腺病毒介导TGF-β1对肾癌细胞增殖及凋亡的相关作用机制

目的研究腺病毒介导转化生长因子-β1(TGF-β1)对肾癌细胞增殖、凋亡的相关作用机制。方法将肾癌786-0细胞进行培养、传代,分为未转染组和转染组,转染组以腺病毒为载体对TGF-β1进行转染,未转染组不转染。对两组细胞TGF-β1表达、增殖率、凋亡率、Wnt/β-catenin通路蛋白表达量进行检测;采用荧光定量聚合酶链式反应(RT-PCR)技术对TGF-β1表达进行检测;采用四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)对肾癌细胞的增殖能力进行检测,按照肿瘤细胞增殖率计算公式,增殖率=(细胞组OD值/参照值-1)×100%,对两组肾癌细胞增殖率进行计算;使用流式细胞仪对两组肾癌细胞凋亡进行检测,利用发光信号测量仪对光子数值进行检测。结果与未转染组相比,转染组β-catenin(0.15±0.01)、Axin2(0.21±0.03)、GSK-3β(0.11±0.02)蛋白表达量及增殖降低,凋亡升高,具有统计学差异(P0.05)。结论 TGF-β1能够抑制肾癌细胞增殖并诱导其凋亡,其作用机制可能与下调Wnt/β-catenin通路蛋白表达量有关。     

过氧化物还原酶4蛋白对小鼠卵巢颗粒细胞凋亡的影响及机制

目的:探讨过氧化物还原酶4(Prdx4)蛋白对小鼠卵巢颗粒细胞凋亡的影响及相关机制.方法:免疫荧光明确Prdx4在人卵巢颗粒细胞(KGN)中的定位;利用Prdx4小干扰RNA(siRNA)转染小鼠卵巢颗粒细胞,以空白组作为对照,蛋白质印迹法检测Prdx4表达水平以验证干扰效果,并检测2组颗粒细胞凋亡相关因子[B细胞淋巴...     

NRF2通过抑制ROS诱导的自噬减轻卵巢颗粒细胞损伤

通过研究核因子E2相关因子2(nuclear factor erythroid-2 related factor 2, NRF2)对卵巢颗粒细胞的作用及可能机制, 为预防卵巢早衰提供依据。本文为细胞实验研究设计, 于2022年1—12月在湖南师范大学附属长沙市妇幼保健院的医学实验中心完成。通过4-乙烯基环己烯二环氧(VCD)处理人卵巢颗粒细胞KGN细胞构建颗粒细胞损伤模型。先以不同浓度的VCD处理KGN细胞, 采用细胞计数试剂(CCK-8)检测卵巢细胞增殖情况。CCK8确定半抑制(IC50)后, 采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测细胞上清中雌二醇和孕酮的含量, 活性氧(ROS)检测试剂盒检测卵巢细胞中ROS的含量, 实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测NRF2的mRNA表达水平, 免疫印迹检测NRF2的蛋白表达水平。进一步通过慢病毒转染构建NRF2干扰(siNRF2)和过表达(NRF2-OE)细胞模型, 通过检测激素水平、氧化应激指标(ROS、SOD、GSH-Px)和自噬情况(LC3B水平)以分析调控NRF2对VCD处理细胞模型的影响。结果显示, VCD干预后以时间依赖...     

丙型肝炎病毒基因1b型F蛋白对人肝细胞癌细胞株凋亡的影响

目的 研究丙型肝炎病毒(HCV)基因1b型F蛋白对人肝细胞癌细胞株HepG2凋亡的影响.方法 构建真核表达重组质粒pcDNA3.0-F-EGFP,并利用Lipofectamine 2000转染人肝细胞癌细胞系HepG2,同时设pcDNA3.0-C-EGFP-HepG2阳性对照、pcDNA3.0-HcpG2为阴性对照及未转染HepG2为空白对照,以Act-D、TNFα诱导四组细胞系发生凋亡,Annexin V-FITC/PI双染检测肿瘤细胞凋亡率,并使用细胞凋亡DNALadder检测,进一步验证HCV 1b型F蛋白在肝细胞凋亡的生物学功能效应.结果 pcDNA3.0-F-EGFP-HepG2细胞系在发生凋亡的时间上比peDNA3.0-C-EGFP-HepG2快,但相对空白质粒转染组及未转染HepG2细胞系有明显延迟,凋亡的发生率也明显低于阴性对照及空白对照细胞系(P<0.001).结论 外源性基因HCV 1b型F的引入及表达,对HepG2细胞的凋亡有抑制作用.     

