佐剂对日本血吸虫31／32kDa蛋白保护性免疫力的影响

本实验用纯化的日本血吸虫３１／３２ｋＤａ蛋白辅以ｐｏｌｙａｌｐｈａｏｌｅｆｉｎ（ｐａｏ）佐剂免疫小鼠，同时比较了Ｓｊ３１／３２蛋白辅以福氏完全佐剂对小鼠保护性免疫力的影响。     

日本血吸虫成虫31／32kDa蛋白的纯化及保护性免…

本文采用制备型聚丙烯酰胺凝胶电泳和电渗析方法分离纯化日本血吸虫成虫３１／３２ｋＤａ蛋白（Ｓｊ ３１／３２蛋白）。ＳＤＳ－ＰＡＧＥ、免疫印迹试验和酶联免疫吸附试验检测结果表明采用该方法分离纯化的Ｓｊ ３１／３２蛋白纯度高，且具有较高的活性。用纯化的Ｓｊ ３１／３２蛋白加福氏佐剂免疫的小鼠，不仅可减少虫负荷（减虫率２８。１％），还可降低血吸虫成虫的产卵量（减卵率７１。４％），抑制虫卵肉芽肿的形成。结果     

两种佐剂对日本血吸虫重组抗原SjGST-Sj32保护效果的影响

目的 比较弗氏完全佐剂（ＦＣＡ）与单磷脂Ａ（ＭＰＬ）的免疫增强作用,为提高重组ＳｊＧＳＴ－Ｓｊ３２（ｒＳｊＧＳＴ－Ｓｊ３２）的疫苗效果提供依据。方法 ｒＳｊＧＳＴ－Ｓｊ３２加弗氏完全佐剂（ｒＳｊＧＳＴ－Ｓｊ３２＋ＦＣＡ）或单磷脂Ａ（ｒＳｊＧＳＴ－Ｓｊ３２＋ＭＰＬ）免疫小鼠３次,ＥＬＩＳＡ法检测抗体水平,用减虫率及减卵率表示保护性作用。结果 与ＰＢＳ对照组相比,ｒＳｊＧＳＴ－Ｓｊ３２加ＦＣＡ或ＭＰＬ     

重组IFN-γ用作reSj26kDaGST佐剂的实验观察

目的探讨重组ＩＦＮ－γ用作血吸虫抗原佐剂的可能性。方法用ｒｅＳｊ２６ＧＳＴ加鼠重组ＩＦＮ－γ,ｒｅＳｊ２６ＧＳＴ加福氏佐剂以及ＩＦＮ－γ分别免疫ＢＡＬＢ／ｃ 小鼠,攻击感染后４５ｄ解剖小鼠,比较各组小鼠成虫检获数及克肝卵数。结果ＩＦＮ－γ／ＧＳＴ组小鼠的减虫率和减卵率均略高于ＦＣＡ／ＧＳＴ组。结论ＩＦＮ－γ可以增强ｒｅＳｊ２６ＧＳＴ保护性免疫效果,初步提示ＩＦＮ－γ可作为血吸虫抗原佐剂使用。     

重组IFN—γ作用reSj26kDaGST佐剂的实验观察

目的 探讨重组ＩＦＮ－γ用作血吸虫抗原佐剂的可能性。方法 用ｒｅＳｊ２６ＧＳＴ 加鼠重组ＩＦＮ－γ，ｒｅＳｊ２６ＧＳＴ加福氏佐剂以及ＩＦＮ－γ分别免疫ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠，攻击感染后４５ｄ解剖小鼠，比较各上鼠成虫检获数及克肝数。结果 ＩＦＮ－γ／ＧＳＴ组小鼠的减虫率和减卵率均略高于ＦＣＡ／ＧＳＴ组。结论 ＩＦＮγ可以增强ｒｅＳｊ２６ＧＳＴ保护性免疫效果，初步提示ＩＦＮ－γ可作为血吸虫抗原佐剂使用。     

IL—12对血吸虫重组SjGST—Sj32蛋白保护性免疫效果的影响

为进一步提高重组ＳｊＧＳＴ－Ｓｊ３２（ｒＳｊＧＳＴ－Ｓｊ３２）的免疫保护作用,用ＩＬ－１２作为佐剂进行免疫增强效果的观察。在０、２、６周用ｒＳｊＧＳＴ－Ｓｊ３２经皮下免疫小鼠３次,攻击感染后１、３、５、７、９ｄ经腹腔注射佐剂ＩＬ－２,用减虫率及减卵率表示保护性免疫力。结果与ＰＢＳ对照组相比,ｒＳｊＧＳＴ－Ｓｊ３２／ＩＬ－１２组减虫率为３８．２％（Ｐ〈０．０１）,每克肝卵数（ＬＥＰＧ）减少率为７５．１％（Ｐ〈０．０１）,每雌肝卵数（ＬＥＰＦ）减少率为７２．９％（Ｐ〈０．０１）;与单独注射ｒＳｊＧＳＴ－Ｓｊ３２组相比,ｒＳｊＧＳＴ－Ｓｊ３２／ＩＬ－１２组减虫率为２６．８％（Ｐ〈０．０５）,ＬＥＰＧ减少率为７２．５％（Ｐ〈０．０１）,ＬＥＰＦ减少率为６６．２％（Ｐ〈０．０５）。表明ＩＬ－１２作为佐剂,可同时增强ｒＳｊ     

