探针熔解曲线法联合交叉引物扩增技术快速检测耐药肺结核的研究

目的评价PCR熔解曲线法联合交叉引物扩增技术(CPA)快速检测耐药肺结核的临床价值。方法 2018年1月-2019年5月济宁市传染病医院结核门诊初诊疑似肺结核患者310例,采集痰标本,涂片,做萋苨氏染色、CPA检测、分枝杆菌BACTEC-MGIT 960快速分离培养及熔解曲线耐药检测,对培养阳性菌株进行菌型鉴定和比例法药敏试验。结果 310例患者痰标本涂片检查分枝杆菌阳性61例,阳性率19.7%(61/310),敏感度和特异度分别为62.2%和95.6%;痰培养分枝杆菌阳性141例,阳性率45.5%(141/310)。菌型鉴定为结核分枝杆菌(MTB)感染132例,非结核分枝杆菌(NTM)感染9例;CPA检测阳性148例,阳性率47.7%,方法的敏感度和特异度分别为94.2%和90.1%。以比例法药敏试验为金标准对132例患者的MTB分离菌株或CPA检测为阳性的痰标本进行探针熔解曲线耐药检测,RFP、INH、EMB、SM等4种抗结核药物检测的敏感度分别为96.82%、92.06%、86.79%和83.93%,特异度分别为95.65%、94.20%、78.48%和80.26%,诊断率分别为96.21%、93.18%、81.81%和81.81%。结论 PCR熔解曲线法和CPA检测技术操作简单、稳定、快速,特异度和敏感度较高,可提高MTB的检出率,两种方法联合使用可快速筛查患者MTB的耐药性。     

1085份痰和支气管肺泡灌洗液标本结核杆菌培养结果的对比分析

目的评价痰和支气管肺泡灌洗液(BALF)两种标本的结核杆菌培养(TB培养)的检测结果在肺结核诊断中的临床价值。方法回顾分析南京市胸科医院2016年5月到2017年4月收治的1085例住院患者标本,其中肺结核组1000例,非肺结核组85例,收集所有患者的痰和BALF标本TB培养的检测结果,比较两种不同标本培养的灵敏度差异和性能指标。结果 (1)痰和BALF的结核分枝杆菌培养灵敏度分别为35.70%和36.30%,诊断效率分别为40.74%、41.29%,肺结核组两种标本TB培养结果比较差异无统计学意义(P0.01)。(2)两种标本联合检测在肺结核诊断中的灵敏度为45.10%,诊断效率为49.40%,与痰和BALF分别检测相比,差异均有统计学意义(P0.01)。结论痰和BALF两种标本的结核分枝杆菌培养在肺结核的诊断上没有差异,两种标本联合检测能更有效的提高肺结核诊断率。     

交叉引物恒温扩增检测技术在疑似肺结核患者临床诊断中的价值

目的 评估交叉引物恒温扩增(cross priming amplification, CPA)检测技术在肺结核早期临床诊断中的应用价值。 方法 以2016年1—10月广东省佛山市和江门市及所辖7个县(区)级结核病防治机构(简称“结防机构”)就诊的初诊疑似肺结核患者为研究对象,共纳入患者6507例;所有患者均进行了胸部影像学检查并送检痰标本进行涂片镜检、固体培养和CPA检测,培养阳性菌株进行菌种鉴定,项目点临床医生结合实验室和临床检查结果对纳入患者进行初诊诊断,国家级临床专家对初诊临床诊断结果进行现场复核。分析项目地区确诊活动性肺结核患者中病原学阳性患者所占比例,并与专家复核后的临床诊断结果进行比较,分析涂片镜检、固体培养和CPA诊断肺结核的敏感度及特异度。 结果 6507例疑似肺结核患者中,涂片镜检、固体培养和CPA检测阳性率分别为18.2%(1187/6507)、25.0%(1629/6507)和23.9%(1555/6507)。3199例临床确诊为活动性肺结核患者中,涂片联合培养阳性检出率为48.5%(1550/3199),涂片联合CPA阳性检出率为47.9%(1531/3199),涂片、培养和CPA三种方法联合检测阳性率为54.4%(1740/3199)。以临床诊断结果为标准,涂片镜检、固体培养和CPA检测诊断活动性肺结核的敏感度分别为35.0%(1120/3199)、46.4%(1485/3199)和44.6%(1428/3199),特异度分别为98.0%(3241/3308)、95.7%(3164/3308)和96.2%(3181/3308)。 结论 县(区)级结防机构可应用CPA检测技术用于疑似肺结核患者的快速诊断,多种诊断技术联合应用可显著提高活动性肺结核患者的病原学诊断阳性率。     