17β-雌二醇对卵巢颗粒细胞增殖转移的影响及作用机制

目的探究17β-雌二醇(17β-E_2)对卵巢颗粒细胞增殖、转移的影响及其作用机制。方法体外培养卵巢颗粒细胞系—KGN细胞,采用MTT法检测17β-E_2对KGN细胞增殖的影响;划痕实验检测17β-E_2单独或和G蛋白偶联雌激素受体1(GPER1)特异性拮抗剂—G15共同处理对KGN细胞转移的影响;分别于17β-E_2单独或和G15共同处理KGN细胞0 min、10 min、30 min及60 min后收集细胞,采用Western Blot法检测细胞ERK1/2的磷酸化水平。结果 MTT结果显示,17β-E_2对KGN细胞增殖无显著影响;划痕实验结果表明,17β-E_2单独处理能够显著抑制KGN细胞的转移,而联合G15处理对细胞转移则无显著影响;Western Blot结果显示,17β-E_2单独处理细胞10 min、30 min及60 min后,细胞ERK1/2磷酸化水平均显著降低;而17β-E_2和G15共同处理细胞不同时间后,细胞ERK1/2磷酸化水平相比于处理前无显著性变化。结论 17β-E_2能够显著抑制KGN细胞的转移,其机制与GPER1介导的雌激素非基因组效应有关。     

GRIM-19对子宫颈癌细胞株HeLa细胞Survivin基因表达的影响

目的:探讨稳定转染GRIM-19对子宫颈癌细胞株HeLa细胞凋亡抑制基因Survivin的表达以及细胞增殖的影响。方法:采用脂质体转染法将GRIM-19重组质粒转染子宫颈癌细胞株HeLa细胞,建立稳定表达GRIM-19的HeLa细胞株,采用RT-PCR检测HeLa细胞转染GRIM-19后mRNA水平表达情况,采用WesternBlot检测稳定转染后GRIM-19与Survivin的表达情况,应用细胞计数法观察各组细胞增殖水平。结果:建立稳定的GRIM-19基因表达的HeLa细胞株,命名为HeLa/G19细胞,对照组细胞命名为HeLa/Con细胞。RT-PCR检测显示GRIM-19mRNA表达明显增加,WesternBlot检测显示GRIM-19的蛋白表达显著升高、Survivin蛋白的表达水平显著降低。细胞计数法实验显示HeLa/GRIM-19细胞增殖较HeLa/Con细胞明显减慢(P<0.05)。结论:GRIM-19可以抑制子宫颈癌细胞Survivin的表达,阻滞细胞的生长,可能是子宫颈癌治疗的新靶点。     

