体外双核细胞微核试验的应用研究

本实验用双核细胞微核试验(简称CB徽核试验)检测不同类型诱变剂对体外培养细胞微核率的影响。实验筛选了9株体外培养细胞,发现其中以BALB/c-3T3和CHL细胞的实验效果较好。丝裂霉素、硫酸镍、苯并[a]芘和香烟烟雾凝聚物等不同类型的诱变剂能直接或间接诱使细胞微核的形成。实验显示BALB/c—3T3细胞有部分代谢活化苯并[a]芘能力,CHL细胞则可能缺乏这种活性。实验还表明CB微核试验的稳定性和灵敏度都高于普通微核法,适用于检测多种类型的环境诱变剂的遗传损伤作用。     

皮肤细胞微核试验

本研究采用体内给药体外培养的方法建立了皮肤细胞微核试验技术。实验使用雄性HRA/Skh裸鼠,背部涂抹三乙烯嘧胺(Triethylemelamine,TEM),在72小时内将动物处死;剥离背部皮肤;分离单个细胞进行体外培养,在培养12-72小时引入细胞松弛素B,阻止胞浆分裂,继续培养48小时后,收获细胞,用Feulgan/Fastgreen染色,计数1000个双核细胞,记录含微核的双核细胞数,实验结果表明,给药0.5mg后,头1小时即可诱发微核,在12,24,48小时取     

多细胞系胞质分裂阻滞微核细胞组学试验法的建立与应用

目的: 采用不同组织来源的细胞系建立微核细胞组学,比较其遗传毒性生物标志物的敏感性,并研究雷公藤甲素(TPL)和甘草酸二铵(DG)对大鼠成纤维肺细胞(CHL)和犬肾小管上皮细胞系(MDCK)细胞微核率的影响。方法:首先建立方法,采用不同浓度丝裂霉素C(MMC)与CHL、L02、MDCK、Bhas42细胞作用6 h后给予细胞松弛素B(CytoB)继续培养约1.5个细胞倍增时间。收获细胞、制片、染色及镜检。计算每个剂量胞质分裂增殖指数(CBPI)、复制指数(RI)、坏死(Nec)及凋亡(Apop)细胞的千分率、双核细胞中微核(MN)、核芽(NBUD)和核质桥(NPB)出现的千分率。然后进行方法的验证,采用CHL细胞经不同浓度(1、10和100 μg/mL)DG预处理24 h后观察DG对上述细胞毒性和微核细胞组相关指标的影响。为进一步了解微核细胞组学对遗传毒性靶器官评估的效果,MDCK细胞经DG(10 μg/mL)预处理24 h后采用不同浓度(1和5 μg/mL)TPL染毒1 h,观察其对遗传毒性的影响。结果:MMC诱发的不同细胞系细胞毒性(CBPI、RI、Apop与Nec)均随MMC浓度升高呈升高趋势。各组细胞的MN、NBUD和NPB均出现不同程度的剂量相关性升高,但不同细胞系对MMC诱发的生物标志物峰值出现的敏感度不同。在验证实验中,与对照组相比,DG(10和100 μg/mL)对MMC(0.2 μg/mL)诱发的MN、NBUD和NPB升高有显著的抑制作用(P均<0.05)。TPL可诱发MDCK细胞NBUD和MN显著上升(P<0.05),且DG预处理可有效拮抗该效应(P<0.05)。结论:多细胞系胞质分裂阻滞微核细胞组学实验法可同时对多项遗传毒性指标进行评价。DG对CHL及MDCK细胞产生的染色体断裂有保护作用,在临床配伍中可发挥抗细胞DNA损伤的功效。     

胞浆分裂阻滞法研究^60Coy-线剂量率致微核效应

淋巴细胞经培养后微核的检测，作为辐射损伤短期监测染色体损伤的又1种细胞遗传学方法已有不少研究，80年代中期Fenech和Morley，首次使用细胞松驰素B(Cytochalasin B，cyt-B)建立了人淋巴细胞胞浆分裂阻滞微核测试法(Cytokinesis-block Micronucleus Method)，简称CB微核法，此法克服了常规培养微核法的不足，可获得大量易于识别的第1次分裂后的双核细胞．     

