24-O-乙酰升麻醇-3-O-β-D-木糖苷对HepG2细胞的细胞毒性及其作用机制

 目的研究24-O-乙酰升麻醇-3-O-β-D-木糖苷对HepG2细胞的细胞毒性及其作用机制。方法利用MTT法进行细胞毒活性初筛;用荧光染色细胞形态学观察法、流式细胞术和蛋白质杂交技术从细胞和分子水平研究该化合物的细胞毒作用机制。结果24-O-乙酰升麻醇-3-O-β-D-木糖苷可以抑制HepG2细胞生长,IC₅₀值为13μmol·L^-1。该化合物可以诱导HepG2细胞凋亡和G₂/M细胞周期阻滞。进一步分子水平研究表明,该化合物可使PARP蛋白裂解,抗凋亡蛋白bcl2下调,凋亡蛋白Bax上调,细胞周期素cyclinB和细胞周期素依赖性激酶cdc2表达下调。结论24-O-乙酰升麻醇-3-O-β-D-木糖苷通过诱导细胞凋亡和G₂/M细胞周期阻滞来发挥细胞毒作用,其凋亡机制涉及caspases家族激活,bcl2下调和Bax表达上调,而G₂/M周期阻滞与cdc2和cyclinB下调直接相关。     

大黄5种炮制品中芦荟大黄素-3-CH_2-O-β-D-葡萄糖苷和大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷变化规律

目的:研究大黄5种炮制品中2个蒽醌苷类成分含量的变化规律。方法:HPLC法同时测定芦荟大黄素-3-CH2-O-β-D-葡萄糖苷、大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷的含量,以Agilent TC-C18(2)为色谱柱,以四氢呋喃-1%冰醋酸溶液(25∶75)为流动相,检测波长410 nm,流速0.9 mL.min-1,柱温35℃。结果:芦荟大黄素-3-CH2-O-β-D-葡萄糖苷的测定范围为0.009 0～0.270 4μg,r=0.999 6,大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷的测定范围0.039 6～1.188μg,r=0.999 6;平均回收率分别为97.85%,97.19%。结论:大黄炮制过程中2个蒽醌苷类成分含量发生了明显变化,生片、醋片的含量没有显著性差异,酒片的含量较生片增加但不显著,熟片、炭片含量较生片下降明显。     

毛蕊异黄酮-7-O-β-D-葡萄糖苷对人宫颈癌HeLa细胞凋亡及Bcl-2/Bax表达的影响

目的探讨毛蕊异黄酮-7-O-β-D-葡萄糖苷(CG)对宫颈癌细胞系HeLa细胞凋亡及Bcl-2/Bax表达的影响。方法体外培养HeLa细胞,分为对照组和实验组,实验组用不同质量浓度的CG分别处理24、48 h,采用MTT法测定CG对HeLa细胞增殖的影响:Hoechst 33258染色观察细胞凋亡情况;采用流式细胞仪检测细胞凋亡和周期;Western blotting法检测半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(Caspase-3)、Bcl-2/Bax蛋白表达情况。结果 CG(2.5~100μg/mL)能抑制HeLa细胞的增殖,呈剂量和时间依赖性;质量浓度为20、40、80μg/mL的CG作用HeLa细胞48 h后,细胞凋亡率逐渐上升,分别为10.40%、25.50%、39.40%,明显高于对照组(1.80%);实验组HeLa细胞Caspase-3的活性形式cleaved Caspase表达量显著增加;促凋亡蛋白Bax表达量升高,而抗凋亡蛋白Bcl-2表达量降低,呈剂量依赖性。结论 CG能抑制HeLa细胞的增殖并诱导其凋亡,其作用机制可能与增加细胞Caspase-3活性、下调Bcl-2蛋白的表达及上调Bax蛋白有关。     

葛根素6"-O-木糖苷对ox-LDL诱导HUVECs细胞损伤的影响

目的 探讨葛根素6"-O-木糖苷对氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导人静脉内皮细胞(HUVECs)损伤的影响.方法 将HUVECs随机分为对照组、ox-LDL组及葛根素6"-O-木糖苷10、20、40μmol/L组,MTT法检测细胞活性,ELISA法检测白介素(IL)-1β和肿瘤坏死因子(TNF)-α水平,试剂盒检...     