液基夹层杯技术检测抗酸杆菌应用性研究

目的评价液基夹层杯技术检测抗酸杆菌的应用价值。方法收集1 190例肺结核可疑症状者的642份晨痰标本和1 140份即时痰标本,每份痰标本均采用液基夹层杯技术、直接涂片查找抗酸杆菌技术和罗氏结核分枝杆菌培养技术进行检测,比较直涂法、液基法与培养法对痰标本的阳性检出率,并在以培养法为金标准的前提下考察液基法、直涂法的灵敏度和特异度,同时评价晨痰和即时痰、1次痰和2次痰对肺结核涂阳病人发现的差异。结果液基法、直涂法和培养法对642份晨痰标本的阳性检出率分别为23.5%、12.7%和26.6%,对1 140份即时痰的阳性检出率分别为18.1%、9.6%和23.3%。以培养法作为金标准,液基法的灵敏度和特异度分别为68.9%和95.8%,并与直涂法相对应的指标差异有统计学意义(P0.05)。液基法检测表明:642份晨痰阳性检出率显著高于1 140份即时痰阳性检出率(P0.05)。结论液基法能够提高痰标本的灵敏度,特异度较高,操作标准化,且所需设备简单,便于基层开展,是一种可能具有推广价值的检测方法。     

免疫学检测联合痰涂片和痰培养检测在活动性肺结核临床诊断中的价值

目的 分析结核感染T细胞斑点试验(T-SPOT.TB)、结核抗体、痰涂片与痰培养联合检测在活动性肺结核诊断中的临床意义。方法 收集2014年1月至2019年12月北京结核病控制研究所门诊收治的疑似活动性肺结核患者715例,最终诊断为活动性肺结核患者412例(肺结核组),非结核病患者303例(非结核组)。715例患者均行T-SPOT.TB检测、结核抗体检测及痰涂片、痰培养检查;以临床诊断结果为标准,分析4种方法单独及联合检测的临床意义。结果 肺结核组患者中,T-SPOT.TB阳性检出率为83.7%(345/412);非结核组患者中,T-SPOT.TB阳性检出率为20.8%(63/303);两组阳性检出率差异有统计学意义(χ²=2.823,P=0.000)。T-SPOT.TB对活动性肺结核检测的敏感度、特异度、阳性预测值、阴性预测值和准确度分别为83.7%(345/412)、79.2%(240/303)、84.6%(345/408)、78.2%(240/307)、81.8%[(345+240)/715];4种方法联合诊断的敏感度、特异度、阳性预测值、阴性预测值和准确度分别为93.7%(386/412)、50.8%(154/303)、72.1%(386/535)、85.6%(154/180)、75.5%[(386+154)/715]。T-SPOT.TB检测、结核抗体检测及痰涂片、痰培养检查的ROC曲线下面积(AUC)分别为0.815、0.575、0.593、0.715,四项联合检测的AUC为0.894。结论 T-SPOT.TB检测的敏感度、阴性预测值较好,T-SPOT.TB检测联合结核抗体、痰涂片和痰培养检测的敏感度、AUC较高,联合检测可提高对肺结核的诊断效能。     

结核杆菌RNA、结核杆菌DNA及γ-干扰素释放试验联合检测对菌阴性肺结核的诊断价值

目的 探讨结核杆菌RNA(TB-RNA),结核杆菌DNA (TB-DNA)及r干扰素释放试验(IGRA)联合检测对菌阴性肺结核的诊断价值.方法 选择自2011年1月至2015年12月河北省胸科医院住院或门诊期间疑诊为肺结核的212例患者,根据痰涂片或痰培养结果分为初治菌阴性肺结核组(n =94)和初治菌阳性肺结核组(n=72)及非结核疾病组(n=46),分别行TB-RNA、TB-DNA、IGRA检测,对各检测结果进行对比,并行TB-RNA、TB-DNA、IGRA联合检测结果与单用检测对比分析.结果 ①单项检测中TB-RNA、TB-DNA、IGRA对初治菌阳对照组的敏感度分别为56.9％,65.3％,81.9％;特异度分别为97.8％,95.8％,97.8％;②单项检测对菌阴肺结核的检出率相应为:50.0％,54.3％,77.7％;③联合检测对菌阴肺结核的检出率为88％,均明显高于单项检测.结论 TB-RNA、TB-DNA、IGRA联合检测提高了菌阴肺结核的检出率.     