活性氧在转化生长因子-β1促肺成纤维细胞增殖和胶原合成中的作用

目的 探讨转化生长因子(TGF-β1)是否可通过活性氧(ROS)激活c-Jun末端激酶(JNK)通路,刺激肺成纤维细胞增殖和Ⅰ/Ⅲ型胶原合成增加,促进矽肺纤维化形成.方法 在检测TGF-β1对肺成纤维细胞作用的实验中,肺成纤维细胞分为对照组(0.4％血清)和TGF-β1组(5μg/L).在检测抗氧化剂NAC(N-乙酰-L-半胱氨酸)是否抑制了TGF-β1对肺成纤维细胞作用的实验中,肺成纤维细胞分为对照组(0.4％血清)、H2O2组(0.1mmol/L,阳性对照)、H2O2+NAC组(10 mmol/L)、TGF-β1组(5μg/L)、TGF-β1+NAC组.利用MTT法测定细胞增殖,蛋白免疫印迹法(western blot)测定Ⅰ/Ⅲ型胶原及JNK表达,免疫荧光法检测8-羟化脱氧鸟苷(8-OHdG,一种DNA氧化产物)水平.结果 在检测TGF-β1对肺成纤维细胞作用的实验中,与对照组比较,TGF-β1组肺成纤维细胞增殖增强、Ⅰ/Ⅲ型胶原、JNK磷酸化及8-OHdG水平增高,差异有统计学意义(P＜0.05).在检测NAC是否抑制了TGF-β1对肺成纤维细胞作用的实验中,与对照组比较,H2O2组和TGF-β1组细胞增殖的吸光度值,Ⅰ/Ⅲ型胶原及JNR磷酸化、8-OHdG水平均增高,但与H2O2组和TGF-β1组比较,H2O2+NAC组和TGF-β1+NAC组的吸光度值,Ⅰ/Ⅲ型胶原及JNR磷酸化、8-OHdG水平均表达下降,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 TGF-β1可诱导肺成纤维细胞生成ROS,并由此促进JNK磷酸化,最终引起肺成纤维细胞增殖和Ⅰ/Ⅲ型胶原合成的增多,减少ROS,可有效抑制TGF-β1的作用.     

自噬基因Beclin1过表达诱导人卵巢癌细胞SKOV3自噬和凋亡的研究

目的:探讨自噬基因Beclin 1在人卵巢癌SKOV3细胞中过表达对其体外生长活性的影响。方法:构建自噬基因Beclin 1的真核表达载体pcDNA3.1/Beclin1,将其稳定转染SKOV3细胞,实现Beclin 1在SKOV3中的过表达;用MTT法分析Beclin1过表达对SKOV3增殖的影响,用流式细胞仪检测凋亡和自噬情况,电镜和荧光显微镜下观察自噬现象。结果:pcD-NA3.1/Beclin1转染SKOV3细胞后Beclin 1在mRNA和蛋白水平均高于空质粒pcDNA3.1转染组和未转染组。Beclin 1在SKOV3中的稳定过表达后G1期细胞明显增多,S期细胞比例明显减少,细胞增殖受到抑制,凋亡率为(21.26±3.89)%,高于空质粒pcDNA3.1转染组和未转染组,差异有统计学意义(P<0.05);流式细胞仪检测pcDNA3.1/Beclin1转染SKOV3细胞后MDC标记的自噬囊泡平均荧光强度高于pcDNA3.1转染组和未转染组。pcDNA3.1/Beclin1转染SKOV3细胞后在电镜下可见大量自噬囊泡形成。在荧光显微镜下见pcDNA3.1/Beclin1转染后SKOV3细胞中MDC标记的自噬囊泡明显增加。结论:自噬基因Beclin1过表达可诱导人卵巢癌细胞SKOV3自噬和凋亡,针对自噬基因Beclin1的卵巢癌基因治疗可能具有可行性。     

芹黄素对肾癌A498细胞凋亡及HIF-1α/NF-κB信号通路的影响

目的探讨芹黄素对肾癌A498细胞凋亡及缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)/核因子κB(NF-κB)信号通路的影响。方法体外培养人肾癌A498细胞, 分为不同浓度芹黄素(10、20、40 μmol/L)组、芹黄素(40 μmol/L)+HIF-1α激动剂二甲基二酰氨基乙酸(DMOG)组、HIF-1α抑制剂利非西呱(YC-1)组、对照组。采用CCK-8法和平板克隆形成实验检测细胞增殖, Hoechst 33258染色和流式细胞术检测细胞凋亡, Western blot实验检测凋亡蛋白及HIF-1α/NF-κB通路蛋白表达。结果芹黄素显著抑制A498细胞增殖, 且抑制作用呈浓度依赖性(P<0.001)。与对照组比较, 10、20、40 μmol/L芹黄素组和YC-1组A498细胞凋亡率[(4.35±1.04)% vs (10.06±1.13)%、(18.52±2.58)%、(32.17±2.63)%、(26.94±2.41)%]、B淋巴细胞瘤-2相关蛋白(Bax)和切割型半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶-3(Cleaved Caspase-3)蛋白表达量均显著升高, B淋巴细胞瘤2(Bcl-...     

