小鼠早期胚胎质量与细胞凋亡的相关性

目的分析小鼠早期胚胎质量与细胞凋亡的关系,了解细胞凋亡调控基因在早期胚胎发育中所起的重要作用,旨在为提高胚胎质量寻找一条新途径。方法采用脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法(TUNEL)检测、天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶(Caspase)原位荧光检测和Bcl-2免疫荧光检测等凋亡检测技术,以及增殖细胞核抗原(PCNA)免疫荧光检测细胞增殖程度的技术,分别对小鼠早期形态正常的胚胎、早期发育阻滞的胚胎和有碎片的胚胎进行细胞凋亡程度和增殖程度的检测,比较其凋亡和增殖程度的差异。结果小鼠早期发育阻滞的胚胎细胞和胚胎中的碎片TUNEL阳性,Caspase活性增强,Bcl-2、PCNA表达水平降低。结论细胞凋亡与胚胎发育阻滞及胚胎中的碎片形成密切相关。     

TLI筛选猪胚胎初次卵裂时间以预测早期胚胎发育

目的 研究猪孤雌激活胚胎初次卵裂时间对早期胚胎发育潜能的影响,以筛选最优胚胎.方法 将猪卵母细胞进行体外成熟培养,孤雌激活后,胚胎采用时差成像系统(TLI)筛选,分为早期卵裂组(<24 h)、中期卵裂组(24～30 h)和晚期卵裂组(30～48 h).各组分开培养至囊胚期,统计比较各组的桑椹胚率和囊胚率,并对囊胚中凋亡相关基因Bcl-2、Bax、P53和细胞周期蛋白Cyclin B1、Cdk1、Cdk2的表达水平进行检测.结果 早期卵裂组桑葚胚率、囊胚率高于中期卵裂组(P<0.05)和晚期卵裂组(P<0.01);凋亡相关基因Bax、P53表达在早期卵裂组中显著低于中期和晚期卵裂组(P<0.01),而抗凋亡基因Bcl-2表达则显著高于中期和晚期卵裂组(P<0.01);早期卵裂组细胞周期蛋白Cyclin B1、Cdk1和Cdk2的表达显著高于中期和晚期卵裂组(P<0.05).结论 猪孤雌激活胚胎初次卵裂时间较早的胚胎具有较高的发育潜能,利用TLI确定的初次卵裂时间可作为筛选优质胚胎的重要参数.     

人类发育欠佳胚胎在卵裂期及囊胚期移植后的临床结局比较

目的 比较分析人类体外受精后的发育欠佳胚胎,行卵裂期移植或囊胚培养后,哪一种策略更有利于改善患者的临床结局.方法 患者入选标准:体外受精第3天(d3)所有胚胎均为发育欠佳胚胎(胚胎卵裂球数＜6-细胞,或胚胎碎片为10％～20％).将患者随机分为两组:卵裂期移植组(n =114)及囊胚培养组(n=106).比较两组间的临床妊娠率、继续妊娠率及植入率.结果 卵裂期移植组与囊胚培养组的移植周期临床妊娠率(38.6％ vs 24.5％)、继续妊娠率(35.1％vs 24.5％)及植入率(24.5％ vs 17.9％)差异均无统计学意义.由于囊胚培养组具有较高的周期取消率(53.8％),卵裂期移植组的取卵周期临床妊娠率显著高于囊胚培养组(38.6％vs 11.3％).结论 人类发育欠佳胚胎在卵裂期进行移植更加适合.     

辅助生殖技术中废弃胚胎继续培养的影响因素分析

目的 探讨辅助生殖技术中废弃胚胎继续培养的潜能,为今后利用废弃胚胎建立胚胎干细胞系提供参考.方法 将D1观察为无原核(0PN)、单原核(1PN)、多原核(≥3PN)和受精正常(2PN),D3评分为Ⅳ级的胚胎继续培养至囊胚期,观察囊胚形成率.比较年龄、受精方式、不同来源、D3卵裂球细胞数、D3胚胎碎片与囊胚形成率的关系.结果 共收集143个取卵周期499个废弃胚胎进行继续培养,形成囊胚105个(21.04％),优质囊胚为24个(22.86％).年龄、不同来源、D3卵裂球的奇偶性、D2卵裂球的数目各组之间差异不显著(P＞0.05);受精方式、D3卵裂球数目、胚胎碎片各组之间差异显著(P＜0.05).结论 部分废弃胚胎有继续发育成囊胚的潜能,受精方式、D3卵裂球的数目和胚胎碎片情况可能为囊胚形成的主要影响因素.     

