1-脱氧野尻霉素减轻2型糖尿病小鼠的肝纤维化

目的探讨1-脱氧野霉素（DNJ）对糖尿病所致的肝纤维化的改善作用及其内在机制。方法建立2型糖尿病小鼠（T2D）模型，随机分为3组，5只/组：（1）对照组：腹膜内注射柠檬酸盐缓冲液（50 mg/kg）；（2）糖尿病组（DM）：采用高脂饮食饲养8周，静脉注射STZ（50 mg/kg），持续3 d，空腹血糖浓度≥16.7 mmol/L；（3）DNJ组：给予高脂饮食和10%DNJ（200 mg·kg^-1·d^-1）饮水，持续8周。测定体质量（BW）、血糖、血清总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）、超氧化物歧化酶（SOD）。制作肝组织切片行苏木精伊红染色（H&E）和天狼星红染色。此外，检测肝组织中胶原蛋白的溶解度。应用实时定量PCR法检测MCP-1、TNF-α、IL-1β、TGF-β 1mRNA相对表达水平。Western-blot法测定α-SMA和Collagen2（ColA2）蛋白水平。将L929小鼠成纤维细胞用DNJ（10 μg/mL）或PBS预处理30 min，然后在含高浓度葡萄糖的MEM培养基培养24 h。使用二氢乙锭（DHE）染色测定ROS的产生。结果DNJ可显著降低糖尿病小鼠血清中的血糖、TC、TG和SOD水平（P < 0.05），并显著减轻肝组织胶原交联程度，尤其以酶溶型胶原（PSC）以及总胶原含量的减低为主要表现（P < 0.05）。同时，DNJ显著降低由糖尿病引起的促炎因子以及纤维化相关细胞因子的高表达（P < 0.05）。用DNJ预处理后培养的L929细胞在DHE染色中显示出较低的红色荧光强度（P < 0.05）。结论DNJ作为一种潜在的天然功能性营养物质，可以通过降血糖，抗炎以及抗氧化作用减轻T2D诱导的肝纤维化。     

补骨脂乙素通过多途径诱导人乳腺癌MCF-7细胞死亡

目的探究补骨脂乙素（IBC）对人乳腺癌MCF-7细胞死亡的作用及其可能机制。方法使用不同浓度IBC处理MCF-7细胞24、48、72 h后，用MTT法检测IBC对MCF-7细胞增殖的影响；将MCF-7细胞设置10、20、40 μmol/L IBC处理组，用Annexin V-FITC/PI双染结合流式细胞仪、荧光显微镜检测IBC对MCF-7细胞凋亡的影响；免疫印迹法检测凋亡、自噬相关蛋白（Bax、Bcl-2、Akt、p-Akt、p62、LC3）表达的变化；透射电镜观察40 μmol/L IBC处理MCF-7后的细胞亚显微结构；利用JC-1试剂盒、ATP试剂盒和活性氧试剂盒检测IBC对细胞线粒体功能的影响。结果MTT实验结果显示，IBC具有抑制MCF-7细胞增殖的作用，并呈现浓度和时间依赖性，其作用24、48、72 h的IC₅₀值分别为38.46、31.31、28.26 μmol/L。IBC诱导MCF-7细胞发生凋亡，呈现浓度依赖性。预处理凋亡抑制剂z-VAD-fmk后，其细胞存活率显著高于单独处理IBC组（P < 0.05），而程序性坏死抑制剂Nec-1没有保护作用。免疫印迹结果显示IBC增加促凋亡蛋白Bax（P < 0.05）表达，下调Bcl-2（P < 0.05）、Akt（P < 0.05）及其Ser-473位的磷酸化水平（P < 0.05）而诱导凋亡。同时，随着IBC浓度的增加，自噬相关蛋白p62的表达逐渐增加，LC3-II/I比值升高，透射电镜下也观察到IBC处理的MCF-7细胞胞浆内有自噬泡以及自噬小体。试剂盒检测到IBC导致线粒体膜电位降低、细胞内ATP水平下降、产生和积聚活性氧（ROS）（P < 0.05）。结论IBC诱导人乳腺癌MCF-7细胞发生凋亡和自噬等多种死亡形式，可成为今后抗乳腺癌创新药物研发的先导化合物。     

褪黑素可改善PBDE-47所致PC12细胞的异常自噬与凋亡

目的探讨褪黑素（MT）对2，2''，4，4''-四溴联苯醚（PBDE-47）所致大鼠肾上腺髓质嗜铬细胞瘤PC12细胞异常自噬与凋亡的影响。方法通过一系列浓度梯度MT（12.5、25、50、100、200 μmol/L）预处理PC12细胞2 h后，并联合浓度为20 μmol/L的PBDE-47染毒细胞24 h，采用细胞计数试剂盒（CCK8）检测细胞存活率，筛选25 μmol/L MT用于后续实验。实验分组为：溶剂对照组（0.5‰ DMSO）、20 μmol/L PBDE-47处理组、20 μmol/L PBDE-47+25 μmol/L MT处理组、25 μmol/L MT处理组。采用免疫荧光技术检测自噬体标志蛋白微管相关蛋白1轻链3（LC3）阳性着色情况；采用Western blot技术检测自噬关键蛋白自噬相关蛋白7（ATG7）、自噬选择性底物p62、LC3-Ⅱ水平，以及凋亡相关蛋白活化型含半胱氨酸的天冬氨酸-3（active caspase-3）和剪切型多（ADP-核糖）聚合酶（cleaved PARP）水平。结果CCK8结果表明，PBDE-47处理组细胞活力相比对照组有所下降（P=0.001）；与PBDE-47处理组相比，PBDE-47+25 μmol/L MT处理组细胞存活率上升且在80%以上，差异均有统计学意义（P=0.023）。与对照组相比，PBDE-47处理后PC12细胞LC3蛋白阳性着色增强；此外，PBDE-47处理组PC12细胞ATG7蛋白水平下降，p62、LC3-Ⅱ、active caspase-3、cleaved PARP蛋白水平上升，差异均有统计学意义（P均 < 0.001）。与PBDE-47处理组相比，PBDE-47+MT处理组LC3蛋白阳性着色减弱；此外，PBDE-47+MT处理组ATG7蛋白水平上升（P=0.034），p62蛋白水平下降（P=0.048），LC3-Ⅱ蛋白水平下降（P=0.018），active caspase-3蛋白水平下降（P < 0.001），cleaved PARP蛋白水平下降（P=0.032）。结论PBDE-47可通过诱导PC12细胞自噬损伤引起自噬体蓄积，并能促进细胞凋亡，从而降低细胞存活；褪黑素可改善PBDE-47所致PC12细胞异常自噬与凋亡，进而提高细胞存活。     