应用磁纳米捕获-PCR技术检测痰液结核分枝杆菌的研究

目的采用磁纳米捕获技术富集痰液中的结核分枝杆菌,以提高PCR检测的灵敏度,快速诊断结核病。方法以普通PCR为对照,采用磁纳米捕获技术富集187份结核和非结核呼吸系统疾病患者痰标本中的结核分枝杆菌,进行PCR检测。结果 152份肺结核患者痰标本41份(27.0%)涂片抗酸染色阳性,72份(47.4%)普通PCR检测阳性,126份(82.9%)磁纳米捕获-PCR检测阳性。35份非结核呼吸系统疾病患者,痰标本中抗酸染色均为阴性,1份普通PCR和磁纳米捕获-PCR检测均阳性,该患者临床诊断肺部感染合并陈旧性肺结核。结论采用磁纳米捕获技术富集痰液中的结核分枝杆菌,可显著提高PCR检测的灵敏度。     

荧光PCR诊断肺结核的临床应用研究

目的对荧光PCR(FQ-PCR)、痰涂片、结核抗体血清学试验及痰培养在肺结核诊断上进行方法学评价。方法 FQ-PCR、痰涂片及痰培养四种方法对结核组(124例)及非结核组(119例)进行检测,对四种方法进行方法学评价。结果结核组中荧光PCR、痰涂片、痰培养、血清学试验四种方法检出率分别为58.9%、30.6%、47.5%及66.1%,差异有统计学意义(P0.01),其中以血清学试验及荧光PCR检出率较高;在非结核组中,荧光PCR、痰涂片、痰培养三种方法均未检测出阳性结果,血清学试验检测出12例阳性;四种方法的方法学评价:灵敏度、约登指数、符合率、阴性预测值以荧光PCR、血清学试验较高,特异度、阳性预测值荧光PCR、痰涂片、痰培养均为100%,综合各项指标以荧光PCR方法较好。结论荧光PCR具有较高的灵敏度、特异度,快速、简单,在肺结核的诊断上具有较大的优势,适合在临床推广应用。     

痰结核分枝杆菌DNA检测诊断肺结核的临床意义

目的评估痰结核分枝杆菌DNA检测诊断肺结核的可行性及临床意义。方法回顾性分析2016年5月—12月在我科住院的经痰结核分枝杆菌培养确诊的136例肺结核患者的临床资料,比较痰涂片找抗酸杆菌和痰结核分枝杆菌DNA检测2种方法的检出率。结果 136例确诊的肺结核患者中,痰涂片阳性的有64例(47.06%),痰结核分枝杆菌DNA检测阳性的88例(64.71%),痰结核分枝杆菌DNA检测阳性率明显高于痰涂片找抗酸杆菌(P0.05)。72例痰涂片阴性患者中痰结核分枝杆菌DNA检测阳性29例,占痰涂片阴性肺结核患者比例的40.28%。结论痰结核分枝杆菌DNA检测优于痰涂片找抗酸杆菌,能够辅助涂阳肺结核的诊断,并提高涂阴肺结核的诊断水平,是一种快速、敏感的病原学诊断方法。     

