低表达Nrf2增敏奥沙利铂抗H460细胞增殖作用

目的:建立Nrf2低表达的H460细胞株,可增敏奥沙利铂对肿瘤细胞的抗增殖作用,同时为Nrf2-ARE信号通路的研究提供便捷途径.方法:H460细胞转染pRS-hNrf2后经过筛选得到多个单克隆细胞株,通过Western blotting和GSH含量的检测方法分析各细胞株中Nrf2及其调控基因的表达以及GSH含量的变化,用MTS法检测细胞株对抗癌药物的敏感性.结果:H460细胞转染pRS-hNrf2后筛选建立Nrf2低表达的稳定细胞株H460-C9和H460-C13,与对照组相比其GSH含量均有显著降低(P_(C9)= 0.00249,P_(C13)= 0.03944);同时,MTS检测表明,抗癌药物奥沙利铂和阿霉素的抗细胞增殖作用在H460-C9和H460-C13细胞株中明显增强.结论:成功建立Nrf2低表达的H460-C9和H460-C13细胞株,与对照组细胞株相比,低表达Nrf2可增敏奥沙利铂对肿瘤细胞的抗增殖作用.     

稳定表达Keap1的H460-N5细胞株的建立及增敏抗肿瘤药物作用的研究

目的:建立野生型Keap1过表达的H460细胞株降表达Nrf2,检测Nrf2-ARE信号通路对肿瘤细胞耐药性的影响.方法:H460细胞转染mKeap1-pEGFP后经过长期筛选得到稳定表达Keap1蛋白质的细胞株,通过Western blotting和荧光定量PCR的方法进行检测;并通过多次继代培养,细胞株H460-N5稳定表达mKeap1,Nrf2及其调控基因均显著降表达;用MTS法检测抗癌药物奥沙利铂、阿霉素和依托泊苷对细胞增殖抑制率.结果:H460细胞转染mKeap1-pEGFP后筛选建立Nrf2降表达的稳定细胞株H460-N5.MTS数据显示,与对照组相比,抗癌药物奥沙利铂、阿霉素和依托泊苷对H460-N5细胞的抗增殖作用更显著.当奥沙利铂和依托泊苷分别在93 μmol/L和100 μmol/L浓度作用于对照组细胞株H460-N0时,药物作用接近半数抑制率(IC_(50));而在H460-N5细胞株中,两种抗癌药物的IC_(50)分别为42 μmol/L和30 μmol/L.阿霉素对H460-N0细胞的IC_(50)>3 mg/L,而对H460-N5细胞的IC_(50)约为2 mg/L.结论:Keap1过表达的H460-N5细胞Nrf2及调控基因显著降低并增敏抗癌药物奥沙利铂、阿霉素和依托泊苷对肿瘤细胞的增殖抑制作用.     

盐霉素联合奥沙利铂对PANC89的增殖及诱导凋亡的机制

目的研究盐霉素对人胰腺癌细胞株PANC89的增殖及诱导凋亡的影响及其联合奥沙利铂后增敏其抗肿瘤的作用及机制。方法采用CCK-8法及Hoechst 33342染色法,分别检测盐霉素及盐霉素联合奥沙利铂对PANC89细胞生长的抑制、凋亡的影响;并且用流式细胞术检测细胞凋亡率。Real—time PCR和Westernblot用于分析盐霉素处理后相关基因的mRNA和蛋白表达水平。结果盐霉素抑制PANC89的增殖,且可增敏奥沙利铂抗胰腺癌作用;经过盐霉素联合奥沙利铂处理后,胰腺癌细胞的凋亡率增加（P〈0．05）。经盐霉素以及联合奥沙利铂作用后Bax、Bak的表达明显增加,而Bcl-2及Bcl—x及β—cateninandp-GSK-3p的表达亦被明显抑制（P〈0．05）。结论盐霉素可抑制PANC89的增殖,增敏奥沙利铂的抗肿瘤作用,通过Bcl-2途径诱导人胰腺癌细胞株PANC89的凋亡,并且这可能是通过对Wnt／β—catenin通路的抑制产生的。     

