日本血吸虫成虫31/32 kDa蛋白的纯化及保护性免疫力的研究

本文采用制备型聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和电渗析方法分离纯化日本血吸虫成虫 31/32 kDa 蛋白(Sj 31/32蛋白)。SDS-PAGE、免疫印迹试验(EITB)和酶联免疫吸附试验(ELISA)检测结果表明采用该方法分离纯化的 Sj 31/32 蛋白纯度高,且具有较高的活性。用纯化的 Sj 31/32 蛋白加福氏佐剂免疫的小鼠,不仅可减少虫负荷(减虫率 28.1％),还可降低血吸虫成虫的产卵量(减卵率 71.4％),抑制虫卵肉芽肿的形成。结果提示:Sj 31/32 蛋白具有较高的减卵率,可望作为混合多价疫苗候选组分。     

日本血吸虫成虫31／32kD蛋白对免疫小鼠TNF—α及sIL—2R…

为了研究Ｓｊ３１／３２所诱导的保护性免疫机制，探讨细胞因子ＴＮＦ－α及ＩＬ－２与Ｓｊ３１／３２保护力之间的关系，本实验用纯化的Ｓｊ３１／３２免疫小鼠，攻击感染后每隔２ｗｋ取外周血观察ＴＮＦ－α与ｓＩＬ－２Ｒ水平的动态变化。     

日本血吸虫成虫31/32kD抗原诱导小鼠产生抗卵免疫的初步研究

本文采用超凝胶柱层析法分离纯化日本血吸虫31/32kD抗原.免疫小鼠诱导保护性免疫力.结果表明,这种保护性免疫力仅有抗卵效果,无抗成虫作用.31/32kD免疫小鼠后可使小鼠粪卵减少63.8%—78.3%;雌虫子宫内虫卵降低53.2%;肝、肠中死卵量明显增加,说明31/32kD抗原可诱导小鼠产生抗卵免疫干扰虫卵形成,加速虫卵死亡,提示它可能是一种有希望的抗血吸虫病理疫苗的候选抗原.     

日本血吸虫成虫31/32kD蛋白对免疫小鼠TNF-α及sIL-2R影响的研究

为了研究Ｓｊ３１／３２所诱导的保护性免疫机制，探讨细胞因子ＴＮＦ－α及ＩＬ－２与Ｓｊ３１／３２保护力之间的关系，本实验用纯化的Ｓｊ３１／３２免疫小鼠，攻击感染后每隔２ｗｋ取外周血观察ＴＮＦ－α与ｓＩＬ－２Ｒ水平的动态变化。结果表明，Ｓｊ３１／３２可影响宿主ＴＮＦ－α与ＩＬ－２水平的表达。由此推测，Ｓｊ３１／３２的保护性免疫机制可能与宿主体内ＴＮＦ－α及ＩＬ－２水平的变化有关。     

日本血吸虫31／32kDa抗原纯化及诊断应用的研究

采用超凝胶柱层析结合超滤、透析、沉淀等方法分离纯化了日本血吸虫成虫３１／３２ｋＤａ抗原。经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ、银染和免疫印迹分析，证明免疫及生化纯度。银染及ＰＡＳ证实此抗原是一种不含糖的多肽类组分。用于ＥＬＩＳＡ和ＩＨＡ诊断日本血吸虫病，与ＳＥＡ同样敏感，而特异性明显较优。     

200 kD 糖蛋白和20 kD 蛋白分子在曼氏血吸虫不同发育阶段的表达与定位研究(英文)

采用间接荧光抗体技术对单克隆抗体 Ｍ４５ 所识别的２００ ｋ Ｄ及 Ｍ５０ 所识别的２０ ｋ Ｄ抗原在曼氏血吸虫不同发育阶段的表达和定位进行了研究。２００ ｋ Ｄ 抗原主要在虫卵、毛蚴和早期童虫阶段表达,主要位于毛蚴、尾蚴和早期童虫的表膜和分泌腺。２０ ｋ Ｄ 抗原则在所研究的发育阶段中,除虫卵阶段外都有表达,定位于童虫到成虫的表膜和尾蚴的实质中。由此可见,２０ ｋ Ｄ抗原主要表达于从童虫到成虫的终宿主体内寄生阶段,而２００ ｋ Ｄ 抗原主要表达于与淡水中自由生活相关的幼虫阶段。     

