方;④注意痰饮在临床上的变化;⑤临床见喘未必治喘,要临证辨别。用此方,要抓住以下临床指征:①面色:"三水"之面色--黧黑之色;②脉象:弦脉或浮紧;③舌象:舌苔多水滑;④痰涎:咳痰较爽,痰涎清稀,泡沫状。以上"但见一证便是,不必悉俱",有效之后,应中病即止。