交叉引物恒温扩增技术在初诊疑似肺结核患者诊断中的应用价值

目的: 评价交叉引物恒温扩增(cross-priming amplification,CPA)技术在初诊疑似肺结核患者诊断中的应用价值。方法: 选取2020年1月至2021年5月深圳市龙华区慢性病防治中心就诊的初诊疑似肺结核患者2408例作为研究对象。收集患者痰液标本分别采用萋-尼抗酸染色(acid-fast stain,AFS)法、BACTEC MGIT 960(简称“MGIT 960”)液体培养法及CPA技术对治疗前痰液标本进行结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)检测,以MGIT 960液体培养法为参照标准,评价CPA诊断效能。结果: AFS法、MGIT 960液体培养法及CPA技术MTB阳性检出率分别为8.89%(214/2408)、27.99%(674/2408)及15.49%(373/2408),不同方法检测阳性率比较差异有统计学意义(χ²=314.619,P=0.000),其中MGIT 960液体培养法明显高于CPA技术和AFS法,而CPA技术高于AFS法,差异均有统计学意义(χ²=110.572、 292.158、 49.046,P值均=0.000)。以MGIT 960液体培养结果为参照标准,CPA检测MTB的敏感度、特异度、阳性预测值、阴性预测值及符合率分别为52.37%(353/674)、98.85%(1714/1734)、94.64%(353/373)、84.23%(1714/2035)及85.84%(2067/2408),而AFS法分别为31.45%(212/674)、99.88%(1732/1734)、99.07%(212/214)、78.94%(1732/2194)及80.73%(1944/2408),其中CPA技术的敏感度[52.37%(95%CI:47.21%~59.64%)]明显高于AFS法[31.45%(95%CI:26.87%~35.72%)],差异有统计学意义(χ²=108.290, P=0.000)。CPA技术与MGIT 960液体培养法检测结果一致性较好(Kappa=0.592),而与AFS法一致性较差(Kappa=0.395)。涂阳培阴率为0.08%(2/2408),培养污染率为5.40%(130/2408),而CPA检测无效例数为0。结论: 初诊疑似肺结核分枝杆菌感染CPA技术阳性检出率和敏感度明显高于AFS法,且一致性好于AFS法,同时操作简单、快速、经济及无污染,对肺结核早期诊断具有应用价值。     

二代测序技术检测临床痰标本中结核分枝杆菌的初步评价CSCD

目的:评价二代测序(NGS)技术对临床痰标本中结核分枝杆菌的检测效能。方法:采用前瞻性研究方法,选取北京市疾病预防控制中心(北京结核病控制研究与防治所)2021年8—10月接诊的49例疑似肺结核患者痰标本,同时进行抗酸杆菌涂片镜检(简称“涂片”)、分枝杆菌培养(包含罗氏培养和MGIT 960液体培养;简称“培养”)、GeneXpert MTB/RIF(简称“Xpert”)和NGS技术检测结核分枝杆菌,比较4种方法检测不同分类患者阳性率差异,并以最终临床诊断为参照标准,评价4种检测方法的检测效能。结果:49例疑似肺结核患者中,最终肺结核诊断者40例(包括病原学确诊患者25例、病原学阴性临床诊断患者15例),非肺结核患者9例(包括肺炎6例,非结核分枝杆菌感染、慢性阻塞性肺疾病和哮喘各1例)。NGS技术检测49例疑似肺结核患者的阳性率[69.4%(34/49)]明显高于涂片[44.9%(22/49)]、培养[51.0%(25/49)]和Xpert[49.0%(24/49)],差异均有统计学意义(χ^(2)=17.614、17.018、20.753,P值均=0.000);检测病原学阴性肺结核患者的阳性检出率为46.7%(7/15)。以临床诊断结果为参照标准,涂片、培养、Xpert、NGS技术对49例疑似患者痰标本的检测敏感度分别为55.0%(22/40)、60.0%(24/40)、60.0%(24/40)、80.0%(32/40),特异度分别为9/9、8/9、9/9、7/9,一致率分别为63.3%(31/49)、65.3%(32/49)、67.3%(33/49)、79.6%(39/49),Kappa值分别为0.310、0.297、0.355、0.459。结论:以临床诊断为参考标准,NGS技术检测的敏感度最高,与临床诊断的一致性也最高,能够快速、高效检测痰标本中的结核分枝杆菌,可早期辅助诊断疑似肺结核患者。     