授精第3天4～5-细胞胚胎的利用价值

目的探讨授精第3天4～5-细胞胚胎的利用价值。方法回顾性分析2017年1月至2018年12月河南省人民医院生殖医学研究所489例接受冻融移植(FET)助孕患者的资料。依据胚胎移植个数和胚胎发育情况将患者分为A组(移植1枚4～5-细胞胚胎,29例)、B组(移植2枚4～5-细胞胚胎,34例)、C组(移植1枚4～5-细胞胚胎和1枚优质卵裂期胚胎,156例)、D组(移植1枚优质卵裂期胚胎,211例)和E组(移植1枚冷冻复苏的囊胚,来源于新鲜周期4～5-细胞胚胎的体外延长培养,59例)。比较5组患者的着床率、临床妊娠率、早期流产率和分娩率。结果 E组着床率高于A组、B组、C组和D组,D组着床率高于A组和B组(均P<0.05)。E组临床妊娠率高于A组、B组和D组,C组和D组的临床妊娠率均高于A组(均P<0.05)。5组早期流产率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。E组分娩率高于A组、B组和D组,C组分娩率高于A组和D组(均P<0.05)。结论授精第3天4～5-细胞胚胎依然具有不同程度的发育潜能,是具有利用价值的。针对授精第3天4～5-细胞胚胎可以通过新鲜周期行囊胚培养、冷冻复苏获得较好的临床结局。     

人原核期胚胎形态与胚胎移植后着床的关系

目的 探讨多个原核期形态学指标与取卵后第3天胚胎着床之间的关系,验证并筛选能正确反映胚胎移植后种植潜能的原核期形态指标.方法 选取年龄均≤35岁,HCG日子宫内膜厚度均≥8 mm,且取卵后第3天进行胚胎移植后100%植入的共30个移植周期患者(植入组),同时随机选取满足上述条件的100%未植入32个移植周期患者(未植入组).根据原核期形态包括两原核是否相邻、大小、居于胞浆中的位置,核仁前体(NPB)的排列方式、大小、数目,极体是否完整,胞浆晕的有无,胞质颜色及颗粒是否正常,胞质内空泡的有无进行数据统计,比较原核期形态与胚胎种植成功与否之间的关系.结果 植入组中两原核相邻、居中、大小一致的出现率明显高于未植入组(P＜0.05),其发育而来的取卵后第3天胚胎种植率明显增高.植入组中以NPB均线性排列、数目3～7个、中等大小出现率明显高于未植入组(P＜0.05),其发育而来的取卵后第3天胚胎种植率明显增高.胞浆形态中胞浆颗粒增粗明显降低胚胎种植率(P＜0.05),其它形态如极体、胞浆颜色、胞浆晕及胞浆内空泡均不影响胚胎种植率.结论 原核期胚胎形态可以反映受精卵的质量,但与取卵后第3天胚胎质量不完全一致,在IVF临床工作中是选择移植胚胎的一项辅助指标,能预测胚胎发育潜能.     

不同时期胚胎线粒体拷贝数与胚胎自身形态学分型的关系研究

目的:探讨人类不同形态学分型的卵裂期胚胎和囊胚与自身线粒体拷贝数的关系。方法:选择在生殖中心因女性双侧输卵管梗阻行体外受精-胚胎移植（IVF-ET）助孕顺利娩出健康胎儿后,自愿丢弃冷冻的卵裂期胚胎和囊胚用于科学研究。将冷冻的胚胎解冻复苏后,依据胚胎发育的时期,将所有胚胎分为卵裂期胚胎冷冻组（D3冷冻胚胎组,n=63）和囊胚冷冻组（D5冷冻胚胎,n=82）,再根据冷冻胚胎的形态学评分标准,将冷冻卵裂期胚胎分为优质胚胎组（n=38）和较差胚胎组（n=25）,将冷冻囊胚分为优质囊胚组（n=52）和较差囊胚组（n=30）。采用实时PCR检测胚胎线粒体拷贝数,比较不同阶段胚胎和相同阶段不同质量的胚胎与自身线粒体拷贝数的差异。结果:D3冷冻胚胎组线粒体拷贝数明显低于D5冷冻胚胎组（t=9.34,P<0.02）,D3冷冻胚组中优质胚胎mtDNA拷贝数高于质量较差胚胎组（t=6.62,P<0.01）,D5冷冻胚组中优质胚胎mt DNA拷贝数明显高于质量较差胚胎组（t=8.03,P<0.04）。结论:不同时期胚胎mt DNA拷贝数对胚胎的发育潜能有重要影响,mtDNA拷贝数越高,胚胎质量越好。     

