胆汁中外泌体及外泌体RNA提取方法比较

目的比较超速离心法和聚合沉淀法分离胆汁外泌体及外泌体RNA的差异。方法收集2017年6月至2018年12月在南京医科大学第二附属医院消化内科行内窥镜逆行胆囊-胰腺造影术(ERCP)患者术中胆汁,分别采用超速离心法和聚合沉淀法对胆汁进行分离。采用透射电镜法观察提取外泌体的形态;采用粒径分析所得粒子的直径;采用流式细胞术检测表面标记物CD63和CD81的表达差异;Trizol法提取RNA,分析RNA水平及A260/A280;采用实时荧光定量(RT-PCR)检测4种miRNA表达,分析两种方法所得平均CT值的差异。结果超速离心法和聚合沉淀法所得外泌体形态和粒径分布无明显差异;流式细胞术分析显示,超速离心法所得外泌体CD63和CD81阳性率较高。RNA分析显示,聚合沉淀法提取RNA水平较高,检测的miR-671-5p、miR-126-3p、miR-210-3p、miR-483-5p平均CT值较小。结论超速离心法和聚合沉淀法均可提取出一定数量的外泌体,其中超速离心法得到的RNA较纯,而聚合沉淀法得到的RNA水平较高,可用于稀缺标本的检测。因此,进一步寻找高敏感、高特异、经济便捷的方法仍然十分必要。     

三种方法提取血清外泌体的比较研究

目的　比较超速离心法、沉淀法和尺寸排阻色谱法提取血清外泌体的得率和纯度。方法　选取8例健康体检受试者血清,用三种方法提取外泌体,采用纳米流式检测仪、透射电子显微镜和Pierce BCA 蛋白检测试剂盒分别检测外泌体颗粒数、粒径分布、形态特征和蛋白浓度;分析外泌体颗粒数。外泌体颗粒数和蛋白总量比值、Triton X-100处理前后颗粒数变化来评估外泌体提取的得率和纯度。结果　超速离心法、沉淀法和尺寸排阻色谱法提取外泌体粒径均分布在40~150 nm;透射电子显微镜下均能观察到呈明显茶托状的双层膜结构,但沉淀法提取的外泌体混有聚乙二醇聚合物及蛋白大颗粒;蛋白质印迹结果显示三种方法提取的外泌体均表达外泌体标记蛋白;沉淀法提取的血清外泌体颗粒数高于超速离心法和尺寸排阻色谱法[(1.11±0.07)×1011 particley/ml vs (2.54±0.04)×1010particley/ml, (7.51±0.89)×1010particley/ml],差异均有统计学意义（P<0.05）,尺寸排阻色谱法提取外泌体颗粒数高于超速离心法（P<0.001） ;尺寸排阻色谱法提取外泌体纯度高于超速离心法和沉淀法[(5.66±0.45)×107particles/μg vs (7.65±0.42)×106 particles/μg, (3.18±0.45)×106 particles/μg],超速离心法提取外泌体纯度高于沉淀法,差异均有统计学意义（P<0.05）。结论　超速离心法、沉淀法和尺寸排阻色谱法均能提取出血清外泌体,超速离心法步骤繁琐,耗时较长,提取外泌体得率与纯度较低;沉淀法操作简单,耗时短,提取外泌体得率最高,但外泌体纯度最低;尺寸排阻色谱法操作简单,耗时短,提取外泌体的纯度最高;相比而言,尺寸排阻色谱法显然优于超速离心法和沉淀法。     

肝星状细胞来源外泌体不同提取方法的比较

目的采用超速离心法(UC)和优化后的排阻超滤组合法提取肝星状细胞(HSC)来源外泌体,比较两种提取方法所得外泌体的纯度、浓度和总蛋白量。方法分别用UC法和优化后的排阻超滤组合法提取HSC来源外泌体。使用透射电镜观察外泌体形态,纳米颗粒跟踪分析技术(NTA)检测外泌体浓度及大小,二喹啉甲酸(BCA)试剂盒检测外泌体总蛋白浓度,Western blotting法检测外泌体表面标志物肿瘤易感基因101蛋白(TSG101)、分化抗原9(CD9)的表达。结果两种方法均可得到圆盘形的30~150 nm膜性囊泡。优化后的排阻超滤组合法所得外泌体,在电镜下可见明显的“茶托”形结构,背景较干净,纯度较高。UC法和优化后的排阻超滤组合法所得外泌体浓度分别为2×10^9、3.6×10^11 particles/ml,平均粒径分别为112.6、121.7 nm。优化后的排阻超滤组合法所得外泌体总蛋白浓度及TSG101的表达高于UC法。结论优化后的排阻超滤组合法虽然操作繁琐,成本较高,但提取的HSC来源外泌体浓度、总蛋白浓度和纯度较超速离心法高,可以作为外泌体分离的有效方法。     