抑制线粒体活性氧自由基可减轻高糖诱导的心肌细胞焦亡和铁死亡

目的探讨抑制线粒体氧化应激和炎症小体减轻高糖诱导的H9C2心肌细胞焦亡和铁死亡的作用，分析线粒体活性氧自由基（ROS）和炎症小体之间可能的上下游关系。方法将H9C2心肌细胞按照随机数字表法随机分为5组。正常对照组（CON）：含25 mmol/L浓度葡萄糖的DMEM完全培养基；高糖损伤组（HG）：含35 mmol/L浓度的高糖完全培养基；高糖+线粒体抗氧化剂Mitoquinone（MitoQ）组（HG+MitoQ）：35 mmol/L高糖完全培养基中加入终浓度为0.5 μmol/mL的MitoQ；高糖+ NLRP3抑制剂MCC950组（HG+MCC950）：35 mmol/L高糖完全培养基中加入终浓度为1 μmol/mL的MCC950；高糖组+MCC950+线粒体电子传递抑制剂Rotenone（ROT）组（HG+MCC950+ROT）：35 mmol/L高糖完全培养基中加入终浓度为1 μmol/mL的MCC950和0.5 μmol/mL的ROT。各组心肌细胞干预24 h后，CCK-8法测定细胞活性；CellRox和MitoSox荧光探针分别测定心肌细胞内和线粒体氧化应激水平变化；免疫荧光法检测细胞内NLRP3炎症小体水平；Western blot检测心肌细胞中NLRP3、GSDMD和CleavedGSDMD（GSDMD-NT）等焦亡相关重要因子的蛋白表达和铁死亡相关因子GPX4蛋白表达。结果与CON组相比，HG组细胞活性明显下降（P < 0.01），心肌细胞和线粒体内ROS荧光强度（P < 0.01）、NLRP3免疫荧光强度（P < 0.01）以及焦亡相关因子NLRP3，GSDMD和GSDMD-NT的蛋白表达（P < 0.01）均明显升高，铁死亡相关因子GPX4蛋白表达下降（P < 0.01）。与HG组相比，HG+ MitoQ和HG+MCC950组细胞活性明显升高（P < 0.01），细胞和线粒体内ROS荧光强度（P < 0.01）、NLRP3免疫荧光强度（P < 0.01）以及NLRP3、GSDMD和GSDMD-NT的蛋白表达明显降低（P < 0.05），GPX4蛋白表达增高（P < 0.01）。与HG组相比，HG+ MCC950+ROT组细胞活性和NLRP3、GSDMD-NT的蛋白表达无明显差异（P>0.05）；但与HG+MCC950组相比，HG+MCC950+ ROT组细胞活性明显降低（P < 0.01），ROS荧光强度、NLRP3炎症小体免疫荧光以及NLRP3、GSDMD-NT的蛋白表达均明显升高，GPX4蛋白表达降低（P < 0.05）。结论MitoQ直接抑制线粒体ROS的产生减轻了高糖诱导的心肌细胞NLRP3炎症小体的生成，减少焦亡和铁死亡的发生；抑制NLRP3炎症小体减少线粒体ROS的产生；线粒体ROS和NLRP3之间可能存在着相互影响。     

原花青素B2通过调控P13K/Akt/Nrf2信号通路减轻氯氰菊酯所致神经元损伤

目的探讨原花青素B2（PCB2）是否通过调控P13K/Akt/Nrf2信号通路保护氯氰菊酯（CYP）导致的神经元氧化损伤。方法原代培养C57BL/6小鼠大脑皮层神经元，将细胞随机分成5组：正常对照组；PCB2处理组（将5 μg/mL的PCB2与细胞共培养24 h）；CYP暴露组（将50 μmol/L的CYP与细胞共培养24 h）；PCB2预处理组（将5 μg/mL的PCB2与细胞预处理30 min后加入CYP 50 μmol/L共培养24 h）；LY294002处理组（先将20 μmol/L的LY294002与细胞预处理30 min，然后加入PCB2预处理30 min，后与CYP共培养24 h）。采用CCK-8分析各组细胞活性，采用荧光探针DCFH-DA及流式细胞术检测细胞内ROS水平，通过Hoechst 33342观察细胞核形态变化，采用JC-1检测线粒体膜电位异常，利用Western blot检测Nrf2、HO-1、p-Akt、Akt蛋白表达。结果CYP暴露降低细胞活性（P < 0.001），引起线粒体膜电位下降、促使细胞核出现固缩、浓染等凋亡特征，导致ROS产生异常。PCB2预处理提高细胞存活率（P=0.006），改善细胞核形态异常，逆转CYP导致的线粒体膜电位下降，减弱细胞内ROS产生。CYP暴露引起Nrf2核易位，Nrf2、HO-1、p-Akt蛋白表达上调（P < 0.001）。PCB2预处理调节Nrf2、HO-1、p-Akt蛋白过度表达。抑制P13K/Akt信号通路消除了PCB2对CYP诱导损伤的保护作用（P < 0.05）。结论PCB2通过激活P13K/Akt信号通路，调控Nrf2/ARE通路，减轻CYP所致小鼠大脑皮层神经元氧化损伤。     

