超声击破微泡对重组腺病毒Ad-EGFP/HIF-1α活性的影响

目的 探讨超声破坏载重组腺病毒Ad-EGFP/HIF-1α的微泡对Ad-EGFP/HIF-1α生物学活性的影响.方法 采用机械振荡法及分层吸附法制备携带重组腺病毒的脂质超声微泡造影剂,用DFY-Ⅱ型超声图像定量分析诊断仪检测微泡粒径.计算其浓度.将脐静脉内皮细胞(HUVEC)接种在24孔板中,随机分为以下5组:①空白对照组;②重组腺病毒Ad-EGFP/HIF-1α组;③载霞组腺病毒Ad-EGFP/HIF-1α微泡组;④超声+重组腺病毒Ad-EGFP/HIF-1α组;⑤超声+载重组腺病毒Ad-EGFP/HIF-1α微泡组.荧光显微镜及流式细胞仪检测各组在细胞内的表达及转染效率,R-PCR法检测HIF-1α的mRNA的表达.结果 载重组腺病毒的超声微泡的大小、粒径及分布与普通超声微泡相似.与对照组相比,各组间绿色荧光强度及转染率无明显差别;各组间HIF-1α mRNA的表达也无明显差别.结论 利用超声破坏载重组腺病毒Ad-EGFP/HIF-1α的微泡造影剂对腺病毒活性无明显影响,为拓展超声微泡介导的基因治疗领域提供了新的思路和方法.     

载基因及穿膜肽脂质超声造影剂制备的实验研究

目的 研究自制的脂质超声造影剂载基因及穿膜肽的能力,评价其物理性质及显影效果.方法 采用机械振荡法制备载基因及穿膜肽的脂质超声造影剂,检测微泡形态、分布、浓度、粒径、表面电位及载基因和穿膜肽的能力,并观察其对兔心脏的显影效果.结果 自制载基因及穿膜肽脂质超声微泡造影剂的粒径为(2.27±0.38)μm,浓度为(3.07±0.42)×109个/ml,表面电位为(1.95±0.13)mV.该造影剂中基因的包封率为32%,穿膜肽的包封率为35%.体内造影显示该造影剂能有效增强心肌显影.结论 自制载基因及穿膜肽脂质超声造影剂符合理想超声造影剂的要求,载基因及穿膜肽的效率高,可作为携带基因等生物活性物质的载体材料.     

载长春新碱长循环聚合物超声微泡造影剂的制备及性能评价

目的 制备载硫酸长春新碱的聚乳酸-乙醇酸-聚乙二醇共聚物(PLGA-PEG)超声微泡造影剂,观察微泡的一般特性及体内、外显影效果.方法 采用W/O/W复乳-溶剂挥干法制备超声微泡造影剂,正交实验设计获得最佳制备工艺,采用紫外分光光度法测定微泡的包封率和载药量,光学显微镜观察微泡形态,以马尔文激光粒径测量仪测定微泡造影剂的粒径、Zeta电位,并观察微泡在兔心腔的显影效果.结果 获得的微泡造影剂为球形,平均粒径约为1.27 μm,包封率为(37.63±0.61)%,Zeta电位为-24.88 mV,静脉注射载药微泡后,能增强兔心腔超声显影效果.结论 采用复乳-溶剂挥干法成功制备超声微泡造影剂,能增强体内外超声显影效果.     

载10-羟基喜树碱脂质超声微泡的处方制备及一般特性研究

目的 研究载10-羟基喜树碱(HCPT)脂质超声微泡的处方制备工艺,筛选出最佳处方制备载药微泡,研究微泡的一般特性及显影效果,并检测微泡的药物包封率和载药量.方法 以机械振荡法制备载HCPT脂质超声微泡;采用正交试验优选处方;采用紫外分光光度法和反相高效液相色谱法测定微泡的包封率和载药量;在光学显微镜下计数并观察微泡的外观和分布情况;以马尔文激光粒径测量仪测量微泡粒径大小和Zeta电位;观察并比较微泡经60Co射线灭菌前后其外观、形态、平均粒径和包封率的改变;并观察微泡在兔肝脏的增强显影效果.结果 以最佳处方制备的载10-羟基喜树碱(2 mg)微泡的药物包封率为86.70%,载药量为21.70%;浓度为(3.07±0.58)×109/ml,粒径范围为(1.10±0.20)μm,平均粒径为1.10 μm;Zeta电位为-(3.90±0.80)mV;超声定向辐照微泡后,药物吸光度值明显增加;经60Co射线灭菌后观察微泡形态、平均粒径及包封率无明显变化;静脉注射此载药微泡后,兔肝脏超声显影持续增强.结论 采用机械振荡法制备的载HCPT脂质微泡,包封率和载药量较高,粒径分布均匀,体内显影效果好,有望实现实时监控下的体内定点靶向给药,为进一步研究奠定了基础.     