外泌体在前列腺癌中的应用及其研究进展

前列腺癌起病隐匿,目前临床常用的生物学标志物——血清PSA易受年龄、炎症等因素影响造成误判,故仍需寻找更优的标志物,并建立更先进的诊治方案。外泌体是由各种细胞天然形成的纳米级胞外囊泡,携带有大量蛋白质、核酸和脂质等,其作为细胞间物质信息递送的载体在前列腺癌的发生、发展进程中发挥着重要作用,并在前列腺癌诊疗方面展现了巨大潜力。该文综述了外泌体的生物学特性、分离方法及其在前列腺癌发展与诊疗方面的研究进展。     

尿液外泌体提取优化及冷冻对外泌体RNA含量的影响

目的对现有沉淀法提取尿液外泌体进行优化,并探讨不同的储存条件对尿液外泌体RNA含量的影响。方法分别用先浓缩后沉淀法和直接沉淀法提取人尿液标本中的外泌体,比较两种方法的分离效率和成本;采用ExoQuick-TC~(TM)沉淀试剂盒提取外泌体;纳米粒子跟踪分析技术(NTA)检测外泌体浓度及粒径分布;动态光散射技术(DLS)检测外泌体电位;透射电镜(TEM)观察外泌体形态;western blot检测外泌体标记分子CD63及Alix蛋白的表达;另取10例临床尿液标本验证先浓缩后沉淀的提取方法,以证实优化方法的可靠性。实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测20例前列腺癌患者尿液外泌体经过反复冻融(新鲜、1、3、5次)及9例前列腺癌患者尿液外泌体在-80℃冷冻不同时间(新鲜、1周、2周、1个月)时外泌体RNA标志物let-7c和PSA mRNA的表达量,并采用Wilcoxon秩和检验进行统计学分析。结果 NTA检测两种方法提取的外泌体粒径分布为30～150 nm,均为单峰;DLS结果显示,两种方法提取的外泌体电位均呈负值;透射电镜观察两种方法提取的外泌体大小较为一致,直径分布为30～150 nm;western blot检测证实优化方法存在外泌体标记分子CD63及Alix蛋白;10例尿液标本提取的外泌体浓度约为10~9～10~(11) particles/mL。外泌体经过5次冻融后let-7c和PSA mRNA含量明显下降,Z值分别为-1.69、-1.73(P均0.05)。而外泌体在-80℃冷冻1个月后其RNA含量保持稳定。结论优化后的外泌体提取方法在保证外泌体浓度和质量的前提下极大地降低成本,分离得到的外泌体在-80℃短时间冷冻后其RNA含量保持稳定,但不能反复冻融超过5次。     

血清外泌体ERG、PSMA在前列腺癌患者中的表达及其预后评估价值

目的 探讨血清外泌体ETS相关基因(ERG)、前列腺特异性膜抗原(PSMA)在前列腺癌(PCa)患者中的表达及其预后评估价值.方法 选取2015年7月2019年7月期间成都上锦南府医院收治的105例PCa患者为癌症组,100例良性前列腺增生患者为疾病组,同期体检的95例健康者为健康组;比较各组间血清外泌体ERG、PSM...     

ExoQuick法提取人血清外泌体的临床价值

目的探讨ExoQuick法提取人血清外泌体的方法及临床价值。方法选取2016年1月至2018年1月在该院体检的健康受试者50例,清晨抽取受试者空腹外周静脉血4mL,标本分成2等份,分别采用超迷离心法、ExoQuick法检测人血清外泌体。比较两种方法的检测时间以及投射电镜、BCA蛋白定量、western blot的检测结果。结果透射电镜检查发现,超迷离心法提取的人血清外泌体外形较圆,为类圆形或椭圆形囊泡状,绝大多数囊泡外周能观察到膜性结构,聚集形态既可单个分布,又可聚集成落,内部可见低电子密度物质,人血清外泌体直径分布在30～100nm,背景清晰。ExoQuick法提取的人血清外泌体外形多为椭圆形,密度均匀,直径30～50nm,背景干净、清晰。ExoQuick法提取的人血清外泌体BCA蛋白水平[(115.59±0.84)g/L]显著高于超迷离心法[(20.69±0.57)g/L,t=52.361,P0.05]。超迷离心法最长提取时间是66min,最短提取时间是60min,平均提取时间为(63.58±1.25)min。ExoQuick法最长提取时间是60min,最短提取时间是52min,平均提取时间为(55.62±1.20)min。ExoQuick法提取的人血清外泌体的时间少于超迷离心法(P0.05)。结论 ExoQuick法提取人血清外泌体方便、有效,能快速提取微小人血清外泌体、提高蛋白检出量,且对CD63敏感,可推荐使用。     

