大黄酸-雌酮对大鼠成骨细胞增殖和分化的作用

【目的】研究大黄酸-雌酮（LC-1）对原代培养大鼠成骨细胞增殖和分化的作用。【方法】酶消化法分离培养SD乳鼠颅盖骨成骨细胞；采取MTT法测定细胞增殖，磷酸苯二钠法（pNPP）测定细胞内外碱性磷酸酶（ALP）活性，研究不同浓度LC-1对成骨细胞增殖和分化能力的影响，并与雌酚酮和大黄酸的作用进行比较。【结果】给药3d后，与空白对照组相比：10^-6mol／L LC-1组、10^-7mol／L LC-1组和10^-7mol／L雌酚酮组明显促进成骨细胞增殖和增加细胞内外ALP活性（P〈0．05）；大黄酸抑制成骨细胞增殖，其中10^-6mol／L组有明显差异（P〈0．05），同时有增加细胞ALP活性的趋势，但无统计学差异。【结论】大黄酸-雌酮在体外可以促进成骨细胞增殖和分化。     

大鼠脑内成分对体外培养的成骨细胞增殖、分化和矿化的影响

目的研究大鼠脑组织固有成分对体外培养的成骨细胞增殖、分化和矿化的影响，探讨合并脑外伤骨折愈合加快的可能原因。方法提取大鼠全脑、灰质、白质、垂体、肌肉、肝脏、大鼠血清等．制成匀浆提取液．体外培养大鼠成骨细胞．与空白培养液作对照观察大鼠各组织提取液对成骨细胞增殖、分化和矿化的作用。结果对成骨细胞增殖的影响：脑内灰质和白质成分较其他提取液显著促进成骨细胞增殖（P〈0．01）。其中灰质成分最为明显；对成骨细胞分化的影响：灰质，白质，血清成分对成骨细胞ALP活性的影响明显较其它各组高（P〈0．01），其中灰质成分为最高（P〈0．01）；对成骨细胞矿化的影响：肌肉组轻度抑制成骨细胞矿化结节形成（P〈0．05），其他各组无显著性差别。结论大鼠脑组织中灰质和白质能显著促进成骨细胞增殖和分化．尤以灰质为最强，但并不能明显促进成骨细胞矿化。脑外伤后脑组织内固有成分释放入血可能和合并脑外伤的骨折愈合加速有一定关系。     

槐角苷及染料木素对成骨细胞生物学特性的影响

目的：比较槐角苷及染料木素对成骨细胞生物学特性的影响。方法：成骨细胞由新生24h SD大鼠头盖骨分离得到。通过细胞增殖率测定、碱性磷酸酶活性测定、茜素红染色矿化结节形态计量方法,对比槐角苷和染料木素在体外对成骨细胞骨形成功能的影响。利用基因克隆和报告基因方法,检测槐角苷和染料木素对人骨保护素（osteoprotegerin,OPG）启动子活性的作用,观察两者对骨保护素基因转录活性的调节。结果：体外培养的成骨细胞在1和0．1μmol／L槐角苷的干预下,均显示增殖刺激作用（与对照组比较P〈0．05）。10μmol／L染料木素使细胞增殖受抑制,但0.1μmol／L染料木素则显示增殖刺激作用（与对照组比较P〈O．05）。槐角苷在实验的各种浓度中均能提高ALP活性,而染料木素只在0．1μmol／L浓度才能提高ALP活性。槐角苷在10、1和0．1μmol／L浓度对成骨细胞的矿化总面积较对照组分别提高了73％、138．6％和114．3％,而染料木素各个浓度下成骨细胞矿化总面积均减少。10、1和0．1μmol／L浓度槐角苷干预后检测报告β-半乳糖苷酶基因（LacZ）活性均增加,但染料木素仅在0．1μmol／L浓度对LacZ活性有增强作用（与对照组比较P〈0．05）。结论：槐角苷能够促进成骨细胞的增殖、分化和矿化功能,与染料木素比较,不出现对成骨细胞成骨功能的抑制作用。而对于成骨细胞产生的破骨细胞抑制因子骨保护素,较染料木素有更强的上调作用。     