一种载基因脂质超声造影剂的制备及特性的实验研究

目的制备一种可作为基因载体的脂质超声造影剂,对其理化性质和兔肾显影效果及载基因的能力进行研究。方法采用机械振荡法制备一种可作为基因载体脂质超声微泡造影剂,观察60Coγ射线灭菌前后造影剂外观、形态、浓度、平均粒径和电位改变,并观察其对正常兔肾显影效果,检测其结合基因的能力。结果自制脂质微泡的平均粒径范围为2.11~6.43μm,平均粒径2.79μm,粒径分布均匀,浓度约为(3.16±0.29)×109/ml;经60Coγ射线灭菌后在显微镜下观察微泡形态,粒径大小无明显变化;体内造影显示该造影剂能够有效增强兔肾实质回声;基因结合量效优化结果显示,造影剂的最大基因结合的效率为22%,最大基因结合量为0.45μg/ml。结论自制脂质超声造影剂符合理想超声造影剂的要求,性质稳定,制备简易,载基因效率高,可望成为一种新型的超声微泡造影剂以及基因或药物治疗的载体。     

一种载基因阳离子微泡超声造影剂的制备及特性研究

目的 制备一种新型的阳离子超声造影剂,评价其理化性质,载基因及体内显影能力.方法 采用水浴机械震荡法,加入DC-胆固醇制备一种阳离子脂质微泡;观察其形态、粒径、表面电位等物理特性,并考察平均粒径及浓度在一定条件下随时间变化情况;检测其载基因量,评价其体内显像效果及对细胞的毒性作用. 结果 所制备的阳离子微泡形态规则,稳定性好,马尔文电位仪测得平均表面电位为(29.02±1.30) mV.与普通脂质微泡比较,阳离子微泡载基因量明显增加,最大基因结合量达4 μg/108个微泡,最大基因结合率为39.2％.对细胞无明显毒性,且体内实验阳离子微泡持续增强兔肝脏显影超过15 min.结论 自制的新型阳离子微泡是一种理想的超声造影剂,并能显著增加基因携带量,可望提高超声靶向微泡破坏技术介导的基因转染效率.     

自制脂质纳米级超声造影剂体外基本特性和造影增强的实验研究

目的 研究自制脂质纳米级超声造影剂的体外基本特性和体内造影增强效果,为今后的靶向显像和载药治疗研究提供依据.方法 (1)造影剂复溶后观察微泡形态,检测其平均粒径,计数其浓度;(2)微泡造影剂常温放置1周、1个月和3个月后复溶,观察其基本特性改变情况;(3)观察此造影剂增强正常兔肝脏显影的情况.结果 自制脂质微泡镜下观察:形态好,粒径范围400～950 nm,平均粒径650 nm,分布均匀,微泡浓度为(3.81±0.33)×109/ml.造影剂放置1周、1个月和3个月后复溶,基本特性无明显改变;造影剂复溶后24 h内微泡能保持较高浓度.体内造影结果显示能显著增强兔肝脏血管及实质显像.结论 此脂质纳米级超声造影剂性质稳定,显像效果好,有极大的开发应用价值,值得进一步研究.     

一种载基因及多聚赖氨酸的脂质超声微泡造影剂制备的实验研究

目的 制备一种能高效载基因的脂质超声微泡造影剂,评价其物理性质、载基因和体内显影能力.方法 采用层-层吸附(LbL)法将基因和多聚赖氨酸(PLL)分层吸附在自制的脂质超声微泡造影剂上,检测微泡造影剂的形态、分布、浓度、粒径、表面电位、载基因和体内显影能力.结果 载PLL、载PLL+基因及载PLL+基因+PLL的微泡与空白微泡相比,其形态、浓度、粒径没有显著差异;随着载PLL和基因层数增加,其表面电位向正或负反转;载基因超声微泡造影剂其外壳吸附基因的层数增加,载基因量也随之增加;载PLL+基因的微泡可增强兔肝实质显像,持续20 min以上.结论 自制的载基因及PLL脂质超声微泡造影剂制备方法简单,载基因的效率高,可作为携带基因等生物活性物质的载体材料.     