佐剂对日本血吸虫31/32kDa蛋白保护性免疫力的影响

本实验用纯化的日本血吸虫３１／３２ｋ Ｄａ 蛋白（ Ｓｊ３１／３２ 蛋白）辅以ｐｏｌｙａｌｐｈａｏｌｅｆｉｎ（ Ｐ Ａ Ｏ）佐剂免疫小鼠,同时比较了 Ｓｊ３１／３２ 蛋白辅以福氏完全佐剂（ Ｆ Ｃ Ａ）对小鼠保护性免疫力的影响。 Ｓｊ３１／３２ 蛋白＋ Ｐ Ａ Ｏ 组小鼠减虫率为３７５５％ ,肝减卵率为６７０２％ ; Ｓｊ３１／３２ 蛋白组小鼠减虫率为２１１８％ , 肝减卵率为 ４９０３％ ; Ｓｊ３１／３２ 蛋白＋ Ｆ Ｃ Ａ 组小鼠减虫率为 ２４０２％ , 肝减卵率为５２２４％ 。结果提示, Ｓｊ３１／３２ 蛋白辅以 Ｐ Ａ Ｏ 佐剂的减虫作用优于 Ｓｊ３１／３２ 辅以 Ｆ Ｃ Ａ 的减虫作用（ Ｐ＜ ００５）,且明显强于单纯 Ｓｊ３１／３２ｋ Ｄａ 蛋白的保护性免疫作用（ Ｐ＜ ００１）。     

日本血吸虫与曼氏血吸虫的致病差异

曼氏血吸虫和日本血吸虫是全球范围内两种主要的肠道血吸虫病病原体,所致基本病理均为虫卵引起的肝脏肉芽肿和纤维化,但两者在产卵方式以及肉芽肿的组成细胞等方面均存在明显差异。 目前,我国的血吸虫病研究主要以日本血吸虫病为对象,国外主要以曼氏血吸虫病为对象,而介绍两种血吸虫致病差异的综述较少。 为更好地理解两种血吸虫的致病差异,本文从血吸虫的基因组和进化路径、幼虫迁移、成虫寄生位置及产卵方式、局部组织病理、肉芽肿的形成机制以及肉芽肿的细胞组成等 6 个方面对日本血吸虫和曼氏血吸虫的致病差异进行了综述。     

纯化31/32kDa抗原和成虫粗抗原诊断日本血吸虫病的比较

用纯化的日本血吸虫成虫３１／３２ｋＤａ抗原（Ｓｊ３１／３２）与成虫粗抗原（ＡＷＡ）对不同类型日本血吸虫病患者血清抗体进行检测，结果３种不同类型（急性、慢性和晚期）血吸虫病患者血清抗Ｓｊ３１／３２抗体水平（ＯＤ值）分别为２．７７±０．２５、２．６７±０．３０和２．４６±０．１９（Ｐ＜０．０１），抗ＡＷＡ抗体水平分别为３．２７±０．１６、３．２８±０．１６和３．２０±０．１７（Ｐ＞０．０５）。慢性血吸虫病患者血清抗Ｓｊ３１／３２抗体与每克粪便虫卵数（ＥＰＧ）之间有高度的相关性（ｒ＝０．９３），明显高于抗ＡＷＡ抗体与ＥＰＧ的相关性（ｒ＝０．４５）。结果表明，利用纯化Ｓｊ３１／３２诊断血吸虫病能较好地区别不同的感染类型和感染度。     

佐剂对日本血吸虫31／32kDa蛋白保护性免疫力的影响

本实验用纯化的日本血吸虫３１／３２ｋＤａ蛋白辅以ｐｏｌｙａｌｐｈａｏｌｅｆｉｎ（ｐａｏ）佐剂免疫小鼠，同时比较了Ｓｊ３１／３２蛋白辅以福氏完全佐剂对小鼠保护性免疫力的影响。     