采用体外微核试验检测某电子烟液的遗传毒性

目的：根据《OECD 487化学品测试方法 体外哺乳动物细胞微核试验》进行试验，检测某电子烟液诱发体外培养的哺乳动物细胞微核形成的能力，以评价其是否属于致突变物。方法：本研究的受试物终浓度分别为1.25、2.50和5.00μL/mL。同时设立溶剂对照组和阳性对照组。试验组和对照组均设2个平行样。在有代谢活化系统(+S9)和无代谢活化系统(-S9)条件下，使培养的中国仓鼠肺细胞(CHL)暴露于电子烟液中，分别染毒4和24 h，收获细胞，低渗固定，经吖啶橙染色后，于荧光显微镜下观察。每个剂量组选2 000个双核细胞进行分析，统计各组细胞微核率。结果：电子烟液在1.25、2.50和5.00μL/mL剂量下，无代谢活化系统短时处理组(4 h,-S9)细胞微核率分别为2.50‰、1.50‰及1.50‰，有代谢活化系统短时处理组(4 h,+S9)细胞微核率分别为1.50‰、2.00‰及1.00‰，无代谢活化系统连续处理组(24 h,-S9)细胞微核率分别为1.50‰、1.00‰及1.00‰，与溶剂对照组相比差异均无统计学意义(P>0.05)。结论：在本实验条件下，该电子烟液在1.25～5μL...     

双核淋巴细胞微核细胞率检测的方法学初探

双核淋巴细胞微核细胞率检测的方法学初探高广花，徐厚恩，郝卫东北京医科大学卫生毒理教研室１０００８３胞质分裂阻断法计数双核细胞中的微核细胞率，这是一种较新的微核分析方法，本文对其检测的敏感性及表达遗传损伤的可恢复性进行了初步的研究。材料和方法１．现场及...     

培养人淋巴细胞分裂阻滞与常规微核测试法的比较研究Ⅲ.微核直…

采用未照射（对照）和体外放射线照射３个供血员的全血，检测应用细胞松弛素法（ＣＢ）与常规法，对测得的淋巴细胞微核直径和微核率作了比较。     

改良的人淋巴细胞微核试验检测非整倍体诱发剂的研究

为了快速检测非整倍体诱发剂，我们应用体外培养淋巴细胞微核检测法，根据非整倍体诱发剂与染色体断裂诱发的微核形成于不同的细胞周期来评估非整倍体诱发剂，结果表明，（１）非整倍体诱发剂ＶＣＲ与染色体断裂剂ＭＭＣ相比，在药物处理后７小时引起微核率显著上升；（２）与对照组相比，ＶＣＲ处理后５，７ｈ引起微核率显著性升高，以７ｈ的微核出率最高；而ＭＭＣ处理组在处理后各个时间的微核率与对照组相比均无显著性差异。本实     

微量快速制备的人双核淋巴细胞微核标本及在放射生物学中的应用

本文报道了利用细胞松弛素Ｂ抑制细胞质分裂诱导产生双核淋巴细胞的制备方法，该方法具有微量，快速，简便的优点，适用大范围的人群普查，具有一定的推广价值。并测试了１０名健康献血者的外周血，经不同剂量ｘ射线照射后的剂量反应曲线，其微核率照射剂量的增加而增加。     

培养人淋巴细胞分裂阻滞与常规微核测试法的比较研究Ⅲ．微核直径和微核率的检测比较

采用未照射（对照）和体外放射线照射３个供血员的全血，检测应用细胞松弛素法（ＣＢ）与常规法，对测得的淋巴细胞微核直径和微核率作了比较。结果表明：１）３．１Ｇｙ的γ－线照射，ＣＢ法微核率７．５１７％高于常规法６．１７１％（Ｐ＜０．０５）；ＣＢ法平均微核体积是常规法的１．８倍，ＤＮＡ损伤检测效率是常规法的２．２倍。２）未照射组中，ＣＢ法测的健康人自发微核率０．７６７％也高于常规法０．４９２％（Ｐ＜０．０５）；ＣＢ法平均微核体积是常规法的１．６倍，ＤＮＡ损伤检测效率是常规法的２．５倍。结合文献资料可认为，ＣＢ法在检测电离辐射的诱变性上较常规法敏感。细胞松弛素Ｂ有一定的遗传毒性，实际工作中应有选择地使用ＣＢ法。     

检测比较微核直径和微核率探讨胞质分裂阻滞微核测试法的敏感性

检测比较微核直径和微核率探讨胞质分裂阻滞微核测试法的敏感性沈宗丽，薛开先（江苏省肿瘤防治研究所南京２１０００９）胞质分裂阻滞微核测试法（ＣＢ─ＭＮＴ）具有仅在经过一次分裂的双核细胞中计数微核（ＭＮ）的优点。ＣＢ法是否较常规微核测试法更敏感，文献有不同...     

