甲硝唑对体外蓝氏贾第鞭毛虫形态结构的损伤

用含甲硝唑500 μg/ml（12h LC₅₀）的改良TYI-S-33培养基培养蓝氏贾第鞭毛虫滋养体。分别用光镜和电镜观察药物作用后2、4、8及12 h虫体的形态变化。光镜观察显示：虫体变圆，从培养管壁脱落，鞭毛摆动迟缓或停止，细胞质出现空泡。电镜观察显示：虫体胀大、变圆、细胞质内核糖体溶解，出现大量空泡；核呈锯齿状异形。证实甲硝唑对体外培养的贾第虫滋养体的形态结构有明显的损伤作用。     

双氢青蒿素对C2株蓝氏贾第鞭毛虫Alpha-7.3 giardin基因mRNA表达水平的影响

目的 观察双氢青蒿素 (dihydroartemisinin,DHA) 对C2株蓝氏贾第鞭毛虫(Giardia lamblia)Alpha -7.3 giardin (α-贾第素)基因mRNA表达水平的影响,探讨其对蓝氏贾第鞭毛虫骨架蛋白的损伤作用。方法 用双氢青蒿素浓度为100 μg/mL、200 μg/mL的改良TYI-S-33培养基分别培养C2株蓝氏贾第鞭毛虫2 h、4 h、8 h、12 h后,以不含药物组为对照,实时荧光定量RT-PCR检测药物作用后Alpha -7.3 giardin基因mRNA表达水平的变化。结果 双氢青蒿素作用虫体后Alpha -7.3 giardin基因mRNA表达水平明显低于对照组,二者有显著性差异。结论 双氢青蒿素对C2株蓝氏贾第鞭毛虫Alpha -7.3 giardin基因mRNA的表达具有明显的抑制作用,抑制效果与药物浓度和作用时间相关,提示双氢青蒿素对蓝氏贾第鞭毛虫骨架蛋白具有损伤作用。     

双氢青蒿素对C2株蓝氏贾第鞭毛虫Centrin基因mRNA表达水平的影响

目的分析双氢青蒿素（dihydroartemisinin,DHA）对体外C2株蓝氏贾第鞭毛虫（Giardia lamblia）中心体蛋白（Centrin）基因mRNA表达水平的影响,探讨其对蓝氏贾第鞭毛虫的抑制作用。方法采用改良型TYI-S-33培养基培养C2株蓝氏贾第鞭毛虫,培养基内分别加入浓度为100μg/ml、200μg/ml的双氢青蒿素,以不含药物组作为阴性对照,分别培养2、4、8、12h后,收集各组虫体并提取总RNA,以此为模板,反转录合成cDNA,采用实时荧光定量RTPCR检测药物作用后Centrin基因mRNA表达水平的相对变化量。结果实时荧光定量RT-PCR检测显示,经双氢青蒿素作用虫体后Centrin基因mRNA表达水平显著降低,培养2、4、8、12h后100μg/ml药物组Centrin基因mRNA相对表达量分别为0.46、0.43、0.35和0.27,200μg/ml药物组分别为0.42、0.38、0.29和0.25。结论双氢青蒿素对C2株蓝氏贾第鞭毛虫Centrin基因mRNA的表达具有明显的抑制作用,且抑制作用随着药物浓度的增高和作用时间的延长而增强,提示双氢青蒿素对蓝氏贾第鞭毛虫具有明显的损伤作用,可供蓝氏贾第鞭毛虫病防治参考。     

蓝氏贾第鞭毛虫类高尔基体的研究

目的探讨类高尔基体结构在蓝氏贾第鞭毛虫滋养体和成囊不同时段的存在情况及其动态变化机理。方法用可特异性标记真核细胞高尔基体的荧光染料C6-NBD神经酰胺，标记有活性的蓝氏贾第鞭毛虫滋养体及成囊6、12、18h虫体，并用荧光显微镜观察。同时利用半定量RT—PCR方法检测高尔基体膜结合蛋白golgin245和膜泡融合的调节蛋白Rab1在蓝氏贾第鞭毛虫对数生长期滋养体及成囊6、12、24h的虫体中的表达水平。结果极少数蓝氏贾第鞭毛虫滋养体被C6-NBD神经酰胺标记；多数处于成囊6、12、18h时段的虫体均可见被特异标记成亮绿色的核周围区域。golgin245和Rab1在滋养体及成囊诱导6、12、24h的虫体中的表达水平无显著变化。结论蓝氏贾第鞭毛虫在成囊过程中出现类高尔基体结构．而在对数期滋养体中却没有。在蓝氏贾第鞭毛虫成囊过程中，高尔基体结构成分无大量合成，出现的类高尔基体结构可能是各组分临时组装的结果。     