23-乙酰泽泻醇B 对SGC-7901细胞线粒体能量代谢的影响

目的观察中药泽泻中指标成分23-乙酰泽泻醇B对细胞线粒体能量代谢的影响。方法以SGC-7901胃癌细胞为研究对象,绘制其生长曲线,MTT法检测细胞增殖抑制率,以阳离子荧光羰花青染料JC-1染色,采用倒置荧光显微镜观察结合流式细胞仪检测对细胞线粒体膜电位;多功能酶标仪检测琥珀酸脱氢酶(SDH)活性。结果 23-乙酰泽泻醇B 3.125μg·m L-1干预能促进细胞增殖,23-乙酰泽泻醇B 25~100μg·m L-1干预则不同程度的抑制细胞增殖,并且呈浓度依赖关系。与正常对照组比较,不同剂量组的红色荧光和绿色荧光的变化不明显。流式细胞仪检测结果显示,正常对照组、23-乙酰泽泻醇B低、中、高剂量组的单阳细胞比例分别为3.5%,3.6%,3.7%和4.0%,与正常对照组比较,23-乙酰泽泻醇B低剂量组单阳细胞比例增加,但差异无统计学意义(P0.05),23-乙酰泽泻醇B中、高剂量组单阳细胞比例增加,差异有统计学意义(P0.05,P0.01);SDH检测结果显示,正常对照组、23-乙酰泽泻醇B低、中、高剂量组的SDH活性分别为0.045、0.058、0.080、0.100μmol·min-1,与正常对照组比较,23-乙酰泽泻醇B低剂量组的SDH活性差异无统计学意义(P0.05),23-乙酰泽泻醇B中、高剂量组的SDH活性差异有统计学意义(P0.05,P0.01)。结论 23-乙酰泽泻醇B在低剂量时能促进SGC-7901细胞增殖,中剂量与高剂量则对SGC-7901线粒体膜电位有一定的损伤而抑制增殖,但对SDH活性促进作用较显著,提示其具有较明显促进线粒体能量代谢的作用,为进一步探讨泽泻改善线粒体能量代谢物质基础的研究奠定了基础。     

南葶苈子中的指标成分槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖基-7-O-β-D-龙胆双糖苷对慢性阻塞性肺疾病大鼠肺部免疫功能调节机制研究

目的研究南葶苈子中的指标成分槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖基-7-O-β-D-龙胆双糖苷(QGG)对慢性阻塞性肺疾病(COPD)大鼠肺部免疫功能调节机制,阐释南葶苈子止咳平喘功效的物质基础与科学内涵。方法 SD大鼠随机分为对照组、模型组及QGG高(QGGH)、中(QGGM)、低(QGGL)剂量(0.20、0.15、0.10 g/kg)组和阳性对照氨茶碱(0.09 g/kg)组,连续8周采用香烟熏暴露联合细菌感染的方法制备COPD稳定期大鼠模型。各给药组大鼠于烟熏5周后开始ig给药,连续28 d。采用荧光定量PCR(q RT-PCR)法检测大鼠肺组织中Th17和Treg细胞特异性转录因子RORγt和FOXP3 mRNA表达水平;流式细胞仪检测Th17/Treg细胞比例;TUNEL法观察QGG对大鼠肺组织细胞凋亡的影响;Western blotting法检测大鼠肺组织蛋白提取液中凋亡相关蛋白(cytoC、Caspase-9、Caspase-3、Bax、Bcl-2)及胞质转录因子-κBp65(NF-κBp65)和胞核NF-κBp65的表达。结果对照组大鼠体质量增长率随周龄增长而明显增加,模型组大鼠体质量在第1～8周增长率变化缓慢。与模型组比较,QGGH和氨茶碱组大鼠体质量增长率从第5周开始呈增长趋势,而QGGM、QGGL组大鼠体质量增长缓慢。q RT-PCR检测结果显示,与对照组比较,模型组大鼠肺组织中Treg和Th17细胞相关转录因子FOXP3和RORγt的表达水平显著增高(P0.05),FOXP3与RORγt比值显著升高。与模型组比较,QGGH组和阳性对照组大鼠FOXP3和RORγt的表达均显著降低(P0.05),且QGGH组效果优于氨茶碱组。流式细胞仪检测结果表明,与模型组比较,QGGH组大鼠外周血中CD4~+IL-17~+/CD4~+和CD4~+FOXP3+/CD4~+的表达均显著下调(P0.05);CD4~+IL-17~+/CD4~+FOXP3+显著降低(P0.05)。氨茶碱组大鼠外周血中Th17和Treg细胞相关的表达与QGGH组相近,但是CD4~+IL-17~+/CD4~+FOXP3+无明显差异。与对照组比较,模型组大鼠肺组织细胞凋亡显著增加。与模型组比较,QGGH组和氨茶碱组大鼠肺组织细胞凋亡显著减少(P0.05),QGGM、QGGL组改变不明显。与对照组比较,模型组大鼠肺组织Bax、cytoC、Caspase-9、Caspase-3、胞核NF-κBp65表达水平显著升高(P0.05),而Bcl-2、胞质NF-κBp65表达水平显著降低(P0.05)。与模型组比较,QGGH组和氨茶碱组大鼠肺组织Bax、cytoC、Caspase-9、Caspase-3、胞核NF-κBp65表达水平显著降低(P0.05),而Bcl-2、胞质NF-κBp65表达水平显著升高(P0.05)。结论 QGG可以显著改善COPD模型大鼠的生存状态、体质量,降低外周血CD4~+IL-17~+/FOXP3+CD4~+,调控Treg和Th17特征性转录因子FOXP3和RORγt的基因表达,平衡外周血中Th17与Treg比例,抑制肺组织细胞凋亡,修复损伤的组织,维持器官功能的完整性。     