潜伏活性的人可溶性TNFⅠ型受体融合蛋白真核表达载体的构建及表达

目的:采用基因工程技术,将转化生长因子β前体相关蛋白(LAP)通过基质金属蛋白酶(MMP)水解部位与人可溶性TNFⅠ型受体(hsTNFRⅠ)连接,构建pcDNA3.1/LAP-MMP-hsTNFRⅠ融合蛋白真核表达载体,获得LAP-MMP-hsTNFRⅠ融合蛋白。方法:将编码MMP水解部位氨基酸的正反义DNA序列退火形成互补双链后定向克隆插入真核表达载体pcDNA3.1( ),得到pcDNA3.1/MMP重组体;将TGF-β1的LAP段和hsTNFRⅠ与MMP水解部位连接,获得pcDNA3.1/LAP-MMP-hsTNFRⅠ真核表达载体。测序鉴定后,脂质体介导重组质粒转染COS-7细胞,通过RT-PCR检测融合基因的表达。结果:酶切及测序结果证实pcDNA3.1/LAP-MMP-hsTNFRⅠ重组载体构建成功,转染后RT-PCR结果表明重组质粒在COS-7细胞中得到有效表达。结论:成功构建了融合蛋白真核表达载体pcDNA3.1/LAP-MMP-hsTNFRⅠ,并获得融合基因的瞬时表达,为进一步研究融合蛋白在子宫内膜异位症中的靶向治疗奠定了实验基础。     

Effect of TIMP1 Gene in Proliferation of Human Colon Carcinoma Cells

目的 采用体外试验探讨基质金属蛋白酶抑制剂1(TIMP1)基因对人结肠癌(HCT-8)细胞增殖的影响.方法 构建TIMP1基因的真核表达载体和RNA干扰质粒(pcDNA3.1-TIMP1-K、TIMP1 RNAi、pcDNA3.1和空白对照),将TIMP1基因真核表达质粒和RNA干扰质粒分别瞬时转染入HCT-8细胞48～72h后,采用Real TimePCR方法检测TIMP1基因在HCT-8细胞中基因转录表达水平,并用Western blot方法检测TIMP1基因在HCT-8细胞中蛋白表达水平,采用MTr试验检测TIMP1基因过表达和干扰后对HCT-8细胞增殖的影响.结果 成功构建了TIMP1真核表达质粒和RNA干扰质粒.与空白对照比较,质粒pcDNA3.1-TIMP1-K在HCT-8细胞中mRNA和蛋白的相对表达含量较高,质粒TIMP1 RNAi的mRNA和蛋白表达含量较低,差异均有统计学意义(P＜0.05).构建过表达质粒(pcDNA3.1-TIMP1-K)转染HCT-8细胞后,与空白对照相比,第1～4天HCT-8细胞的活性无显著变化(P＞0.05),第5～7天TIMP1基因过表达能够促进HCT-8细胞的增殖活性(P＜0.05);构建干扰质粒(TIMP1 RNAi)转染HCT-8细胞后,与空白对照相比,第1～4天HCT-8细胞生长无显著变化(P＞0.05),第5～7天TIMP1基因过表达能够抑制HCT-8细胞增殖(P＜0.05).结论 TIMP1基因过表达后能够促进人结肠癌细胞的增殖,在一定条件下还能够抑制人结肠癌细胞的增殖.     

