lncRNA RP11-1C8.5通过结合miR-181a-5p 对糖尿病心肌细胞凋亡和增殖的影响

目的 探究长链非编码(long non-coding RNA,lncRNA)RP11-1C8.5对糖尿病心肌细胞凋亡和增殖的影响及其分子机制。方法 分别采用5.5、10.0、13.9、22.2和33.3mmol/L葡萄糖浓度的培养基培养人心肌HCM细胞24h后,实时定量聚合酶链反应(qPCR)技术检测不同葡萄糖浓度培养下HCM细胞中RP11-1C8.5的表达水平。选择RP11-1C8.5表达最高的葡萄糖浓度继续培养HCM细胞,分别感染RP11-1C8.5干扰腺病毒(实验组)和对照病毒(对照组)。流式细胞术和CCK-8法检测对照组和实验组HCM细胞的凋亡情况和细胞活力。通过生物信息学和双荧光素酶报告基因实验验证RP11-1C8.5与miR-181a-5p的结合作用。qPCR检测对照组和实验组HCM细胞中miR-181a-5p的表达水平。Western blot法检测下调RP11-1C8.5表达对凋亡相关蛋白Bax、caspase3、Bcl-2、CED-9表达的影响。结果 与正常葡萄糖浓度(5.5mmol/L)比较,在高糖培养心肌HCM细胞中RP11-1C8.5的表达水平显著增加(P＜0.01),其中在33.3mmol/L葡萄糖浓度培养HCM细胞中的表达最高(P＜0.01)。与对照组比较,实验组HCM细胞中RP11-1C8.5的表达显著降低(P＜0.01)。与对照组比较,实验组HCM细胞的凋亡率显著降低(P＜0.01),细胞活力明显增加(P＜0.05)。双荧光素酶报告基因实验证实RP11-1C8.5与miR-181a-5p存在互补结合作用(P＜0.01)。与对照组比较,实验组HCM细胞促凋亡蛋白Bax、caspase3表达降低,抗凋亡蛋白Bcl-2、CED-9表达增加。结论 下调RP11-1C8.5通过结合miR-181a-5p发挥抑制糖尿病心肌细胞凋亡和促进细胞增殖的作用。     

LncRNA XIST通过miR-193a-3p/RSF1轴对骨肉瘤细胞增殖和迁移的作用研究

目的 研究长链非编码RNA X染色体失活特异转录本(lncRNA XIST)通过miR-193a-3p/重构剪切因子1(RSF1)轴对骨肉瘤细胞增殖、迁移的作用.方法 收集2017年9月至2018年12月滨州医学院烟台附属医院30例行骨肉瘤切除术获得的癌组织和癌旁组织,RT-qPCR检测癌组织和癌旁组织中lncRNA XIS T m RN A表达.采用脂质体转染法将sh-lncRN A XIS T重组质粒、空载质粒分别转至对数期生长的骨肉瘤HOS细胞,另取未做任何处理的HOS细胞为空白组.稳定转染48 h后,CCK-8法检测各组细胞培养24、48、72 h时的吸光度(A)值,划痕实验检测培养24 h时细胞的融合距离,荧光素酶报告基因实验检测LncRNA XIST、miR-193a-3p与RSF1之间的作用关系,RT-qPCR检测lncRNA XIST、miR-193a-3p、RSF1 mRNA表达,Western blot检测RSF1蛋白表达.结果 骨肉瘤组织中lncRNA XIST mRNA表达明显高于癌旁组织,差异有统计学意义(P<0.05).空白组、空载组及实验组A值随转染时间的延长而升高,差异有统计学意义(P<0.05).与空白组和空载组比较,实验组培养24、48、72 h后A值降低,融合距离缩短,lncRNA XIST、RSF1 mRNA表达降低,miR-193a-3p mRNA表达升高,RSF1蛋白表达降低,差异有统计学意义(P<0.05).结论 敲降ln-cRNA XIST可抑制骨肉瘤细胞增殖和迁移能力,可能通过miR-193a-3p/RSF1轴发挥作用.     