右美托咪定预处理通过抑制NLRP3炎性小体激活减轻大鼠肠缺血再灌注诱导的急性肺损伤

目的探讨右美托咪定（Dex）对大鼠肠缺血再灌注（II/R）所致急性肺损伤（ALI）的保护作用以及核苷酸结合域样受体蛋白3（NLRP3）炎性小体活性的影响。方法将32只健康雄性SD大鼠，随机分为4组（8只/组）。假手术组（Sham组）仅暴露肠系膜上动脉（SMA），肠缺血再灌注组（II/R组）阻断SMA 1 h后再灌注2 h，II/R+右美托咪定处理组（Dex+II/R组）右美托咪定干预后行再灌注，Dex假手术组（Dex组）右美托咪定预处理假手术组。Sham组和II/R组腹腔注射等量生理盐水。采取夹闭SMA 1 h再灌注2 h的方法建立肠缺血再灌注损伤模型。测定各组大鼠肺部组织湿/干质量比值（W/D）、髓过氧化物酶（MPO）活性，HE染色评估肺组织病理学变化以及行肺损伤评分；ELISA检测肺部组织中炎性因子TNF-α、IL-18、IL-1β水平；Western blot检测肺部组织中NLRP3、凋亡相关斑点样蛋白（ASC）、Caspase-1及磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶（p-AMPK）蛋白的表达水平。结果相较于Sham组，II/R组肺组织病理损伤明显，W/D值、MPO活性及肺组织中的TNF-α、IL-18、IL-1β表达显著升高（P < 0.05），肺组织中NLRP3、ASC、Caspase-1蛋白表达增加（P < 0.05），p-AMPK蛋白表达减少（P < 0.05）；相较于II/R组，Dex+II/R组肺组织病理损伤轻微，W/D值、MPO活性及肺组织中的TNF-α、IL-18、IL-1β表达明显下降（P < 0.05），肺组织NLRP3、ASC、Caspase-1蛋白表达明显下降（P < 0.05），p-AMPK蛋白表达明显增加（P < 0.05）。结论右托美咪定通过对NLRP3炎性小体激活的抑制，减轻炎性反应，进而改善大鼠II/R所致的ALI。     

TGF-β1通过上调Shh信号诱导大鼠脑膜成纤维细胞向肌成纤维细胞转化

目的探讨TGF-β1在诱导脑膜成纤维细胞转化为肌成纤维细胞中对Shh信号的影响。方法新生24 h SD大鼠脑膜原代成纤维细胞经Ⅳ型胶原酶提取纯化。原代脑膜成纤维细胞随机分为3个组：分别为空白对照组、10 ng/mL TGF-β1处理组（TGF-β1组）、10 ng/mL TGF-β1联合20 μmol/L TGF-β1受体抑制剂SB-431542组(TGF-β1+SB组)。各组细胞在药物处理前均用无血清培养基培养24 h后换用加入了药物的DMEM/F12完全培养基处理72 h。采用CCK-8法检测各实验组成纤维细胞的增殖能力；细胞划痕实验检测各实验组成纤维细胞的迁移能力；免疫荧光法检测各实验组纤维连接蛋白（Fn）的表达；Western blotting检测各实验组Fn、α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、Shh蛋白的表达；q-PCR检测各实验组细胞Shh mRNA的表达。结果TGF-β1可促进原代脑膜成纤维细胞的增殖（P < 0.05）；TGF-β1可促进原代脑膜成纤维细胞的迁移（P < 0.05）。TGF-β1可促进成纤维细胞向肌成纤维细胞的转化并增加Fn的分泌（P < 0.05）。TGF-β1处理后可上调Shh蛋白和mRNA的表达（P < 0.05），TGF-β1受体抑制剂SB-431542则可抑制TGF-β1引起的原代脑膜成纤维细胞向肌成纤维细胞的转化并减少纤维连接蛋白的分泌（P < 0.05）。结论TGF-β1可通过上调Sonic Hedgehog信号通路中Shh蛋白的表达，诱导脑膜成纤维细胞转化为肌成纤维细胞。     

Leptin对缺氧状态下大鼠视网膜祖细胞体外增殖和分化的影响

目的探讨Leptin对体外培养的缺氧状态下视网膜祖细胞（RPCs）增殖、分化的影响及细胞中PTEN蛋白表达的变化。方法原代培养大鼠RPCs，不同浓度Leptin作用RPCs细胞，分为：常氧培养组（Control组）、缺氧培养（Hypoxia）+0、0.3、1.0、3.0、10、30 nmol/L Leptin组，分别培养至12、24、48 h，CCK-8法检测细胞增殖活性。将原代培养的RPCs细胞分为：Control组、Hypoxia组、Hypoxia+Leptin组，培养48 h后，转换为分化培养基继续培养6 d，采用免疫荧光染色法对GFAP阳性细胞比例和β- tubulin III阳性细胞比例进行统计分析。Control组、Hypoxia组、Hypoxia+Leptin组细胞培养48 h后，采用Western blot法检测各组RPCs中PTEN蛋白表达水平。结果原代培养的P0代RPCs为圆形悬浮生长，培养2 d后细胞可聚集成神经球。低浓度Leptin（0.3、1.0、3.0 nmol/L）作用RPCs 48 h，细胞增殖活性较Control组及Hypoxia组增强，RPCs细胞增殖活性随Leptin浓度增高呈递增趋势，其中，3.0 nmol/L Leptin作用48 h细胞增殖活性最强（P < 0.05）；高浓度Leptin（10 nmol/L，30 nmol/L）组细胞增殖活性较对照组减弱（P < 0.05）。细胞培养48 h，与Control组及Hypoxia组相比，Hypoxia+Leptin组β-tubulin III阳性细胞比例和GFAP阳性细胞比例均无显著性差异（P>0.05），而PTEN蛋白表达量较对照组显著下调（P < 0.05）。结论低浓度Leptin可促进缺氧状态下大鼠RPCs细胞增殖，抑制细胞中PTEN蛋白表达，对细胞分化无明显影响。     