两种不同培养体系对卵母细胞体外受精及胚胎体外发育的影响

目的　挑选出一种较为理想的体外受精(IVF)培养体系。方法　90例(91个周期)接受IVF/单精子胞浆内注射(ICSI)技术治疗的患者,卵母细胞的IVF及胚胎的体外培养分别采用GⅢ体系(A组, 51周期, )和Quinn体系(B组,40周期)。结果　A组和B组分别获得683枚和652枚卵母细胞,IVF后,受精率分别为63 .25% ( 432 /683 )及66 41%(433 /652),无显著性差异(P>0. 05)。体外培养24h后,A组414枚受精卵发生卵裂,卵裂率为95. 83% ( 414 /432 );B组397枚受精卵发生卵裂,卵裂率为91 69% (397 /433) ,无显著性差异(P>0 .05)。继续培养,行第3天胚胎移植,A、B两组分别获得优质胚胎220及140枚(53. 14%和35. 26% )。最终,A组共有26例获得临床妊娠,B组15例获得临床妊娠,妊娠率为50. 98%和37. 5%,两者之间有显著性差异(P<0 .05)。另外,B组中受精率、卵裂率、优质胚胎率及临床妊娠率方面,IVF周期与ICSI周期之间无显著性差异(P>0. 05),而A组中优质胚胎率及临床妊娠率方面,有显著性差异(48. 97%和63 .11%, 45 .71%和56 25%,P<0 05),受精率和卵裂率方面两周期之间无显著性差异(P>0. 05 )。结论　Quinn系列似乎有助于卵母细胞的体外受精,而GⅢ体系更有利于胚胎的早期发育及后期的着床方面。对于GⅢ系列采取ICSI授精方式似乎更能提高试管婴儿的     

受精第3天胚胎卵裂速度和囊胚发育潜能的关系

目的 探讨受精第3天胚胎卵裂速度是否可以预测囊胚发育潜能及辅助生殖临床结局.方法 回顾性分析2016年1月1日至2018年12月31日于我中心行体外受精/卵胞质内单精子注射-胚胎移植(IVF/ICSI-ET)治疗的150例不孕症患者的临床资料及所有366枚新鲜囊胚移植的胚胎数据.根据受精第3天卵裂球的细胞数目将胚胎分为慢发育组(细胞数目≤6个,n=78)、正常发育组(细胞数目7～9个,n=230)和快发育组(细胞数目≥10个,n=58).分析比较3组的囊胚形成率、优质囊胚形成率、胚胎种植率、临床妊娠率及活产率.结果 慢发育组、正常发育组和快发育组囊胚形成率分别为7.7％(6/78)、55.7％(128/230)和29.3％(17/58),其中正常发育组的囊胚形成率最高,与其他两组比较差异均有统计学意义(P均<0.01);3组优质囊胚形成率分别为0(0/6)、7.0％(9/128)和11.8％(2/17),其中快发育组最高,与正常发育组比较差异有统计学意义(P<0.05);胚胎种植率分别为0(0/18)、50.6％(80/158)和63.3％(19/30),其中快发育组最高,与正常发育组比较差异有统计学意义(P<0.05).正常发育组临床妊娠率为53.7％(58/108)、活产率为41.4％(24/58);快发育组临床妊娠率为63.0％(17/27),活产率为47.1％(8/17);正常发育组与快发育组临床妊娠率和活产率比较差异均有统计学意义(P均<0.05).结论 受精第3天细胞数目7～9的卵裂胚囊胚形成率最高,细胞数目≥10的卵裂胚优质囊胚形成率、胚胎种植率、临床妊娠率及活产率较高,提示快速发育的胚胎有正常的发育潜能.     

hCG注射后到授精时间间隔大于42小时对胚胎质量影响研究

目的：探讨体外受精胚胎移植中hCG注射后授精时间间隔超过42 h对胚胎质量的影响。方法：将进行常规体外受精-胚胎移植519个周期的5493枚卵子分为两组,A组hCG注射后授精时间间隔大于42 h授精,B组hCG注射后授精时间间隔小于40 h授精,均于受精后16~18 h左右去除卵丘细胞观察授精的情况,分别统计并比较两组的受精率、卵裂率、优质胚胎率和可利用胚胎率。结果：两组的受精率、卵裂率、优质胚胎率、可利用胚胎率比较差异无统计学意义（P〉0.05）。结论：IVF-ET中取卵后在超过最佳授精时间授精并不影响胚胎的质量。     