lncRNA LINC00173通过调节miR-130a-5p抑制骨肉瘤发生发展的机制研究

目的探讨长链非编码RNA（lncRNA）LINC00173通过调控miR-130a-5p抑制骨肉瘤发生发展的分子机制。方法体外培养人骨肉瘤细胞系MG-63,分别将LINC00173过表达载体质粒或空载质粒转染至MG-63细胞,实时荧光定量PCR（qPCR）检测转染效率,采用细胞计数法（CCK-8）和Transwell实验分析MG-63细胞增殖、侵袭和迁移能力,双荧光素酶报告基因实验和qPCR检测LINC00173和miR-130a-5p的靶向调控关系。同时过表达LINC00173和miR-130a-5p,并检测MG-63细胞增殖、侵袭和迁移能力。结果qPCR检测结果显示,与Mock组比较,pc-LINC00173组LINC00173在MG-63细胞中的表达量明显升高（P < 0.01）。转染48 h和72 h后,pc-LINC00173组细胞增殖活力均低于Mock组和pcDNA组（P < 0.01）。Transwell检测结果显示,pc-LINC00173组与Mock组比较侵袭和迁移细胞数明显减少（P < 0.05）。LINC00173与miR-130a-5p之间存在特异性结合位点,与miR-NC组比较,转染miR-130a-5p mimics能够抑制LINC00173-Wt细胞的相对荧光素酶活性（P < 0.01）,与Mock组和pcDNA组比较,pc-LINC00173组MG-63细胞中miR-130a-5p的表达量均降低（P < 0.01）。与pc-LINC00173组和pc-LINC00173+miR-NC组比较,pc-LINC00173+miR-130a-5p组MG-63细胞中miR-130a-5p的表达明显升高,吸光度值明显升高,侵袭和迁移细胞数明显增多（P < 0.01）。结论LINC00173能够抑制骨肉瘤MG-63细胞增殖、侵袭和迁移,其作用机制可能与靶向抑制miR-130a-5p的表达有关。     

LncRNA HOTAIR靶向miR-34a-5p调节类风湿关节炎滑膜细胞凋亡的机制研究

目的:研究长链非编码RNA HOX转录反义RNA(LncRNA HOTAIR)对类风湿关节炎滑膜细胞(MH7A)凋亡的调控作用及其作用机制.方法:运用脂质体将pcDNA组(转染pcDNA)、pcDNA-HOTAIR组(转染pcDNA-HOTAIR)、antagomiRNA组(转染antagomiRNA)、antagom...     

下调lncRNA CTC-425F1.4靶向调控miR-146a-3p表达对膀胱癌细胞的增殖和侵袭的影响

目的 研究长链非编码RNA(long-chain non-coding RNA,lncRNA) CTC-425F1.4在膀胱癌组织中的表达,探讨下调CTC-425F1.4对膀胱癌细胞增殖和侵袭的影响及相关机制。方法 荧光实时定量PCR测定30例膀胱癌组织及癌旁组织、4种膀胱癌细胞株(UM-UC-3、T24、RT4、5637)和正常膀胱上皮细胞SV-HUC-1中CTC-425F1.4表达变化。在RT4细胞中分别转染CTC-425F1.4抑制剂(inhibitor组)和阴性对照序列(control组),荧光实时定量PCR检测CTC-425F1.4下调效果。CCK-8法和Transwell小室法分别检测CTC-425F1.4 inhibitor对膀胱癌细胞增殖和侵袭的影响。采用生物信息学软件预测CTC-425F1.4的靶基因,采用荧光素酶报告系统验证两者的靶向关系。荧光实时定量PCR检测CTC-425F1.4 inhibitor对膀胱癌细胞miR-146a-3p表达的影响。Western blot法检测p21、Zeb1、Vimentin、Snail蛋白的表达。结果 膀胱癌组织中CTC-425...     

lncRNA AC131056.3通过调控miR-21-5p对骨肉瘤细胞增殖和侵袭的影响

目的 探讨长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)AC131056.3对骨肉瘤细胞增殖和侵袭的作用及可能机制。方法 采用GEPIA数据库分析骨肉瘤患者总生存期和AC131056.3表达的相关性。采用qRT-PCR检测骨肉瘤细胞(Saos2、U-2OS、MG-63、143B、HOS)及正常成骨细胞hFOB1.19中AC131056.3的表达。将HOS细胞分为对照组和AC131056.3组,分别转染pcDNA质粒和pcDNA-AC131056.3质粒。CCK-8法检测HOS细胞增殖活力,Transwell实验检测HOS细胞侵袭活力,qRT-PCR检测两组HOS细胞中miR-21-5p表达,Western blot检测两组HOS细胞中PI3K/Akt/mTOR信号通路蛋白p-Akt、p-mTOR、p-PI3K、GSK-3、PDK-1表达。生物信息学和双荧光素酶报告基因法验证AC131056.3与miR-21-5p的互补关系。结果 与AC131056.3低表达的骨肉瘤患者相比,AC131056.3高表达的患者总生存期较长(P<0.01)。与hFOB1.19...     