重组日本血吸虫中国大陆株脂肪酸结合蛋白的动物免疫试验

目的观察重组日本血吸虫中国大陆株脂肪酸结合蛋白（ｒＳｊ１４ＦＡＢＰ）免疫动物所诱导的免疫保护效果。方法用ｒＳｊ１４ＦＡＢＰ分别对昆明系小鼠、Ｗｉｓｔａｒ大鼠及绵羊进行３次免疫,于第３次免疫后２周,分别用４０、６００、及３００条尾蚴攻击,于攻击后６～８周剖杀小鼠和大鼠,１１周剖杀绵羊,观察各实验组的减虫率及绵羊免疫组的组织、粪便减卵率。结果在小鼠试验中,以ＢＣＧ为佐剂进行皮内免疫获得３３． ７％的减虫率（Ｐ＜０．０５）,明显高于以 ＦＣＡ／ＦＩＡ为佐剂进行肌肉免疫所获得的减虫率４．７％（Ｐ＞０．０５）。用ｒＳｊ１４ＦＡＢＰ皮内免疫大鼠,获得的减虫率为３１．９％,但和对照组相比无显著性差异。用ｒＳｊ１４ＦＡＢＰ皮内免疫绵羊,减虫率为５９．２％（Ｐ＜０．０１）,同时,自攻击后第６周至１１周,绵羊免疫组粪便中平均每克虫卵数（ＥＰＧ）分别比对照组减少２３．６％～６３．３％,第１１周解剖时,肝组织ＥＰＧ减少４４．９％,小肠ＥＰＧ减少６９．６％,大肠ＥＰＧ未见减少。结论ｒＳｊ１４ＦＡＢＰ能诱导抗日本血吸虫攻击感染的部分保护作用,值得作为抗日本血吸虫候选疫苗抗原进一步探讨。     

重组日本血吸虫中国大陆株脂肪酸结合蛋白的动物免 …

目的 观察重组日本血吸虫中国大陆株脂肪酸结合蛋白（ｒＳｊ１４ＦＡＢＰ）免疫动物所诱导的免疫保护效果。方法 用ｒＳｊ１４ＦＡＢＰ分别对昆明系小鼠、Ｗｉｓｔａｒ大鼠及绵羊进行３次免疫，于第３次免疫后２周，分别用４０、６００、及３００条尾蚴攻击，于后６￣８周剖杀小鼠和在鼠，１１周剖杀绵羊，观察各实验组的减虫率及绵羊 组织、粪例减卵率。结果 在小鼠试验中，以ＢＣＧ为佐剂进行皮内免疫获得３３．７％的减虫率，     

不同剂量日本血吸虫裸露DNA疫苗pCDSj32诱发小鼠保护 …

应用已构建的日本血吸虫裸露ＤＮＡ疫苗ｐＣＳＳｊ３２经骨骼肌免疫小鼠，获得了较好的保护性免疫效果，１００μｇ和２００μｇ ｐＣＤＳｊ３２免疫后，减成虫率分别为５２．４３％和３６．４７％；肝组织减卵率分别为５４．１９％和５７．７９％；并对各组小鼠肝脏虫卵肉芽肿的面积进行了测量。结果表明，ｐＣＤＳｊ３２免疫小鼠后可减少虫荷，降低血吸虫的产卵量，抑制肝脏虫卵肉芽肿的形成。     

不同剂量日本血吸虫裸露DNA疫苗pCDSj32诱发小鼠保护性免疫力的初步研究

应用已构建的日本血吸虫裸露ＤＮＡ疫苗ｐＣＤＳｊ３２经骨骼肌免疫小鼠，获得了较好的保护性免疫效果。１００μｇ和２００μｇｐＣＤＳｊ３２免疫后，减成虫率分别为５２．４３％和３６．４７％；肝组织减卵率分别为５４．１９％和５７．７９％；并对各组小鼠肝脏虫卵肉芽肿的面积进行了测量。结果表明，ｐＣＤＳｊ３２免疫小鼠后可减少虫荷，降低血吸虫的产卵量，抑制肝脏虫卵肉芽肿的形成。     

重组日本血吸虫脂肪酸结合蛋白在不同佐剂条件下的免疫效果观察

目的观察重组日本血吸虫脂肪酸结合蛋白在几种佐剂条件下的免疫预防效果。方法用E.coli表达日本血吸虫脂肪酸结合蛋白基因,制备日本血吸虫脂肪酸结合蛋白与GST的重组融合蛋白(rSj14/GST),分别以福氏完全佐剂(FCA)/福氏不完全佐剂(FIA)、卡介苗(BCG)和免疫刺激复合物(ISCOM)作为佐剂免疫昆明系小鼠,比较攻击感染后的减虫效果。结果以BCG为佐剂皮内免疫和以ISCOM为佐剂皮下免疫分别诱导了34.3%和36.0%的减虫率;而以FCA/FIA为佐剂进行免疫,虽然诱导了较高的抗体反应,但几乎没有产生明显的减虫效果(8.5%)。结论BCG和ISCOM均是rSj14/GST的适宜佐剂。     

