龙葵碱调控Bcl-2与Bax蛋白表达及caspase-3活性诱导HepG2细胞凋亡的研究

目的 探讨龙葵碱诱导HepG2细胞凋亡的作用机制.方法 透射电镜观察凋亡细胞形态变化,原位缺口末端榆测法(TUNEL法)检测DNA断裂情况,流式细胞术检测细胞凋亡率,间接免疫荧光法激光共聚焦扫描显微术检测Bcl-2与Bax蛋白表达,比色法检测caspase-3活性的变化.结果 在透射电镜下观察,龙葵碱组细胞出现细胞固缩,染色质致密,核凝聚固缩,染色体断裂形成核碎块,凋亡小体形成等细胞凋亡特征形态.TUNEL法发现龙葵碱高、中、低剂量组HepG2细胞均有绿色荧光,阴性对照组无荧光.流式细胞术分析表明0.4、2、10μmol/L龙葵碱作用HepG2细胞24 h凋亡率分别为4.0%、8.5%、20.1%.同时,龙葵碱升高caspase-3活性,下调Bcl-2蛋白表达,上调Bax蛋白表达.结论 龙葵碱通过降低Bcl-2/Bax的值,激活caspase-3酶活性诱导HepG2细胞凋亡.     

龙葵碱调控与蛋白表达及活性诱导细胞凋亡的研究

探讨龙葵碱诱导HepG2细胞凋亡的作用机制。方法透射电镜观察凋亡细胞形态变化,原位缺口末端检测法(TUNEL法)检测DNA断裂情况,流式细胞术检测细胞凋亡率,间接免疫荧光法激光共聚焦扫描显微术检测Bcl-2与Bax蛋白表达,比色法检测caspase-3活性的变化。结果在透射电镜下观察,龙葵碱组细胞出现细胞固缩,染色质致密,核凝聚固缩,染色体断裂形成核碎块,凋亡小体形成等细胞凋亡特征形态。TUNEL法发现龙葵碱高、中、低剂量组HepG2细胞均有绿色荧光,阴性对照组无荧光。流式细胞术分析表明0.4、2、10μmol/L龙葵碱作用HepG2细胞24h凋亡率分别为4.0%、8.5%、20.1%。同时,龙葵碱升高caspase-3活性,下调Bcl-2蛋白表达,上调Bax蛋白表达。     

四逆汤上调p53蛋白表达诱导肝癌细胞凋亡研究

目的:以中医温阳法代表方四逆汤为研究对象,研究其对p53蛋白表达诱导肝癌细胞凋亡的影响,为提高肝癌中西医结合治疗效果提供实验依据。方法:采用含药血清方法,整体小鼠移植瘤实验,建立肝癌动物模型后,随机分为空白组、四逆汤组、阳性组共3组,每组10只,每日按0.2mL/10g标准定时胃饲给药1次。四逆汤组:3.7g生药/kg;空白组:同法灌胃等量0.9%氯化钠溶液;阳性组:顺铂4mg/kg,腹腔注射,每周给药1次,连续给药3周。用Tunel法检测细胞凋亡,Western Blot测定p53蛋白表达,从分子水平分析细胞凋亡的机制。结果:①四逆汤组对肝癌细胞具有抑制作用(P<0.05)。②四逆汤组在抑制肝癌组织生长的同时,对胸腺及脾脏起到了一定的保护作用。③Tunnel法测凋亡细胞结果表明,四逆汤可诱导小鼠肝癌细胞凋亡。④四逆汤明显上调肝癌组织p53蛋白的表达(P<0.01)。结论:温阳法对肝癌有抑制作用,同时具有免疫保护作用,降低肿瘤恶性程度的作用;促进肝癌组织p53蛋白的表达,四逆汤诱导细胞凋亡中的作用可能与p53蛋白的表达存在密切关系。     