人参皂苷Rh2调控盘状结构域受体1对糖尿病大鼠肾纤维化和细胞凋亡的影响

目的分析人参皂苷Rh2（G-Rh2）对糖尿病肾病（DN）大鼠肾纤维化和细胞凋亡的影响及其作用机制。方法SPF级，雄性，SD大鼠30只，随机分为对照组（Control组）、DN组以及G-Rh2药物干预组。DN和G-Rh2药物干预组大鼠腹腔注射链脲佐菌素构建DN大鼠模型，Control组大鼠给予等量的柠檬酸缓冲溶液注射。待DN大鼠模型构建成功后，G-Rh2药物干预组给予G-Rh2（20 mg·kg^-1·d^-1）连续灌胃12周，Control和DN大鼠给予等量的生理盐水灌胃。HE染色和PAS染色观察大鼠肾组织形态，Masson染色观察大鼠肾组织纤维化程度，TUNEL染色观察肾组织细胞凋亡情况；Western blot检测大鼠肾组织CollagenⅠ、CollagenⅢ、Cleaved-caspase-3、Bcl-2、DDR1表达水平；免疫组化定位检测肾组织DDR1表达情况。结果与Control组相比，DN组肾组织纤维化程度加重，细胞凋亡指数升高（P < 0.01），CollagenⅠ、CollagenⅢ、Cleaved-caspase-3、DDR1表达上调（P < 0.01），Bcl-2表达下调（P < 0.01）；与DN组相比，G-Rh2药物干预组肾组织纤维化程度，细胞凋亡指数，CollagenⅠ、CollagenⅢ、Cleavedcaspase-3、DDR1表达均显著降低（P < 0.05或P < 0.01），Bcl-2表达显著升高（P < 0.05）。结论G-Rh2抑制糖DN肾纤维化和细胞凋亡可能与下调DDR1表达有关。     

活性氧与铁死亡通路相互作用在丙酮醛引起的小鼠胚胎成骨细胞损伤中起重要作用

目的探讨活性氧和铁死亡在丙酮醛诱导小鼠胚胎成骨细胞（MC3T3-E1）损伤中是否存在相互作用。方法应用丙酮醛损伤MC3T3-E1细胞建立模拟糖尿病骨质损伤的细胞模型。应用细胞计数试剂盒-8（CCK-8）测定MC3T3-E1细胞的存活率；罗丹明123染色荧光显微镜照相法测定线粒体膜电位；双氯荧光素（DCFH-DA）荧光显微镜照相法检测胞内活性氧水平；碱性磷酸酶试剂盒检测定碱性磷酸酶活性；茜素红染色观察成骨细胞晚期标志物-矿化结节的形成；铁离子试剂盒检测铁离子水平；Western blot检测成骨细胞的抑制铁死亡的标志蛋白谷胱甘肽过氧化物酶4（GPX4）的表达水平。结果0.6 mmol/L丙酮醛处理MC3T3-E1细胞24 h可明显减少GPX4的表达（P < 0.001），同时可使胞内铁离子浓度升高，细胞存活率降低，线粒体膜电位丢失，胞内活性氧水平升高，碱性磷酸酶活性降低和矿化结节减少（P < 0.001）。应用2 mmol/L活性氧清除剂N-乙酰半胱氨酸和丙酮醛共处理MC3T3-E1细胞24 h可增加GPX4的表达（P < 0.01），应用4 μmol/L铁死亡抑制剂铁抑素-1与丙酮醛共处理成骨细胞24 h可使胞内活性氧水平降低（P < 0.001）；应用N-乙酰半胱氨酸或铁抑素-1与丙酮醛共处理成骨细胞24 h均能对抗丙酮醛引起的上述其他细胞损伤（P < 0.001）。结论活性氧与铁死亡通路相互作用在丙酮醛引起MC3T3-E1成骨细胞损伤中起重要的作用。     

苗药验方四大血对人类风湿性关节炎成纤维样滑膜细胞凋亡和焦亡的影响

目的探讨苗药验方四大血（SX）对人类风湿性关节炎（RA）成纤维样滑膜细胞（FLSs）凋亡和焦亡的影响。方法数据库检索RA及凋亡、焦亡相关靶蛋白；韦恩软件分析获得与RA相关凋亡及焦亡蛋白；RA-凋亡-焦亡靶蛋白互作（PPI）网络构建以获取RA中凋亡和焦亡重要靶蛋白；Autodock vina软件进行分子对接验证SX主要活性成分与凋亡和焦亡相关蛋白的结合能力，并通过PyMoL软件进行可视化。人源第2代RA-FLSs MH7A细胞检测SX对MH7A细胞抑制率后分为空白对照组、雷公藤多甘片阳性对照组（TGT组，5 mg/L）及5、10、20、40 mg/L SX组，采用Wound- healing实验、Transwell法、ELISA法及Western blot法分别检测MH7A细胞的迁移和侵袭能力、凋亡和焦亡相关蛋白。结果获得RA相关凋亡靶蛋白9个、焦亡靶蛋白15个、RA-凋亡-焦亡重叠靶蛋白4个，SX主要活性成分与TNF-α、Fas、Bax等靶蛋白均具有较高亲和力；与空白组相比，给药处理24、48、72 h，随着SX浓度增加，对MH7A细胞抑制率增加（P＜0.05），药物作用6、12、24 h，同一时间点内MH7A细胞划痕修复率随SX浓度增加而减少（P＜0.05）；药物作用24 h，20、40 mg/L SX组MH7A细胞侵袭个数减少（P＜0.05）；20、40 mg/L SX组和TGT组TNF-α、IL-1β、IL-18的表达水平均下降（P＜0.05）；20、40 mg/L SX组Bax/Bcl-2比值均增加（P＜0.05）；5、40 mg/L SX组Caspase-1表达量均减少（P＜0.05）；20、40 mg/L SX组Fas和FasL表达量均增加（P＜0.05）。结论SX可诱导MH7A细胞凋亡、抑制其焦亡，减缓炎症反应，其作用机制可能与下调TNF-α、IL-1β、IL-18细胞因子水平，上调Bax、Fas、FasL，抑制Bcl-2和Caspase-1蛋白表达有关。     