日本血吸虫菲律宾株26kDa抗原的表达、纯化与应用

利用亲和层析和Ｗｅｓｔｅｒｎ－ｂｌｏｔ等分子生物学技术，表达、纯化、鉴定了重组日本血吸虫菲律宾株２６ｋＤａ抗原（ｒＳｊｐ２６ＧＳＴ），并比较了其与日本血吸虫大陆株２６ｋＤａ抗原（ｒＳｊｃ２６ＧＳＴ）基因ｃＤＮＡ序列的异同，分析了其应用前景。分别以质粒ｐＧＥＸ和血吸虫大陆株总ＲＮＡ为模板，经ＰＣＲ或逆转录ＰＣＲ（ＲＴ－ＰＣＲ）扩增出的Ｓｊｐ２６ＧＳＴ和Ｓｊｃ２６ＧＳＴｃＤＮＡ，其片段长度均为６５４ｂｐ。通过双脱氧测序结果显示两者碱基排列顺序相同。用大肠杆菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）表达载体在Ｅ．ｃｏｌｉ中高效表达Ｓｊｐ２６ＧＳＴ，ｒＳｊｐ２６ＧＳＴ占菌体总蛋白的２５％。用谷胱甘肽（ＧＳＨ）亲和层析柱一步纯化法，得到纯品Ｓｊｐ２６ＧＳＴ，将其作为靶抗原用Ｗｅｓｔｅｒｎ－ｂｌｏｔ检测血吸虫大陆株感染者和感染小鼠血清及用Ｓｊｃ２６ＧＳＴ免疫的小鼠血清，反应均为阳性。本研究提示Ｓｊｐ２６ＧＳＴ与Ｓｊｃ２６ＧＳＴ在ＤＮＡ序列、氨基酸顺序和抗原性等方面高度同源，Ｓｊｐ２６ＧＳＴ在研制日本血吸虫疫苗方面具有一定应用价值     

日本血吸虫31/32kDa循环免疫复合物的检测及其在疾病诊断中的作用

检测血吸虫循环免疫复合物（CIC）有助于提高疾病的检出率。利用抗血吸虫单克隆抗体H226和碱性磷酸酶标记的羊抗人IgG（Fc）作捕捉ELISA，检测日本血吸虫病患者血清中CIC，其阳性检出率为92．2％，其中，EPG＜100的病人阳性检出率为90．0％，EPG＞100的病人阳性检出率为95．5％，两者无显著性差异。由于羊抗人IgGFc段能与CIC中人IgG的Fc段特异性结合，因此不仅省去了常规分离CIC的步骤，而且有助于提高试验的敏感性和特异性。     

吡喹酮治疗对日本血吸虫31/32 kDa抗体的影响

为探讨化疗对日本血吸虫31/32kDa抗体的影响,应用纯化日本血吸虫31/32kDa抗原（Sj31/32）和可溶性虫卵抗原（SEA）对94例经吡喹酮治疗后不同时期血吸虫病患者血清抗体进行检测。结果治疗后3和6个月血清31/32kDaIgG水平分别为1.26±0.15和0.65±0.14(治疗前为2.03±0.20,P<0.01),而SEAIgG水平则分别为2.87±0.19和2.30±0.20（治疗前为3.01±0.17,P>0.05）。各年龄组治疗前后血吸虫抗体水平均随治疗进展而降低,其中儿童和青少年（3～20岁年龄组）Sj31/32IgG水平下降最快,治疗后6个月时几乎接近正常值。治疗前Sj31/32IgG与SEAIgG水平之间高度相关（r=0.90）,治疗后3和6个月两者之间的相关程度降低（r分别为0.30和0.40）。结果表明,吡喹酮治疗后患者血清中Sj31/32IgG下降较快,Sj31/32IgG似可作为一种短期抗体用于疗效考核。     

日本血吸虫成虫cDNA表达文库免疫筛选及抗原表达克隆的鉴定

用表达载体λgtll构建日本血吸虫成虫cDNA表达文库,并直接以日本血吸虫病人血清抗体筛选,从1.5×10~4个噬菌体克隆中筛选出9个阳性克隆.经Western印渍分析,Sjll4,Sill5,Si116 3个克隆显示有大于β-半乳糖苷酶的重组融合蛋白带,并被日本血吸虫病人血清所识别,其分子量分别为130、135和 130kDa.经重组DNA技术获得单一性日本血吸虫抗原蛋白,对于研究日本血吸虫病、血吸虫和宿主之间的复杂关系和大量制备标准化日本血吸虫病诊断抗原或疫苗侯选成分具有重要意义.     

日本血吸虫卵与卫氏并殖吸虫成虫可溶性抗原内的共同抗原组分研究

应用凝胶电泳和免疫印斑技术对日本血吸虫卵与卫氏并殖吸虫成虫的水溶性抗原(JSEA、PAA)和尿素溶性抗原(JEA-u、PAA-u)进行了抗原蛋白组分比较分析。结果显示:两者的特异性抗原显色主带,JSEA、JEA-u分别有8条和3条,PAA、PAA-u分别有9条和2条;其中JSEA、JEA-u分别有1条和2条,PAA、PAA-u分别有1条和2条对异种抗血清呈现交叉反应显色带。表明两种吸虫的可溶性抗原均存在共同抗原组分。慢性血吸虫病患者血清与并殖吸虫成虫抗原的交叉反应仅见于PAA,而未见于PAA-u,提示PAA-u在避免交叉反应和抗原纯化方面比PAA较为优越。