通利枢机针刺法对右侧大脑中动脉永久性缺血大鼠Jagged2和Notch2蛋白表达的影响

目的:观察通利枢机针刺法对右侧大脑中动脉永久性缺血大鼠行为学、脑梗死体积百分比、缺血侧脑半球海马组织Jagged2和Notch2蛋白表达的影响,探讨通利枢机针刺法改善缺血性脑血管病的作用机制。方法:SD大鼠随机分为假手术组、模型对照组、阳性药物组、普通针刺组、通利枢机组,每组10只。采用线栓法建立右侧大脑中动脉永久性缺血大鼠模型。阳性药物组给予胞二磷胆碱(0.4 mg/kg)灌胃;普通针刺组针刺"百会""大椎"穴,每天15 min;通利枢机组针刺左侧"正营""天井""环跳"穴,每天15 min。各组均连续干预28 d。术后第1、7、14、21、28天进行神经功能缺损评分,全部治疗结束后检测大鼠脑梗死体积百分比,蛋白质免疫印迹法检测大鼠右侧脑半球海马组织Jagged2和Notch2蛋白的表达。结果:与假手术组比较,同时点模型对照组神经功能缺损评分显著升高(P0.001);与模型对照组、阳性药物组、普通针刺组比较,通利枢机组术后第21天神经功能缺损评分均显著降低(P0.01)。与假手术组比较,模型对照组脑梗死体积百分比明显升高(P0.05);与阳性药物组比较,通利枢机组脑梗死体积百分比明显降低(P0.05)。与模型对照组比较,普通针刺组Jagged2蛋白表达明显上调(P0.01);与模型对照组、阳性药物组、普通针刺组比较,通利枢机组Jagged2和Notch2蛋白表达明显上调(P0.01)。结论:针刺可以改善右侧大脑中动脉永久性缺血大鼠神经功能缺损的行为学表现,通利枢机针刺法对大鼠缺血侧海马组织Jagged2和Notch2蛋白有明显上调作用,这可能与激活Notch信号通路达到神经保护作用有关。     

健脾益智胶囊对大脑中动脉栓塞大鼠海马神经干细胞增殖及Notch1、Jagged1表达的影响

目的:探讨健脾益智胶囊对大脑中动脉栓塞(MCAO)大鼠海马神经干细胞(NSCs)增殖及Notch1、Jagged1基因与蛋白表达的影响。方法:建立MCAO大鼠模型,随机分为正常组、假手术组、模型组、西药组、中药组。采用免疫组化、Western Blotting、Real-Time RT-PCR法于术后7d、14d、28d观察海马NSCs增殖,Notch1、Jagged1蛋白及mRNA表达情况。结果:术后7d中药组NSCs、Notch1、Jagged1蛋白及mRNA表达显著高于模型组、西药组(P<0.05)。术后28d中药组NSCs表达显著高于模型组、西药组(P<0.05);Notch1蛋白及mRNA低于正常、假手术组,但高于模型组、西药组(P<0.05)。结论:健脾益智胶囊可促进BrdU阳性细胞数量增加,提高Notch1、Jagged1蛋白及基因的表达,提示健脾益智胶囊能可能通过激活Notch通路以促进缺血后神经干细胞增殖分化。     