17β-雌二醇和晚期糖化终末产物对大鼠成骨细胞增殖和分化的影响

目的：探讨不同浓度的17β－雌二醇（17β－estrodiol)对成骨细胞增殖分化的影响及雌激素（estrogen)与晚期糖化终末产物（advanced glycosylation end-product,AGE)共存对成骨细胞的作用。方法：用不同浓度的17β－雌二醇加入大鼠成骨细胞培养体系,不同作用时间,观察对大鼠成骨细胞增殖分化的影响,以及17β－雌二醇与AGE共存时对成骨细胞增殖的影响。结果：17β－雌二醇＞10^-9mol/L主要表现为对大鼠成骨细胞增殖的抑制作用,10^-10和10^-11mol/L则显著促进大鼠成骨细胞的增殖（P＜0．01,P＜0．05）;10^-12-10^-14mol/L的17β－雌二醇培养48h显著抑制成骨细胞增高（P＜0．01）,10^-6-10^-8mol/L 17β-雌二醇存在下培养24,48,72h,均表现出显著抑制成骨细胞的分化,10^-10mol/L 17β－雌二醇与400－1000mg/L AGE共同存在,培养24h则均表现出促增殖作用（P＜0．01）。结论：雌激素在生理浓度对大鼠成骨细胞增殖产生抑制作用,低于生理浓度具有促增殖活性,浓度进一步降低,再次出现抑制作用,且适量浓度的雌激素与高浓度AGE共存时,促进大鼠成骨细胞增殖。     

骨愈1号药物血清对成骨细胞增殖分化功能的影响

目的观察中药骨愈1号药物血清对成骨细胞增殖、分化以及矿化的影响。方法从新生SD大鼠颅骨获取成骨细胞进行培养，取第3代成骨细胞进行试验，将其分为4组，在各组培养液中分别加入不灌胃骨愈1号的新西兰兔血清（对照组）和灌胃骨愈1号浓度分别12．5g／Kg、25g／Kg、50g／Kg的新西兰兔血清（高、中、低剂量组）。用MTT法测定细胞增殖功能；用对硝基苯基磷酸二钠法测定碱性磷酸酶（ALP）活性；用茜素红染色法，在40倍光镜下作矿化结节计数。结果与对照组比较，骨愈1号药物血清高、中、低剂量组在MTT显色的OD值、ALP活性和矿化结节数均明显升高（P〈0.01或者P〈0.05），且高剂量组优于低剂量组（P〈0.01或者P〈0.05），在提高ALP活性方面，高剂量组优于中剂量组（P〈0.05）。结论骨愈1号具有促进成骨细胞增殖、分化及矿化作用，且其作用呈剂量相关性。     

成骨生长肽1O～14及其结构类似物G48A对大鼠成骨细胞增殖和分化的影响

目的 探讨成骨生长肽10～14（G36G）及其结构类似物G48A对大鼠成骨细胞增殖与分化功能的影响。方法 采用无血清培养条件，G36G和G48A各9组：浓度依次为1×10^-2、1×10^-8、1×10^-9、1×10^-10、1×10^-11、1×10^-12、1×10^-13、1×10^-14和1×10^-15mol／L。甲状旁腺激素（PTH）组：培养结束前6h培养液中的PTH浓度为1×10^-8mol／L。对照组：培养液中含1％牛血清白蛋白。分别观察不同浓度G36G及其类似物G48A对大鼠成骨细胞增殖及碱性磷酸酶（ALP）活性的影响，免疫组织化学法检测不同处理因素对成骨细胞胰岛素样生长因子（IGF）-1蛋白表达水平的变化。结果 透射电子显微镜下，G36G、G48A和PTH组的成骨细胞形状丰满，核膜清晰，粗面内质网丰富，高尔基器发育良好，胞质内分泌颗粒增多，可见细胞核分裂相；对照组的成骨细胞胞体扁平，胞质内部分细胞器丧失，细胞核分裂相比例降低。G36G、G48A组分别在1×10^-11、1×10^-13mol／L时促进成骨细胞增殖的效应最强。PTH组的ALP活性显著高于对照组（P〈0．05）。G36G组在1×10^-13mol／L时促进ALP活性作用最强，显著高于对照组（P〈0．01）。G48A组在1×10^-15mol／L时促进ALP活性作用最强，显著高于对照组（P〈0．01）。4组间IGF-1蛋白表达水平的差异无统计学意义（P值均〉O．05）。结论 G36G及其类似物G48A在体外能够促进大鼠成骨细胞的增殖及分化。     