液基夹层杯技术用于基层实验室结核病诊断的可行性研究

目的 评价液基夹层杯法在基层实验室用于结核病诊断的可行性及安全性。 方法 在泰兴、江阴CDC两个县级结核病实验室,对385例疑似肺结核患者的754份痰标本同时采用液基夹层杯法与直接痰涂片法进行镜检,结合临床诊断,比较2种方法的阳性检出率。采用四格表Fisher确切概率法进行比较,并进一步比较两种方法对不同性状、不同时间收集的痰标本的阳性率。选取12份阳性痰标本,设定不同的痰消化液比例,不同的消化时间,加热与否处理痰标本,将处理后的消化液接种到罗氏培养基,37℃培养,通过比较生长情况评价液基法的安全性。 结果 液基夹层杯法、直接痰涂片法对754份痰标本的阳性检出率分别为23.5%(177/754)、16.8%(127/754),检测结果差异有统计学意义（χ²=48.02,P=0.000）;比较不同性状、不同时间采集的痰标本采用两种方法的检测结果,得出脓痰直涂法阳性检出率为40.9%（81/198）,液基法阳性检出率为47.5%（94/198）,两种方法对于脓痰的检测结果差异有统计学意义（Fisher确切概率法,P_确切概率＜0.001）;非脓性痰（包括血痰、黏液痰、口水痰）直涂法阳性检出率为4.7%（9/193）,液基法阳性检出率为13.5%(26/193),差异有统计学意义（P_确切概率值均＜0.001）。安全性试验发现经消化液处理的痰标本,培养8周后未见结核分枝杆菌生长。 结论 液基夹层杯法提高了疑似肺结核患者细菌学检查的阳性检出率,且操作简单、安全性高,适合在基层实验室应用并便于开展质量控制,是一种很有推广价值的检测方法。     

二代测序技术检测临床痰标本中结核分枝杆菌的初步评价

目的 评价二代测序(NGS)技术对临床痰标本中结核分枝杆菌的检测效能。方法采用前瞻性研究方法,选取北京市疾病预防控制中心(北京结核病控制研究与防治所)2021年8—10月接诊的49例疑似肺结核患者痰标本,同时进行抗酸杆菌涂片镜检(简称“涂片”)、分枝杆菌培养(包含罗氏培养和MGIT 960液体培养;简称“培养”)、GeneXpert MTB/RIF(简称“Xpert”)和NGS技术检测结核分枝杆菌,比较4种方法检测不同分类患者阳性率差异,并以最终临床诊断为参照标准,评价4种检测方法的检测效能。结果49例疑似肺结核患者中,最终肺结核诊断者40例(包括病原学确诊患者25例、病原学阴性临床诊断患者15例),非肺结核患者9例(包括肺炎6例,非结核分枝杆菌感染、慢性阻塞性肺疾病和哮喘各1例)。NGS技术检测49例疑似肺结核患者的阳性率[69.4%(34/49)]明显高于涂片[44.9%(22/49)]、培养[51.0%(25/49)]和Xpert[49.0%(24/49)],差异均有统计学意义(χ²=17.614、17.018、20.753,P值均=0.000);检测病原学阴性肺结核患者的阳性检出率为46.7%(7/15)。 以临床诊断结果为参照标准,涂片、培养、Xpert、NGS技术对49例疑似患者痰标本的检测敏感度分别为55.0%(22/40)、60.0%(24/40)、60.0%(24/40)、80.0%(32/40),特异度分别为9/9、8/9、9/9、7/9,一致率分别为63.3%(31/49)、65.3%(32/49)、67.3%(33/49)、79.6%(39/49),Kappa值分别为0.310、0.297、0.355、0.459。结论以临床诊断为参考标准,NGS技术检测的敏感度最高,与临床诊断的一致性也最高,能够快速、高效检测痰标本中的结核分枝杆菌,可早期辅助诊断疑似肺结核患者。     

荧光定量PCR测定支气管肺泡灌洗液中TbDNA对涂阴肺结核的诊断价值

目的探讨纤支镜肺泡灌洗液中结核分枝杆菌DNA在涂阴肺结核诊断中的价值。方法应用荧光定量聚合酶链反应（FQ-PCR）技术对300例涂阴肺结核,178例菌阳肺结核及119例肺炎或肺癌患者的纤支镜肺泡灌洗液标本进行结核分枝杆菌DNA检测。结果3种病因肺泡灌洗液结核分枝杆菌DNA阳性检出率分别为：74.3%（223/300）、94.9%（169/178）、17.6%（21/119）。结论荧光定量聚合酶链反应检测肺泡灌洗液结核分枝杆菌DNA,用于肺结核诊断可提高肺结核诊断的敏感性和准确性,明显优于痰抗酸染色,亦较痰结核菌培养诊断灵敏、快速,可作为肺结核诊断较可靠指标。     