失答剌知丸对脑缺血再灌注大鼠海马区Notch1和Jagged1含量的影响

目的:观察失答剌知丸对脑缺血再关注大鼠海马区Notch1和Jagged1含量的影响。方法:将102只SD大鼠随机分为17组,每组6只,分别为:空白组,假手术组,模型组,尼莫地平组,失荅剌知丸高剂量组、中剂量组和低剂量组,其中后5组分别依据再灌注时间的不同分为1 d、3 d、7 d组。以上各组除空白、假手术组外,均采用线栓法制备局灶性脑缺血再灌注模型(MCAO)。其中空白组、假手术组、模型组均用生理盐水灌胃;尼莫地平组给予浓度为1.08 g/L灌胃;失荅剌知丸组则以浓度分别为4.5 g/m L、3.0 g/m L和1.5 g/m L灌胃;以上各组每天同一时间灌胃,2次/d。各组分别在缺血再灌注1 d、3 d、7 d各时间点取材,检测Notch1和Jagged1水平。结果:(1)空白组与假手术组对比没有统计学意义(P>0.05);(2)模型组和各药物组相较于空白组、假手术组均有统计学意义(P<0.05);(3)各药物组相较于模型组均有统计学意义(P<0.05);(4)尼莫地平组与失荅剌知丸低剂量组对比有统计学意义(P<0.05),与失荅剌知丸中剂量组对比没有统计学意义(P>0.05),与失荅剌知丸高剂量组对比差异性显著(P<0.01);(5)失荅剌知丸低、中、高剂量组,随着1 d、3 d、7 d时间点的延长,Notch1和Jagged1表达量依次呈上升趋势,其中尤以7 d组表达量最高。结论:失答剌知丸治疗脑缺血可能与自身药效和促进海马区Notch1和Jagged1表达水平有关。     

柚皮苷联合头穴针刺对脑缺血大鼠血管新生及Notch1/Akt/eNOS通路的影响

目的 观察柚皮苷联合头穴针刺对脑缺血大鼠脑组织血管新生及Notch1/丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶(Akt)/内皮型一氧化氮合酶(eNOS)信号通路的影响。方法 将120只SD大鼠随机分组为假手术组、模型组、尼莫地平组、柚皮苷组、头穴针刺组和柚皮苷+头穴针刺组,每组20只。除假手术组外,其余组大鼠采用线栓法复制大鼠局灶性脑缺血模型。造模成功后,尼莫地平组给予尼莫地平混悬液12 mg/kg灌胃,柚皮苷组给予柚皮苷溶液80 mg/kg灌胃,头穴针刺组给予头穴针刺干预,柚皮苷+头穴针刺组给予柚皮苷溶液80 mg/kg灌胃和头穴针刺干预,假手术组及模型组给予等量生理盐水灌胃,各组均每天干预1次,连续干预7 d。干预结束后,记录各组大鼠神经功能评分,干/湿重法和TTC染色观察大鼠脑组织含水量及脑梗死体积,ELISA法检测大鼠血清中血管内皮生长因子(VEGF)、血管内皮生长因子受体2(VEGFR-2)水平,免疫组化法检测海马组织中VEGF阳性表达情况,Western blot法检测海马组织中Notch1、Akt、磷酸化Akt (p-Akt)、eNOS、磷酸化eNOS(p-eNOS)蛋白表达情况,RT-P...     

电针结合传统针刺百会、大椎穴对脑缺血模型大鼠GAP-43表达的影响

目的:探讨针刺百会、大椎对脑缺血模型大鼠GAP-43表达的影响,探索其对神经功能再生的影响机制,为临床针刺百会、大椎治疗缺血性脑血管病提供实验依据。方法:选取SPF级雄性大鼠150只,体质量230～270 g,采用随机数字法随机分为五个大组,每组30只大鼠。各组又随机平均分为术后3 d、7 d、21 d 3个不同时段亚组,每组10只。采用线栓法制备脑缺血模型。电针组针刺主穴后,接G6805-2型电针仪,每天1次,每次30 min。针刺组予针刺干预,不接电针,每5 min行针1次,每天1次,电针结合传统针刺组,行电针及传统针刺方法,每天1次。模型组术后不予处理,假手术组使实验大鼠大脑中动脉暴露,不予栓线。各组大鼠在造模后3 d、7 d、21 d 3个不同时段采用神经功能缺损评分及免疫组化法检测脑缺血周围组织GAP-43蛋白表达情况,采用JD801形态学图像分析系统进行分析,对结果进行统计学分析。结果:各时间段模型组神经功能评分与假手术组比较显著升高,差异具有统计学意义(P<0.05); 在各时间段其他组与模型组比较,电针组、传统针刺组、电针结合传统针刺组神经功能缺损评分均较模型组降低,差异具有统计学意义(P<0.05); 术后第7天和第21天,与电针组、传统针刺组比较,电针结合传统针刺组大鼠神经功能缺损评分降低,差异具有统计学意义(P<0.05)。各时间段模型组脑组织GAP-43蛋白的免疫表达与假手术组比较显著升高,差异具有统计学意义(P<0.05)。在各时间段其他组与模型组比较,电针组、传统针刺组、电针结合传统针刺组大鼠相应区域GAP-43免疫活性较模型组增高,差异具有统计学意义(P<0.05); 术后第3天、第7天和第21天,与电针组、传统针刺组比较,电针结合传统针刺大鼠GAP-43免疫活性显著增高,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:电针结合传统针刺百会、大椎能促进各时间点脑缺血大鼠脑组织内GAP-43表达,改善脑血管的缺血状态。     