IRE1α缺陷通过上调内质网钙稳态蛋白降低软骨细胞的自噬功能

目的探究肌醇依赖性激酶1α（IRE1α）通过调控内质网钙稳态蛋白（CHERP）影响软骨细胞自噬功能的相关机制。方法衣霉素（TM）处理人软骨细胞C28/I2，Western blot检测不同时间点的内质网应激和自噬相关蛋白指标。4μ8c、雷帕霉素（Rapa）处理C28/I2（分为：NC组、4μ8c组、Rapa组、4μ8c+Rapa组），Western blot检测自噬相关蛋白指标。分别从软骨组织特异性ERN1基因敲除小鼠（ERN1 CKO）和对照小鼠（Control）软骨组织分离原代软骨细胞，qPCR检测ERN1及自噬相关蛋白ATG5、ATG7的mRNA水平，Western blot检测IRE1α/p-IRE1α、CHERP表达水平，流式细胞术检测胞内钙离子含量。巴佛洛霉素A1（Bafilomycin A1）处理原代软骨细胞（分为Control组、Control+Bafilomycin A1组、ERN1 CKO组、ERN1 CKO+Bafilomycin A1组），Western blot检测LC3Ⅱ、LC3Ⅰ的表达。自噬双荧光病毒在Rapa处理下检测自噬流（分为Control+Rapa组、ERN1 CKO+ Rapa组）。C28/I2中过表达CHERP与IRE1α，免疫荧光检测自噬水平。结果TM处理C28/I2细胞后，内质网应激相关标志蛋白表达上调，LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值上调（P＜0.05），p62表达下调（P＜0.05）。相较对照组，Rapa上调LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值（P＜0.001），4μ8c+ Rapa组相较Rapa组的LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值降低（P＜0.05）。相较于对照组，原代软骨细胞中敲除ERN1/IRE1α后，ERN1（P＜0.01）、ATG5（P＜0.001）、ATG7（P＜0.001）mRNA水平显著下调。IRE1α/p-IRE1α蛋白表达缺失或显著下调（P＜0.01），CHERP蛋白表达上调（P＜0.05），胞内钙离子含量显著上升（P＜0.001）。巴佛洛霉素A1处理原代软骨细胞后，Control+Bafilomycin A1组较Control组的LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值上调（P＜0.01），ERN1 CKO+Bafilomycin A1组较ERN1 CKO组的LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值上调（P＜0.05）、较Control+Bafilomycin A1组的LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值下降（P＜0.05）。自噬双荧光病毒处理后，ERN1 CKO+Rapa组较Control+Rapa组未淬灭LC3-GFP荧光增强（P＜0.05）。C28/I2细胞中过表达CHERP降低LC3荧光强度，过表达IRE1α增强LC3荧光表达并能部分挽救CHERP导致的荧光降低情况。结论IRE1α缺陷通过上调内质网钙稳态蛋白，升高胞内钙离子含量，进一步导致软骨细胞的自噬功能受损。     

小檗碱通过激活Nrf2-HO-1/GPX4通路抑制小鼠海马神经元HT22细胞的铁死亡

目的探讨小檗碱对于Erastin诱导小鼠海马神经元HT22细胞的铁死亡的保护作用及其可能机制。方法以HT22小鼠海马神经元细胞为研究对象，分为对照组、Erastin模型组、Erastin+30 μmol/L BBR组、Erastin+60 μmol/L BBR组。采用CCK-8法、特异性Fe²⁺荧光探针、荧光染料（DAPI）检测和荧光探针（H2DCFH-DA）检测各实验组细胞的增殖情况、活性铁水平、细胞凋亡和活性氧（ROS）变化。RT-qPCR和Western blot分别检测各实验组细胞的Nrf2、HO-1、GPX4 mRNA和蛋白表达情况。以60 μmol BBR的最适浓度来进一步探究其作用机制，分为对照组、Erastin模型组、Erastin+60 μmol/L BBR组、Erastin+60 μmol/L BBR+2 μmol Nrf2抑制剂ML385组。通过使用荧光探针和Western blot检测Nrf2抑制剂（ML385）作用后的活性铁的水平、活性氧含量以及Nrf2、HO-1、GPX4蛋白的表达来验证小檗碱调节的Nrf2-HO-1/GPX4通路对Erastin处理的HT22细胞的保护作用。结果0.5 μmol/L Erastin作用于HT22细胞8 h，细胞存活率与对照组相比显著被抑制（P < 0.05）；同时细胞凋亡、ROS以及活性铁含量增加（P < 0.05）。与Erastin组比较，Erastin+30 μmol/L BBR组和Erastin+60 μmol/L BBR组的细胞存活率明显升高（P < 0.05），同时显著降低细胞凋亡、ROS以及活性铁含量（P < 0.05）。小檗碱增加HT22细胞中Nrf2、HO-1、GPX4基因及蛋白的表达量（P < 0.05）。加入Nrf2抑制剂ML385后，Nrf2-HO-1/GPX4通路被抑制，并且ROS以及活性铁含量升高（P < 0.05）。结论Erastin诱导HT22细胞发生铁死亡，小檗碱抑制Erastin诱导的铁死亡，可能机制是激活了Nrf2-HO-1/GPX4通路。     