双氢青蒿素对C2株蓝氏贾第鞭毛虫Delta giardin抑制作用的研究

目的 建立实时荧光定量RT-PCR( real- time quantitative, RT- PCR)检测C2株蓝氏贾第鞭毛虫(Giardia lamblia)Delta giardin基因mRNA表达量的方法,分析双氢青蒿素(Dihydroartemisinin, DHA)对体外C2株蓝氏贾第鞭毛虫Delta giardin基因mRNA表达水平的影响。方法 分别采用100 μg/mL、200 μg/mL的双氢青蒿素改良型TYI-S-33培养基培养C2株蓝氏贾第鞭毛虫,以不含药物组作为阴性对照,分别培养2 h、4 h、8 h、12 h,提取总RNA,逆转录合成cDNA,实时荧光定量PCR检测Delta giardin基因mRNA表达情况。结果 100 μg/mL双氢青蒿素培养2 h、4 h、8 h、12 h后,Delta giardin基因mRNA相对表达量分别为0.44、0.26、0.25、0.02;200 μg/mL双氢青蒿素培养2 h、4 h、8 h、12 h后,Delta giardin基因mRNA相对表达量分别为0.30,0.26,0.11,0.02。药物对照组中C2株蓝氏贾第鞭毛虫Delta giardin基因mRNA表达量明显低于阴性对照组。结论 双氢青蒿素对C2株蓝氏贾第鞭毛虫Delta giardin基因mRNA的表达具有明显的抑制作用,提示双氢青蒿素对蓝氏贾第鞭毛虫具有明显的防治效果。     

体外蓝氏贾第鞭毛虫滋养体的形态学观察

目的观察体外培养的蓝氏贾第鞭毛虫滋养体超微结构,探究贾第虫滋养体的核仁。方法用改良TYI-S-33培养基培养蓝氏贾第鞭毛虫滋养体,姬姆萨(Giemsa)染色和铁苏木素染色后光镜观察虫体的形态结构;以透射电镜观察虫体的超微结构;以核仁特异性抗体作用虫体产生间接免疫荧光,用激光共聚焦显微镜检测核仁。结果光学显微镜下观察姬姆萨染色后的贾第虫胞质为淡监色,可见1对细胞核,核内有分散的染色体,数目为10条;4对鞭毛、1对半月形的中体、轴柱。铁苏木素染色可见1对椭圆形的泡状细胞核内各有1个细小的核仁。透射电镜观察虫体外观颜面状,呈倒置的梨形:质膜下可见单层排列、大小均匀的小囊泡;可见虫体的细胞器:游离核糖体颗粒、内质网;细胞骨架:腹吸盘、鞭毛、基体、中体的微管结构;核结构:核膜、核孔、核仁、染色体。激光共聚焦显微镜观察发现分裂间期虫体细胞核内有绿色荧光并聚集为核仁,在分裂期虫体内绿色荧光呈弥散分布。结论光镜和电镜观察结果显示体外蓝氏贾第鞭毛虫滋养体的形态结构复杂,有典型的核仁、染色体及复杂的细胞骨架结构。     

蒿甲醚体外抗弓形虫作用的实验研究

目的 :了解蒿甲醚体外抗弓形虫速殖子的作用效果。方法 :采用大鼠肾细胞培养技术 ,观察蒿甲醚 (浓度 0.01- 100 μg/ ml)对虫体侵入细胞及在细胞内增殖的影响 ,选乙酰螺旋霉素作对照。结果 :蒿甲醚抗弓形虫作用的最低有效浓度为 0 .1μg/ml。当其浓度为 4 μg/ ml时 ,作用速殖子 4 8h后 ,光镜下多数虫体变形 ,胞质内出现空泡、颗粒。乙酰螺旋霉素的作用不及相同浓度的蒿甲醚。结论 :蒿甲醚在体外能抑制弓形虫速殖子的侵袭和繁殖力 ,且具有杀虫效果。     