天花粉蛋白抑制HeLa细胞增殖的实验研究

目的研究天花粉蛋白(TCS)对人宫颈癌HeLa细胞生长的抑制作用,探讨TCS抗肿瘤的作用机制。方法采用MTT法检测TCS对Hela细胞的抑制作用,形态学观察、DNA电泳及流式细胞仪检测TCS对HeLa细胞的诱导凋亡作用。结果TCS对HeLa细胞的生长具有明显的抑制作用,显微镜下可见细胞圆缩,胞浆凝聚等凋亡细胞的形态学改变,DNA凝胶电泳呈梯级格局,流式检测出现凋亡峰,凋亡比例具有剂量和时间依赖性。结论天花粉蛋白通过诱导细胞发生凋亡而抑制宫颈癌HeLa细胞的增殖。     

乌骨藤提取物体外对人肠癌细胞增殖实验研究

目的:研究乌骨藤提取物对体外培养的人肠癌细胞(lovo)增殖的影响.方法:用两种方法(A、B)制备乌骨藤提取物,采用不同浓度的鸟骨藤提取物分别作用于培养的lovo细胞,通过细胞形态学和MTT法检测鸟骨藤提取物对lovo细胞增殖的影响.结果:乌骨藤提取物A对细胞的最大无毒浓度大约为0.648mg/ml;药物浓度在0.389mg/ml、0.648mg/ml、1.08mg/ml、1.8mg/ml、3mg/ml时的抑制率分别为6.58%、8.24%、13.02%、59.69%、66.23%;用回归法求出鸟骨藤提取物A对lovo细胞增殖的半数抑制浓度为1.625mg/ml.乌骨藤提取物A对细胞的最大无毒浓度大约为0.648mg/ml;药物浓度在0.389mg/ml、0.648mg/ml、1.08mg/ml、1.8mg/ml、3mg/ml时的抑制率分别为14.49%、15.48%、29.69%、63.26%、64.05%;用回归法求出乌骨藤提取物B对lovo细胞增殖的半数抑制浓度为1.84mg/ml.结论:乌骨藤提取物对体外培养的人肠癌细胞(lovo)的增殖有明显抑制作用.     

沥水调脂胶囊对氧化型低密度脂蛋白影响内皮细胞Bcl-2、Bax、p53和caspase-3蛋白表达的调节

目的：研究沥水调脂胶囊抑制氧化型低密度脂蛋白诱导血管内皮细胞凋亡的机制。方法：沥水调脂胶囊舍药血清和ox-LDL与人脐静脉内皮细胞(hUVEC)共同孵育15h，用免疫荧光标记结合流式细胞仪分别测定Bcl—2、Bax、p53和caspase-3蛋白表达量。结果：发现ox-LDL可使hUVEC Bcl—2蛋白表达降低，Bax、p53和caspase-3蛋白表达量升高，而沥水调脂胶囊可使ox-LDL对Bcl-2、p53和caspase-3的上述作用明显减弱，但对Bax未见明显影响。结论：沥水调脂胶囊抑制ox-LDL诱导的血管内皮细胞凋亡，可能是从正反两个方面、多条途径调节与凋亡密切相关的基因表达以及保护细胞结构功能有关。     

14-3-3蛋白家族新机制和新功能研究

14-3-3是一个高度保守的酸性蛋白家族,在哺乳动物中由7种亚型组成.14-3-3蛋白控制着细胞分裂周期、生长增殖、分化凋亡和扩展迁移等.对14-3-3蛋白的新机制和新功能进行综述,以期为该蛋白家族的研究提供参考.     

臭牡丹总黄酮对人肝癌HepG2细胞增殖作用的实验研究

目的:研究臭牡丹总黄酮体外对培养的人肝癌HepG2细胞增殖的影响.方法:提取中药臭牡丹的有效成分臭牡丹总黄酮,采用不同浓度分别作用于培养的HepG2细胞,通过细胞形态学和MTT法检测臭牡丹总黄酮对HepG2细胞增殖的影响.结果:臭牡丹总黄酮药物浓度在0.025、0.25、2.5、25、250μg/mL时的抑制率分别为5.55％、12.73％、14.84％、62.44％、76.81％,与对照组比较差异均有统计学意义(P＜0.05).结论臭牡丹总黄酮体外对人肝癌HepG2细胞的增殖有明显抑制作用.     