邻苯二甲酸二丁酯对大鼠卵巢颗粒细胞中细胞凋亡因子Bcl-2、Bax表达的影响

目的研究邻苯二甲酸二丁酯(dibutyl phthalate,DBP)对大鼠卵巢颗粒细胞中细胞凋亡因子Bcl-2、Bax表达的影响。方法体外培养25 d雌性SD大鼠卵巢颗粒细胞,分别加入DBP使终浓度分别(0、5、20、80μmol/L),培养24 h。采用放射免疫方法测定雌二醇(estradiol,E2)和孕酮(progestone,P)的水平;采用实时荧光定量PCR(real-time PCR)和免疫印迹试验(Western blot)检测卵巢颗粒细胞中Bcl-2、Bax mRNA和蛋白的表达。结果 DBP染毒后颗粒细胞分泌的E2及P水平下降,各剂量DBP均可降低颗粒细胞中Bcl-2 mRNA和蛋白的表达(P0.05),且表达量与DBP剂量呈反比,同时,DBP可以增加颗粒细胞中Bax mRNA和蛋白的表达(P0.05),且表达量与DBP剂量呈正比。结论 DBP可导致大鼠卵巢颗粒细胞凋亡,且Bcl-2/Bax比例失调可能是导致其凋亡的机制。     

苦参素对特发性肺纤维化患者血清基质金属蛋白酶9和转化生长因子β1的影响

目的 观察并分析血清基质金属蛋白酶9(MMP-9)、转化生长因子β1(TGF-β1)在特发性肺纤维化(IPF)病理过程中的作用,探讨苦参素对IPF的治疗价值.方法 选取38例健康体检者为对照组,38例IPF患者为患者组.按随机数字表法将患者组分为常规治疗组(19例)和苦参素组(19例).采用酶联免疫吸附试验法测定血清MMP-9、TGF-β1水平并比较.结果 对照组与患者组治疗前血清MMP-9水平分别为(92.30±27.21)、(420.66±101.78)μg/L,两组比较差异有统计学意义(P＜0.05).对照组与患者组治疗前血清TGF-β1水平分别为(67.36±13.03)、(217.82±43.90)μg/L,两组比较差异有统计学意义(P＜0.05).常规治疗组与苦参素组治疗前血清MMP-9、TGF-β1水平比较差异无统计学意义(P＞0.05);常规治疗组治疗后血清MMP-9水平显著下降,与治疗前比较差异有统计学意义[(138.91±35.09) μg/L比(428.21±102.75)μg/L](P＜ 0.05),苦参素组治疗后血清MMP-9水平与治疗前比较差异无统计学意义(P＞0.05);常规治疗组与苦参素组治疗后血清TGF-β1水平均显著下降,与治疗前比较差异有统计学意义[(145.42±30.78) μg/L比(200.34±58.96) μg/L;(102.37 ±26.04) μg/L比(219.78±63.20)μg/L](P＜ 0.05);常规治疗组与苦参素组治疗后血清MMP-9、TGF-β1水平比较差异有统计学意义(P＜0.05).结论 苦参素在有效降低IPF患者血清中较高水平的TGF-β1的同时,还可以维持MMP-9在含量较高的状态,对IPF有显著治疗作用.     

姜黄素对人甲状腺癌TPC-1细胞增殖、周期和凋亡的影响

目的探讨姜黄素对人甲状腺癌TPC-1细胞增殖、周期和凋亡的影响。方法取对数生长期TPC-1细胞, 加入0.0、7.5、15.0、22.5 μmol/L姜黄素培养48 h, 采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法测定细胞增殖水平;流式细胞仪测定细胞周期和凋亡水平;蛋白质印迹(Western blot)法测定B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)和Bcl-2相关X蛋白(Bax)的表达水平。结果 7.5、15.0、22.5 μmol/L姜黄素组细胞增殖抑制率均高于0.0 μmol/L姜黄素组(均P < 0.05);G0/G1期比例均高于0.0 μmol/L姜黄素组, 而G2/M和S期比例均低于0.0 μmol/L姜黄素组(均P < 0.05);细胞凋亡率均高于0.0 μmol/L姜黄素组[(14.13 ± 0.57)%、(25.27 ± 0.62)%、(36.01 ± 0.84)%比(8.48 ± 0.43)%, 均P < 0.05];Bcl-2蛋白表达水平均低于0.0 μmol/L姜黄素组, 而Bax蛋白表达水平均高于0.0 μmol/L姜黄素组(均P < 0.05)。结论姜黄...     