仙鹿健骨汤含药血清对成骨细胞增殖和ALP影响的实验研究

[目的]观察仙鹿健骨汤含药血清对大鼠成骨细胞增殖和成骨细胞ALP的影响。[方法]取12周龄Wister大鼠40只,随机分为A、B、C、D、E、F六组,每组8只,分为仙鹿健骨汤低、中、高剂量组（A、B、C组）,阳性对照组（D组）、模型组（E组）及空白对照组（F组）,制备成仙鹿健骨汤含药血清备用。成骨细胞建立采用新生SD乳鼠5只（24h内颅盖骨）进行体外细胞传代培养。观察仙鹿健骨汤含药血清对体外培养的新生SD大鼠成骨细胞增殖、分化情况。[结果]B、C、D、F组间比较无显著性差异,与E组比较细胞增殖分化与ALP影响具有显著性差异（P〈0．05或P〈0．01）。[结论]仙鹿健骨汤含药血清能促进大鼠早期成骨细胞的增殖与分化。     

熟地黄含药血清对成骨细胞及分泌胰岛样生长因子1的影响

目的：探讨熟地黄含药血清对新生SD大鼠成骨细胞（ OB）增殖及胰岛样生长因子1（ IGF-1）分泌的影响。方法：采用1日龄SD大鼠分离培养OB;熟地黄水煎剂分高、中、低3个剂量组对SD大鼠灌胃,生理盐水作为对照组,8 d后取大鼠血清加入培养,每组分别培养24、48、72 h,用MTT法、pNPP法分别检测熟地黄含药血清对OB增殖及ALP活性的影响,用ELISA法测定培养上清中IGF-1的含量。结果：与对照组比较,在24、48、72 h时间点熟地黄含药血清高、中、低剂量组OB增殖程度显著升高,且高剂量组促进增殖效果较好（ P〈0.05）;与对照组比较,熟地黄含药血清高、中、低剂量组ALP 活性显著增强,且高剂量组较高（ P〈0.05）;在48 h时间点熟地黄含药血清高、中、低浓度组IGF-1分泌量升高,且高剂量组分泌量较高（ P〈0.05）。结论：熟地黄含药血清能够促进成骨细胞的增殖与分化,同时促进成骨细胞分泌IGF-1的作用。     

依普拉芬对新生大鼠颅盖骨成骨细胞增殖和分化的影响

目的 研究依普拉芬对体外培养的原代大鼠成骨细胞增殖和分化功能的影响.方法 体外分离培养新生大鼠颅盖骨成骨细胞,将不同浓度的依普拉芬加入培养液,测定细胞增殖情况、碱性磷酸酶(ALP)活性及钙化结节.结果 与阴性对照组相比, 各浓度组的依普拉芬均可增加成骨细胞数量(P＜0.01),提高细胞的ALP活性和促进钙化结节形成(P＜0.01),其中10-8～10-5 mol/L作用更为显著.结论 依普拉芬具有促进体外培养成骨细胞增殖、分化的作用.     