木犀草素抗肿瘤细胞增殖及增敏抗肿瘤药物作用研究

目的:研究黄酮类化合物木犀草素(Luteolin)对体外抗肿瘤细胞增殖,以及其与抗肿瘤药联用的增敏作用.方法:选用5 μmol/L或10 μmol/L木犀草素与不同浓度抗肿瘤药联合作用肿瘤细胞24 h后,用MTS法检测其体外抗增殖作用.结果:5 μmol/L木犀草素对人非小细胞肺癌细胞(A549)、人子宫颈癌细胞(Hela)、人乳腺癌细胞(MCF-7)、人胃腺癌细胞(AGS)、人胃癌细胞(MGC-803)的抗增殖作用均<20%,对人结肠癌细胞(Caco2)和人肝癌细胞(HepG2)的抗增殖作用约20%.Bexarotene单一用药时对Hela细胞抑制率达50%(IC_(50))的浓度约为2 μmol/L,与5 μmol/L木犀草素联用后IC_(50)约0.2 μmol/L,5 μmol/L木犀草素与0.1 μmol/L Bexarotene联用对Hela细胞的抗增殖作用达44%,Bexarotene与木犀草素联用在MGC-803、HepG2、A549细胞中增敏较小,在Caco2和MCF-7细胞中无增敏作用;顺铂单一用药时对Hela细胞的IC_(50 )>30 μmol/L,与5 μmol/L木犀草素联用后IC_(50)约3 μmol/L,联用后在MGC-803、HepG2和A549中增敏较小;博来霉素单一用药时对Hela细胞的IC_(50)>100 μmol/L,对A549细胞的IC_(50)约为100 μmol/L,与5 μmol/L木犀草素联用后Hela细胞的IC_(50)约为1 μmol/L,与10 μmol/L木犀草素联用后A549细胞的IC_(50)约为10 μmol/L.木犀草素与格列卫联用在MGC-803、HepG2、A549和AGS中增敏较小.结论:木犀草素在低于10 μmol/L浓度时,对肿瘤细胞体外抗增殖作用较小.低浓度(5 μmol/L~10 μmol/L)的木犀草素在不同的肿瘤细胞中对抗肿瘤药的增敏作用强度不同,在Hela细胞中增敏作用最显著.     

洛铂联合放疗对肺癌细胞杀伤作用的研究

目的:研究洛铂联合放疗对非小细胞肺癌细胞的杀伤作用以及对细胞周期和凋亡的影响?方法: MTT法观察肺癌A549细胞增殖抑制,流式细胞仪检测细胞凋亡及细胞周期分布,蛋白免疫印迹检测Bcl-2和Bax蛋白表达?结果: 洛铂对肺癌A549细胞有增殖抑制作用,且细胞毒性呈剂量依赖性;洛铂联合放疗组观察到有更高的细胞凋亡率和G2/M期阻滞;蛋白免疫印迹结果显示洛铂联合放疗组Bcl-2表达水平下降,促进凋亡诱导蛋白Bax表达水平升高?结论:洛铂有放疗增敏作用,作用机制可能与抑制Bcl-2表达?促进Bax表达?激活 Bcl-2(Bax)-Caspase信号通路有关?     

奥沙利铂对人肺腺癌A549细胞增殖凋亡及Survivin和CyclinD1表达的影响

目的 研究奥沙利铂(oxaliplatin,L-OPH)对人肺腺癌A549细胞株的生长抑制作用和对Survivin、CyclinD1基因表达的影响,探讨奥沙利铂抑制肺癌细胞增殖的机制.方法 以不同浓度(0、7.81、15.63、31.25、62.50和125.00μg/mL)的奥沙利铂干预体外培养的肺腺癌细胞株A549,分别于24、48和72 h后,采用MTT方法检测细胞光密度值,分析A549细胞的增殖活性.采用流式细胞术检测其细胞周期变化.采用Hoechst33342染色方法在荧光显微镜下观察细胞形态变化.采用RT-PCR、Westem-blotting方法检测Survivin和CyclinD1的mRNA及蛋白的表达情况.结果 ①奥沙利铂能有效抑制A549细胞的增殖(P＜0.05),呈时间-剂量依赖性.②奥沙利铂能改变A549细胞的周期分布并诱导其凋亡(P＜0.05),呈时间-剂量依赖性.③奥沙利铂作用48 h后A549细胞Survivin、Cyclin D1基因及蛋白的表达明显低于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05),且该抑制效应呈浓度依赖性.结论 奥沙利铂可以抑制A549细胞株的增殖、改变其周期分布、诱导其凋亡,且呈一定的剂量-时间依赖性;其机制可能与奥沙利铂下调Survivin和Cyclin D1基因的表达有关.     