白头翁体外抗阴道毛滴虫的效果及扫描电镜观察

目的 探讨白头翁杀阴道毛滴虫作用机制。方法 利用不同浓度白头翁水提液(PWE)进行体外抗滴虫实验，并用光镜及扫描电镜观察白头翁作用后滴虫的形态变化。结果 随着药物作用时间的延长和药物浓度的增加，滴虫死亡率增高。5mg／ml药物作用8h，滴虫死亡率达到100％。白头翁水提液24h杀灭滴虫的最低有效浓度为1．25mg／ml。药物作用后虫体内空泡增多，颗粒堆积，虫体裂解。扫描电镜显示，虫体表面皱褶加深，表膜凹陷、剥脱、破裂，鞭毛和波动膜受损。结论 白头翁可直接作用于虫体表膜，具有较强的抗滴虫作用。     

HIV合并人芽囊原虫和蓝氏贾第鞭毛虫感染1例

患者,女,64岁,农民,以“腰部间断性疼痛不适”入院。患者人类免疫缺陷病毒（HIV）抗原/抗体检测结果为阳性,粪样常规生理盐水涂片显微镜镜检检出人芽囊原虫和蓝氏贾第鞭毛虫包囊,人芽囊原虫包囊呈圆形、卵圆形,大小不一,1～2颗颗粒状核;碘液染色虫体中间有空泡,在空泡与胞膜之间有不规则、闪亮、似月牙状的边缘,其内见多个小亮点;蓝氏贾第鞭毛虫包囊呈椭圆形,囊壁较厚,与虫体间有明显的间隙,碘液染色囊内轴柱明显,可见2～4个核,核位于轴柱两侧,苏木素染色后包囊内可见明显的4个紫红色的核。巢式PCR从患者粪样DNA中扩增出511 bp的条带,与蓝氏贾第鞭毛虫基因序列TSA417 (GenBank登录号AF065606)的一致性为99%;用人芽囊原虫BhRDr和RD5特异引物PCR扩增核糖体小亚基基因,扩增出约600 bp的条带,测序结果为人芽囊原虫ST1型。结合患者饮生水史、使用非水冲式厕所、饲养猫、犬等流行病学史,诊断为HIV合并人芽囊原虫和蓝氏贾第鞭毛虫混合感染。给予甲硝唑（0.2 g/次,3次/d）治疗4 d后,患者症状缓解并出院。     

苦参对蓝氏贾第鞭毛虫作用及其机理初步研究

目的研究苦参对蓝氏贾第鞭毛虫的作用及其机理. 方法用苦参作用蓝氏贾第鞭毛虫滋养体,观察滋养体脱壁及死亡情况,并用光镜和透射电镜观察其形态和内部结构的变化. 结果在作用 6、8和24 h后,滋养体脱壁率分别为47.4%、70.9%和80.2%,死亡率为 24.5%、36.1%和54.2%;形态观察可见,苦参作用的滋养体收缩,胞质内容物减少,吸盘部分脱离胞体,有的滋养体部分胞膜内陷. 结论苦参在体外能引起滋养体脱壁、死亡,其抗虫作用是肯定的,吸盘脱离、质膜凹陷及胞质减少等,这可能是其对贾第虫作用机理所在.     

双氢青蒿素对蓝氏贾第鞭毛虫滋养体蛋白质的损伤

目的探讨双氢青蒿素(dihydroartemisinin,DHA)对体外培养的蓝氏贾第鞭毛虫(Giardialamblia)滋养体蛋白质的损伤作用。方法用改良TYI-S-33培养基培养蓝氏贾第鞭毛虫滋养体;设立实验组(DHA组)和正常对照组(C组)。实验组用含双氢青蒿素的培养基(含LC50=200μg/mL的DHA)培养;对照组培养基不含药物。提取各组虫体总蛋白,经Brad-ford法进行蛋白质定量,样本经2D-电泳和硝酸银染色后,扫描检测凝胶电泳图蛋白点的数量和种类,获取蛋白质点匹配信息,挑选匹配性高的蛋白点,进行质谱(MALDI-TOF MS)分析。结果经双氢青蒿素作用后虫体总蛋白质含量(0.6993μg/mL)明显低于对照组(4.8241μg/mL),二者差异有显著性(P0.001)。蛋白质二维电泳凝胶图分析结果显示,正常对照组(C组)蛋白点密集,约1253个点,布满整块凝胶,蛋白表达量高(蛋白点颜色深且清晰、明亮);与此相反,实验组(DHA组)蛋白点显著减少,DHA作用6h后约617个点,作用12h后约326个点,蛋白表达量明显降低(蛋白点颜色浅,不清晰)。其次,正常对照组与双氢青蒿素组的12kDa~30kDa、等电点pI3.0~7.6范围内蛋白点表达量存在明显差异,即实验组该范围内大多数蛋白点完全消失,45kD~60kDa的蛋白点仅剩6个点。质谱分析鉴定结果显示,在正常对照组胶图所选的80个匹配良好的蛋白点中,鉴定出6种骨架蛋白(14个点),而实验组(DHA组)蛋白胶图中相对应的蛋白点消失。结论双氢青蒿素对蓝氏贾第鞭毛虫滋养体的蛋白质具有明显的损伤作用,其中包括细胞骨架蛋白。     