IGF-Ⅰ联合BMP-2促MC 3T3-E1和NIH 3T3细胞的增殖和分化及钙化效应

目的：探讨重组人胰岛素样生长因子-Ⅰ（rhIGF—Ⅰ）和重组人骨形成蛋白-2（rhBMP-2）单独或联合应用对MC3T3-E1和NIH 3T3细胞增殖、分化和钙化的影响。方法：单独或联合应用不同浓度rhIGF—Ⅰ和rhBMP-2作用于小鼠成骨样细胞株MC3T3-E1和小鼠成纤维细胞株NIH 3T3，采用四唑盐比色法（MTT）和流式细胞技术检测细胞增殖，碱性磷酸酶（ALP）试剂盒检测细胞分化，放射免疫法检测细胞分泌的骨钙素水平（OC），以及Von kossa钙化染色法观察细胞的钙化。结果：1～50ng／ml rhIGF—Ⅰ作用于MC 3T3-E1细胞或5～75ng／ml rhIGF—Ⅰ作用于NIH 3T3细胞后，均能显示明显的促细胞增殖作用（P〈0．01），使S期细胞百分率升高、G1期细胞百分率减少，以及使胞内ALP活性、钙化面积百分比增高（P〈0．05）。10～100ng／ml rhBMP-2也可促进MC 3T3-E1和NIH 3T3细胞的增殖作用（P〈0．01），使S期细胞百分率升高、G1期细胞百分率减少，并使2种细胞ALP活性、钙化面积百分比升高（P〈0．05）。各浓度rhIGF—Ⅰ或rhBMP-2对MC 3T3-E1及NIH 3T3细胞作用8h、24h和48h的MTT检测结果相似。rhIGF—Ⅰ和rhBMP-2联合作用后，对2种细胞的促增殖、增强ALP活性、促钙化的作用均较各自单独作用更为明显（P〈0．05）。单独或联合应用不同浓度rhIGF—Ⅰ和rhBMP-2对细胞分泌的OC水平均无显著性差异（P〉0．05）。结论：rhIGF—Ⅰ和rhBMP-2具有明显的促进细胞增殖、早期分化及钙化的协同作用，但对成骨末期细胞分化影响不大，而其活性主要与使用剂量有关。     

Effects of kidney-tonifying Chinese herbal drugs on human osteoblast Ca2+ intake and mineralization in vitro]

OBJECTIVE: To study the effects of kidney-tonifying Chinese herbal drugs on Ca2+ intake and mineralization of human osteoblasts in vitro. METHODS: Human osteoblasts were isolated from the iliac trabecular bone followed by purification and culture at 37 degrees Celsius with 5% CO2. The cells were identified by cell morphology, calcium nodule formation and alkaline phosphatase (ALP) activity assay. The third passage of the cultured osteoblasts were treated with 10% scrum from rat fed with the decoction of the kidney-tonifying Chinese herbal drugs of different concentrations for 30 min, 3 d and 28 d, respectively. The cells treated with 10% rat serum without the drugs served as the control. Flow cytometry was used to observe the changes in cell proliferation and intracellular Ca2+ concentration, and von Kossa staining employed for quantification of the mineral nodules. RESULTS: The osteoblasts obtained were positive for ALP staining and could form calcium nodules in vitro. Flow cytometry showed that the drugs at different concentrations all increased Ca2+ influx, as compared with the control cells. The drugs also increased the relative proliferation index of the osteoblasts, and high concentration of the drugs resulted in greater number of the mineral nodules in the osteoblasts (P<0.05). CONCLUSION: The kidney-tonifying Chinese herbal drugs may increase Ca2+ influx and stimulate proliferation and differentiation of adult osteoblasts in vitro.     