奥沙利铂对人肝癌HepG2细胞周期、凋亡及侵袭能力的影响

目的 研究奥沙利铂对人肝癌细胞株HepG2细胞的增殖、周期与凋亡及侵袭力的影响.方法 应用MTT法检测奥沙利铂对HepG2细胞生长的抑制作用;流式细胞仪分析细胞周期的分布和凋亡的情况;Transwell侵袭实验检测细胞的侵袭力变化.结果 奥沙利铂对HepG2生长有明显的抑制作用,使细胞周期阻滞于s期(P＜0.01),细胞凋亡率增加(P＜0.05);奥沙利铂作用后癌细胞的侵袭力明显减弱(P＜0.01).结论 奥沙利铂能明显抑制肝癌细胞增殖及侵袭能力,诱导癌细胞凋亡.     

木犀草素抑制肺癌细胞A549的增殖及其联合化疗作用

目的 研究木犀草素对肺癌细胞增殖的抑制及其在联合化疗中的作用。方法 MTT法检测木犀草素对A549细胞增殖的影响;碘化丙啶(PI)染色以及Annexin V FITC 和PI双参数标记后,采用流式细胞仪检测木犀草素对A549细胞周期和细胞凋亡的影响及其机制;采用JC 1染色检测细胞线粒体膜电位;划痕实验检测木犀草素对A549细胞迁移的抑制情况;采用共聚焦显微镜检测木犀草素对A549细胞应力纤维的影响,分析对细胞迁移的作用;采用细胞实时检测系统研究木犀草素和顺铂联合应用时的作用效果。结果 木犀草素能够有效抑制细胞增殖,显著阻滞细胞周期、诱导细胞凋亡;细胞膜电位在木犀草素的作用下被破坏;木犀草素还能影响细胞的应力纤维进而抑制细胞的迁移,加强顺铂的抗癌作用。结论 木犀草素可以通过阻断细胞周期、诱导细胞凋亡和抑制细胞的迁移发挥抗肺肿瘤作用,同时能够降低肺肿瘤细胞多药耐药性,提高肺肿瘤细胞对抗癌药物的敏感性,还可以通过影响微丝蛋白Actin的功能抑制肺癌细胞的迁移。     

姜黄素联合奥沙利铂对肺腺癌细胞系A549细胞体外侵袭的作用

目的:探讨姜黄素和奥沙利铂两种药物联用对肺腺癌细胞系A549细胞体外侵袭能力的作用,并观察对侵袭相关蛋白CD147表达的影响。方法:应用MTT法检测两种药物单用及联用后A549细胞的吸光度,并计算增殖抑制率;Transwell侵袭小室检测药物作用后A549细胞的体外侵袭能力;Western blot和免疫细胞化学检测药物作用前后CD147蛋白表达的差异。结果:姜黄素和奥沙利铂单用均能抑制A549细胞的增殖,呈量-效关系,联用时作用相加;奥沙利铂单用能抑制A549细胞的体外侵袭能力和CD147蛋白的表达,与姜黄素联用时抑制作用更明显。结论:姜黄素和奥沙利铂均可抑制人肺腺癌A549细胞的增殖和侵袭能力,在一定浓度范围内,呈量-效关系,而且两者联用具有相加作用,其抑制侵袭转移的机制可能通过下调CD147蛋白的表达而实现。     