不同交联剂处理对脱细胞小肠黏膜下层多孔支架的影响

目的探讨不同交联剂处理对脱细胞小肠黏膜下层(decellularized small intestinal submucosa, SIS)多孔支架理化性能及生物相容性的影响。方法(1) 将新鲜SIS塑形为三维多孔支架并采用戊二醛(glutaraldehyde, GA)、碳二亚胺[1-ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl) carbodiimide, EDC]和原花青素(procyanidine, PA)3种交联剂进行交联, 获得3组交联后支架, 分别为GA组、EDC组和PA组。(2)理化性能评价: 对3组多孔支架进行宏观形貌观察, 使用场发射环境扫描电镜进行微观形貌观察并测定孔径及孔隙率, 使用茚三酮法测定交联度, 使用酶促降解法评价抗降解性能, 使用万能力学测试机测定应力应变曲线及压缩强度。(3)生物相容性评价: 使用细胞计数试剂盒(cell counting kit-8, CCK-8)法检测交联处理对人骨髓间充质干细胞(human bone marrow mesenchymal stem cells, hBMSCs)增殖的影响, 使用Calcein-AM/PI活死细胞染色法评价交联处理后支架的细胞毒性。结果宏观形貌观察可见交联修饰未破坏支架三维结构; 微观形貌观察可见各组多孔支架具有大小均匀、相互连通的孔隙结构。EDC组孔径最大, 与另两组差异具有统计学意义(P < 0.05);PA组孔隙率最低, 与另两组比较差异有统计学意义(P < 0.05)。PA组交联度最高而溶胀率最低, EDC组溶胀率最高。EDC组和GA组的体外降解速率均高于PA组, 其中GA组降解速度最快, PA组抗降解能力最佳, 降解至第15天时3组质量丧失率间的差异有统计学意义(P < 0.05)。EDC组和GA组压缩强度近似, PA组压缩强度最高, 与另两组比较差异有统计学意义(P < 0.05)。GA组支架的细胞毒性最大, hBMSCs在EDC组和PA组支架上具有更好的增殖能力, 在GA组增殖较慢。结论3种交联剂处理均可达到较高的交联度, 经EDC和PA交联处理的SIS多孔支架在拥有较好理化性能的同时具有良好的生物相容性, 相比于GA是更有应用前景的交联处理方法。     

抑制铁死亡可减轻脓毒症小鼠的心肌损伤：脂钙蛋白-2的作用

目的观察铁死亡在盲肠结扎与穿孔（CLP）法诱导的脓毒症小鼠心肌损伤中的作用，并探讨脂钙蛋白-2（Lcn2）在铁死亡中的可能作用。方法选取8周龄雄性C57BL/6小鼠，采用CLP法诱导脓毒症心肌损伤模型。小鼠随机分为3组（10只/组）：假手术组、脓毒症组（CLP，小鼠接受CLP手术）、脓毒症+铁死亡抑制剂Ferrostain-1组（CLP+Fer-1，小鼠腹腔注射浓度为5 mg/mL的Fer-1 5 mg/kg，1 h后接受CLP手术）。各组小鼠术后24 h通过超声心动图检测小鼠心功能。H & E染色观察心肌损伤，透射电镜观察心肌纤维细微结构和线粒体的变化；ELISA法测定血清中炎症因子肿瘤坏死因子-α（TNF-α）水平；组织铁试剂盒测定心肌组织铁含量的变化；Western blot法检测心肌组织中Lcn2蛋白和铁死亡相关蛋白谷胱甘肽过氧化物酶4（GPX4）和铁死亡抑制蛋白1（FSP1）的表达变化。结果与假手术组相比，CLP术后24 h，脓毒症小鼠心脏收缩与舒张功能减弱，左心室射血分数（LVEF%）、左心室缩短分数（LVFS%）和左心室舒张末期内径（LVIDd）降低（P < 0.05）；左心室收缩期末期内径（LVIDs）升高（P < 0.05）。与CLP组相比，CLP+铁死亡抑制剂Fer-1组LVEF%、LVFS%和LVIDd升高（P < 0.05）；LVIDs降低（P < 0.05）。光镜下观察到CLP小鼠心肌纤维排列不整齐，部分变性，有炎症细胞浸润，间质水肿，横纹模糊，红细胞渗出。透射电镜观察到部分线粒体嵴减少，外膜破裂，部分线粒体变小，膜密度增高。CLP+Fer-1组小鼠心肌形态学有改善，线粒体损伤减轻。与假手术组相比，CLP组血清TNF-α水平、心肌组织铁含量、Lcn2蛋白表达升高（P < 0.01），GPX4、FSP1蛋白表达降低（P < 0.01）。与CLP组相比，CLP+Fer-1组血清TNF-α水平、心肌组织铁含量、和Lcn2蛋白表达降低（P < 0.05）；GPX4、FSP1蛋白表达升高（P < 0.05）。结论来源于GPX4、FSP1不同途径的铁死亡参与CLP引起的脓毒症性心肌损伤的发生，抑制铁死亡可减轻脓毒症心肌损伤，Lcn2可能参与其中。     