载血卟啉脂质微泡的制备及一般特性的实验研究

目的 制备一种载声动力药物的脂质超声微泡并测定其包封率、粒径大小、观察其体内超声显像效果.方法 采用机械振荡的方法制备载血卟啉的脂质超声微泡,用荧光分光光度仪测定其包封率,用倒置显微镜及马尔文激光粒径测量仪测量粒径大小、分布和Zeta电位;观察60Co射线灭菌前后造影剂外观、形态、浓度和平均粒径的改变,并观察其在兔肝内的显像效果.结果 载药脂质微泡的浓度为(3.24±0.79)×109/ml,粒径范围为1.5～5.3μm,平均粒径为(2.84±0.4)μm;脂质载血卟啉(1mg)微泡的包封率为(30.25±4.45)%;Zeta电位为-(15.4±2.4)mV.经60℃射线灭菌后观察微泡形态、粒径及包封率无明显变化,其平均粒径大小及包封率分别为(2.24±0.3)μm,(27.39±2.91)%.静脉注射此载药微泡后,小鼠肝脏可见良好、持续的增强显像效果.结论 采用机械振荡法制备的载血卟啉脂质微泡,包封率较高,粒径分布均一,体内显像效果好,有望实现实时监控下的体内定点靶向给药.     

载竹红菌素脂质微泡的制备及对兔VX2肝肿瘤的显影实验

目的 制备一种载光动力药物的脂质超声微泡,测定物理特性,并观察其对兔VX2肝肿瘤的显影效果及过程.方法 采用机械振荡的方法 制备载竹红菌素脂质微泡,并测定其粒径大小、分布、Zeta电位和包封率、稳定性及超声辐照后药物释放情况.采用不同超声模式观察微泡在兔VX2肝肿瘤的显像效果及过程.结果 载药微泡的粒径为(1052.4±322.7)nm,Zeta电位为 (21.1±7.4)mV,包封率为(88.1±4.6)%,超声辐照能够促使微泡释放药物,对兔VX2肝肿瘤的显影效果好.结论 载竹红菌素脂质微泡包封率高、微泡能够释放药物、显像好,符合理想的药物载体,为实时监控下的体内定位光动力治疗疾病提供了一种新的思路.     

载组织型纤溶酶原激活物及精-甘-天-丝氨酸四肽超声微泡造影剂的实验研究

目的 制备一种同时携带组织型纤溶酶原激活物(Tissue plasminogen activator,tPA)与精-甘-天-丝氨酸四肽(RGDS)靶向配体的新型脂质超声微泡造影剂.方法 以冷冻干燥法制备包载tPA的脂质超声微泡造影剂并应用共价键桥连剂法结合RGDS配体.光镜及荧光显微镜观察其形态;测量其粒径、表面电位、pH值;以ELISA法测定tPA包封率;流式细胞仪检测RGDS携带率;琼脂糖纤维蛋白平板法检测其纤溶活性;以该造影剂对正常家兔肝脏进行静脉声学造影,绘制时间-强度曲线,检测其成像功能.结果 微泡膜上同时携带tPA和RGDS,浓度(7～9)×109/ml,粒径(2.08±0.93) μm,表面电位-51.3,pH值5.58,tPA包封率(81.12±2.44)%,RGDS携带率(94.49±6.19)%.微泡在超声辐照条件下显示溶栓活性.声学造影后,该造影剂能明显增强实验兔肝实质回声.结论 以冷冻干燥法和共价键桥连剂结合法能成功制备同时包载tPA并携带RGDS的脂质超声微泡造影剂,将为血栓的靶向释药促溶治疗提供一条新的可行之路.     

载诺帝脂质微泡的制备及特性的实验研究

目的 制备载诺帝(去甲二氢愈创木酸)脂质微泡并测定其包封率、载药量及观察其体内超声显像效果.方法 采用机械振荡法制备载诺帝脂质微泡,测定其粒径大小、分布和Zeta电位、包封率、载药量;超声造影观察其在兔肝内的显像效果.结果 载药脂质微泡的浓度为(2.53±0.52)×109个/ml,粒径为(2.61±0.32)μm,Zeta电位为+(17.52±2.04)mV;脂质微泡诺帝的包封率(27.1±2.01)%,载药量为(10.9±0.90)%;微泡经外周静脉注射后,兔肝可见良好、持续的增强显像效果.结论 采用机械振荡法可以成功制备携带诺帝的脂质微泡,微泡可以通过肺血管床,符合静脉注射要求,在家兔体内获得了良好的显像效果.     

