掌叶半夏提取物的有效部位对体外培养宫颈癌细胞的促凋亡作用

目的:观察中药掌叶半夏提取物的有效部位(pinellia extract fraction,PE)对体外培养的两种宫颈癌细胞株的作用,力求寻找一种能有效防治女性宫颈病变的纯中药制剂。方法:将4种不同浓度PE分别作用于Hela和Caski细胞1-5天,用倒置相差显微镜观察细胞生长及摄影,溴化噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞活性,流式细胞术检测细胞凋亡。结果:PE对两种宫颈癌细胞株的生长均表现出明显的抑制作用,流式细胞术检测结果显示PE作用后两种细胞株均呈现出凋亡,且随着作用时间延长,凋亡细胞的比例明显增加。结论:PE对两种宫颈癌细胞株有明显的抑制生长和促凋亡作用;为进一步研究PE的药物作用机制和新药的研制开发奠定了初步的基础。     

掌叶半夏提取物的有效部位对CaSki的促凋亡作用机制研究

目的:前期的研究已证实中药掌叶半夏提取物的有效部位(pinellia extract fraction,PE)对体外培养的宫颈癌细胞株CaSki和HeLa有促凋亡作用,通过本次研究进一步明确PE对CaSki的促凋亡作用机制。方法:采用RT-PCR方法检测0.15g/L的PE作用24h后CaSki细胞Bcl-2和Bax mRNA表达的变化,采用Western Blot检测0.15g/LPE作用24h后CaSki细胞Bcl-2、Bax蛋白表达的变化。结果:0.15g/L的PE作用24h后CaSki细胞Bcl-2 mRNA和蛋白的表达均明显下降,而Bax mRNA和蛋白的表达均明显上升。结论:PE对CaSki宫颈癌细胞株促凋亡作用之一是抑制Bcl-2基因的表达、促进Bax基因的表达。这为进一步研究PE的抗宫颈癌作用机制以及新药的研制开发奠定了一定的实验基础。     

掌叶半夏有效提取物对HeLa细胞的作用及机制

目的观察中药掌叶半夏有效提取物(Pinellia extract,PE)对HeLa细胞的作用,并对可能的机制进行初步研究,为其临床用于防治女性宫颈病变提供科学依据。方法用倒置相差显微镜观察细胞生长并摄影,MTT法检测细胞活性,流式细胞术检测细胞凋亡,免疫细胞化学法检测增殖细胞核抗原(proliferatingcell nuclear antigen,PCNA)蛋白表达,免疫荧光实验检测B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)蛋白表达。结果PE对HeLa细胞的生长表现出明显的抑制作用,流式细胞术检测结果显示PE作用后HeLa细胞出现凋亡,且随着作用时间延长,凋亡细胞的比例明显增加;免疫细胞化学实验和免疫荧光实验结果表明:PE作用24 h后HeLa细胞PCNA和Bcl-2蛋白表达均明显减少。结论PE对HeLa细胞有明显的抑制生长和促进凋亡的作用,其促凋亡机制是通过降低PCNA和Bcl-2蛋白表达来实现的,这为进一步研究PE的作用机制以及抗癌新药的研制开发奠定了初步的实验基础。     

掌叶半夏提取物的有效部位对宫颈癌细胞株HPVE6和P53基因表达的影响

目的:观察中药掌叶半夏提取物的有效部位(PE)对CaSki和HeLa细胞人乳头瘤病毒(HPV)E6基因和P53基因表达的影响,进一步阐明PE的抑癌机制。方法:0.15mg/mL的PE作用于CaSki和HeLa细胞24h后,采用RT-PCR方法检测两种细胞HPVE6和P53 mRNA表达的变化,采用Western Blot检测CaSki和HeLa细胞HPVE6、P53蛋白表达的变化。结果:0.15mg/mL的PE作用24h后CaSki和HeLa细胞HPVE6 mRNA和蛋白的表达均明显下降,而P53mRNA和蛋白的表达均明显上升(P0.05,P0.01)。结论:PE可以明显抑制CaSki和HeLa宫颈癌细胞株HPVE6基因的表达、促进其P53基因的表达,这可能是PE抗宫颈癌作用的关键环节。     