江浙蝮蛇蛇毒蛋白对K562细胞端粒酶活性、p53和p21蛋白表达的影响

蛇毒在大量体外及动物抗肿瘤实验中表现出良好的抗肿瘤作用,近年来,国内外对蛇毒抗肿瘤作用的研究日趋重视,目前关于蛇毒抗肿瘤的研究主要集中在中华眼镜蛇,对江浙蝮蛇蛇毒抗肿瘤的报道较少,而且多局限于肿瘤细胞形态学方面的观察[1,2].     

人参配伍五灵脂对A549人肺腺癌细胞增殖抑制及诱导凋亡的实验研究

目的:观察人参配伍五灵脂对A549人肺腺癌细胞增殖及凋亡的影响,以阐明其作用机制,探究其最佳配伍比例,为临床用药提供合理的实验依据。方法:健康Wistar大鼠25只,随机分成5组,每组5只,即正常对照组,人参、五灵脂1∶1,1∶2,2∶1组,复方斑蝥胶囊组。煎取药液后,计算出大鼠等效剂量,按1 mL.100 g^-1给大鼠灌胃,每天2次,连续灌胃3 d。末次灌胃后1 h取血清,加入RPMI 1640培养液,配制成含量为10%的药物血清温育液。运用MTT法检测肿瘤细胞生长曲线及肿瘤细胞抑制率,透射电镜观察其凋亡情况。结果:人参、五灵脂配伍能抑制A549人肺腺癌细胞增殖,并对其细胞的凋亡有诱导作用,且当二者比例为2∶1时效果最显著。结论:提示抑制肿瘤细胞增殖,诱导其调亡可能是人参配伍五灵脂抗癌作用的机制之一。     

Haeamtang induces apoptosis of colon cancer HT-29 cells through activation of caspase-3

The effect of Haeamtang (HAT) on the colon cancer HT-29 cells was investigated in this study. A water extract of HAT significantly decreased the number of HT-29 cells in a dose-and time-dependent manner as determined by a MTT assay. Flow cytometry results revealed a dose- and time-dependent increase of dead cells in HT-29 cells treated with HAT extract. The anticancer activity of the H AT extract is attributed to apoptosis induced in HT-29 cells, which was demonstrated by increased caspase-3 activity and poly-ADP-ribose polymerase fragmentation. A selective caspase inhibitor, z-VAD-fmk, inhibited the HAT-induced cell death. Taken together, these results demonstrate that HAT extract induces apoptosis in HT-29 cells.     

淫羊藿素对人卵巢癌SKOV3细胞增殖抑制及促凋亡作用

基于PI3K/Akt信号通路,观察人卵巢癌SKOV3细胞在不同浓度淫羊藿素(icaritin)干预下的增殖与凋亡变化过程,探讨可能存在的分子机制.研究对象为人卵巢癌细胞SKOV3,设置空白对照组和淫羊藿素不同浓度组(5,10,20μmol· L-1),药物干预48 h,采用cell counting kit-8 (CC...     

苦木碱F通过miR-331-3p调控宫颈癌HeLa细胞增殖及凋亡的机制研究

目的:探讨苦木碱F调控miR-331-3p在宫颈癌HeLa细胞增殖及凋亡中的作用及机制。方法:MTT法检测苦木碱F对宫颈癌HeLa细胞增殖的影响; 流式细胞术检测苦木碱F对宫颈癌HeLa细胞凋亡的影响; RT-qPCR检测苦木碱F处理HeLa细胞后miR-331-3p的表达; miR-331-3p mimic或miR-331-3p inhibitor 转染HeLa细胞,经苦木碱F处理后检测HeLa细胞的增殖及凋亡情况; 使用生物信息学和双荧光素酶报告基因实验预测及验证miR-331-3p与蛋白酶体活化复合物3(PSME3)的靶向关系; Western blot检测HeLa细胞中凋亡相关蛋白表达情况。结果:苦木碱F能显著抑制HeLa细胞增殖,促进凋亡,且具有浓度依赖性(P<0.01); 苦木碱F显著上调HeLa细胞中miR-331-3p的表达(P<0.01); miR-331-3p mimic能显著抑制HeLa细胞增殖能力,促进细胞凋亡; miR-331-3p inhibitor能显著降低苦木碱F对HeLa细胞增殖的抑制以及凋亡的促进作用(P<0.05); 生物信息学预测PSME3是miR-331-3p的靶基因之一,双荧光素酶报告基因结果显示miR-331-3p与PSME3 3'UTR靶向结合; 与苦木碱F+NC inhibitor +NC-siRNA组比较,苦木碱F+miR-331-3p inhibitor +NC-siRNA组中细胞存活率升高,细胞凋亡率降低,β-catenin和Bcl-2蛋白水平升高,Bax蛋白水平降低,而敲低PSME3能逆转这一结果,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:苦木碱F通过介导miR-331-3p/PSME3轴抑制宫颈癌HeLa细胞增殖,促进凋亡,发挥抗肿瘤作用。     