尿液外泌体circ＿0040507联合PSA对前列腺癌诊断价值的初步研究

目的探讨尿液外泌体circ₀040507及其联合前列腺特异性抗原(PSA)对前列腺癌的诊断价值。方法选择35例前列腺癌患者(前列腺癌组)和27例BPH患者(BPH组),采用第三代微滴数字PCR检测尿液外泌体circ₀040507表达水平,以前列腺活组织检查(活检)病理结果为金标准,应用受试者工作特征(ROC)曲线分析尿液外泌体circ₀040507、PSA及两者联合对前列腺癌的诊断效能。结果前列腺癌组和BPH组尿液外泌体circ₀040507表达量分别为(8.35±5.87) copies/ml和(3.25±2.45)copies/ml,前列腺癌组尿液外泌体circ₀040507表达量高于BPH组(P <0.001);尿液外泌体circ₀040507、PSA及两者联合诊断前列腺癌的ROC曲线下面积分别为0.767(95%CI 0.649～0.896)、0.782(95%CI 0.668～0.896)、0.851(95%CI0.755～0.946)。结...     

尿液外泌体miR-106a联合miR-373诊断前列腺癌的价值

目的 探讨尿液外泌体微小RNA-106a(miR-106a)联合微小RNA-373(miR-373)诊断前列腺癌的应用价值。方法 选取2016年11月至2018年4月在本院就诊的前列腺癌患者69例作为观察组,另选取同期在本院进行常规体检的健康男性69例为对照组。采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测尿液外泌体中miR-106a、miR-373的表达情况。分析miR-106a、miR-373表达与前列腺癌临床病理特征的关系。分别以miR-106a、miR-373水平为检验变量绘制受试者工作特性曲线（ROC）,采用四表格分析血清前列腺特异性抗原（PSA）以及miR-106a联合miR-373检测诊断前列腺癌的应用价值。结果 观察组miR-106a、miR-373的表达均明显低于对照组,差异有统计学意义（P<0.05）。前列腺癌患者尿液外泌体中miR-106a和miR-373的表达水平与临床分期、淋巴结转移和远处转移有关（P<0.05）。血清PSA诊断前列腺癌的灵敏度为94.2%,特异度为26.1%。前列腺癌患者尿液外泌体中miR-106a、miR-373水平ROC曲线的A...     

血清前列腺健康指数对 tPSA灰区前列腺癌患者的诊断价值探讨

目的　探讨前列腺健康指数（PHI）在血清总前列腺特应性抗原（tPSA）灰区（4~10 ng/ml）前列腺癌（PCa）患者中的诊断价值。方法　选择 2018年 3月～ 2019年 10月上海市金山区亭林医院泌尿外科收治的 94例血清 tPSA在 4～ 10 ng/ml的老年男性患者临床资料。其中 PCa组 21例,前列腺良性增生（ BPH）73例。检测两组患者血清中 tPSA、游离 PSA（fPSA）以及前列腺特异性抗原前体 2型（p2PSA）的指标水平,从而计算得出 fPSA/tPSA比值和 PHI,并绘制 tPSA, fPSA/tPSA, p2PSA以及 PHI的受试者工作特征（ ROC）曲线,得出曲线下面积（ AUC）、95%CI以及截断值（ cut off value）,分析 tPSA, fPSA/tPSA, p2PSA以及 PHI的检测对 PCa患者的早期诊断价值。结果　两组患者的血清 tPSA,fPSA和p2PSA水平差异均无统计学意义（U=899,450和 261.5,均 P >0.05）;两组患者 fPSA/tPSA（U=261.5, P =0.023）与 PHI（t=1275.5,P<0.001）指标的差异有统计学意义（均 P <0.05）。tPSA, fPSA/tPSA, p2PSA以及 PHI的 ROC曲线下面积分别为 0.586,0.676,0.613和 0.832,其中 tPSA, fPSA/tPSA和 p2PSA（AUC值均 <0.7）的诊断效能较低,而 PHI的诊断效能较高。血清 PHI的准确度（ 81.9%）明显高于 tPSA, fPSA/tPSA和 p2PSA,差异有统计学意义（ χ2=6.975, 4.145和 6.211, 均 P <0.05）。tPSA及 p2PSA指标对提高 PCa的诊断效率无明显助益（均 P >0.05）,fPSA/tPSA和 PHI明显提高 Pca的诊断效力（ P<0.05）,其中 PHI的诊断效果最佳（ P<0.001）,PHI的 AUC值 0.832（95% CI: 0.733～ 0.931）高于 fPSA/tPSA的 AUC值 0.676（95% CI: 0.539～ 0.812）,差异有统计学意义（Z=2.758,P<0.01）。结论　PHI诊断 tPSA灰区 PCa患者的诊断效能与准确性均较高,具有比 tPSA, fPSA/tPSA和 p2PSA更高的诊断价值。     