芹菜素对人肺癌NCI-H1299细胞的生长抑制和凋亡诱导的作用

目的研究芹菜素对人肺癌NCI-H1299细胞的生长抑制和诱导凋亡的作用。方法体外常规培养NCI-H1299细胞,芹菜素作用终浓度分别为10、20、40、80μmol/L。MTT法测定芹菜素对细胞的生长抑制作用;Hoechst 33258细胞核染色法观察细胞凋亡的形态学变化;流式细胞仪AnnexinV-FITC/PI双染色法检测细胞凋亡率;Western blot方法检测芹菜素对Bax和Bcl-2蛋白表达的影响。结果芹菜素能够抑制NCI-H1299细胞的增殖,并随药物浓度的增加、作用时间的延长,作用更明显;Hoechst 33258染色结果显示,芹菜素处理组细胞出现核固缩、染色质凝集和凋亡小体产生等典型的细胞凋亡特征;不同浓度的芹菜素作用24 h,细胞凋亡率逐渐增加,呈一定浓度依赖性;Western blot结果显示,芹菜素处理组细胞Bax蛋白表达增加,Bcl-2蛋白表达降低。结论芹菜素能够抑制人肺癌NCI-H1299细胞的增殖,并诱导其凋亡,其机制可能与调控Bax和Bcl-2的表达,导致Bcl-2/Bax比值下降有关。     

芹菜素对NCI-H446细胞系球细胞自我更新和uPAR表达的影响

目的：研究芹菜素对人小细胞肺癌NCI-H446细胞系球细胞自我更新的影响及机制。方法：采用干细胞条件培养基超低黏附板悬浮培养法从体外培养NCI-H446细胞系得到球细胞。测定球形成率用以评价0(0.1% DMSO对照组),5.0,10.0,20.0 μmol/L芹菜素对NCI-H446细胞系球细胞自我更新的抑制作用;Western印迹分析球细胞尿激酶型纤维蛋白酶原激活物受体(urokinase-type plasminogen activator receptor,uPAR)的表达。结果：0,5.0,10.0,20.0 μmol/L 芹菜素呈剂量依赖性抑制NCI-H446细胞系第2代球细胞的球形成率[球形成率分别为(18.2±1.9)%,(13.6±1.7)%,(10.6±1.6),(6.9±1.3)%],并呈浓度依赖性下调uPAR蛋白的表达(P<0.05)。结论：芹菜素抑制人小细胞肺癌NCI-H446细胞系球细胞自我更新作用,可能与下调uPAR表达相关。     

芹菜素选择性抑制人胃癌细胞活力和诱导细胞凋亡

目的:对比研究芹菜素对人胃癌BGC-823细胞和永生化人胃粘膜上皮GES-1细胞活力和细胞凋亡的影响。方法:体外培养BGC-823和GES-1细胞。MTS比色法测定细胞活力。PI染色FCM分析细胞凋亡率。ELISA法检测细胞Caspase-3活性。结果:芹菜素对BGC-823细胞活力有显著抑制作用(P<0.05),呈浓度依赖性,其IC50是22μmol/L;然而,对GES-1细胞活力抑制作用弱,其IC50达到77μmol/L;选择指数是3.5(77/22)。芹菜素选择性诱导BGC-823细胞Sub G1百分率增高(P<0.05),同时,活化BGC-823细胞Caspase-3(P<0.05)。结论:芹菜素具有选择性抑制人胃癌BGC-823细胞活力和诱导细胞凋亡作用。     

芹菜素改善肥胖大鼠肾脏氧化应激损伤

目的 研究芹菜素对肥胖大鼠肾脏代谢状态的影响以及可能机制.方法 4周龄雄性SD大鼠按随机数字表法分为对照组和高脂组.高脂组予连续高脂喂养12 周后,再随机分为肥胖组、干预组.对照组和肥胖组予0.9%生理盐水灌胃,干预组予芹菜素40 mg/(kg·d)灌胃处理,4周后通过Western blot、DHE探针染色和免疫组化检测肾脏组织中氧化应激、炎症和自噬相关指标.结果 ① 芹菜素干预4周后,与肥胖组相比,芹菜素组体重有一定的下降趋势,但是差异无统计学意义(t=1.80,P=0.096).② DHE探针染色检测肥胖大鼠肾脏示O2-较对照组明显增多( t= -3.58,P=0.023),经过4 周菜素治疗后明显好转(t =2.79, P =0.049).③ 肥胖大鼠肾脏p-P67、p-P65等表达明显增加,芹菜素干预后,其蛋白水平较肥胖组(均P＜0.05)出现显著下降.④ 经芹菜素治疗后肾脏自噬相关蛋白LC3BII/LC3BI、Beclin1水平明显上升,与肥胖组相比差异有统计学意义(均P＜0.05).结论 芹菜素可明显改善肥胖大鼠肾脏内氧化应激、炎症的代谢紊乱状态,可能与其激活自噬通路有关.     