芹菜素抑制蛋白激酶B活性诱导人卵巢癌细胞凋亡的机制研究

目的探讨芹菜素通过抑制蛋白激酶B活性诱导人卵巢癌细胞凋亡的作用机制。方法采用细胞形态学观察、DNA ladder、聚丙烯酰胺凝胶电泳检测Caspasse-3,Akt,磷酸化Akt,Bad及磷酸化Bad蛋白表达并测定Akt激酶活性。结果芹菜素明显抑制卵巢癌细胞的生长;DNA琼脂糖凝胶电泳检测到典型的DNA梯形条带;Western blotting方法检测到Caspase-3的活性片段,并呈明显的时间依赖关系;芹菜素可以时间依赖方式抑制与细胞增殖相关的Akt及Akt下游促凋亡蛋白Bad的磷酸化,但对总Akt及总Bad蛋白的表达无影响。结论芹菜素通过抑制Akt活性能诱导人卵巢癌细胞发生凋亡。     

去甲斑蝥素对人肝癌SMMC-7721细胞凋亡相关因子半胱天冬酶3、bax和细胞色素C表达的影响

目的:了解去甲斑蝥素对人肝癌SMMC-7721细胞增殖的影响,通过分子生物学手段探讨其诱导肿瘤细胞凋亡的作用机制。方法:以1、5、25、125mg/L去甲斑蝥素作为药物组,不加药物的细胞作为对照组。通过MTT比色法检测去甲斑蝥素对SMMC-7721细胞生长的抑制率;采用Annexin V-FITC/PI双染色法测定肿瘤细胞的凋亡率;通过免疫印迹法测定caspase-3、bax和细胞色素C的表达水平。结果:相同浓度的去甲斑蝥素作用时间越长,细胞生长抑制率越高;作用相同时间的去甲斑蝥素浓度越高,细胞生长抑制率越高。药物组细胞均有不同程度的早期凋亡和晚期凋亡。随着去甲斑蝥素浓度的提高,总凋亡率相应升高;药物组的总凋亡率均高于对照组(t=10.758、16.931、33.955、22.358,P均0.05)。随着去甲斑蝥素的浓度提高,caspase-3、bax和细胞色素C的表达量均升高;浓度为25、125mg/L的去甲斑蝥素处理细胞后,caspase-3、bax和细胞色素C的蛋白表达量均高于对照组(t=4.246、2.521、5.842、6.654、7.137、4.825,P均0.05)。结论:去甲斑蝥素通过诱导细胞凋亡抑制SMMC-7721细胞生长,其作用机制在于上调凋亡相关因子caspase-3、bax和细胞色素C的表达。     

蛇床子素对卵巢癌SKOV3细胞凋亡的影响

目的:探讨蛇床子素对卵巢癌SKOV3细胞增殖与凋亡的影响以及其潜在的机制。方法:不同浓度蛇床子素作用于卵巢癌SKOV3细胞,采用MTT法检测蛇床子素对细胞增殖的影响;Hoechst 33258染色和流式细胞术检测蛇床子素对细胞凋亡的影响;实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和Western Blot检测Bax、Bcl-2 mRNA和蛋白的表达水平。结果:蛇床子素明显抑制SKOV3细胞的增殖;蛇床子素干预后,有典型的凋亡小体形成,SKOV3细胞的凋亡率随着药物浓度的增加而增加,80mg/L处理组细胞的凋亡率达到(24.90±5.35)%;qRT-PCR和Western Blot结果显示各浓度蛇床子素对SKOV3细胞促凋亡因子Bax mRNA和蛋白水平表达均有上调作用,而抗凋亡因子Bcl-2mRNA和蛋白表达均下调。结论:蛇床子素能够抑制卵巢癌SKOV3细胞的增殖并诱导其凋亡,其机制可能与其下调抗凋亡因子Bcl-2和上调促凋亡因子Bax的表达有关。     