叶酸缺乏对BRCA1突变淋巴细胞株染色体损伤效应的影响

背景与目的:评价叶酸缺乏在BRCA1突变乳腺癌患者淋巴细胞株(GM13705)微核诱发效应,探询能将遗传物质损伤减少到最低程度的叶酸浓度.材料与方法:在叶酸缺乏(6～240 nmol/L)条件下离体培养GM13705细胞株,利用细胞质分裂阻断微核技术(CBMN),分析双核细胞中的微核率.结果:叶酸浓度在6 nmol/L、60nmol/L和120 nmol/L时,双核细胞微核率高于240nmol/L及常规RPMI1640组,这3个测试组间未出现双核细胞微核率的显著差异;240 nmol/L和常规RPMI1640组之间双核细胞微核率差异无统计学意义.结论:在本试验条件下,240 nmol/L的叶酸是该细胞株防范遗传损伤的最低浓度,具有BRCA1突变的基因组对叶酸缺乏的胁迫作用敏感性似乎高于正常细胞.     

正常人外周血淋巴细胞体外辐射敏感性的研究

本文利用PHA和白细胞介素2结合克隆的形成测定了人外周血新鲜淋巴细胞体外辐射敏感性。外周血淋巴细胞来自健康成年人,在体外照射x射线0～5Gy,并获得了剂量活存曲线,D-(10)值(杀伤90％细胞时所需剂量)约为3.5Gy。 另一种方法是用细胞松弛素B(CB)阻断细胞浆分裂,从体外受照淋巴细胞形成双核微核率的结果,得出双核微核形成率和受照剂量(0～3Gy)之间呈良好线性关系。     

大鼠胃粘膜上皮微核试验

为筛选遗传毒胃致癌物,我们以N-甲基-N′-硝基-N-亚硝基胍(MNNG)为模型诱变剂,发展大鼠胃粘膜微核试验。Wistar大鼠经口给以MNNG灌胃2次,间隔24h,末次染毒后24h处死。取腺胃,以1％链霉蛋白酶E于37℃消化30～45min,离心消化液收集胃粘膜细胞,制片,Giemsa染色。胃粘膜细胞收率为每鼠4.0 ×10~6细胞。在涂片上,胃粘膜细胞可分为3组:表面上皮细胞、泌酸细胞、腺颈细胞和酶原细胞。研究结果表明:MNNG可引起大鼠胃粘膜细胞微核率增加,并有剂量一效应关系。     

纺锤体毒剂和断裂剂体外诱发V79细胞多核与微核效应的差异

采用长春新碱，秋水仙素，丝裂霉素Ｃ和环磷酰２胺对Ｖ７９细胞染毒，发现两类诱变剂在诱发多核与微核的敏感性和强度上存在显著差异。当剂量较高时，四种诱变剂都可诱发多核与微核，但纺锤体毒剂以请发多核为主，多核细胞率与微核细胞率的比值为２．０－３．５．而断裂剂以诱发微核为主。     

应用蚕豆根尖细胞微核试验分析城市饮用水的致突性

本文应用蚕豆根尖细胞微核试验分析了S市饮用水的致突性。水样采自S市12个区（县）居民点末梢自来水共13份，同时以双蒸水为对照水样。结果表明，两种蚕豆根尖细胞分别经末梢自来水处理6小时后，其诱发的微核率，除3份水样的微核率接近本底值外，其余水样均有一定程度的升高。6份水样属基本无致突物污染，5份水样属污染，仅2份水样达中度污染。不同水样诱发微核率差别的原因是水质，因同一水厂供水范围内的水样，其诱发的微核率属同一污染程度。同时测定总有机碳（TOC）含量的结果也表明，微核率的高低与TOC含量高低一致。本实验提示蚕豆根尖细胞微核试验可用于即位评价环境污染。     