整合素α_vβ_6在卵巢上皮性肿瘤中的表达及生物学意义

目的　探讨整合素αvβ6mRNA和蛋白在卵巢上皮性肿瘤组织中的表达及与临床病理特征和预后的关系。　方法　应用半定量逆转录聚合酶链反应技术 (RT PCR)和免疫组织化学 (SP)法 ,对 5例正常卵巢组织 ,10例卵巢良性上皮性肿瘤 ,35例卵巢恶性上皮性癌 ,(其中 11例卵巢恶性上皮性癌同时取转移病灶组织 ) ,行整合素αvβ6mRNA及蛋白的定量和定位分析。　结果　整合素αvβ6基因及蛋白在正常及良性卵巢上皮肿瘤组织中不表达 ,而在恶性上皮性卵巢癌组织中出现表达 ;Ⅲ、Ⅳ期恶性上皮性卵巢癌中αvβ6mRNA表达量为 (0 735± 0 115 ) μg/ml,显著高于Ⅰ、Ⅱ期(0 5 34± 0 0 6 2 ) μg/ml;蛋白强阳性染色Ⅲ、Ⅳ期占 77 8% (2 1/ 2 7) ,显著高于Ⅰ、Ⅱ期 37 5 %(3/ 8) ,差异有显著性 (P <0 0 5 ) ;病情有进展患者 ,αvβ6mRNA表达量为 (0 72 6± 0 12 1) μg/ml,显著高于病情无进展患者 (0 5 6 5± 0 0 98) μg/ml;病情有进展患者蛋白强阳性染色占 94 7% (18/19) ,而病情无进展者仅占 37 5 % (6 / 16 ) ,差异有显著性 (P <0 0 5 )。原发病灶和转移病灶整合素αvβ6mRNA表达量分别为 (0 74 2± 0 0 19) μg/ml和 (0 75 1± 0 0 93) μg/ml;蛋白强阳性染色分别为4 5 5 % (5 / 11)和 5 4 5 % (6 / 11)     

miR-29a-3p靶向 SGMS2调控PCOS卵巢颗粒细胞慢性炎症的机制研究

目的探究miR-29a-3p/SGMS2轴对人类卵巢颗粒样肿瘤细胞系(human ovarian granulosa-like tumor cell line, KGN)炎症反应的调控机制。方法通过构建并验证过表达和敲低miR-29a-3p及SGMS2转染KGN细胞模型, 双荧光素酶报告基因实验检测 miR-29a-3p与SGMS2的结合;MTT法检测各组细胞的增殖;免疫荧光法观察增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen, PCNA)和Ki67蛋白荧光强度;流式细胞术检测细胞凋亡;酶联免疫吸附法检测细胞上清液中肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α, TNF-α)、白介素(interleukin, IL)-6、IL-1β和鞘磷脂的表达;Western blotting检测细胞中Caspase-3、cleaved-Caspase-3、SGMS2和p-p65蛋白表达。结果 miR-29a-3p与SGMS2之间存在位点结合, 且能够负向调控SGMS2的表达水平。KGN细胞中过表达SGMS2能够增高其吸光度值(P=0.007...     

Notch1基因沉默对滋养细胞增殖与凋亡的影响

目的:探讨Notch1基因沉默后对滋养细胞增殖与凋亡生物学功能的影响。方法:构建Notch1蛋白基因干扰质粒,体外培养人早孕期胎盘绒毛膜外滋养细胞系HTR-8/SVneo细胞进行转染。应用实时荧光PCR计数检测转染后Notch1 mRNA相对表达水平,CCK-8检测细胞转染后活性情况,Western blotting检测Bcl-2凋亡蛋白家族表达情况。结果:同未转染组相比,空白质粒转染组与基因沉默组mRNA相对表达水平分别为0.97±0.03、0.31±0.10,基因沉默组mRNA表达与其它两组差异有统计学意义(P<0.05)。Notch1基因沉默组同空白质粒转染组相比细胞活性明显下降(P<0.05),同时Notch1基因沉默组抗凋亡蛋白Bcl-2表达较空白质粒转染组明显降低(P<0.05),而促凋亡蛋白Bax表达明显增加(P<0.05)。结论:Notch1基因可通过调节Bcl-2凋亡蛋白家族参与滋养细胞增殖与凋亡过程,是胎盘形成发展过程中的正向调节因子。     