API通过耗竭GSH抑制人肝癌Hep G2细胞活性和诱导凋亡

目的:研究芹菜素(apigenin,API)是否通过耗竭谷胱甘肽(glutathione,GSH)诱导人肝癌Hep G2细胞活性抑制和凋亡。方法:体外培养Hep G2细胞。分光光度法测定细胞GSH水平。MTS比色法测定细胞活力。PI染色FCM分析细胞凋亡率。结果:API降低Hep G2细胞GSH水平(P<0.05),呈浓度依赖性。API以浓度依赖方式抑制Hep G2细胞活性(P<0.05),同时,诱导Hep G2细胞Sub G1百分率增高(P<0.05);500μM GSH预孵育30min,能有效阻断API降低细胞GSH水平、抑制细胞活性和诱导细胞凋亡作用(P<0.05)。结论:API通过耗竭细胞GSH抑制Hep G2细胞活性和诱导细胞凋亡。     

芹菜素对人肺癌NCI-H460细胞增殖及凋亡的影响

目的研究芹菜素对人肺癌NCI-H460 细胞增殖及凋亡的影响。方法应用10~80 μmol/L 芹菜素处理NCI-H460 细胞,
MTT法检测细胞增殖抑制率;Hoechst 33258细胞核染色法观察细胞凋亡的形态学改变;流式细胞仪AnnexinV-FITC/PI双染色
法检测细胞凋亡率;Western blotting检测凋亡相关信号分子Bax、Bcl-2和caspase-3的蛋白表达水平。结果芹菜素对NCI-H460
细胞的增殖抑制作用呈浓度和时间依赖性;芹菜素处理组细胞出现核固缩、染色质凝集和核碎片化等典型的细胞凋亡特征;
NCI-H460细胞凋亡率随着芹菜素浓度增加逐渐增高;芹菜素处理组细胞Bax和caspase-3蛋白表达增加,Bcl-2蛋白表达降低。
结论芹菜素能够抑制人肺癌NCI-H460细胞的增殖,并诱导其凋亡,其机制可能与上调Bax和下调Bcl-2的表达,导致Bcl-2/Bax
比值下降,caspase-3活化有关。
     

Effects of apigenin on cell proliferation of human pancreatic carcinoma cell line BxPC-3 in vitro

Objective： To observe the effects of apigenin on cell proliferation of human pancreatic carcinoma cell line BxPC-3 in vitro. Methods：The inhibitive effects of apigenin at different concentrations （0 μmol/L, 100 μmol/L, 200 μmoL/L, and 400 μmol/L） on human pancreatic carcinoma cell line BxPC-3 were detected by MTT assays, transmission electron microscope, agarose gel electrophoresis and flow cytometry. The immunohistochemistry was used to detect the expression of Bcl-2 and Bax gene. Results： Apigenin at different concentrations could inhibit the proliferation of human pancreatic carcinoma cell lines BxPC-3, and the inhibitive effect was dose-dependent. The cell cycle of pancreatic carcinoma cells was arrested at G2/M phase. The results of immunohistochemistry showed that the density of apigenin increased, and the expression of Bcl-2 gene was reduced gradually, At the same time the expression of Bax gene was enhanced. Conclusion ：Apigenin could inhibit the proliferation of human pancreatic carcinoma cell lines BxPC-3 in vitro. The effect of apoptosis was accompanied with the expression of Bcl-2 decrease and Bax increase.     

芹菜素对肝细胞癌SMMC-7721细胞系干样细胞自我更新及CK2α表达的影响

目的:研究芹菜素是否能下调CK2α表达和抑制SMMC-7721细胞系肝癌干样细胞自我更新.方法:干细胞培养基超低粘附培养板悬浮培养法扩增肝癌干样细胞;肿瘤球形成法检测肝癌干样细胞的自我更新能力;Western-blot检测细胞CK2α蛋白表达水平.结果:人肝细胞癌SMMC-7721细胞系第2代球细胞具有最强自我更新潜能,可用作肝癌干样细胞模型.芹菜素以浓度依赖方式降低肝癌干样细胞的肿瘤球形成率以及CK2α蛋白表达水平.结论:芹菜素抑制肝癌干样细胞自我更新作用与其下调CK2α表达相关.     