1例进展期前列腺癌的循证治疗

针对进展期前列腺癌的治疗问题,运用循证医学的方法 全面检索相关的临床治疗证据并进行质量评价.结果 显示,各种雄激素阻断方法疗效相似,但早期进行雄激素全阻断的疗效更好;对激素不敏感性前列腺癌,采用米托蒽醌、强的松、多西他赛及苏拉明等化疗药物有一定疗效;锶-89内照射的镇痛效果较传统的外照射好,而双磷酸盐无效;抗雄激素撤退可使部分患者前列腺特异性抗原下降,但临床疗效有待进一步评价.     

经尿道前列腺电切术治疗晚期前列腺癌合并膀胱出口梗阻的疗效观察

目的探讨经尿道前列腺电切术（TURP）治疗晚期前列腺癌合并膀胱出口梗阻（BOO）的疗效。方法对24例前列腺癌合并BOO症状的患者采用经尿道前列腺电切术同时切除双侧睾丸,术后使用抗雄激素药物治疗,比较治疗前、后患者的临床症状、国际前列腺症状评分（IPSS）、前列腺特异性抗原（PSA）水平及最大尿流率（Qmax）的变化。结果手术后患者排尿困难、尿潴留、血尿等症状显著改善;与手术前比较,手术后患者IPSS评分和血清PSA水平均显著下降,最大尿流率明显增加（均P〈0．05）。结论经尿道前列腺电切术是治疗晚期前列腺癌合并B00的有效方法。     

人间充质干细胞来源外体诱导胃癌细胞恶性转化

目的探讨人间充质干细胞(MSCs)能否通过外体(exosome)促进胃癌细胞迁移、侵袭和化疗抵抗,诱导胃癌的恶性转化。方法提取不同细胞来源的exosome(HFL-ex和MSC-ex),并用可视型纳米颗粒分析仪及western blot进行鉴定;Transwell实验检测不同处理因素下对照组、HFL-ex组和MSC-ex组细胞的迁移、侵袭能力;构建免疫缺陷小鼠模型,处理7 d后分别检测对照组、5-FU组、HFL-ex组和MSC-ex组小鼠的肿瘤体积。结果可视型纳米颗粒分析仪结果表明,HFL-ex和MSC-ex的直径约为(110±49)nm,western blot证实其表面均表达CD63蛋白;Transwell实验结果表明,与HFL-ex比较,MSC-ex可促进SGC-7901细胞的迁移与侵袭(P均0.05);荷瘤实验结果显示,MSC-ex组小鼠肿瘤体积大于5-FU组和HFL-ex组,差异有统计学意义(P0.05)。结论 MSCs可通过旁分泌exosome的方式促进胃癌细胞迁移、侵袭和化疗抵抗,诱导胃癌的恶性转化。     

Vaccines as Monotherapy and in Combination Therapy for Prostate Cancer

Prostate cancer is the second leading cause of cancer death among men in the United States. Standard‐of‐care chemotherapy for metastatic castration‐resistant prostate cancer is associated with significant but modest survival benefit, indicating a need for alternative and/or additional approaches. The use of therapeutic cancer vaccines for the treatment of prostate cancer represents a novel targeted therapeutic approach. Whereas vaccine strategies are being developed for the treatment of various stages of prostate cancer, this article focuses on novel vaccine strategies for castration‐resistant prostate cancer that have been translated into late‐stage clinical studies.     

差异表达基因Hepsin在前列腺癌中的表达及其意义

目的探讨cDNA芯片筛选出的前列腺癌（PC）差异表达基因Hepsin在PC中的表达及其意义。方法应用RT—PCR检测Hepsin在正常前列腺组织、PC组织及PC细胞系中的表达，并进行半定量分析，同时采用免疫印迹法检测Hepsin的表达，采用免疫组织化学染色法检测40例PC标本、15例前列腺增生（BPH）标本和6例正常前列腺标本的Hepsin表达水平。结果在mRNA水平，Hepsin在PC中的表达水平高于正常前列腺组织（P=0．026），但在PC细胞系中的表达并不增高。在蛋白表达水平，正常前列腺组织未表达Hepsin，而PC及PC细胞系均表达Hepsin。PC和BPH标本免疫组化检测均为阳性，但两者间有非常高度显著性差异（P=0．000），而正常前列腺标本为阴性。结论Hepsin在PC中的表达增高，有可能作为早期诊断的标志以及基因治疗的靶基因。     