感觉、运动神经匀浆对兔成骨细胞增殖与成骨功能的影响

目的 研究兔周同感觉、运动神经匀浆对兔骨髓间充质干细胞来源的成骨细胞增殖与成骨能力的影响.探讨周围神经影响成骨的可能原因.方法 提取大隐神经、坐骨神经肌支分别作为感觉、运动神经组织,制备匀浆.体外培养兔骨髓间充质干细胞,常规成骨诱导后鉴定备用.以含感觉、运动神经匀浆的诱导培养基、成骨诱导培养基、无地米诱导培养基及对照培养基作用于干细胞来源的成骨细胞,观察其增殖、分化及矿化情况.结果 感觉神经组较其他各组显著促进成骨细胞增殖(P<0.01),成骨诱导组及对照组抑制细胞增殖(P≤0.001);感觉神经匀浆显著促进成骨细胞总蛋白及碱性磷酸酶(ALP)的合成(P<0.05),成骨诱导组及对照组ALP蛋白比活性显著高于运动神经组及无地米组(P<0.05);感觉神经组、成骨诱导组及对照组茜素红结合量显著高于无地米组及运动神经组(P<0.001),前三组之间无显著性差异.结论 感觉神经成分能显著促进成骨细胞的增殖、分化与矿化,运动神经成分未见促成骨作用.     

雌二醇与雷洛昔芬对体外培养成骨细胞生物学功能的影响及护骨素表达的调控

OBJECTIVE: To study the effect of raloxifene and estradiol on the biological function and osteoprotegerin expression of osteoblasts in vitro. METHODS: Different doses of raloxifene and estradiol were added into the medium of the second generation osteoblasts from the shull of newborn SD rats. The proliferation, differentiation, mineralization and osteoprotegerin expression of the osteoblasts in different groups were observed. RESULTS: Raloxifene had no significant effects on stimulating the proliferation, the expression of osteoprotegerin and the formation of mineral nodes of the cultured osteoblasts (the trial vs the control, P>0.05). However, raloxifene can significantly improve the alkaline phosphatase activity of the cultured osteoblasts (the trial vs the control, P<0.05). Estradiol significantly increased the proliferation of osteoblasts, and differentiation, mineralization, expression of osteoprotegerin (P<0.01 vs the control). CONCLUSION: The effects of raloxifene and estradiol on the cultured osteoblasts are different, which implied their different mechanisms in inducing osteoporosis.     

阿托伐他汀对骨髓基质细胞增殖及向成骨细胞分化的影响

目的比较不同浓度的阿托伐他汀对小鼠骨髓基质细胞向成骨细胞分化、矿化成骨的影响。方法分别将10^-8、10^-7、10^-6mol／L的阿托伐他汀和空白药物加入传代培养的小鼠骨髓基质细胞，通过细胞形态学观察、细胞增殖率检测、碱性磷酸酶（ALP）检测和钙结节染色，比较药物在成骨细胞分化过程中对细胞增殖和分化的影响。结果阿托伐他汀可以剂量依赖性方式抑制骨髓基质细胞的增殖，10^-7mol／L组和10^-6mol／L组较明显（均P〈0．05）。阿托伐他汀可以提高骨髓基质细胞ALP活性，培养10～22d，10^-7mol／L组和10^-6mol／L组ALP活性高于对照组和10^-8mol／L组（均P〈0．05）。矿化成骨染色显示在培养26d后，10^-6mol／L组染色明显深于其它各组。结论阿托伐他汀可促进骨髓基质细胞来源的成骨细胞的分化，抑制了细胞增殖，促进骨结节钙化。     

帕米磷酸钠对成骨不全成骨细胞和成纤维细胞增殖分化的研究

目的 研究双磷酸盐类药物帕米磷酸钠对成骨不全患者原代成骨细胞和成纤维细胞增殖分化的影响.方法 实验组:成骨不全患者成骨细胞及成纤维细胞;对照组:先天性髋脱位成骨细胞及成纤维细胞,两组各取三例样本.不同浓度(10-3M～10-10M)帕米磷酸钠分别作用48h、72h.四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测药物对细胞增殖的影响;碱...     