人胚细胞提取物拮抗环磷酰胺诱发小鼠骨髓微核的研究

本文研究了人胚细胞提取物（胚提物）对小鼠自发和环磷酰胺（ＣＰ）诱发骨髓嗜多染细胞（ＰＣＥ）微核的影响．结果表明：①胺腔注射０．３，３和３０ｍｇ／ｋｇ．体重的胚提物，小鼠骨髓ＰＣＥ微核率（ＭＮＦ）与对照组相比无显著差异．②ＣＰ可诱发ＰＣＥ的ＭＮＦ显著增加（Ｐ＜０．０１）．③注射ＣＰ和上述剂量的胚提物，可使ＭＮＦ呈剂量依赖性下降，当剂量达３和３０ｍｇ／ｋｇ．体重时，ＭＮＦ下降显著（Ｐ＜０．０５和＜０．０１）．上述结果提示；胚提物无诱发小鼠骨髓微核作用，而对ＣＰ诱发小鼠ＰＣＥ微核则有拮抗作用，这一结果在临床肿瘤化疗上有潜在的应用价值．     

叶酸对乙醇诱发的人成淋巴细胞遗传损伤的影响

目的：探讨叶酸（folic acid,FA）对乙醇（ethanol,EtOH）诱发的人成淋巴细胞遗传损伤的影响。方法：人成淋巴细胞株GM12593培养在含有不同FA浓度（20、200、2000 nmol/L）的RPMI-1640培养基中,并同时在每种FA浓度的培养体系中分别加入0.09%、0.36%和1.34%（V/V）的EtOH,8 d后用细胞松弛素B（cytochalasin B,CB）处理28 h,胞质阻断微核细胞组分析（cytokinesisblockmicronucleus cytome assay,CBMN Cyt）比较不同培养条件下的细胞遗传损伤,包括微核化双核细胞（micronucleated binucleatedcell,MNed BNC）、核芽（nuclear bud,BUD）、核质桥（nucleoplasmic bridges,NPB）的频率差异。结果：乙醇在受试细胞中诱发MNedBNC、BUD和NBP频率显著升高（P〈0.01）;2 000 nmol/L的叶酸能显著降低由乙醇诱发的MNed BNC、BUD和NBP频率（P〈0.01）。结论：乙醇对细胞遗传物质具有损伤效应,叶酸对乙醇的遗传毒性具有防护效应。     

低水平氚水诱发小鼠骨髓嗜多染红细胞微核的观察

随着核能发展及核电站运转,释放到环境中的氚越来越多。通过食物链转移,对人类影响越来越引起人们的关注。近来,国内外学者对氚的危害进行了较多的研究。如氚水诱发小鼠外周血淋巴细胞微核细胞率;胎肝中嗜多染红细胞(PCE)微核细胞率等其出现随剂量升高而升高。与~(60)Coγ射线诱发的微核细胞率作比较,测得了氚RBE值。为了进一步研究低水平氚水诱发的细胞遗传学效应,本实验选用低水平氚水,观察了小鼠骨髓中PCE微核细胞率变化,并测得氚RBE值。     

普洱茶水提取物对丝裂霉素C诱发人成淋巴细胞株遗传损伤的影响

目的：探讨普洱茶水提取物对丝裂霉素C（mitomycin C,MMC）诱发的人成淋巴细胞株遗传损伤的影响。方法：以正常人成淋巴细胞株GM12593为实验材料,设计对照组、MMC作用组和普洱茶组不同条件培养细胞株。对照组用RPMI-1640正常培养,MMC作用组培养基中MMC的终浓度为0.1μg/ml,普洱茶组培养基中除含有0.1μg/ml的MMC外,还分别加入浓度为0.125、0.25、0.5和1 mg/ml的普洱熟茶和生茶水提取物。培养24 h后加入细胞松弛素B,作用28 h后制片,计数不同培养条件下的双核细胞微核率。结果：普洱熟茶在0.125和0.25 mg/ml,普洱生茶在0.125 mg/ml时,均明显降低由MMC引起的细胞微核率（P〈0.05）;普洱熟茶降低MMC诱发的细胞微核率的作用略优于普洱生茶,但两者间的差异无统计学意义。结论：一定浓度的普洱茶能降低由MMC诱发的人成淋巴细胞株的遗传损伤。