miR-125a-5p对卵巢癌细胞的增殖迁移和侵袭能力的影响

目的探讨miR-125a-5p对卵巢癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及其作用的靶基因。方法购入正常人卵巢上皮细胞HOSEpi C,卵巢癌细胞SKOV3、A2780、ES2和HO8910各1株,通过实时定量聚合酶链式反应(RT-PCR)检测人卵巢上皮细胞HOSEpi C以及卵巢癌细胞SKOV3、A2780、ES2和HO8910中miR-125a-5p的表达水平。利用生物信息学方法预测miR-125a-5p的靶基因,构建预测靶基因3’端非编码区(3’-UTR)的野生型(WT)和突变型(mut)荧光素酶报告基因质粒,通过双荧光素酶报告基因法验证miR-125a-5p与预测靶基因的靶向作用。利用慢病毒感染的方法建立稳定过表达miR-125a-5p的SKOV3细胞,使用荧光定量PCR和Western blot检测靶基因的表达水平。利用细胞计数试剂盒-8(CCK-8)分析过表达miR-125a-5p的SKOV3细胞增殖能力的变化,通过Transwell迁移和侵袭试验分析过表达miR-125a-5p的SKOV3细胞迁移和侵袭能力的变化。结果正常人卵巢上皮细胞HOSEpi C中miR-125a-5p的表达水平高于卵巢癌细胞SKOV3、A2780、ES2和HO8910中miR-125a-5p的表达水平,其中SKOV3中miR-125a-5p的表达水平最低,差异均有统计学意义(P <0. 05),选择SKOV3进行后续实验。生物信息学分析显示,miR-125a-5p能够靶向结合Rab3D的3’-UTR;双荧光素酶报告基因分析证实miR-125a-5p能够靶向作用于Rab3D的3’-UTR。筛选稳定表达miR-125a-5p和si-Rab3D及相应对照的SKOV3细胞,分别命名为SKOV3/miR-125a-5p组,SKOV3/si-Rab3D组,SKOV3/miR-NC组和SKOV3/si-NC组。在SKOV3/miR-125a-5p组中,Rab3D的表达水平低于SKOV3组和SKOV3/miR-NC组,差异均有统计学意义(P <0. 05)。细胞增殖能力检测结果显示,与SKOV3组和SKOV3/miR-NC组相比,SKOV3/miR-125a-5p组在72小时和96小时细胞增殖能力降低,差异有统计学意义(P <0. 05)。Transwell迁移和侵袭试验结果显示,SKOV3/miR-125a-5p组分别与SKOV3组和SKOV3/miR-NC组相比,细胞迁移和侵袭能力均显著下降,差异有统计学意义(P <0. 05)。结论 miR-125a-5p能够靶向作用Rab3D,抑制卵巢癌细胞的增殖、迁移和侵袭。     

低表达lncRNA RP11-316M1.12通过上调miR-138-5p抑制膀胱癌细胞的侵袭和迁移

目的 探讨RP11-316M1.12对膀胱癌细胞侵袭、迁移、上皮间充质转化等恶性生物学行为的影响及相关机制.方法 lncRNAs from cancer arrays(lnCAR)数据库分析RP11-316M1.12在膀胱癌和癌旁组织中的表达水平.荧光实时定量聚合酶链反应(fluorescence quantitati...     

上调lncRNA CTA-246H3.12通过调节miR-515-5p 抑制鼻咽癌细胞的增殖和侵袭

目的 探讨长链非编码RNA(lncRNA) CTA-246H3.12在鼻咽癌组织和细胞系中的表达,研究上调CTA-246H3.12影响鼻咽癌细胞增殖和侵袭的分子机制。方法 qPCR分别检测CTA-246H3.12在鼻咽癌组织和鼻咽癌细胞系中的表达。选取CTA-246H3.12表达量最低的细胞系,分别转染阴性质粒或表达CTA-246H3.12的质粒,定义为阴性对照组和CTA-246H3.12组。MTT法和Transwell侵袭实验分别检测上调CTA-246H3.12对细胞增殖和侵袭能力的影响。生物信息学方法预测CTA-246H3.12的靶基因。qPCR和Western blot法分别检测上调CTA-246H3.12对靶基因表达的影响。结果 与慢性鼻咽炎组织比较,CTA-246H3.12在鼻咽癌组织表达下调(P<0.01)。与人永生化鼻咽上皮细胞比较,CTA-246H3.12在鼻咽癌细胞系表达下调(P<0.05),CTA-246H3.12在C666-1细胞中的表达量最低(P<0.01)。与阴性对照组比较,CTA-246H3.12组C666-1细胞的增殖能力显著降低(P<0.05),细胞侵袭能力显著降低(P<0.01)。CTA-246H3.12的靶基因可能是miR-515-5p,miR-515-5p的靶基因可能是尾侧型同源盒转录因子1(CDX1)。与阴性对照组比较,CTA-246H3.12组C666-1细胞中miR-515-5p表达显著降低(P<0.01),CDX1在mRNA和蛋白水平的表达显著增加。结论 CTA-246H3.12在鼻咽癌组织及细胞系中表达下调,上调CTA-246H3.12可明显抑制鼻咽癌C666-1细胞的增殖和侵袭能力,其分子机制可能是通过抑制miR-515-5p的表达,间接促进CDX1基因的表达。     