纳米脂质微泡超声造影剂制备及其显影效果的实验研究

目的 制备一种纳米级脂质超声微泡造影剂,并将其与普通脂质微泡在正常兔肝的造影效果进行比较,以评价其造影效果.方法 经机械振荡法制备纳米脂质微泡,检测其形态、粒径、表面电位等物理特性.分别经兔耳缘静脉团注自制纳米脂质、普通脂质微泡造影剂(2.5 ml/kg),动态观察肝的实质回声增强情况,并用DFY型超声图像分析诊断仪对造影效果进行定量分析.结果 纳米脂质微泡平均粒径为415.8 nm,平均电位为-(13.7±1.6)mV.造影后观察:该纳米微泡能明显增强兔肝的二维灰阶显像,与普通脂质微泡比较,纳米微泡达峰时间较晚,峰值持续时间较短,增强持续时间较普通脂质微泡长,纳米微泡对肝的增强峰值强度略低于普通微泡.结论 自制纳米微泡形态好,粒径均一,显影效果理想,为肿瘤的靶向性研究提供了一个前期基础.     

载多西紫杉醇脂质微泡超声造影剂的制备及其性质

目的 制备载多西紫杉醇脂质微泡并测定性质及观察其体内显像效果.方法 制备载多西紫杉醇脂质微泡,测定粒径、包封率等性质;观察60Co射线灭菌前后微泡性质的差异,观察超声辐照后载药微泡药物的释放,并观察其对兔VX2肝癌的显像效果.结果 载多西紫杉醇微泡的浓度为2.2×109～3.2×109个/ml;粒径分布范围为473.4～706.6 nm,平均粒径为623.1 nm;微泡的包封率为70%以上,载药量为(17.5±0.8)%;Zeta电位为-(3.1±0.9)mV;超声辐照微泡溶液后,药物可释放;静脉注射此微泡后,兔肝实质见良好、持续的增强显像,肝癌病灶可见明显的"快进快出"显影表现.结论 载多西紫杉醇脂质微泡包封率较高,性质较佳,体内显像效果好,提高了超声在肝癌等肿瘤诊断中的价值,超声辐照能促使微泡中的药物释放,有望在实时监控下体内定点靶向给药,实现对肿瘤的靶向治疗.     

自制脂质超声造影剂稳定性和造影增强的实验研究

目的对自制脂质超声造影剂体外稳定性影响因素进行考察,观察其对正常兔肝、肾实质增强效果.方法考察3个体外稳定性影响因素:强光照射、60Co辐射和溶解后不同时间对造影剂外观、微泡形态、微泡浓度和平均粒径的影响.应用实时造影匹配成像(CnTI)技术观察自制脂质超声造影剂对5只兔的肝和肾实质造影后视频增强强度及增强持续时间.结果体外稳定性实验结果说明,自制脂质超声造影剂溶解后微泡较为稳定,溶解后90 min时微泡浓度还保持在较高水平(4×108个/ml左右).长时间强光照射影响脂质超声造影剂溶解后微泡的圆整形态,灭菌剂量的60Co辐射不影响脂质超声造影剂的外观形态、微泡浓度和平均粒径等指标.体内造影表明自制脂质超声造影剂能够有效增强兔肝和肾实质显像强度,肝和肾平均峰值视频强度分别为(4.67±0.26)和(4.78±0.16),肝和肾的平均增强持续时间分别为(290±9)s和(300±10)s.结论自制脂质超声造影剂贮存应避免强光照射,制备时可采用60Co辐射灭菌,溶解后微泡稳定时间较长,可以作为有效的超声造影诊断试剂.     

包载经PEG修饰的重组腺病毒PLGA超声造影剂的制备及特性

目的 制备包载经聚乙二醇(PEG)修饰的重组腺病毒Ad-EGFP/HIF-1α高分子超声造影剂(PLGA),以改善腺病毒载体(Adv)在体内的安全性,提高Adv基因在细胞的转染效率。方法 使用活化的甲氧基PEG对重组Adv衣壳蛋白质进行修饰得到PEG化Adv(PEG-Adv),用双乳化法制备载PEG-Adv高分子超声造影剂(PLGA),观测其粒径、包封率、释放规律及释放病毒的活性,并检测其在巨噬细胞中的免疫反应程度。结果 PLGA分布均匀,平均粒径为6.23 μm;包封率为17.23%;PEG-Adv和单纯Adv从PLGA释放规律相似,但从PLGA释放出来的PEG-Adv的转染效率比从PLGA释放出来的单纯Adv高;包载PEG-Adv的PLGA产生的免疫反应强度也较低。结论 用PLGA微球包载PEG化的重组腺病毒Ad-EGFP/HIF-1α,可改善Adv在体内安全性差的缺点,释放出来的病毒稳定性好,转染效率较高,作为心血管疾病的基因治疗载体具有较好的研究前景。     