零污染空气净化对体外受精-胚胎移植妊娠结局的影响

目的 探索零污染空气净化系统对体外受精-胚胎移植(IVF-ET)妊娠结局的影响.方法 分别利用独立样本t检验比较我院生殖中心在应用零污染空气净化系统前(A组:尘埃及细菌滤过空气净化系统)及后(B组:零污染空气净化系统)两组周期不同年龄段(≥35岁和<35岁)的正常受精率、受精率、卵裂率、优胚率、临床妊娠率和早期流产率差异.结果 对于年龄<35岁的IVF-ET患者,应用零污染空气净化系统前后两组不孕年限、平均获卵数、优质卵数和移植胚胎数比较差异均无统计学意义(P>0.05),但实验组优胚率和卵裂率明显提高,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05);显著提高临床妊娠率,降低早期流产率.对于年龄≥35岁的IVF-ET患者,应用零污染空气净化系统前后两组不孕年限、平均获卵数、优质卵数、正常胚胎和移植胚胎数差异均无统计学意义(P>0.05),但实验组优胚率和卵裂率明显提高,与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05);显著提高临床妊娠率,降低早期流产率.结论 实验室和手术室使用零污染空气净化系统能明显改善IVF-ET胚胎发育潜能,提高临床妊娠率,有效降低早期流产率.     

胚胎早裂联合胚胎发育速度及形态评分在胚胎选择中的应用

目的 探讨胚胎早裂联合胚胎发育速度及形态评分对于体外授精/卵母细胞单精子显微注射(IVF/ICSI)周期中胚胎选择的意义.方法 IVF/ICSI 610周期,随机分为A、B两组.A组(269周期)单以授精后72 h(D3)胚胎发育速度及形态评分选择胚胎;B组(341周期)在此基础上联合胚胎早裂情况进行胚胎选择.比较两组的临床妊娠率和单胚着床率;比较B组移植胚胎中有早裂胚胎和无早裂胚胎者的妊娠结局.结果 B组临床妊娠率和单胚着床率均高于A组(P<0.05);B组移植胚胎中有早裂胚胎者的临床妊娠率和单胚着床率均高于无早裂胚胎者(P<0.01).结论 与单纯的胚胎发育速度及形态评分比较,胚胎早裂联合胚胎发育速度及形态评分进行胚胎评价可显著改善IVF/ICSI的临床结局.     

胚胎早裂联合胚胎发育速度及形态评分在胚胎选择中的应用

目的探讨胚胎早裂联合胚胎发育速度及形态评分对于体外授精／卵母细胞单精子显微注射（IVF／ICSI）周期中胚胎选择的意义。方法IVF／ICSI610周期,随机分为A、B两组。A组（269周期）单以授精后72h（D3）胚胎发育速度及形态评分选择胚胎;B组（341周期）在此基础上联合胚胎早裂情况进行胚胎选择。比较两组的临床妊娠率和单胚着床率;比较B组移植胚胎中有早裂胚胎和无早裂胚胎者的妊娠结局。结果B组临床妊娠率和单胚着床率均高于A组（P〈0．05）;B组移植胚胎中有早裂胚胎者的临床妊娠率和单胚着床率均高于无早裂胚胎者（P〈0．01）。结论与单纯的胚胎发育速度及形态评分比较,胚胎早裂联合胚胎发育速度及形态评分进行胚胎评价可显著改善IVF／ICSI的临床结局。     

Relationship between Pronuclear Scoring and Embryo Quality and Implantation Potential in IVF-ET

To assess the relationship between pronuclear scoring and day-3 embryo quality and pregnancy outcome and to determine the Clinical value of pronuclear stage scoring system in human in vitro fertilization-embryo transfer （IVF-ET） program, a pronuclear scoring system was used to score zygotes 16-20 h after insemination during conventional IVF or intracytoplasmic sperm injection （ICSI）. The embryos were classified into groups Z1, Z2, Z3 and Z4, Comparisons were made of the rates of arrested embryos and excellent embryos on day 3. Comparisons of pregnancy outcome were made only in those patients in whom cohorts of similarly Z-scored embryos were transferred, The results showed that there were less arrested embryos and more excellent embryos on day 3 in groups Z1 and Z2 than those in group Z3 and Z4, More embryos arrested and less excellent embryos developed in group Z4 than group Z3. The clinical pregnancy rates resulting from the transfer of single pronuclear score homologous embryo types were similar among groups Z1, Z2 and Z3. Implantation rates of group Z1 were higher （P〈0.05） than that of group Z3, These findings suggests that pronuclear scoring can predict developmental ability on day 3 and implantation potential. A evaluation that combines the Z-score and day 3 embryo morphology is useful in the determination of the most viable embryos and the number of embryos for transfer.     