加味四君子对宫颈癌大鼠模型癌组织中Caspase-3、Caspase-7、Survivin表达的干预作用

目的:观察加味四君子汤对宫颈癌模型癌组织Caspase-3、Caspase-7、Survivin表达的影响,以探明加味四君子汤治疗宫颈癌的机制。方法:将30只Wistar雌性大鼠随机分为空白组、模型组及干预组,其中空白组10只,模型组及干预组各9只。其中空白组大鼠不接受造模及干预,模型组大鼠仅接受模型制备,干预组大鼠接受模型制备及加味四君子汤灌胃,连续治疗8周,疗程结束后比较各组宫颈癌病灶大小,同时用免疫组化法检测各组宫颈癌组织Caspase-3、Caspase-7、Survivin的水平表达变化。结果:1)空白组未出现宫颈癌病灶,模型组病灶体积(1 573. 48±11. 24) mm3,干预组病灶体积(683. 23±4. 81) mm3,各组宫颈癌病灶大小差异有统计学意义(P 0. 05),干预组明显较模型组小。2) 2组接受造模术大鼠Caspase-3、Caspase-7浓度均有不同程度下调,Survivin表达升高,其中干预组大鼠经过为期8周的干预后Caspase-3、Caspase-7浓度上调,Survivin浓度下降,干预组改善明显优于模型组,差异有统计学意义(P 0. 05)。3)经过相关分析显示,癌灶体积与Caspase-3、Caspase-7呈负相关关系,与Survivin有正相关关系。结论:加味四君子可明显缩小宫颈癌病灶体积,其作用机制可能与调节Caspase-3、Caspase-7、Survivin表达有关。     

半夏及掌叶半夏毒针晶中共性毒蛋白的研究

目的:寻找天南星科半夏属有毒中药半夏及掌叶半夏毒性物质基础毒针晶中的共有蛋白,研究刺激性相关蛋白的致炎效应。方法:采用溶液内双酶解方法将半夏与掌叶半夏毒针晶中的蛋白降解为混合肽段,采用液相色谱与串联质谱偶联分析降解后的肽段,将质谱分析数据与BIOWORKS软件搜索的NCBI绿色植物Viridiplantae蛋白库比对进行蛋白质检索分析。采用聚丙烯酰胺凝胶电泳对半夏、掌叶半夏毒针晶蛋白进行分析,同时采用胶内酶解后液相色谱与串联质谱偶联的方法,分析并鉴定约13kDa蛋白。提取分离半夏中的凝集素蛋白,并采用中性粒细胞迁移试验和测定腹腔渗出液中PGE2的含量,考察毒针晶及凝集素的炎症刺激性效应。结果:半夏及掌叶半夏毒针晶中均含约13kDa的蛋白条带,此条带经鉴定为凝集素类蛋白,且此13kDa蛋白条带为毒针晶中的主要蛋白之一,凝集素类蛋白可诱导中性粒细胞向大鼠腹腔迁移,可显著增加小鼠腹腔渗出液中PGE2的含量。结论:天南星科有毒中药半夏及掌叶半夏毒针晶蛋白中均含有凝集素类蛋白,且此类凝集素蛋白具有显著的致炎作用,是半夏与掌叶半夏毒针晶中的共性毒蛋白。     

遮荫对掌叶半夏化学成分含量的影响

目的:探讨不同光照强度下掌叶半夏化学成分的变化,为栽培生产和林药间作提供理论依据。方法:利用HPLC测定不同遮荫处理(遮荫率分别为0%,40%,60%,80%)下掌叶半夏4种含氮化合物含量。结果:随着遮荫程度的增加,4种含氮化合物含量指标是呈低-高-低的变化趋势,但不同含氮化合物变化程度不同。与全光对比,A,B,C处理的葫芦巴碱和胸腺嘧啶含量增加,A,B处理的腺嘌呤和6-氧嘌呤含量也增加,而C处理的腺嘌呤和6-氧嘌呤含量减少。结论:中度遮荫下,能够提高4种含氮化合物的含量,适宜在一定遮荫条件下栽培,适宜林(果)间作。     