新型生物陶瓷对体外培养成骨细胞影响的试验研究

目的 :研究新型复合生物陶瓷 (ZrO2 -CBC)对体外培养的胎鼠成骨细胞增殖分化的影响 ,探讨ZrO2 -CBC的细胞相容性 .方法 :将ZrO2 -CBC与胎鼠成骨细胞体外共同培养 15d ,通过细胞计数、ALP活性检测和流式细胞仪法评价ZrO2 -CBC对成骨细胞增殖分化的影响 .结果 :与空白对照组相比 ,实验早期ZrO2 -CBC对成骨细胞增殖分化无抑制作用 (P >0 0 5 ) ,后期轻度抑制成骨细胞的增殖 ,并抑制成骨细胞ALP的分泌 (P <0 0 5 ) .结论 :ZrO2 -CBC是一种有前途的牙科种植体材料     

葡萄糖、胰岛素对大鼠骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化的影响

目的 观察不同浓度葡萄糖及胰岛素(INs)对骨髓间充质干细胞(BMSC)向成骨细胞(OB)分化能力的影响,探讨葡萄糖及INs对骨代谢的作用机制.方法 采用体外细胞培养技术自大鼠股骨和胫骨中分离BMSC进行纯化,培养,然后在成骨培养基中诱导BMSC分化为OB,并用不同浓度的葡萄糖(5.6、25、50 mmol/L)及加或不加INs(0.6 μg/ml)干预诱导过程,光镜下观察茜素红染色分化后的OB钙结节的细胞比例.Realtime PCR测定OB的标记物碱性磷酸酶(ALP)、骨钙素(BGP)及转录因子Runx2 mRNA表达.结果 随着糖浓度升高,茜素红染色红色钙结节数目明显减少,PCR结果显示ALP,BGP及Runx2 mRNA表达也明显降低,差异有统计学意义(P<0.05).提示随着糖浓度增加成骨分化逐渐减少,在同等糖浓度下,加入INs干预组,茜素红染色阳性细胞计数明显增加,PCR结果ALP,BGP及Runx2 mRNA表达明显升高(P<0.01),提示INs可提高OB分化.结论 葡萄糖呈量效性地抑制BMSC向OB分化,这可能为糖尿病性骨质疏松形成的重要机制之一.INs可促进BMSC向OB分化,并可改善高糖对BMSC向OB分化的抑制作用.     

成纤维生长因子(FGF) 23基因沉默对甲状旁腺激素(PTH)促成骨细胞分化作用的影响

 目的  研究内源性成纤维生长因子23(fibroblast growth factor 23,FGF23)对甲状旁腺激素(parathyroid hormone,PTH)促成骨细胞分化作用的影响。方法  采用酶消化法分离培养新生SD大鼠头盖骨成骨细胞,应用小发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA)干扰技术(RNAi)沉默成骨细胞FGF23表达,应用MTT法和PNPP法检测细胞增殖和碱性磷酸酶(alkaline phosphates,ALP)活性,应用real-time RT-PCR法检测其FGF23、ALP和骨钙素(osteocalcin,OCN)等基因mRNA水平,研究PTH对培养成骨细胞和FGF23基因沉默细胞的作用。结果  rhPTH1-34对培养成骨细胞增殖促进作用明显,分化促进作用弱。1×10-10~1×10-8 mol/L rhPTH1-34 作用3天,细胞增殖率增加31.6%~50.5% (P<0.05),而细胞比活性未见明显改变。同时其ALP和OCN转录水平轻度上调,分别较对照组增加35%(P<0.05)和16%(P>0.05)。rhPTH1-34上调成骨细胞FGF23 mRNA水平(4倍),该作用可被针对FGF23特异的shRNA转染所抑制。FGF23基因沉默后PTH促分化作用明显增强,其ALP和OCN mRNA水平分别较对照组增加1.8倍(P<0.05)和5.8倍(P<0.05),显示内源性FGF23对PTH促分化的干扰作用。结论  内源性FGF23可能参与PTH促分化作用的调节,FGF23上调可干扰PTH的促成骨细胞分化作用。