藏医白脉疗法对局灶性脑缺血再灌注大鼠脑损伤的保护作用及对海马齿状回Jagged1表达的影响

目的探讨白脉疗法对局灶性脑缺血再灌注大鼠脑损伤的保护作用及对海马齿状回Jagged1表达的影响。方法线栓法制作局灶性脑缺血再灌注大鼠模型。随机分为假手术组、模型组、白脉疗法组,脑缺血1.5小时,分别再灌注7天、14天,通过氯化三苯基四氮唑(triphenyltetrazolium chloride,TTC)染色观察脑梗死面积,苏木精-伊红染色法(hematoxylin-eosin staining,HE)染色观察皮层细胞形态变化,并应用免疫组化法检测各组大鼠海马齿状回Jagged1阳性细胞数量。结果 (1)TTC染色观察到正常脑组织呈鲜红色,梗死区脑组织呈苍白色,并且随着再灌注时间的延长可见梗死区扩大,白脉疗法组的脑梗死体积小于模型组,且14天时与模型组比较有显著性差异(P0.05)。(2)HE染色表明白脉疗法组脑缺血大鼠皮层神经元的损伤程度低于模型组。(3)白脉疗法可以上调脑缺血大鼠海马齿状回SGZ的Jagged1表达,术后7天、14天Jagged1阳性细胞数高于模型组、假手术组,且有显著性差异(P0.05)。结论白脉疗法对局灶性脑缺血再灌注大鼠脑损伤有一定的保护作用,且可促进大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤后海马齿状回区Jagged1的表达,Jagged1的表达增加可能是白脉疗法通过Notch通路促进脑缺血损伤后内源性神经干细胞增殖分化的分子机制之一。     

针刺百会穴、风府穴对脑缺血损伤大鼠神经功能及NGF、BDNF表达的影响

目的:观察针刺百会穴、风府穴对脑缺血损伤大鼠神经功能及损伤侧皮质神经生长因子(nerve growth factor,NGF)、脑源性神经营养因子(brain-derived neurotrophic factor,BDNF)表达的影响。方法:用随机数字表法将动物随机分为假手术组、模型组和针刺组,模型组和针刺组大鼠使用大脑中动脉线栓阻塞法,技术制作永久性脑缺血损伤模型;假手术组大鼠不做大脑中动脉线栓阻塞法仅做颈总动脉分离手术。针刺组取百会穴、风府穴,使用0.30 mm×25 mm毫针刺入百会穴、风府穴后,使用平补平泻捻转法作为行针手法,每次留针时间30 min,15 min后行针1次,术后4 h接受针刺治疗,每天治疗1次。每组各24只,再分为术后3 d、术后7 d、术后14 d 3个小组,每小组8只,术后4 h对大鼠进行神经功能缺损评分,运用神经缺损体征评分和感觉、运动能力评分,通过免疫组化技术进行NGF、BDNF显色,比较分析各组大鼠脑组织中阳性细胞的表达情况。结果:治疗前各组大鼠行为学功能评分无统计学意义(P0.05),治疗后针刺组大鼠行为学功能评分与模型组比较有统计学意义(P0.05);与假手术组比较,模型组大鼠皮质NGF、BDNF的表达显著升高(P0.01);与模型组比较,针刺组大鼠皮质NGF、BDNF的表达显著升高(P0.01)。结论:针刺百会穴、风府穴对脑缺血损伤大鼠神经功能有保护和修复作用,其机制可能与上调脑损伤皮质NGF、BDNF蛋白的表达有关。     