实时荧光核酸恒温扩增技术在肺结核诊断中的价值分析

目的评价实时荧光核酸恒温扩增技术(SAT-TB)在肺结核诊断中的价值。方法纳入1121例非相同患者痰标本,其中26例为非结核分枝杆菌。570例肺结核为观察组,525例其他肺部疾病患者为对照组。对治疗前的痰标本分别进行抗酸杆菌涂片、培养及鉴定和SAT法检测。阳性检出率的比较使用卡方检验。结果临床诊断肺结核570例,痰培养结核菌阳性率46.5%(265/570),SAT法检测阳性率46.7%(266/570),痰涂片阳性率34.4%(196/570),SAT与涂片法阳性率的差异有统计学意义(χ2=17.83,P0.01)。在涂阴肺结核中,SAT阳性率达19.5%。以培养阳性作为金标准,SAT法诊断结核病的灵敏度为89.4%,特异度96.3%,阳性似然比为24.2,阴性似然比为0.11,一致率是94.6%,阳性预测值是88.4%,阴性预测值为96.6%。在非结核分枝杆菌肺病中SAT检测阳性率为零。结论 SAT-TB法在肺结核的早期诊断中是一种快速、准确、敏感的方法,值得推广。     

四种结核分枝杆菌检测方法的临床应用评价

目的评估涂片、培养、PCR和增菌PCR检测结核分枝杆菌临床应用价值。方法对124例临床确诊的肺结核、可疑结核患者和非结核病人痰标本的涂片、培养、PCR和增菌PCR四种方法的检测结果进行比较。结果涂片、培养、PCR和4及7d的增菌PCR检测31例临床确诊的肺结核病人痰标本阳性率分别为22.5%、32.2%、54.8%、64.5%和87.1%;检测59例临床可疑肺结核病人痰标本阳性率分别为13.6%、18.6%、28.8%、37.3%和52.5%。比较四种方法的阳性检测率有显著性差异(P<0.05)。检测34例非结核病人痰标本,涂片、培养均为阴性,而PCR和增菌PCR均有1例假阳性,假阳性率2.9%。比较PCR与增菌PCR对菌阳和菌阴病人的痰标本阳性检测率,有显著性差异(P<0.05),而两种方法的假阳性率相同。结论增菌PCR检测结核分枝杆菌具有很高的敏感性和特异性,可作为结核病的有效辅助诊断方法之一。     

结核分枝杆菌聚合酶螺旋反应检测方法的建立及效果评价

目的 建立聚合酶螺旋反应(polymerase spiral reaction,PSR)检测结核分枝杆菌的方法并评价效果。方法 针对结核分枝杆菌插入序列IS6110设计引物进行PSR检测。提取结核分枝杆菌基因组DNA,加入Bst DNA聚合酶的RM2×反应液中,在荧光定量PCR仪上于63℃反应45min,通过荧光信号进行检测。通过对引物序列进行优化,筛选出最佳引物序列,并对其检测特异性和最低检出限进行评估。于2019年5—8月间从郑州市第六人民医院连续收集200例肺结核患者痰液样本(同一患者收集3份),对痰标本进行痰涂片、固体痰培养和PSR检测。以痰培养结果为参照,评价PSR对结核病患者的检测效能。结果 通过引物序列优化,筛选出一套对结核分枝杆菌检测的PSR引物,使用该引物进行PSR的最低检出限可达到10³菌落形成单位(CFU)/ml;检测特异性实验表明该方法与15株非结核分枝杆菌无交叉反应。200例肺结核患者中,痰涂片检测阳性48例,阳性检出率为24.0%(48/200);痰培养检测阳性83例,阳性检出率为41.5%(83/200);PSR方法检测阳性87例,阳性检出率为43.5%(87/200)。以痰培养结果为标准,PSR检测结核病的敏感度和特异度分别为96.4%(80/83)、94.0%(110/117),阳性预测值为92.0%(80/87),阴性预测值为97.3%(110/113),与痰培养检测方法基本一致(Kappa值为0.898)。结论 PSR检测适用于结核分枝杆菌的快速筛查。     

Establishment and effect evaluation of polymerase spiral reaction for detection of Mycobacterium tuberculosis