LncRNA SNHG7靶向调节miR-146a-5p对胃癌细胞增殖、迁移、侵袭和细胞凋亡的影响

目的:探讨长链非编码RNA小核仁RNA宿主基因7(lncRNASNHG7)对胃癌细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡的影响及其分子机制.方法:培养人正常胃黏膜上皮细胞GES-1和胃癌细胞NCI-N87、Hs-746T、NCI-SNU-16;将si-NC、si-SNHG7分别转染至 NCI-N87细胞中,记为 si-NC 组、si...     

LncPANDAR通过靶向miR-637调控甲状腺癌增殖、转移的机制研究

目的：探究长链非编码RNA PANDAR（long-chain non-coding RNA PANDAR,PANDAR）促进甲状腺癌生长转移的分子机制。方法：首先运用实时荧光定量PCR测定甲状腺癌患者血清和癌组织中PANDAR表达情况,再通过MTT、流式、Tran－swell等方法测定PANDAR对甲状腺癌细胞生长、凋亡、迁移能力的影响,通过双荧光素酶报告基因实验确定PANDAR的作用靶点为miR-637,最后再测定miR-637在PANDAR对甲状腺癌细胞生长、凋亡和迁移能力中的作用。结果：PANDAR在甲状腺癌患者血清和癌组织中表达明显升高,且PANDAR能明显促进细胞生长和迁移,并抑制细胞凋亡,且PANDAR的作用靶点为miR-637,miR-637能逆转PANDAR诱导的细胞增殖、转移和凋亡减少。结论：PANDAR通过靶向miR-637调节甲状腺癌的增殖和转移。     

lncRNA MIR34AHG通过miR-296-5p/SRCIN1轴影响喉癌细胞的恶性生物学行为

目的 探讨长链非编码RNA(lncRNA) MIR34AHG通过miR-296-5p/SRCIN1轴对喉癌细胞增殖和迁移的作用。方法 qPCR检测MIR34AHG在喉癌细胞系(TU686、Hep-2、TU177、AMC-NH-8、TU212)以及支气管上皮细胞系(16HBE)中的表达。选取MIR34AHG表达最低细胞系,分别构建MIR34AHG过表达细胞系(MIR34AHG组)和对照细胞系(对照组)。MTT法、细胞划痕实验分别检测上调MIR34AHG对细胞增殖和迁移的影响。生物信息学工具预测MIR34AHG的靶基因,双荧光素酶报告基因实验检测MIR34AHG与靶基因之间的相互作用。qPCR和Western blot法检测上调MIR34AHG对相关基因和蛋白表达的影响。结果 与16HBE细胞比较,喉癌细胞系中MIR34AHG呈低表达(P<0.01),且以TU686细胞中表达最低(P<0.01)。与对照组比较,MIR34AHG过表达抑制TU686细胞的增殖和迁移(P<0.05)。MIR34AHG和miR-296-5p之间存在靶向关系(P<0.01),miR-296-5p的靶基因可能是SRCIN1。与对照组比较,MIR34AHG过表达抑制miR-296-5p表达(P<0.01),促进SRCIN1基因的表达(P<0.01)。结论 MIR34AHG可能通过下调miR-296-5p的表达、上调SRCIN1的表达从而抑制喉癌细胞的增殖和迁移。     