复方丹参片对急性脑缺血大鼠药理作用的探讨

目的观察复方丹参片对急性脑缺血大鼠的治疗效果,探讨其对急性脑缺血大鼠的保护作用和机制。方法采用Longa改良栓线法制备大鼠大脑中动脉缺血模型。实验大鼠随机分为正常组、假手术组、模型组、血塞通胶囊组、复方丹参片组5组,术后后正常组、假手术组、模型组予蒸馏水灌胃。血塞通胶囊组予血塞通胶囊灌胃,复方丹参片组予复方丹参片灌胃。分别在24h,3d,7d等时间点对以上5组进行神经功能缺损评分。断头取脑,TTC染色观察脑梗死面积,免疫组织化学方法及积分光密度值观察梗死周围区脑组织血管新生因子蛋白的表达。结果复方丹参片可明显改善急性脑缺血大鼠的行为学评分,减少梗死面积百分率,显著增加大鼠脑内血管新生因子蛋白的表达,促进急性脑缺血大鼠脑缺血组织侧支循环的建立。结论复方丹参片增强急性脑缺血大鼠梗死灶周围血管生长因子的表达,促进了梗死灶周围的血管新生。     

电针对脑缺血再灌注大鼠脑缺血皮质区基质细胞衍生因子-1α表达的影响

目的:观察电针对局灶性脑缺血再灌注(CI/RI)大鼠脑缺血皮质区基质细胞衍生因子-1α(SDF-1α)、CD34表达的影响,探讨电针通过调控SDF-1/CXC型趋化因子受体4(CXCR4)轴促进CI/RI大鼠神经功能重塑的作用机制。方法:雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组和电针组,每组10只。采用大脑中动脉线栓法制备CI/RI模型。电针组电针大鼠"百会"及"足三里",连续波,频率40 Hz,刺激强度为1～2 mA,留针20 min,每日1次,连续治疗14 d。采用神经功能缺损评分法评价神经功能缺损情况,HE染色法观察大鼠患侧脑组织病理形态变化,免疫组织化学法检测大鼠脑缺血灶周围皮质SDF-1α、CD34的表达。结果:与假手术组比较,模型组神经功能缺损评分明显升高(P<0. 05);HE染色见模型组大鼠出现明显的脑缺血灶;脑缺血灶周围皮质SDF-1α、CD34表达明显升高(P<0. 05)。与模型组比较,电针组神经功能缺损评分逐渐降低,电针3、7、14 d时神经功能缺损评分低于模型组(P<0. 05);HE染色见电针组大鼠脑缺血灶病理损伤减轻;电针14 d后,电针组脑缺血灶周围皮质SDF-1α、CD34表达明显升高(P<0. 05)。结论:电针可以改善CI/RI大鼠神经功能,其作用可能与提高CI/RI大鼠缺血灶周围皮质SDF-1α、CD34表达水平,调控SDF-1/CXCR4轴有关。     

芹菜素对局灶性脑缺血再灌注大鼠脑内caveolin-1表达的影响

目的探讨芹菜素对局灶性脑缺血再灌注大鼠脑内caveolin-1表达的影响。方法采用大脑中动脉栓塞法复制脑缺血再灌注模型,将动物随机分为假手术组、模型组、地塞米松组、芹菜素组,分别给予不同处理,在6 h、1d、3 d7、d不同灌注时间点处死动物,用5分法对大鼠神经行为学进行评定,脑组织TTC染色以及采用免疫组织化学法观察caveolin-1的表达。结果芹菜素能显著减轻神经功能缺损;神经行为学评分显示,芹菜素3 d组大鼠神经行为学评分明显低于模型组(P0.05);TTC染色示模型组出现白色梗死灶;正常脑内有一定量的caveolin-1表达,缺血后caveolin-1迅速增加,分别于术后1 d或3 d达高峰,芹菜素组显著提高caveolin-1的表达,在各时间点芹菜素组与模型组差异显著(P0.01)。结论芹菜素可调节脑缺血再灌注后caveolin-1的表达,对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤具有保护作用,是促进其神经功能恢复的可能机制之一。