毛细管电泳法检测肝细胞癌微卫星基因表型的影响因素

目的：分析影响肝细胞癌微卫星—自动毛细管电泳检测结果的技术因素。方法：应用MegaBACE500毛细管电泳测序仪对一组高度多态性微卫星PCR扩增产物进行电泳，应用Genetic Profiler软件进行基因表型分型，比较PCR扩增产物在不同处理条件下对基因分型的影响。结果：PCR反应体系残留混合物(dNTP、引物和盐离子的浓度等)对基因分型的结果有明显的影响，当PCR体系中益离子和DNA的浓度比＞10000：1时可使等位基因片段分析系统评分出现偏差而导致结论错误，基因组DNA—PCR样品浓度在50ng/μl时较为合适。结论：毛细管电泳测序体系中PCR反应体系残留混合物的浓度是影响基因分型结果的一个重要因素。     

马凡综合征FBN1基因单倍型连锁分析

目的　建立一种微卫星多态性检测法对马凡综合征(MFS)家系成员进行原纤蛋白 - 1基因 (FBN1 )单倍型分离分析 ,探讨 FBN1微卫星检测对 MFS症状前诊断的应用价值。　方法　从 4个 MFS家系及 4 0名正常人外周血中提取基因组 DNA,应用 1 5号染色体 FBN1基因侧翼区的 4个微卫星 (m ts- 1～ 4 )为遗传标记 ,以荧光标记引物的聚合酶链反应 (PCR)扩增目的 DNA片段 ,PCR产物用毛细管电泳技术(Capillary Electrophoresis)分析并计算其碱基数 ,对这 4个MFS家系及 4 0名正常人进行单倍型分离分析 (Haplotype-Segregation Analysis)。　结果　毛细管电泳技术检测 FBN1微卫星方法简便稳定 ,重复性好。 4 0名正常人 80条染色体等位基因片段大小与国外报道有一定差异 ;4个 MFS家系致病基因分别与 m ts- 1～ 4的 8/ 7/ 3/ 1 5 ,7/ 6 / 3/ 1 4 ,7/ 7/ 3/ 1 0和 1 3/ 7/ 3/ 1 0单倍型连锁 ,单倍型分离分析结果与家系中患者的临床表型一致。　结论　 (1 )本研究建立的荧光 PCR-毛细管电泳 mts- 1～ 4检测技术灵敏度高 ,重复性好 ,较为简便、高效 ,是协助诊断 MFS的方法 ,便于临床实验室使用。(2 )对 4 0名正常人 80条染色体的检测显示 ,位于 FBN1基因内含子的 4个微卫星标记 m ts- 1～ 4的等位基因片段大小与国外报道有一定     

毛细管电泳技术快速检测p53基因点突变

目的：探讨利用毛细管电泳技术快速检测p53基因点突变的临床应用价值。方法：采用毛细管电泳作SSCP分析，检测20例结肠癌肿瘤标本p53基因第7外显子PCR扩增产物，并与传统的聚丙烯酰胺凝胶电泳结果进行比较，最后用DNA序列测定判断其准确性。结果：20例结肠癌标本中，毛细管电泳技术检测出5例标本(Ca4，Ca6，Ca7，Ca8，Ca14)有突变，而凝胶电泳结合银染技术仅检出4例标本(Ca4，Ca6，Ca7，Cal4)有突变，测序证实经毛细管电泳所检出的5例标本均存在点突变。结论：对于PCR产物的单链构象多态性分析，毛细管电泳技术是一种更加快速、简便、敏感的方法，可应用于临床筛查基因点突变。     

绿色荧光标记C-反应蛋白的原核表达和毛细管电泳检测

目的:表达纯化重组的His-EGFP-CRP蛋白,通过毛细管电泳技术对该重组蛋白的生物活性进行评价.方法:用pET14b/EGFP-hCRP原核表达质粒转化到大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达,表达的重组蛋白通过亲和色谱纯化、梯度透析,获得复性的His-EGFP-CRP蛋白;并用高效毛细管电泳(HPCE)技术对复性的蛋白进行检测,了解蛋白质的等电点及活性.结果:转化实验发现,该质粒pET14b/EGFP-hCRP在BL21(DE3)中能够被诱导表达;通过包涵体变性溶解、亲和色谱纯化可获得纯度较高的His-EGFP-CRP蛋白;HPCE分离发现复性后的His-EGFP-CRP蛋白峰为多个,其在电泳液pH值低于6时易检出,His-EGFP-CRP与THP-1细胞裂解物孵育后的检测峰增多.结论:成功地在大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达重组蛋白His-EGFP-CRP,通过包涵体变性溶解及亲和色谱纯化获得该重组蛋白,复性后的His-EGFP-CRP等电点接近于6,以单体或多聚体等结构形式存在,具有结合活性,能与细胞内相关分子结合成复合物,可应用于CRP功能和内化机制的研究.     