20-O-β-D-吡喃葡萄糖苷-20(S)-原人参二醇对抗肝癌药物的增敏作用研究

目的探讨20-O-β-D-吡喃葡萄糖苷-20(S)-原人参二醇(人参皂苷IH901)与医学上常用抗肝癌药物环磷酰胺(CTX)、5-氟尿嘧啶(5-FU)、顺铂(cDDP)单独用药及联合用药体外抗肝癌细胞Bel-7402、SMMC-7721的活性。方法应用MTT法检测人参皂苷IH901、CTX、5-FU、cDDP分别在不同质量浓度下单独及联合用药对肝癌细胞的增殖抑制率,并根据金氏公式计算其协同指数(Q值),进而评价两药联用的增敏效果。结果 IH901与CTX联合用药后对Bel-7402、SMMC-7721抑制作用明显增强,且二者合用具有协同作用;而IH901与5-FU联合用药后对2种细胞仅相加效果;IH901与cDDP联合用药,对Bel-7402仍然是相加的效果,对SMMC-7721则是具有轻微的协同效果。结论人参皂苷IH901可增强CTX对肝癌细胞增殖的抑制作用,具有化疗协同效果,且具有一定的广谱性,可能成为一种潜在的抗肝癌药物。     

UPLC-ESI-Q-TOF-MS/MS分析异鼠李素-3-O-β-D-芸香糖苷大鼠肠道菌群代谢产物的研究

目的:分析异鼠李素-3-O-β-D-芸香糖苷经体外培养大鼠肠道菌群代谢转化的产物。方法:在离体培养的大鼠肠道菌群中,加入异鼠李素-3-O-β-D-芸香糖苷,采用HPLC检测代谢进程,采用超高效液相色谱串联电喷雾飞行时间质谱(UPLC-ESI-Q-TOF-MS-MS)对转化产物进行分析,结合对照品、化合物精确分子量和CID-MS-MS裂解碎片信息进行化合物结构解析。结果:从异鼠李素-3-O-β-D-芸香糖苷的大鼠肠道代谢产物中鉴定了槲皮素-3-O-葡萄糖苷、异鼠李素-3-O-葡萄糖苷、槲皮素、山奈酚和异鼠李素,另一化合物是否为5,7,3’,4’-四甲氧基黄酮-3-O-葡萄糖苷还需进一步确证。结论:肠道菌群代谢对异鼠李素-3-O-β-D-芸香糖苷的转化主要是苷水解、脱羟基和甲基化,增加了化合物疏水性和化学多样性。     

HPLC法测定藏药镰形棘豆中鼠李柠檬素-3-O-β-新橙皮糖苷的含量

目的:建立镰形棘豆中鼠李柠檬素-3-O-β-新橙皮糖苷的含量测定方法,同时比较药材的不同部位经不同溶剂提取后所得含量。方法:采用HPLC法,色谱柱:Symmetry C18柱(4.6mm×250mm,5μm);流动相:1%乙酸水溶液-乙腈(79:21);流速:1.0mL/min;检测波长:350nm。结果:鼠李柠檬素-3-O-β-新橙皮糖苷在20-100μg/mL范围内线性关系良好(r=0.9995),平均回收率为99.49%,RSD=1.30%。溶剂对该化合物的提取率由高至低依次为甲醇,95%乙醇、水;药材叶中含量比根高。结论:本法简便、准确、重现性好,可用于该药材或相关制剂的质量控制;药材不同部位经不同溶剂提取所得含量差别较大。     

安眠补脑糖浆中2,3,5,4-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷的含量测定

目的：建立安眠补脑糖浆中2，3，5，4．四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷的含量测定方法。方法：HPLC法，流动相：乙睛-水（21：79）；检测波长：320nm。结果：2，3，5，4．四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷的线性范围为（25．70～179．90）μg，平均回收率为97．5％，RSD为1．6％。结论：方法简便可靠，可有效地控制安眠补脑糖浆的质量。     