双氢青蒿素通过调节凋亡相关蛋白的表达及活性氧的产生而抑制胰腺癌JF-305细胞的增殖

探讨双氢青蒿素诱导人胰腺癌JF-305细胞凋亡作用及活性氧在双氢青蒿素诱导JF-305细胞凋亡中的作用。采用MTT法考察不同浓度双氢青蒿素对人胰腺癌JF-305细胞增殖的影响,流式细胞术检测细胞周期,Hochest 333258荧光染色法观察细胞凋亡形态,Annexin V荧光染色法检测JF-305细胞凋亡的变化,DCFH-DA检测凋亡过程中活性氧(ROS)的变化。Western blot检测细胞内Bax,Bcl-2,Cleaved caspase-3,Cleaved caspase-9和Cyto C蛋白表达的变化。与对照相比,双氢青蒿素作用JF-305细胞48 h,细胞增殖受到明显抑制(P0.05);细胞被阻滞于G2/M期;细胞出现核浓缩聚集、碎裂的凋亡形态,细胞凋亡比例升高(P0.05);DCFH-DA检测双氢青蒿素给药组细胞ROS明显升高(P0.05);Western blot结果显示,双氢青蒿素作用后细胞内Bcl-2蛋白表达下调,Bax蛋白表达上调,Bax/Bcl-2蛋白表达比例升高,Cleaved caspase-3,Cleaved caspase-9和Cyto C蛋白表达升高。双氢青蒿素能诱导JF-305细胞凋亡,其凋亡过程可能与ROS的生成增加相关。     

Evodiamine induces extrinsic and intrinsic apoptosis of ovarian cancer cells via the mitogen-activated protein kinase/phosphatidylinositol-3-kinase/protein kinase B signaling pathways

OBJECTIVE: To explore the effects of evodiamine on ovarian cancer cells and the mechanisms underlying such effects.METHODS: Human ovarian cancer cells HO-8910 PM were treated with evodiamine at 0, 1.25,2.5, and 5 μM for 1-4 d. 3-(4,5-Dimethiylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide(MTT) assay was used to detect the growth inhibition rate of evodiamine-treated HO-8910 PM cells. The cell cycle was observed via propidium iodide(PI) staining. Apoptosis induction was assessed via Annexin V-fluorescein isothiocyanate/propidium iodide(Annexin V-FITC/PI) double staining assay. To verify the mechanism of apoptosis, caspase-dependent apoptotic pathway-related protein was detected by Western blot analysis. The expression levels of mitogen-activated protein kinase(MAPK)and/or phosphatidylinositol-3-kinase(PI3K)/pro-tein kinase B(Akt) pathway-related proteins were also investigated.RESULTS: Evodiamine significantly inhibited the proliferation of HO-8910 PM cells in a dose- and time-dependent manner. Evodiamine induced G2/M arrest with an increase of cyclin B1 level, and promoted cell apoptosis with a decrease of B cell lymphoma/lewkmia-2(Bcl-2) and an increase of Bcl-2-associated X protein(Bax) level. In addition,evodiamine treatment led to the activation of caspase-8, caspase-9, and caspase-3 and the cleavage of poly(ADP-ribose)-polymerase(PARP). Evodiamine targeted the MAPK and/or PI3K/Akt pathways by reducing the expression and activity of PI3 K, Akt, and extracellular signal-regulated kinase mitogen-activated protein kinase(ERK1/2 MAPK)and the activity of p38 MAPK.CONCLUSION: Evodiamine can inhibit the growth of ovarian cancer cells by G2/M arrest and intrinsic and extrinsic apoptosis. In addition, evodiamine-induced PI3K/Akt, ERK1/2 MAPK, and p38 MAPK signaling may be involved in cell death.