毛细管电泳差异性检测尿液蛋白方法初探

Objective: To explore an optimized method for difference detection of urinary proteomics in patients with Bladder Cancer (BCs) by Capillary Electrophoresis separation technique coupled with diode array detector (CE-DAD). Methods: For detecting the difference in the contents of each urinary low-abundance proteins between the two groups, electrolytic additives were used to improve the buffer system, and the concentration of electro-osmotic flow was well controlled in this condition, in order to increase the separation efficiency. Results: The optimal conditions were established to detect the difference between the bladder cancer and the control group by CE-DAD, and the difference and correlation were also tested by the parallel experiment of ELISA method. Conclusion: This paper makes a preliminary exploration on the condition of difference detection by CE-DAD, and establishes the foundation for the institution of standardized experimental method in the future.     

纤支镜取材对患者检测p53、nm23基因蛋白的临床价值

目的 :探讨纤支镜取材对肺癌患者检测 p5 3、nm2 3基因蛋白的临床价值。 方法 :采用OlympusBF - 1TR型纤支镜钳取肺癌组织 35例 ,肺良性病变组织 2 8例 ,分别作 p5 3、nm2 3基因蛋白的免疫组化染色。结果 :p5 3基因蛋白的阳性率在肺癌组为 6 5 7% (2 3/ 35 ) ,在肺良性病变组为 7 1% (2 /2 8) ;nm2 3基因蛋白的阳性率在肺癌组 6 8 6 % (2 4/ 35 ) ,在肺良性病变组为 92 9% (2 6 / 2 8)。而且nm2 3基因蛋白在表达程度上也有明显差异 ,在肺癌组以弱阳性为主占阳性率的 6 6 7% (16 / 2 4) ;在肺良性病变组则以强阳性为主占阳性率的 6 9 2 % (18/ 2 6 ) ,这一特点在肺癌的临床诊断中具有一定的实用价值。结论 :纤支镜对肺部疾病的活检 ,联合检测其 p5 3、nm2 3基因蛋白的表达 ,可对肺癌患者作出早期诊断、转移潜能的预测和预后的评估     

纤支镜取材对患者检测p53、nm23基因蛋白的临床价值

目的：探讨纤支镜取材对肺癌患者检测p53、nm23基因蛋白的临床价值。方法：采用Olympus BF-1 TR型纤支镜钳取肺癌组织35例，肺良性病变组织28例，分别作p53、nm23基因蛋白的免疫组化染色。结果：p53基因蛋白的阳率在肺癌组为65.7%(23/35)，在肺良性病变组为7.1%(2/28)；nm23基因蛋白的阳性率在肺癌组68.6%(24/35)，在肺良性病变组为92.9%(26/28)。而且nm23基因蛋白在表达程度上也有明显差异，在肺癌组以弱阳性为主占阳性率的66.7%(16/24)；在肺良性病变组则以强阳性为主占阳性率约69.2%(18/26)，这一特点在肺癌的临床诊断中具有一定的实用价值。结论：纤支镜对肺部疾病的活检，联合检测其p53、nm23基因蛋白的表达，可对肺癌患者作出早期诊断、转移潜能的预测和预后的评估。     

人釉原蛋白基因的扩增及其真核表达克隆的构建

目的 构建人釉原蛋白基因真核表达克隆。方法 从胚龄20周的引产胎儿牙胚中提取总RNA，RT-PCR法扩增人釉原蛋白编码区基因，重组到真核表达载体PcDNA3．1中，经酶切和DNA序列分析验证。结果 经RT-PCR扩增后，得到大小约570bp的特异性产物，与预期的人釉原蛋白mRNA编码区碱基长度一致，重组克隆PcDNA3．1-AMG的测序结果显示，与GenBank中的人釉原蛋白基因(AMELX)序列仅在第485位碱基发生错配(G→C)，但不影响氨基酸组成。结论 本研究成功的构建了人釉原蛋白基因真核表达克隆，为进一步研究牙周组织再生的基因治疗奠定了基础。     

纤溶酶对心房颤动患者血栓前体蛋白、纤维蛋白原的影响

目的探讨心房颤动患者血栓前体蛋白、纤维蛋白原水平变化及纤溶酶对其的影响。方法心房颤动患者50例,随机分为常规药物治疗组（A组）26例,常规药物联合纤溶酶治疗组（B组）24例,分别观察治疗前、后血栓前体蛋白、纤雏蛋白原含量,并以23例健康人作对照。结果心房颤动患者血浆血栓前体蛋白、纤维蛋白原水平显著高于健康人（P〈0．01）,纤溶酶治疗后显著低于治疗前（P〈0．01）,治疗后B组显著低于A组（P〈0．01）。结论心房颤动患者血栓前体蛋白、纤维蛋白原水平对其血栓形成有一定影响,纤溶酶能有效降低血栓前体蛋白、纤维蛋白原含量。     