ELF4通过激活Akt通路促进胰岛素瘤细胞增殖并抑制细胞凋亡

目的探索ELF4促进胰岛素瘤细胞增殖与抗凋亡的作用及其机理。方法利用逆转录病毒载体系统，构建稳定高表达ELF4的胰岛素瘤细胞BON-ELF4，以及载体对照组细胞BON-Vector。采用MTT法检测胰岛素瘤细胞BON-ELF4和BONVector各组细胞的生长情况。采用0.1 μmol/L化疗药物表阿霉素处理BON-ELF4和BON-Vector细胞24 h后，检测细胞凋亡相关指标，采用免疫印迹法检测各组肿瘤细胞中凋亡通路关键因子caspase-9，caspase-8和PARP切割带的表达水平；采用Annexin V-FITC/PI双染色结合流式细胞术分析各组细胞凋亡情况。采用免疫印迹法检测胰岛素瘤细胞BON-ELF4和BONVector细胞中Akt磷酸化水平。结果免疫印迹法检测结果显示，BON-ELF4细胞中ELF4蛋白表达量高于对照组细胞BONVector（P=0.013），稳定高表达外源性ELF4蛋白的细胞系BON-ELF4构建成功。稳定高表达ELF4的细胞系BON-ELF4生长明显较快（P < 0.05）。相比较于载体对照组BON-Vector，BON-ELF4细胞在0.1 μmol/L表阿霉素处理24 h后caspase-8，caspase-9的蛋白前体降低，而caspase-8，caspase-9切割成熟体升高（P < 0.05）；同时，相应的PARP切割带随着ELF4的高表达而降低（P < 0.05）；流式细胞术检测结果显示，22.90%的载体对照组BON-Vector细胞呈现出Annexin V阳性、PI阴性的早期凋亡结果，6.03%的BON-ELF4细胞组呈现出Annexin V阳性、PI阴性的早期凋亡结果。外源高表达ELF4的肿瘤细胞中Akt的磷酸化显著升高（P < 0.05），而Akt总蛋白的水平基本未受影响（P>0.05）。结论ELF4能通过激活Akt通路而促进胰岛素瘤细胞增殖和抗凋亡。     

汉黄芩苷通过上调SIRT1表达减轻糖尿病视网膜病变引起的细胞和组织损伤

目的探究汉黄芩苷对高糖诱导的人视网膜微血管内皮细胞（hRMECs）功能障碍的作用和对链脲佐菌素（STZ）诱导的大鼠糖尿病视网膜的损伤的影响及潜在的分子机制。方法hRMECs常规培养，实验分为对照组（5 mmol/L葡萄糖）、渗透对照组（5 mmol/L葡萄糖+25 mmol/L甘露醇）、高糖组（30 mmol/L葡萄糖）、给药组（30 mmol/L葡萄糖+10、20、30、40 μmol/L汉黄芩苷）。通过CCK-8与Transwell实验分别检测细胞增殖和迁移能力，小管形成与单层细胞膜通透性实验分别检测细胞成管能力和细胞膜通透性，ROS、NO、GSH-ST试剂盒检测细胞氧化应激水平，qRT-PCR和ELISA试剂盒分别检测IL-1β、IL-6的表达水平和含量，Western blot检测VEGF、HIF-1α和SIRT1蛋白表达。选取40只SPF级雄性SD大鼠，随机分为对照组（Sham组）、模型组（STZ组）、汉黄芩苷组（Wog组）和汉黄芩苷治疗组（STZ+Wog组），10只/组。模型组和汉黄芩苷治疗组腹腔注射0.1 mol/L柠檬酸缓冲液（pH=4.5）溶解的STZ，剂量为60 mg/kg建立糖尿病大鼠模型，对照组与单独的汉黄芩苷组给予等剂量的柠檬酸缓冲液。糖尿病大鼠模型建立1周后给予汉黄芩苷治疗，对照组、模型组予等量生理盐水注射，连续6周。比较4组大鼠视网膜组织损伤、HIF-1-α、ROS、VEGF、TNF-α、IL-1β、IL-6水平以及sirt1蛋白表达情况。结果与对照组相比，高糖诱导hRMECs异常增殖和迁移，提高了hRMECs小管形成能力及细胞膜通透性（P＜0.05），同时高糖诱导的hRMECs炎症水平和氧化应激水平上升（P＜0.05）。而与高糖组相比，汉黄芩苷可浓度依赖性抑制高糖诱导的hRMECs细胞增殖、迁移、小管形成及细胞膜通透性的增加（P＜0.05），此外汉黄芩苷可降低高糖诱导的hRMECs的炎症和氧化应激水平（P＜0.05）。SIRT1在高糖诱导的hRMECs中低表达，30 μmol/L剂量汉黄芩苷处理后高糖诱导的低SIRT1表达部分恢复（P＜0.01），干扰SIRT1表达可逆转汉黄芩苷对高糖诱导hRMECs异常增殖、迁移、小管形成、细胞膜通透性、炎症及氧化应激的抑制作用。动物实验显示，与对照组相比，STZ组视网膜组织厚度增加（P＜0.05），而汉黄芩苷治疗后能缓解糖尿病引起的大鼠视网膜增厚（P＜0.05）。同时STZ处理提高了VEGF、HIF- 1α、IL-1β、IL-6和ROS的水平（P＜0.001），汉黄芩苷的处理降低了STZ诱导的大鼠视网膜损伤且上调了SIRT1的表达（P＜0.001）。结论汉黄芩苷通过上调SIRT1的表达缓解糖尿病视网膜病变引起的损伤。     