目的 建立聚合酶螺旋反应(polymerase spiral reaction,PSR)检测结核分枝杆菌的方法并评价效果。方法 针对结核分枝杆菌插入序列IS6110设计引物进行PSR检测。提取结核分枝杆菌基因组DNA,加入Bst DNA聚合酶的RM2×反应液中,在荧光定量PCR仪上于63℃反应45min,通过荧光信号进行检测。通过对引物序列进行优化,筛选出最佳引物序列,并对其检测特异性和最低检出限进行评估。于2019年5—8月间从郑州市第六人民医院连续收集200例肺结核患者痰液样本(同一患者收集3份),对痰标本进行痰涂片、固体痰培养和PSR检测。以痰培养结果为参照,评价PSR对结核病患者的检测效能。结果 通过引物序列优化,筛选出一套对结核分枝杆菌检测的PSR引物,使用该引物进行PSR的最低检出限可达到10³菌落形成单位(CFU)/ml;检测特异性实验表明该方法与15株非结核分枝杆菌无交叉反应。200例肺结核患者中,痰涂片检测阳性48例,阳性检出率为24.0%(48/200);痰培养检测阳性83例,阳性检出率为41.5%(83/200);PSR方法检测阳性87例,阳性检出率为43.5%(87/200)。以痰培养结果为标准,PSR检测结核病的敏感度和特异度分别为96.4%(80/83)、94.0%(110/117),阳性预测值为92.0%(80/87),阴性预测值为97.3%(110/113),与痰培养检测方法基本一致(Kappa值为0.898)。结论 PSR检测适用于结核分枝杆菌的快速筛查。     

新型分子检测技术在基层实验室诊断肺结核的效能分析

目的 分析与比较GeneXpert MTB/RIF(简称“GeneXpert”)与交叉引物核酸恒温扩增(cross-priming amplification,CPA)技术在基层实验室结核病快速诊断中的效能。 方法 连续收集黑龙江省五常市结核病防治所2014年4月至2017年7月初诊肺结核可疑患者的痰标本,分别进行改良罗氏固体培养基培养法(简称“固体培养法”)与快速分子检测 (A组采用GeneXpert检测了787例;B组采用CPA检测了501例)。以固体培养法为标准,计算2种分子检测技术的敏感度、特异度、Kappa值。结果 A组共检测787例患者痰标本,其中培养阳性229例,GeneXpert阳性300例,GeneXpert检测的敏感度、特异度分别为99.1%(227/229)、86.9%(485/558),Kappa=0.788。B组共检测501例患者痰标本,其中培养阳性129例,CPA检测阳性125例。CPA检测的敏感度、特异度分别为81.4%(105/129)、94.6%(352/372),Kappa=0.768。2种分子检测技术与固体培养法检测结果的一致率比较,差异无统计学意义[90.5%(712/787)vs 91.2%(457/501); χ ²=0.204, P=0.652)]。结论 CPA检测的准确性与GeneXpert相当,但其成本低、无需检测仪器、允许每批次大量样本同时操作,更适用于基层实验室对肺结核患者的早期诊断。     

SAT技术与荧光定量PCR在痰涂片阴性肺结核诊断中的价值研究

目的通过采用RNA恒温扩增实时检测技术(SAT-TB)与荧光定量PCR(FQ-PCR)两种不同类型的方法检测痰涂片阴性肺结核患者的肺泡灌洗液(BALF)标本,探讨两种检测方法的临床价值。方法采集2015年3月-2017年3月本院收治的疑似肺结核,且至少3次痰涂片结果为阴性的患者共1050例,其中531例肺结核为观察组,519例其他肺部疾病患者为对照组。以临床诊断为金标准,计算SAT-TB、FQ-PCR、结核分枝杆菌快速培养、抗酸杆菌染色等检测方式的各类评价指标,并进行比较。结果菌阴肺结核肺泡灌洗液抗酸杆菌染色、结核分枝杆菌快速培养、SAT-TB、FQ-PCR单独检测与SAT-TB联合FQ-PCR检测单阳、双阳的准确性分别为12. 99%、21. 28%、56. 69%、54. 24%、62. 52%、42. 37%,SAT-TB、FQ-PCR与SAT-TB联合FQ-PCR检测的诊断价值均具有统计学意义(P 0. 05);对痰涂片阴性的肺结核患者的肺泡灌洗液(BALF)诊断有价值,单阳 SAT-TB FQ-PCR双阳结核分枝杆菌快速培养抗酸杆菌染色。结论与细菌学检测方法比较,SAT-TB、FQ-PCR检测具有快速、敏感等优势,能显著缩短确诊时间,提高诊断的准确率,给痰涂阴性肺结核患者提供了有效的诊断手段和依据,值得临床推广应用。