自制高分子材料超声造影剂及初步实验研究

目的自制一种新型的高分子材料超声微泡造影剂,并观察其对新西兰大白兔的肾能量多普勒显像效果.方法采用水/油/水(water/oil/water,w/o/w)乳液-溶剂蒸发、冷冻干燥法制备聚乳酸/羟基乙酸(poly lacticcoglycolic acid,PLGA)超声微泡造影剂,用扫描电镜观察微泡大小、形态,用血细胞计数仪测定微泡浓度.用生理盐水稀释粉末样PLGA超声微泡造影剂至浓度为108/ml左右,然后按0.2 ml/kg的剂量经兔耳缘静脉注射至兔体内,用能量多普勒观察其对兔肾显影的增强效果,同时监测兔基本生命体征变化.结果 PLGA超声微泡造影剂均一度高,平均粒径3 μm左右,最大直径6 μm.与造影前相比,PLGA超声微泡造影剂能够明显增强兔肾能量多普勒显影效果,并且显像时间长.显像过程中未见兔基本生命体征有明显的变化.结论 PLGA超声微泡造影剂能够明显增强兔肾能量多普勒显影效果,显像时间长,尚未发现明显的副作用,是一类具有广泛应用前景的新型超声造影剂.     

聚糖纳米微泡超声造影剂的制备及其超声显影效果

目的 制备聚糖纳米微泡超声造影剂,观察其基本特征及动物超声显影效果.方法 高速剪切法制备纳米微泡超声造影剂,光学显微镜和透射电镜观察纳米微泡大小、形态,马尔文粒度分析仪测粒径分布,细胞计数板计数纳米微泡,Zeta电位仪测表面电位,对比超声观察大鼠肾、心脏超声显影效果并测量声强度.结果 纳米微泡呈空心球形结构,分散均匀,形态规则,平均粒径(617±12)nm,浓度(7.2±0.6)×109/ml,Zeta电位(52.9±1.3)mV.24 h、45 d和90d三个时间点浓度、平均粒径和表面电位无明显差异(P＞0.05).用其可使小鼠肾、心脏超声显影明显增强,最大视频强度分别达(15.6±1.1)GU、(27.3±2.5)GU,可视增强持续时间(10±2)min.结论 聚糖纳米微泡稳定性和显像效果良好,有可能成为可穿过血管内皮间隙的新一代超声造影剂.     

载多西紫杉醇脂质超声微泡造影剂对兔VX2肝癌增殖和凋亡的作用

目的 研究载多西紫杉醇脂质超声微泡造影剂对兔VX2肝癌的作用.方法 建立兔VX2肝癌动物模型,将实验兔30只随机分为6组,比较各组的肿瘤生长率、TUNEL法检测肿瘤细胞凋亡、免疫组化法检测PCNA的表达情况.结果 治疗后载药微泡+超声组肿瘤生长速度明显减慢,其肿瘤生长率与其他各组相比差异有显著性(P<0.01);载药微泡+超声组的凋亡指数显著高于其他各组(P<0.01);载药微泡+超声组的肿瘤增殖受到明显抑制,其增殖指数明显低于其他各组(P<0.01).结论 载多西紫杉醇脂质超声微泡造影剂在超声作用下能延缓兔VX2肝癌的增殖、促进其凋亡,对VX2肝癌具有显著的生长抑制作用.     

自制靶向脂质微泡与普通脂质微泡超声显影的对比实验研究

目的探讨自制的靶向脂质微泡超声造影剂在正常兔肝脏与VX2兔肿瘤模型的超声成像特点,对比研究其与普通脂质做泡超声造影剂超声成像的异同。方法分别从正常兔及VX2肿瘤兔耳缘静脉团注普通脂质微泡超声造影剂与自制靶向脂质微泡超声造影剂,使用飞利浦iU22超声诊断仪的造影模式,实时监控2种不同造影剂各自的超声显影特点。DFY定量分析诊断仪分析图像的达峰时间、峰值回声强度、清除时间并对各组参数进行比较。结果在正常兔肝实质,普通脂质微泡超声造影剂(MB)达峰时间明显早于自制的靶向脂质微泡超声造影剂(MB’)达峰时间,峰值回声强度前者高于后者,清除时间前者显著短于后者。在VX2肿瘤区,MB达峰时间明显早于MB’,峰值回声强度前者明显高于后者,清除时间前者显著短于后者。结论自制靶向脂质微泡超声造影剂有其自身独特的超声显像过程和特点,呈"负向显影"模式。