毛细管电泳基因扫描和凝胶电泳异源双链分析在免疫球蛋白/T细胞受体基因重排检测中的应用研究

目的 探讨免疫球蛋白轻链IgK及T细胞抗原受体(TCRγ)基因重排更有效的检测方法。方法 收集四川大学华西医院病理科2013~2014年淋巴组织增生性病变石蜡样本共139例,采用BIOMED-2系统扩增,分别使用毛细管电泳基因扫描和凝胶电泳异源双链分析两种方法进行IgK和TCRγ基因重排检测,比较不同方法之间的检出率。结果 81例行IgK基因重排检测,其中59例病理诊断为B细胞淋巴瘤,毛细管电泳基因扫描检出阳性47例(79.66%),凝胶电泳异源双链分析检出阳性34例(57.63%),二者差异有统计学意义(P=0.01)。58例行TCRγ基因重排检测,其中26例病理诊断为T细胞淋巴瘤,毛细管电泳基因扫描检出阳性21例(80.77%),凝胶电泳异源双链检出阳性17例(65.38%),差异无统计学意义(P=0.211)。结论 毛细管电泳基因扫描在抗原受体基因重排检测中比凝胶电泳异源双链分析有更好的检测灵敏度。     

毛细管电泳技术分离哺乳动物脑组织中神经节苷脂

利用毛细管电泳（ｃａｐｉｌｌａｒｙｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ，ＣＥ）分离猪脑、鼠脑组织中主要几种神经节苷脂ＧＭ_１、ＧＤ_（１ａ）、ＧＤ_（１ｂ）、ＧＴ_（１ｂ），在缓冲液中加入α－环状糊精（α－ｃｙｃｌｏｄｅｘｔｒｉｎ，α－ＣＤ）来提高分离的选择性和效率，并对缓冲液的ｐＨ值、α－ＣＤ浓度和电压等变化因素进行研究。结果表明在含１５．０ｍｍｏｌ／Ｌα－环状糊精的２．５ｍｍｏｌ／Ｌ磷酸级冲液（ｐＨ８．６）中，电压为２５ｋＶ时能很好的分离生物样品。从猪脑提取物中分离出ＧＭ_３、ＧＭ_１、ＧＤ_（１ａ）、ＧＤ_（１ｂ）、ＧＴ_（１ｂ）和含唾液酸的其他糖脂类物质，鼠脑中分离出ＧＭ_１、ＧＤ_（１ａ）和ＧＴ_（１ｂ），说明毛细管电泳可用于分离神经节苷脂，具有快速、简便、节约等特点。     

毛细管电泳测定micro RNA346基因多态性的方法研究

目的建立micro RNA346基因多态性的毛细管电泳（CE）测定方法。方法采用血液/细胞/组织基因组DNA提取试剂盒提取血清样品基因组DNA,PCR扩增micro RNA346目的基因,BciT130Ⅰ限制性内切酶酶切,产物用CE测定。对CE筛分介质质量浓度、分离电压等参数进行了优化。在优化的条件下（筛分介质质量浓度为10 g/L分离电压为12 kV),分别测定类风湿性关节炎患者和正常人血清样品micro RNA346酶切产物,并对其进行基因分型。结果在优化的CE实验条件下（筛分介质质量浓度为10 g/L,分离电压为12 kV,25 min内可完成micro RNA346基因酶切产物检测。方法日内相对标准偏差（RSD）为0.43%～0.63%,日间RSD为1.49%～1.56%。用该法测定了96份类风湿性关节炎患者样品和43份正常人样品,结果均为micro RNA346 Ⅰ型,未发现micro RNA346 Ⅱ型。结论本研究建立的方法操作简单,具有高效、快速、样品用量少、自动化程度高等优点,适用于micro RNA类小分子RNA基因多态性的测定。     

毛细管电泳在体液分析中的应用

介绍毛细管电泳的基本原理及其在体液分析中的全液分析中的并通过与高效液相色谱比较，说明它的优越性，指出它在临床药学中的广阔应用前景。     

党参中有机酸的高效毛细管电泳法分析

目的用高效毛细管电泳法,对党参样品所含的活性成分中4种有机酸类成分进行分离与测定.方法采用高效毛细管区带电泳模式,二极管阵列检测器,在209nm、254nm、308nm波长处进行定量测定.结果最佳电泳条件为石英毛细管柱(50μmI.D.×45cm),缓冲溶液为20%乙腈、25mmol/L硼砂溶液(pH=9.12);分离电压为18kV,温度28℃;样品和标准品在20min内得到基线分离.结论本方法简单、快捷、灵敏,当严格控制实验过程中的每个环节时,可以得到良好的准确性和重现性,故可作为中药党参的质量控制方法.     