半夏、掌叶半夏和水半夏对小鼠镇静催眠作用的比较研究

目的:研究并比较半夏、掌叶半夏及水半夏对小鼠的镇静催眠作用。方法:采用电位滴定法测定药材中总游离有机酸的含量以控制药材质量;采用阈下和阈上剂量戊巴比妥钠致小鼠睡眠法,比较药物对小鼠的镇静催眠作用。结果:半夏大、小剂量组,掌叶半夏大剂量组和水半夏小剂量组均可明显增加戊巴比妥钠阈下催眠剂量的入睡动物数;半夏及掌叶半夏大剂量组能明显延长戊巴比妥钠小鼠睡眠时间。结论:半夏和掌叶半夏具有显著的镇静催眠作用。     

掌叶半夏总蛋白作用人卵巢癌SKOV3细胞的蛋白质组学研究

目的研究掌叶半夏总蛋白作用于人卵巢癌SKOV3细胞后蛋白质组学的变化。方法体外培养SKOV3细胞,应用CCK-8比色法观察不同时间（24、48、72、96 h）、不同浓度（0、0.05、0.10、0.20、0.30、0.40、0.50 mg/mL）掌叶半夏总蛋白对SKOV3细胞的生长抑制作用。取对数生长期SKOV3细胞,加入0.296 mg/mL掌叶半夏总蛋白作用于细胞48 h,提取细胞总蛋白,采用双向凝胶电泳（2-DE）和基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱（MALDI-TOF-MS）筛选差异表达的蛋白质。结果 0.10～0.50 mg/mL掌叶半夏总蛋白可显著抑制SKOV3细胞的生长,且具有一定的时效和量效关系（P〈0.05,P〈0.01）。经2-DE和质谱分析成功鉴定43个差异蛋白质点（其中21个上调,22个下调）,包括α-烯醇化酶1、真核翻译起始因子3α、亲环素B等。结论掌叶半夏总蛋白可显著抑制SKOV3细胞的生长,并引起SKOV3细胞株蛋白质组学的改变,可能与其抗癌机制相关。     

半夏、掌叶半夏及禹白附凝集素蛋白的刺激性研究

目的:研究半夏凝集素(Pinellia ternata agglutinin,PTA),掌叶半夏凝集素(Pinellia pedtaisecta agglutinin,PPA),禹白附凝集素(Typhonium giganteum agglutinin,TGA)的刺激性作用。方法:SD雄性大鼠随机分为空白组,PTA,PPA及TGA高中低剂量组(300,200,100 mg.L-1),ip给药,4 h后处死大鼠,ip生理盐水,取腹腔液测中性粒细胞迁移数目,测定腹腔液中总蛋白,一氧化氮(NO),前列腺素E2(PGE2)的含量;家兔随机分为空白组,半夏,掌叶半夏及禹白附的凝集素组及毒针晶组,半夏,掌叶半夏及禹白附的针晶加其凝集素组,观察家兔眼结膜充血,水肿及分泌物,考察PTA,PPA,TGA的刺激性作用。结果:大鼠ip PTA,PPA,TGA后,与空白组腹腔液中性粒细胞迁移数目(633.33±233.81)×106/L比较,100 mg.L-1组PTA(1 083.33±116.9)×106/L,PPA(1 033.3±150.55)×106/L及TGA(1 133.33±103.28)×106/L均具极显著性差异(P<0.01),均可引起严重的中性粒细胞向腹腔迁移,且浓度升高,作用增强;大鼠腹腔液的总蛋白,NO及PGE2的含量显著升高,均可加重针晶刺激家兔眼结膜强烈水肿。结论:天南星科中具有刺激性毒性作用的半夏,掌叶半夏及禹白附所含凝集素蛋白具有刺激性作用,是其毒性刺激性成分。     

半夏栽培生态学研究

目的 半夏栽培生态研究。方法 对半夏Pinellia ternata不同质量的种茎进行田间栽培实验。结果 半夏块茎收获量随种茎质量增加，但相对增重则随着种茎质量的增加而减少；子块茎、珠芽和种子数量随着块茎质量而增加，半夏繁殖系数随半夏种茎质量增大而增大；统计表明叶柄数量、地上部分干重、珠芽总数、最大株芽质量、花总数与种茎的质量呈极显著正相关；珠芽总数与叶柄数量呈极显著正相关；子块茎数与种茎的增重呈负相关，而叶柄数也与种茎增重负相关。结论 半夏栽培中营养生长与生殖生长、地上部分生长与地下部分生长相互制约。     