芹菜素对A375黑色素瘤生长、迁移和血管生成的影响及其作用机制

目的  探讨芹菜素对A375黑色素瘤增殖、迁移和血管生成的影响及其作用机制。方法  采用四唑氮化合物（MTS）法检测芹菜素对人黑色素瘤A375细胞增殖的影响;裸鼠皮下移植瘤模型考察芹菜素对体内黑色素瘤生长的影响;划痕实验检测芹菜素对细胞体外迁移的影响;小管形成实验检测芹菜素对人黑色素瘤血管生成的影响;Western blot检测芹菜素对A375细胞中调控增殖及血管生成相关蛋白表达的影响,如血管内皮生长因子（VEGF）、基质金属蛋白酶-9（MMP-9）、磷酸化P38（p-P38）、总蛋白P38（t-P38）、磷酸化Erk（p-Erk）、总蛋白Erk（t-Erk）。结果  体外芹菜素处理A375细胞后,肿瘤细胞的体外增殖及体内生长较空白对照组明显受抑制;肿瘤细胞的迁移能力较溶剂对照组明显减弱;小管形成实验中,芹菜素能够抑制肿瘤细胞诱导的血管生成;分子机制研究发现,芹菜素能抑制血管生成相关蛋白VEGF及MMP-9的表达,同时芹菜素也能抑制调控肿瘤细胞增殖相关蛋白,如p-P38及p-Erk的表达。结论  芹菜素能抑制A375黑色素瘤生长、迁移及血管生成,其机制可能与抑制调控肿瘤细胞增殖及血管生成相关蛋白的表达有关。

     

芹菜素醚化及溴化衍生物的合成及抗肝癌活性研究

目的:合成芹菜素甲醚化、二氟甲醚化及溴化衍生物,进行抗肝癌活性研究。方法:以芹菜素为原料,经硫酸二甲酯甲醚化、溴素溴化或一氯二氟甲烷二氟甲醚化,柱层析分离,合成芹菜素衍生物。MTT法测定氟尿嘧啶(5-FU)、芹菜素衍生物对体外培养人肝癌HepG2细胞活性的抑制作用。结果:共得到6个化合物,结构经1H-NMR等进行了确证;MTT法测定结果表明,化合物1抑制HepG2细胞活性作用的IC50值是7.86±1.35μg/mL,与化疗药5-FU(7.18±0.85μg/mL)类似;化合物2～7的IC50值分别为2.62±0.32、0.65±0.12、3.21±0.43、4.36±0.51、4.13±0.46和1.96±0.29μg/mL;其中以化合物3的效价强度最大,是先导物芹菜素的12.09倍,化疗药5-FU的11.05倍。结论:芹菜素衍生物的抗肝癌活性较芹菜素更强,其中化合物3(6-8-二溴-7,4'-二甲氧基-5-羟基黄酮)是一个具有开发潜力的抗肝癌活性新化合物。     

芹菜素对人CIK细胞杀伤结肠癌SW1116细胞的影响

目的观察芹菜素对人结肠癌细胞SW1116及CIK细胞的作用,探讨芹菜素对人CIK细胞杀伤结肠癌SW1116细胞的影响。方法不同浓度的芹菜素分别诱导人CIK细胞和结肠癌细胞SW1116细胞24、48、72 h,四甲基偶唑蓝(MTT)法检测上述两种细胞的生长。乳酸脱氢酶释放法检测CIK细胞对结肠癌SW1116细胞杀伤活性。结果体外培养10 d后,CIK细胞比例由3.12%增加到17.55%。与对照组比较,浓度1.17～4.7μmol/L芹菜素作用后的CIK细胞的增殖率显著提高(P<0.05),浓度37.5～600μmol/L的芹菜素对SW1116细胞生长抑制率显著提高(P<0.05),三个时间段比较均无明显差异。浓度2.35～9.4μmol/L的芹菜素作用48 h后,CIK细胞对结肠癌SW1116细胞的杀伤活性显著高于对照组(P<0.05)。结论芹菜素在一定浓度范围内可促进CIK细胞的生长,明显提高CIK细胞对SW1116细胞的杀伤作用,且抑制结肠癌SW1116细胞的生长。