褪黑素通过激活自噬抑制MDA-MB-231乳腺癌细胞的生长和转移

目的探讨褪黑素对乳腺癌细胞MDA-MB-231生长和转移的作用及其机制。方法将MDA-MB-231细胞设置对照组以及1、3、5 mmol/L褪黑素处理组，Western blot检测自噬对细胞生长、转移的影响时，添加3-甲基腺嘌呤（3-MA）组、3-MA联合褪黑素组。使用不同浓度褪黑素处理MDA-MB-231乳腺癌细胞24、48 h，并加入0.1%无水乙醇的细胞作为对照，CCK-8法检测细胞增殖活性确定最佳处理浓度和时间，筛选出3 mmol/L褪黑素用于后续实验。集落形成实验及划痕实验检测不同浓度褪黑素对乳腺癌细胞集落形成能力和迁移能力的影响；流式细胞术、免疫荧光检测3 mmol/L褪黑素对MDA-MB-231细胞凋亡率和自噬蛋白阳性着色情况；Western blot检测自噬相关蛋白LC3、P62、Beclin1，凋亡相关蛋白Bcl2、Bax，上皮-间质转化（EMT）相关蛋白E-cadherin、Snai1的水平。结果CCK-8结果显示，与对照组相比，褪黑素呈浓度及时间依赖性抑制乳腺癌细胞的增殖（P < 0.05）；集落形成实验显示，3个浓度褪黑素处理组的集落数低于对照组；褪黑素作用24 h后明显抑制乳腺癌细胞划痕愈合速度（P < 0.01），并诱导细胞凋亡率增加（P < 0.01）；且与对照组相比，褪黑素组的促凋亡蛋白Bax表达增加（P < 0.05），抗凋亡蛋白Bcl2表达下调（P < 0.05），Bcl2/Bax的比值逐渐减低（P < 0.01）；转录因子Snail减少，上皮细胞标志蛋白E-cadherin增加；单独使用褪黑素能够诱导细胞内自噬标记蛋白LC3-ΙΙ/LC3-Ι、Beclin1表达增加，P62表达减少（P < 0.05）以及Beclin1蛋白阳性着色增强，P62蛋白阳性着色减弱；3-MA+褪黑素组中自噬相关蛋白Beclin1（P < 0.001）、LC3-ΙΙ/LC3-（ΙP < 0.05）以及凋亡蛋白Bax（P < 0.01）、上皮细胞标志蛋白E-cadherin（P < 0.001）明显低于褪黑素组，抗凋亡蛋白Bcl2（P < 0.05）、转录因子Snail以及Bcl2/Bax的比值（P < 0.01）高于褪黑素组。结论褪黑素可通过诱导MDA-MB-231乳腺癌细胞发生自噬，抑制乳腺癌细胞增殖、转移并促进其凋亡，而减少自噬，可减弱褪黑素对乳腺癌细胞生长和转移的抑制作用。     

局部注射环孢素A对非肥胖糖尿病小鼠下颌下腺分泌功能及炎症的影响

目的探讨非肥胖糖尿病(non-obese diabetic, NOD)小鼠下颌下腺局部注射环孢素A(cyclosporine A, CsA)对腺体唾液分泌功能及炎症的影响。方法选用21只14周龄和18只21周龄雌性NOD小鼠，随机平均分为低剂量组、高剂量组和对照组。NOD小鼠下颌下腺局部注射CsA 1周后，检测刺激性唾液流率；取下颌下腺标本，制作石蜡切片，用苏木精-伊红(hematoxylin-eosin staining，HE)染色，显微镜下观察腺体淋巴细胞浸润程度；用徕卡图像分析系统计数淋巴细胞浸润灶的数量，计算灶性指数和淋巴细胞浸润灶的面积比；用实时荧光定量聚合酶链式反应(quantitative real-time polymerase chain reaction, qRT-PCR)检测下颌下腺中肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α, TNF-α)、干扰素-γ(interferon-γ, IFN-γ)、白介素-4(interleukin-4, IL-4)、IL-13、IL-17F、IL22和IL-23a等炎症细胞因子的表达；用脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法(terminal deoxynucleotidyl transferase-mediated dUTP nick end labeling, TUNEL)检测下颌下腺凋亡细胞；用全自动生化分析仪测量血清肌酐(serum creatinine，Scr)、尿素氮(blood urea nitrogen, BUN)、尿酸(uric acid, UA)、丙氨酸氨基转移酶(alanine aminotransferase，ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(aspartate aminotransferase，AST)、碱性磷酸酶(alkaline phosphatase, ALP)、白蛋白(albumin, ALB)和γ-谷氨酰基转移酶(γ-glutamyl transferase，GGT)，评估肝肾功能。结果下颌下腺局部注射CsA后，14周龄和21周龄NOD小鼠的刺激性唾液流率较同龄对照组明显增加(P < 0.01或P < 0.05)；14周龄低剂量组NOD小鼠下颌下腺淋巴细胞浸润灶的灶性指数和面积比较同龄对照组显著减少(P < 0.01)；低剂量和高剂量组减轻炎症反应和改善唾液分泌功能的作用相似；下颌下腺整体炎症细胞因子表达水平无明显降低；低剂量和高剂量组下颌下腺凋亡细胞数和对照组相比有减少趋势，但差异无统计学意义；局部注射CsA对NOD小鼠肝肾功能无影响。结论局部应用CsA可减轻NOD小鼠的下颌下腺淋巴细胞浸润，并改善唾液分泌功能。     

肾交感神经射频消融术可降低高血压犬血压并改善动脉硬度

目的了解肾交感神经射频消融术（RDN）对高血压犬血压和动脉硬度的影响并探讨RDN对动脉硬度影响的相关机制。方法将16条比格犬按2∶1∶1的比例随机分为RDN组（n=8，高盐高脂饲养构建高血压大动物模型+RDN治疗）、假手术组（n=4，高盐高脂饲养构建高血压大动物模型+肾动脉造影）和对照组（n=4，普通配方犬粮饲养）。比较3组血压、动脉硬度、内皮功能及交感活性相关指标的变化，并进行相关性分析。结果高血压犬模型全部构建成功，术后3月，3组收缩压（SBP）变化差异显著（P=0.006），RDN组SBP降幅显著大于假手术组与对照组（P < 0.05），舒张压（DBP）变化亦存在显著差异（P=0.016），RDN组DBP降幅大于对照组（P=0.007），但与假手术组差异不明显（P=0.052）；术后3组血管阻力指数（RI）变化幅度有显著差异（P=0.043），其中RDN组术后RI降幅显著大于对照组（P=0.032）及假手术组（P=0.043）；RDN术前后的eNOS、NO及Ang Ⅱ浓度在3组间均无显著差异（P>0.05），建模成功后RDN组血清NE浓度显著高于对照组（P=0.014）而与假手术组无统计学差异（P=0.560），术后RDN组血清NE浓度降幅大于假手术组（P=0.032）而与对照组差异不明显（P=0.080）；RDN组比格犬RI的变化与SBP、DBP、NO浓度、NE浓度的变化存在显著相关性（P < 0.05）。结论RDN可显著降低高血压犬的血压及改善动脉硬度，对动脉硬度的改善可能与交感活性和血压降低及促进NO合成有关。