miR-30a-5p对肺癌细胞增殖与迁移的影响及其机制

研究miR-30a-5p 对非小细胞肺癌（NSCLC）增殖和迁移的影响,并探讨其调控机制。方法NSCLC A549细胞系分成两组,miR-30a-5p组和对照组,分别转染miR-30a-5p mimics和microRNA scramble,MTT实验及细胞划痕实验分别测定两组细胞增殖和迁移能力,实时聚合酶链反应（real time-PCR）和蛋白免疫印迹法（Western blot）分别测定两组泛素蛋白连接酶（UBE3C）mRNA 和蛋白质表达水平。结果培养48 h后,miR-30a-5p 组相对活细胞百分比低于对照组[（203.7±16.8）% vs（330.4±20.7）%（p =0.000）];培养72 h后,miR-30a-5p组相对活细胞百分比（258±30.2）%,对照组相对活细胞百分比（403.4±28.4）%,miR-30a-5p组相对活细胞百分比低于对照组（p =0.001）。细胞划痕实验示：miR-30a-5p组划痕愈合率为（23.2±2.7）%,对照组划痕愈合率为（89.2±4.8）%,miR-30a-5p 组划痕愈合率低于对照组（p =0.000）。real time-PCR显示,miR-30a-5p 组UBE3C mRNA 表达水平为（0.15±0.02）,对照组UBE3C mRNA 表达水平为（1.03±0.09）,miR-30a-5p组UBE3C mRNA表达水平低于对照组（p =0.000）;Western blot显示,miR-30a-5p组UBE3C 蛋白表达水平为（1.57±0.26）,对照组UBE3C 蛋白表达水平为（5.32±0.42）,miR-30a-5p 组UBE3C 蛋白表达水平低于对照组（p =0.000）。结论miR-30a-5p抑制NSCLC 增殖和迁移,其机制与下调UBE3C表达有关。     

miR-33a-3p通过调控EphA2影响结直肠癌化疗耐药

摘要:目的 探讨微小 RNA-33a-3p(miR-33a-3p)对结直肠癌化疗耐药的影响及其调控机制。方法 实时荧光定量 PCR(qRT-PCR)法检测结直肠癌亲本株(HCT8)及耐药细胞株(HCT8/5-Fu及 HCT8/DDP)中 miR-33a-3p的表达。构 建 miR-33a-3p模拟物和阴性对照转染至结直肠癌耐药细胞后检测细胞增殖、凋亡、周期分布及化疗敏感性变化,运用生 物信息学方法预测 miR-33a-3p的靶基因,运用qRT-PCR和 Westernblot检测过表达 miR-33a-3p对下游靶基因 EphA2 的影响。结果 结直肠癌耐药细胞系中 miR-33a-3p的表达显著低于亲本株(均 P<0.01)。与阴性对照组相比,过表达 miR-33a-3p的耐药细胞增殖能力降低,细胞凋亡增加,细胞于 G2/M 周期阻滞,化疗敏感性增强(均 P<0.05)。生物信 息学预测结果显示 EphA2可能为 miR-33a-3p的下游靶基因。当过表达 miR-33a-3p时,耐药细胞 EphA2表达明显降 低。结论 miR-33a-3p可能通过调控下游靶基因 EphA2的水平逆转结直肠癌化疗耐药。     

LncRNA CCAT2/miR-145/p70S6K1分子轴调控口腔鳞癌细胞侵袭转移

目的研究长链非编码RNA CCAT2(CCAT2)、microRNA-145（miR-145）和p70S6K1 在口腔鳞细胞癌（Oral squamous cell carcinoma,OSCC）组织中的表达水平,并探讨CCAT2/miR-145/p70S6K1 分子轴对OSCC 细胞侵袭迁移的影响。方法 收集2018 年1 月～2019 年6 月在我院进行手术治疗的52 对OSCC 组织和癌旁正常组织,通过实时荧光定量PCR 检测CCAT2、miR-145 和p70S6K1 的相对表达水平。敲低OSCC 细胞中CCAT2 和p70S6K1 的表达,并通过Transwell 实验检测OSCC 细胞侵袭迁移的改变。结果 CCAT2 和p70S6K1 在OSCC 组织中表达显著高于癌旁正常组织（P＜0.05）,而miR-145 在OSCC 组织中表达显著低于癌旁正常组织（P＜0.05）。双荧素酶基因报告实验显示,miR-145 靶向抑制OSCC 细胞中CCAT2 和p70S6K1 的表达。敲低CCAT2 抑制OSCC 细胞体外迁移和侵袭,抑制miR-145 和促进p70S6K1 的表达,而miR-145-inhibitor 上调敲低CCAT2 的OSCC 细胞中p70S6K1的表达。此外,敲低p70S6K1 抑制OSCC 细胞体外迁移和侵袭。结论 LncRNA CCAT2/miR-145/p70S6K1 可以调控OSCC 细胞侵袭迁移,在OSCC 体内转移中发挥作用,是治疗OSCC 的潜在靶点。