Endo G基因过表达对镉诱导HEK-293细胞凋亡影响

目的 观察细胞凋亡因子核酸内切酶G( endonuclease G,Endo G)基因过表达在镉诱导人胚胎肾细胞HEK-293凋亡中的影响.方法 从人肝癌细胞系(human hepatocarcinoma cells,HepG 2)中提取RNA,经逆转录获取互补DNA cDNA),通过聚合酶链反应(PCR)扩增Endo G基因,与pcDNA 3.0相连,构建pcDNA 3.0-Endo G真核表达载体,转染HEK-293细胞,并结合不同浓度氯化镉处理细胞;通过蛋白印迹实验(Western blot)验证基因过表达,吖啶橙/溴乙锭(AO/EB)双染法及流式细胞术(FCM)检测Endo G基因过表达对镉诱导HEK-293细胞凋亡的影响,噻唑蓝法(MTT)检测细胞存活率.结果 成功构建pcDNA 3.0-EndoG真核表达载体,Endo G基因扩增片段大小约1 100 bp;该载体转染细胞后,Endo G成功过表达,使HEK-293细胞凋亡率＞37％,且随氯化镉浓度增加,Endo G表达量先上升后下降.结论 Endo G以诱导细胞早期凋亡和晚期凋亡为主要形式.     

邻苯二甲酸单乙基己基酯抑制人卵巢黄素化颗粒细胞激素合成机制的研究

目的：研究邻苯二甲酸单乙基己基酯[Mono-（2-ethylhexyl）phthalate,MEHP]抑制人卵巢黄素化颗粒细胞激素合成的机制。方法：选取在北京大学人民医院行体外受精-胚胎移植的患者6例,分别收集卵泡液,提取颗粒细胞进行原代体外培养72 h后,分别加入MEHP 25,300,500 μmol/L,并于之后48 h通过实时聚合酶链反应（real-time PCR）检测胆固醇侧链裂解酶（CYP11A1）、过氧化物酶体激活受体γ（peroxisome proliferator-activated receptor,PPAR-γ）、芳香化酶基因（CYP19A1）、3β-羟基类固醇脱氢酶（3β-HSD）的表达。结果：MEHP为300及500 μmol/L时CYP19A1的表达均明显降低（P＜0.05）;500 μmol/L的MEHP可使CYP11A1表达明显降低（P＜0.05）;当MEHP为500 μmol/L时3β-HSD的表达明显降低（P＜0.05）;当MEHP达到300,500 μmol/L时,PPAR-γ的表达明显增加（P＜0.05）。结论：MEHP不仅能降低雌激素合成关键酶CYP19A1的合成,也抑制了孕激素合成关键酶CYP11A1及3β-HSD的合成。此外,MEHP能促进PPAR-γ的生成。     

邻苯二甲酸二乙基己酯在体外对大鼠卵巢颗粒细胞凋亡Caspase通路的影响

目的通过对原代培养的大鼠卵巢颗粒细胞进行邻苯二甲酸二乙基己酯(di-2-ethylhexylphthalate,DEHP)染毒,探讨DEHP在体外对大鼠卵巢颗粒细胞凋亡通路Caspase-3和Caspase-9基因表达以及细胞凋亡的影响。方法分离和培养原代未成熟大鼠的卵巢颗粒细胞,用不同浓度的DEHP(0、10、50、100 nmol/L)染毒24 h。荧光定量PCR法检测颗粒细胞的Caspase-3和Caspase-9基因mRNA表达水平,Weastern blot检测颗粒细胞Caspase-3和Caspase-9蛋白表达水平,流式细胞术检测颗粒细胞凋亡率。结果与对照组相比,各DEHP处理组卵巢颗粒细胞Caspase-3基因mRNA和蛋白表达水平下降(P<0.05),Caspase-9基因mRNA和蛋白表达水平也降低(P<0.05),同时细胞凋亡率增加(P<0.05),呈浓度依赖关系。结论 DEHP可通过激活Caspase通路而诱导大鼠卵巢颗粒细胞凋亡,进而影响卵巢功能。