Co-culture of early embryo with human decidual stromal cellsin vitro by improvement of early embryo development

Summary An early embryo co-culture system with human decidual stromal cells was established to study its effect on early embryonic cleavage and growth in vitro. Three hundred and eight 2-cell mouse embryos were co-cultured with human decidual stromal cell monolayer in MEM + 0.4 % bovine serum albumin (BSA) and 163 embryos cultured in MEM + 15 % FCS alone as control. Among the mouse 2-cell embryos co-cultured with human decidual stromal cells, 72.73 % developed to the morula stage and 67.21 % cavitated to blastocysts with 59.74 % hatching, as compared with 61.34 % to morula stage, 48.47 % to blastocysts and none hatching in the controls, respectively. Co-cultured embryos cleaved slightly faster than controls and showed no or less fragmentation than those in the control. These results suggested that human decidual stromal cells can support early embryonic development and yield a reasonable number of embryos with good quality up to blastocyst stage.     

早期原核分裂对于胚胎发育潜能预测的研究

目的通过比较移植早期原核与晚期原核分裂胚胎的临床妊娠率和种植率,探讨早期原核分裂与胚胎发育潜能之间的关系。方法回顾性分析05年11月至07年1月在生殖医学中心行体外受精胚胎移植的妇女240例,通过移植不同时期的原核分裂胚胎将其分为早期原核分裂组（143例）,晚期原核分裂组（47例）和混合组（50例）,比较三组的妊娠率和种植率。结果早期原核分裂组的受精率和早卵裂率分别为80．39％和54．16％,而晚期原核分裂组的受精率和早卵裂率分别为71．01％和8．99％,差异具有统计学意义（P〈0．001）。早裂组的妊娠率（47．55％）高于晚裂组的妊娠率（38．30％）,差异具有统计学意义（P〈0．001）。种植率前者为29．72％,高于后者（22．99％）,差异无统计学意义（P〉0．05）。结论早期原核分裂有更好的妊娠结局,能够预测胚胎发育潜能,评价早期原核分裂是筛选高质量胚胎的一种简单有效、非侵袭性方法。     

Co-Culture of Early Embryo with Human Decidual Stromal Cells in vitro by Improvement of Early Embryo Development

The quality of the in vitro culture conditionsfor human pre--implantation embryos is one of themost critical aspects of successful in vitro fertilization and embryo transfer (IVF--ET) and other biology techniques, such as embryo clone, geneknock--out, pre--implantation genetic diagnosis etc.The culture of pre--im:7lantation mammalian embryos can take place in a range of embryo culturemedia, ranging from simple chemically defined media to more complex media. In vitro pre--implantation embryo …     

利用废弃胚胎行人原核移植方法的初步建立

 【目的】 探索利用废弃胚胎进行人原核移植的方案?【方法】 收集废弃多原核受精卵117个?用显微操作-电融合的方法构建原核移植重构胚胎?分别比较钙离子浓度0.05 mmol/L(n=39)和0.1 mmol/L(n=58)的两种电融合液以及电压分别为1 800 V/cm(n=58)和2 000 V/cm(n=20)的两种电场条件对重构合子融合率和发育的影响?【结果】 操作成功率70.1%,融合成功率59.8%,得到43个卵裂胚胎,其中23个(53.5%)6细胞以上胚胎?共14个重构胚发育至8细胞或以上,得到3个囊胚?将电压由2 000 V/cm下降到1 800 V/cm,重构胚胎融合率?卵裂率和囊胚率的差异没有统计学意义(P > 0.05),但6-细胞率明显上升(22.2% vs. 60.9%, P < 0.05)?和钙离子浓度为0.05 mmol/L的融合液比较,0.1 mmol/L的融合液融合率明显上升(39.3% vs. 69.0%,P < 0.05),卵裂率?6-细胞率和囊胚率皆无统计学差异(P > 0.05)?【结论】 通过显微操作-电融合的方法,用废弃胚胎重构人核-质异质的胚胎模型,是可行的?经济的?