游离与总前列腺特异抗原检测在前列腺癌诊断中的应用

目的研究血清游离前列腺特异抗原(FPSA)与总前列腺特异抗原(TPSA)比值对前列腺癌患者的诊断价值。方法用电化学发光免疫分析法检测54例前列腺增生(BPH),32例前列腺癌(Pca)和38例正常男性的血清FPSA、TPSA含量,并计算FPSA/TPSA比值,讨论它们对前列腺癌的诊断意义。结果单独以血清TPSA大于4.0μg/L作为前列腺癌的诊断标准,其敏感性和特异性分别为85.0%,76.2%。以FPSA/TPSA小于0.11作为前列腺癌的诊断限定值,当血清TPSA小于4.0μg/L时,FPSA/TPSA比值的敏感性和特异性分别为98.0%,68.1%;当血清TPSA大于10.0μg/L时,FPSA/TPSA比值的敏感性和特异性分别为68.5%,69.1%;而当血清TPSA在4.0￣10.0μg/L时,FPSA/TPSA比值的敏感性和特异性分别为95.3%,90.5%。结论当血清TPSA在4.0￣10.0μg/L时,FPSA/TPSA比值可大大提高前列腺癌诊断的准确率。     

前列腺癌经直肠超声声像图与病理对照

目的 本文观察前列腺癌部位声像图特点并与病理对照,以便帮助穿刺点的正确选择,提高前列腺穿刺活检阳性率。方法 总结71例经病理证实为前列腺癌的125个部位的经直肠超声声像图,观察有无异常回声肿块和异常血流区域,以及肿块的超声回声类型和边界情况。结果 125个前列腺癌部位其经直肠超声（TRUS）检查发现异常的有100个,占80％;TRUS检查未发现可疑之处的为25例,占20％。结论 TRUS可作为前列腺穿刺活检穿刺点选择的重要方法。     

低血清前列腺特异抗原型高危前列腺癌的临床特征

目的:提高对低血清前列腺特异抗原(PSA)型高危前列腺癌的认识及诊疗水平。方法:回顾分析8例低PSA型高危前列腺癌患者的临床资料。结果:8例患者入院平均PSA值为2.14ng/mL;7例患者肛指检查异常;穿刺病理诊断腺癌6例(其中1例为导管腺癌),小细胞癌2例;行Gleason评分者5例,均>7分;T3期以上患者占75%,5例有远处转移。对2例前列腺小细胞癌行内分泌治疗,其中1例再行化疗;对6例前列腺癌,1例行内分泌治疗加根治性放疗,1例行前列腺癌根治术加内分泌辅助治疗,其余4例均行内分泌治疗。平均随访19.5个月,8例患者中3例死亡,4例病情进展,1例病情无进展。结论:低PSA型高危前列腺癌起病隐匿,恶性程度较高,诊断及监测不依赖于PSA,治疗效果不佳,需引起足够重视。     

基于SWE和MRI对临床显著性前列腺癌的诊断价值

目的：探究基于剪切波弹性成像（SWE）和多参数磁共振成像（mpMRI）对临床显著性前列腺癌（csPCa）的诊断价值。方法：回顾性选取2020年10月至2022年1月在延安大学附属医院泌尿外科疑诊为前列腺癌（PCa）并行超声引导下前列腺穿刺活检的患者为研究对象,共纳入患者74例。根据穿刺活检病理结果将患者分为PCa组与非PCa组,csPCa组与非PCa+临床不显著前列腺癌组（cisPCa）,其中PCa组24例,csPCa组17例。采用单因素及多因素logistic逐步回归分析筛选csPCa的独立预测因子,并通过ROC曲线比较预测概率值与各独立预测因子的诊断效能。结果：tPSA、fPSA、PSAD、PV、PIRADS、Emax差、Emean差和Emin差在PCa组与非PCa组,以及非PCa+cisPCa组与csPCa组之间的差异有统计学意义（P＜0.05）。logistic回归结果显示tPSA、PV、Emax差及PIRADS是csPCa的独立预测因子,ROC曲线结果显示logistic回归模型曲线下面积（AUC）为0.954,灵敏度为0.882,特异度为0.947,结果均优于各独立预测因子。结论：Emax差及PIRADS是csPCa的独立预测因子,与tPSA、PV联合具有较好的诊断效能。