大黄素甲醚-8-O-β-D-葡萄糖苷对CCl4致小鼠急性肝损伤的作用

目的 研究大黄素甲醚-8-O-β-D-葡萄糖苷（PMG）对四氯化碳（CCl₄）致小鼠急性肝损伤的作用及可能机制。方法 将60只雄性ICR小鼠按随机数字表法分为正常对照组,模型组,低、中、高剂量组,联苯双酯组,每组10只。每组小鼠每次均按照0.1 mL/10 g体质量灌胃给药,正常对照组和模型组灌胃0.5%羧甲基纤维素钠（CMC-Na）溶液,低、中、高剂量组分别灌胃1、2、4 mg/mL PMG混悬液,联苯双酯组灌胃30 mg/mL联苯双酯混悬液。2次/d,连续灌胃3 d。末次给药1 h后,除正常对照组外,其余各组均按0.1 mL/10 g体质量一次性腹腔注射0.5%CCl₄油溶液,建立急性肝损伤模型。各组小鼠禁食不禁水16 h后取血和肝组织,采用比色法检测血清谷丙转氨酶（ALT）、谷草转氨酶（AST）水平;HE染色观察肝组织形态结构病理改变;免疫组织化学法观察肝组织中NF-κBp65、TNF-α、IL-6蛋白表达;RT-PCR法检测肝组织中ICAM-1、MCP-1 mRNA相对表达量。结果与正常对照组比较,模型组血清ALT、AST水平显著升高...     

蓬子菜黄酮类化合物对人肝癌HepG2细胞增殖及凋亡的机制研究

目的 探讨莲子菜黄酮类化合物香叶木素-7-O-β-D-木糖-(1→6)-β-D-葡萄糖苷(DXG)对人肝癌细胞株HepG2增殖的抑制作用及其诱导HepG2细胞凋亡的机制.方法 台盼蓝染色法检测DXG对HepG2细胞生长的影响;MTT法检测DXG对细胞增殖的抑制作用;吖啶橙/溴乙(AO-EB)荧光染色法观察DXG对HepG2细胞凋亡的形态学影响;琼脂糖凝胶电泳观察凋亡细胞的DNA图谱变化;反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测凋亡相关基因bcl-2及bax的表达.结果 台盼蓝染色和MTT检测显示,DXG 50、100、200 μg/mL能明显抑制HepG2细胞增殖,与对照组相比差异显著(P＜0.05).AO-EB染色可见DXG诱导HepG2细胞凋亡并发生形态学改变,且随DXG的质量浓度升高,凋亡细胞的比例显著增加.琼脂糖凝胶电泳显示,HepG2细胞经DXG 100、200 μg/mL处理48 h后,可见DNA“梯形”碎片条带.RT-PCR实验表明,DXG下调细胞凋亡的抑制基因bcl-2 mRNA表达,促使凋亡基因bax mRNA表达增强.结论 DXG具有显著抑制人肝癌细胞HepG2增殖、诱导其凋亡的作用,其作用机制与调控bax/bcl-2的表达有关.     

HPLC法测定降脂减肥片中2,3,5,4’-四羟基对苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷的含量

目的建立以HPLC法检测降脂减肥片中2,3,5,4’-四羟基对苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷的含量测定。方法色谱柱:依利特C18(4.6mm×250mm,5μm);流动相:乙腈-水(21:79);流速:0.8ml/min;检测波长:320nm;以2,3,5,4’-四羟基对苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷为对照品,采用外标法定量。结果 2,3,5,4’-四羟基对苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷线性范围为0.0621～0.5508μg(r=1.0000),平均回收率为99.05%,RSD为0.47%。结论本法简便,结果准确,重现性好,可用于该药品的质量控制。     

高效液相色谱法测定市售首乌藤中2，3，5，4′-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷的含量

目的测定济南市售首乌藤中2,3,5,4'-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷含量,同时进行比较。方法采用高效液相色谱法,色谱柱:lichrospher C_(18)柱(4.6mm×150mm,5μm);流动相:乙腈-水(20:80),流速:1ml/min,检测波长320 nm。结果市售首乌藤中二苯乙烯苷含量为0.0179%～0.355%。结论市售首乌藤中二苯乙烯苷含量差距较大,其质量存在比较明显的差异。     

高效液相色谱法测定市售首乌藤中2,3,5,4'-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷的含量

目的 测定济南市售首乌藤中2,3,5,4'-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷含量,同时进行比较.方法 采用高效液相色谱法,色谱柱:lichrospher C18柱(4.6 mm×150 mm,5 μm);流动相:乙腈-水(20:80),流速:1 ml/min,检测波长320nm.结果 市售首乌藤中二苯乙烯苷含量为0.0179%～0.355%.结论 市售首乌藤中二苯乙烯苷含量差距较大,其质量存在比较明显的差异.     