高效毛细管电泳分离测定颠茄制剂中莨菪类生物碱

选择毛细管区带电泳分离模式，以麻黄素为内标建立了适合莨菪类生物碱阿托品、东莨菪碱、山莨菪碱、樟柳碱化化分离与颠茄酊剂及片剂定量分析的高效毛细管电泳方法。电泳分离条件：毛细管40c×50μm，运行缓冲液（pH8.0）50mmol／L磷酸盐溶液-四氢呋喃（9:1），电迁移进样5kV×5s，运行电压11kV（＋）→（－），柱上检测UV200um，0．02AUFS，毛细管柱温24℃。本法简便、快速、重现性好，可用于含莨菪类生物碱中药制剂的质量控制。     

非同位素PCR方法检测脆性X 综合征FMR-1基因CGG重复序列数目

目的 建立一种可靠、简便的非同位素PCR方法检测脆性X综合征的突变基因。方法 采用生物素标记的CGG寡核苷酸探针，检测通过PCR扩增的FMR-1基因中CGG三核苷酸重复序列数目。从而判断所检样品中FMR—1基因是否正常。结果 该法可检测出正常人及携带者的CGG重复拷贝数。结论 该方法可以简便、安全、可靠地检测FMR—1基因中(CGG)n重复拷贝数，从而确定为正常人或携带者，可作为临床上筛查脆性X综合征的首选方法。     

转铁蛋白基因多态性对毛细管电泳法检测血清糖缺失性转铁蛋白的影响

目的 研究转铁蛋白（Tf）基因多态性对毛细管电泳检测血清糖缺失性转铁蛋白（CDT）的影响,探讨其临床应用价值。方法 选择51例健康体检者,17例非酒精性肝病者,65例酗酒者作为研究对象,均为汉族成年男性。首先采用毛细管电泳（CE）获取样本的CDT电泳图,选取会影响毛细管电泳对血清中CDT含量检测并且在中国人群中较为常见的Tf基因变异体:Tf-Dchi (A>G)、Tf-D1 (A>G)与Tf-B2 (G>A),应用高分辨熔解曲线（HRM）初步检测所有标本的基因型,对HRM筛选出的样本进行测序验证。结果 133例标本经毛细管电泳后显示:127例峰分离良好,6例未能完全分离（健康组2例,非酒精性肝病3例,酗酒组1例）,导致所得CDT结果不可信。133例样本经HRM分析,可疑突变样本经测序确认后,分别检出3例Tf-Dchi (A>G)杂合突变型,0例Tf-D1 (A>G)突变型,0例Tf-B2 (G>A)突变型,其余3例均为C型。Tf-Dchi、Tf-D1、Tf-B2突变型在被检测人群中出现概率分别为2.3%（3/133）,0,0。结论 Tf基因多态性中Tf-Dchi型变异体会导致毛细管电泳中Tf异构体分离不佳,影响检测准确性。     

高效毛细管电泳法分离检测盐酸普鲁卡因和盐酸利多卡因

建立了两种局 部麻醉药－－盐酸普鲁卡因和盐酸利多卡因的高效毛细管电泳方法。以微铂电极为工作电极，通过优化选择检测电位、缓冲溶液ｐＨ、工作电压等实验参数，盐酸普鲁卡因和盐酸利多卡因在５ｍｉｎ内可以得到较好的分离，检出限分别为４ｕｇ／Ｌ，６ｕｇ／Ｌ，回收率在９６．３％～１０１．６％。方法简便，快速，重现性好，适合药物生产过程的质量控制和临床检测。     

高效毛细管电泳分离中焦耳热现象的考察

以黄连素及其化学衍生物为分析对象,通过不同操作条件下分离效能、溶质迁移时间、电压电流关系以及电泳运行功率的关系,来考察高效毛细管电泳过程中管内焦耳热现象对样品分离的影响,明确了在综合优化电泳分离条件中限制焦耳热的必要性。     

亲和毛细管电泳法测定茶碱人血清白蛋白的结合常数

目的 :测定茶碱与人血清白蛋白的结合平衡常数。方法 :亲和毛细管电泳法 ,以 2 0mmol/LpH7 4的磷酸盐缓冲液 (含氨基乙酸 0 . 5mol/L ,EDTA 1mmol/L)为运行缓冲液 ,茶碱作为运行缓冲液的添加剂 ,样品为含 5 %丙酮的 30 μmol/L人血清白蛋白溶液 ,采用更加可靠的描述性指标———淌度比 (M)估算了茶碱与人血清白蛋白的结合平衡常数 ,检测波长为 2 14nm。结果 :测得的茶碱与人血清白蛋白的结合平衡常数与文献值基本吻合。结论 :亲和毛细管电泳法可用于茶碱 蛋白结合常数的快速测定。