双氢青蒿素对体外培养阴道毛滴虫作用的电镜观察

目的 观察双氢青蒿素（DHA）对阴道毛滴虫超微结构的影响。 方法 在2.5×10⁶个／ml滴虫培养液中加入双氢青蒿素1 mg／ml。 37 ℃ 培养3 和3.5 h, 进行扫描电镜观察，培养2.5和4 h进行透射电镜观察。 结果 双氢青蒿素作用滴虫后，虫体细胞膜受损明显，表面皱褶加深、表膜凹陷，并出现裂隙。细胞核膜破损，细胞核和细胞质均出现裂隙。内质网呈囊状肿胀，氢化酶体受损、变形。细胞质从细胞膜破裂处溢出。 细胞膜剥脱后细胞核、氢化酶体和盾等结构裸露。最后虫体变性、坏死。 结论 双氢青蒿素能破坏阴道毛滴虫膜系结构并导致虫体裂解死亡。     

PRELIMINARY STUDIES ON THE EFFECTS OF A CHINESE HERB-RADIX SOPHORAE FLA VESCENTIS ON TROPHOZOITES OF GIARDIA LAMBLIA IN VITRO

Objective To investigate the effect and mechanism of radix Sophorae flavescentis on the trophozoites of Giardia lamblia in vitro. Methods Trophozoites of G. lamblia were exposed to aqueous extracts of radix S. flavescentis and then the detachment from the tube wall, the death rate and the morphological changes under light and transmission electron microscope of trophozoites were studied. Results After exposure to 1.6% aqueous extracts of radix S, flarescentis for 6, 8 and 24 h, the detachment rates were 47. 4%, 70. 9% and 80. 2%, and the death rates were 24. 5%,36.1% and 54.2%, respectively. The radix S, flavescentis-treated trophozoites shrinked and became roundish. The rewere also changes in ultrastructure, such as depletion of the contents of cytoplasm, separation of adhesive disk from the cell body and appearance of pit in cell membrane of some treated trophozoites, Conclusion Radix S, flavescentis can kill trophozoites of G, lamblia and lead them to detach from the tube wall in vitro. The induced morphological changes may be partially responsible for the effects of radix S, flavescentis on giardiasis.     

Occurrence of specific secretory immunoglobulin A in bile after inoculation of Giardia lamblia trophozoites into rat duodenum

We studied the appearance of specific secretory immunoglobulin A (IgA) antibody in bile after inoculation of live Giardia lamblia trophozoites into rat intestine. Serial bile specimens collected before and after inoculation of trophozoites were assayed for IgA antibodies by indirect immunofluorescence. Secretory IgA antibodies to Giardia lamblia were first detected in bile at 3 days after inoculation, remained elevated through 12 days, and then returned to control levels. Positive immunofluorescence of trophozoites for IgA was observed at bile titers of 1:80 to 1:160, whereas control biles were usually negative at dilutions of 1:10 or less. Scanning electron microscopic examination of Giardia in conjunction with immunocytochemistry revealed IgA antibodies bound to the flagella and surfaces of the trophozoites including the adhesive disk. These data demonstrate the occurrence of a secretory IgA immune response directed against surface antigens of Giardia lamblia trophozoites in the rat.     

双氢青蒿素对大鼠体内卡氏肺孢子虫作用的超微结构研究

目的 研究双氢青蒿素（DHA）治疗对大鼠体内卡氏肺孢子虫（PC）超微结构的影响。方法 以地塞米松磷酸钠对Wistar大鼠进行皮下注射，建立卡氏肺孢子虫肺炎（PCP）动物模型，用60mg／kgDHA治疗实验大鼠，杀鼠取肺，用透射和扫描电镜观察大鼠肺内PC的超微结构变化，并与感染对照组进行比较。结果 透射电镜发现PC滋养体表膜和核膜破裂，胞质中出现大量空泡和高电子密度颗粒，PC包囊中也出现空泡，囊内小体变性坏死；扫描电镜发现PC滋养体丝状伪足和微绒毛稀疏、变短甚至脱落，表膜出现缺损。结论 DHA可破坏PC滋养体和包囊。