道地药材荆半夏的指纹图谱研究

目的:建立荆半夏药材中麻黄碱含量的HPLC测定方法,为科学评价及有效控制荆半夏药材质量提供依据。方法:采用HPLC法测定含量。色谱条件:C18柱,乙腈-0.1%三乙胺为流动相,检测波长:210nm,流速1.0mL/min,柱温35℃。结果:麻黄碱在样品中的平均回收率为97.74%,RSD为1.98%。结论:该方法简便、可靠,可作为荆半夏药材的质量控制方法之一。     

川半夏种茎大小对产量和质量的影响

目的在大田条件下,研究不同大小川半夏种茎对产量和质量的影响,为川半夏规范化栽培提供理论依据。方法选取川半夏主产区3份不同来源地的材料,分别按种茎直径(d)大(d>1.5 cm)、中(1.0 cm相似文献   

半夏珠芽萌发动态及其影响因子的研究

目的研究半夏P inellia terna ta珠芽的萌发动态及其影响因子,为阐明半夏珠芽的生产应用和珠芽发育生物学提供依据。方法利用完全随机实验设计研究半夏珠芽的萌发动态以及珠芽大小、不同覆土深度、土壤干湿度和不同来源对半夏珠芽萌发和半夏生长的影响。结果四川南充半夏珠芽播种约14 d开始萌发,23 d萌发率达60%以上,29 d完成萌发。直径≥8 mm的珠芽的萌发率显著高于5 mm≤直径<8 mm的珠芽;两种覆土深度10和20 mm对半夏珠芽的萌发和半夏幼苗的生长没有显著性影响;保持土壤湿润的珠芽萌发率显著高于土壤见干见湿的珠芽;从播种到23 d时,四川南充半夏的珠芽萌发率极显著高于山西新绛半夏的珠芽,随后二者的萌发率没有显著性差异。另外发现不同来源的半夏珠芽在萌发时叶形会发生变化。结论培育大的珠芽对半夏繁育有重要意义,保持土壤湿度对提高萌发率和促进半夏幼苗生长有重要作用,不同来源的半夏珠芽具有不同的萌发特点和生长特性,应重视半夏不同品系的筛选。     

遮荫影响半夏DNA甲基化的MSAP分析

半夏为天南星科药用草本植物,其块茎入药,为我国一种常见的大宗中药材,市场需求量大。半夏在生长过程中遭遇高温强光易倒苗减产,遮荫可有效缓解半夏的倒苗,进而提升其块茎产量,但相关调控机制并不明确。DNA甲基化作为生物响应环境变化的一种自我修饰方式,常参与调控植物的生长发育。该研究以宿半夏为实验材料,选取自然光下生长的半夏为对照组,90%遮荫处理的半夏为实验组,对其基因组DNA甲基化进行甲基化敏感扩增多态性(MSAP)分析。结果表明,20对选扩引物共检测到617个基因位点,其中光照组占311个、遮荫组为306个。光照组和遮荫组中发生甲基化的位点分别占58.2%,71.57%,甲基化位点中全甲基化比率分别为27.65%,29.41%,表明遮荫显著诱导半夏基因组甲基化水平的提升。另外,相比光照组,遮荫促进32.51%的基因发生甲基化,同时诱导了16.25%基因去甲基化。该研究揭示了遮荫处理条件下半夏基因组的DNA甲基化变异水平,为进一步从表观遗传水平探析遮荫调控半夏生长的机制奠定了初步的理论基础。     

半夏中重金属和农药残留的测定

目的:测定半夏中微量元素铅、镉、砷、汞和农药六六六、滴滴涕的含量。方法:原子吸收分光光度法,原子荧光光谱法,气相色谱法。结果:半夏中铅的含量为1.9438~3.6938 mg/kg,镉的含量为0.3988~1.9440 mg/kg,砷的含量为0.1940~0.9643 mg/kg,汞的含量为0.0040~0.1420 mg/kg;半夏中总六六六的含量为0.04%~0.57%,总滴滴涕的含量的含量为0.03~0.07%。结论:半夏中重金属、六六六和滴滴涕的含量符合相关规定。