HPLC法测定首乌补汁中2,3,5,4′-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖甙的含量

目的:测定首乌补汁中2,3,5,4′-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖甙的含量.方法:采用反相高效液相色谱法.色谱柱为DiamonsidTM-C18柱,乙腈-水(25:75)为流动相,流速为1.0 ml/min,检测波长320 nm,柱温为室温.结果:2,3,5,4′-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖甙的浓度在0.02～0.16 mg/m1之间与峰面积线性关系良好,平均回收率为99.85%,RSD为0.49%.结论:该法可用于首乌补汁中2,3,5,4′-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖甙的含量测定.     

HPLC法测定除脂生发片中2，3，5，4’-四羟基二笨乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷含量

目的：建立高效液相色谱法测定除脂生发片中2，3，5，4'-四羟基二笨乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷含量的方法。方法：ODS C18色谱柱。乙腈-水(20：80)为流动相；流速：1ml／min；柱温：40℃；检测波长320nm。结果：本法可测定除脂生发片中二苯乙烯苷含量。回收率为99．36％；RSD为1．17％。结论：该方法简便、准确，可作为除脂生发片的含量测定方法。     

反相高效液相色谱法同时测定抗脑衰胶囊中葛根素和2，3，5，4′-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷的含量

目的 建立抗脑衰胶囊中葛根素和2,3,5,4'-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷的含量测定方法.方法 采用反相高效液相色谱法,色谱柱为Nova-Pak C18(150 mm ×3.9 mm,4 μm),流速0.8 ml·ml-1,乙腈水(2080)为流动相,检测波长为320 nm.结果 葛根素的线性范围为0.3056～1.528 mg·ml-1,r=0.999 7,平均回收率为98.15%,RSD=1.20%(n=6);2,3,5,4'-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷的线性范围为1.024～8.192 μg·ml-1,r=0.999 5,平均回收率为97.46%,RSD=2.12%(n=6).结论 该方法简便、快速、准确,适合该胶囊中葛根素和2,3,5,4'-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷的含量测定.     

梓醇对模拟缺血再灌注损伤兔窦房结细胞凋亡及细胞骨架β-微管蛋白的影响

目的观察地黄主要有效成分梓醇对模拟缺血再灌注损伤兔窦房结细胞凋亡及细胞骨架β-微管蛋白(β-tubulin)的影响,探讨其治疗病态窦房结综合征的机制。方法取新生乳兔窦房结细胞,分为正常组、模型组及梓醇高、中、低剂量组。以缺氧缺糖模拟缺血、恢复氧和糖的供应模拟再灌注造成窦房结细胞损伤模型。正常组与模型组给予等体积培养基,梓醇高、中、低剂量组给予终浓度为100、20、10μg/m L药物,应用酶标仪、流式细胞仪、激光共聚焦显微镜观察各组窦房结细胞凋亡率、β-tubulin的形态变化。结果模型组细胞凋亡率较正常组明显增加(P0.01),β-tubulin裂解明显。与模型组比较,梓醇高、中、低剂量组细胞凋亡率明显降低(P0.01),β-tubulin结构明显完整,荧光强度明显升高(P0.01)。结论梓醇抑制模拟缺血再灌注引起的窦房结细胞凋亡,保护窦房结β-tubulin形态可能是地黄治疗病态窦房结综合征的机制之一。     

木犀草素-7-O-β—D-葡萄糖苷对缺血缺氧培养乳鼠心肌细胞的保护作用

目的观察木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷对缺血缺氧培养乳鼠心肌细胞的保护作用及其可能机制。方法采用原代培养的乳鼠心肌细胞造成缺血缺氧损伤模型，观察木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷对损伤后心肌细胞存活率、超氧化物歧化酶（SOD）活性、丙二醛（MDA）含量的影响，推断细胞内活性氧的生成量；观察培养液中乳酸脱氢酶（LDH）活性．以判断细胞损伤情况；并进行hochest33258染色，判断细胞凋亡程度。结果木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷（100，50μg／mL）组可显著升高缺血缺氧损伤时细胞存活率、提高细胞SOD活性，降低MDA含量、降低LDH的漏出量，细胞凋亡率降低。结论木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷对缺血缺氧培养的心肌细胞具有保护作用．其机制可能与清除氧自由基．稳定细胞膜．抑制细胞凋亡有关。