日本血吸虫成虫31/32 kDa蛋白的纯化及保护性免疫力的研究

本文采用制备型聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和电渗析方法分离纯化日本血吸虫成虫 31/32 kDa 蛋白(Sj 31/32蛋白)。SDS-PAGE、免疫印迹试验(EITB)和酶联免疫吸附试验(ELISA)检测结果表明采用该方法分离纯化的 Sj 31/32 蛋白纯度高,且具有较高的活性。用纯化的 Sj 31/32 蛋白加福氏佐剂免疫的小鼠,不仅可减少虫负荷(减虫率 28.1％),还可降低血吸虫成虫的产卵量(减卵率 71.4％),抑制虫卵肉芽肿的形成。结果提示:Sj 31/32 蛋白具有较高的减卵率,可望作为混合多价疫苗候选组分。     

日本血吸虫成虫31/32kD抗原诱导小鼠产生抗卵免疫的初步研究

本文采用超凝胶柱层析法分离纯化日本血吸虫31/32kD抗原.免疫小鼠诱导保护性免疫力.结果表明,这种保护性免疫力仅有抗卵效果,无抗成虫作用.31/32kD免疫小鼠后可使小鼠粪卵减少63.8%—78.3%;雌虫子宫内虫卵降低53.2%;肝、肠中死卵量明显增加,说明31/32kD抗原可诱导小鼠产生抗卵免疫干扰虫卵形成,加速虫卵死亡,提示它可能是一种有希望的抗血吸虫病理疫苗的候选抗原.     

日本血吸虫31kDa组织蛋白酶B DNA疫苗保护性免疫效果观察

目的观察日本血吸虫31kDa组织蛋白酶BDNA疫苗(Sj31B1N)在小鼠体内的保护性免疫效果.方法用Sj31B1N和Sj31B1N+pUCDNA疫苗肌注免疫BALB/C小鼠,用空白质粒载体VR1012做对照,在0、4、8周共免疫3次,每次免疫前及末次免疫后4周从尾静脉采血收集血清,经ELISA法检测小鼠血清抗体升高时,用日本血吸虫尾蚴攻击感染小鼠.结果Sj31B1N和Sj31B1N+pUC减虫率分别为24.2%和22.0%;肝卵减少率分别为34.9%和39.5%,每雌肝卵减少率分别为30.4%和35.3%.结论小鼠接种Sj31B1N后对日本血吸虫感染有减虫、减卵作用及抗雌虫生殖的作用.加质粒佐剂pUC未见有增强免疫效果的作用.     

日本血吸虫(大陆株)14-3-3 epsilon同型信号转导蛋白诱导小鼠保护性免疫的研究

目的：探索日本血吸虫新的疫苗候选分子对小鼠的保护性免疫效果。方法：利用已构建的真核表达质粒pBK-Sj14-3-3在大肠杆菌ＢＬ２１内表达的日本血吸虫（大陆株）14－3－3epsilon同型融合蛋白质，免疫6周龄BALB／c雌性小鼠，免疫3次，每次间隔2周，第3次免疫后2周感染尾蚴。42d后剖杀小鼠，计算其减虫率和肝减卵率。结果：各免疫组与对照组相比，均获得了部分抗血吸虫保护性免疫力，第1、2、3各免疫组的减虫率分别为32．7％（P＜0．05）、30．7％（P＜0．05）、27．5％（P＜0．05）；其肝减卵率分别是48．5％（P＜0．05）、43．1％（P＜0．05）、28．2％（P＜0．05）。结论：首次证明日本血吸虫14－3－3epsilon同型重组融合蛋白可诱导小鼠抗血吸虫感染的部分保护性免疫力。     

重组日本血吸虫铁蛋白诱导小鼠保护性免疫的研究

目的 用重组日本血吸虫铁蛋白免疫小鼠,观察抗血吸虫的免疫保护作用。方法 用重组的日本血吸虫铁蛋白（ＧＭ－ＣＳＦ－ＳｊＦｅｒｒｉｔｉｎ）免疫小鼠,经皮下免疫３次,在第３次免疫后４周,经腹部感染日本血吸虫尾蚴４０条或５０条,４５ｄ后杀鼠,观察减虫效果。结果 用ＧＭ－ＣＳＦ－ＳｊＦｅｒｒｉｔｉｎ,ＩＬ－１２＋ＧＭ－ＣＳＦ－ＳｊＦｅｒｒｉｔｉｎ和ＦＣＡ＋ＧＭ－ＣＳＦ－ＳｊＦｅｒｒｉｔｉｎ免疫小鼠分别获得２     

日本血吸虫Mf1和胞质氨基肽酶基因的亚克隆表达与免疫保护效果测定

目的　在大肠杆菌中高效表达日本血吸虫 (Schistosomajaponicum ,Sj)Mf1蛋白和胞质氨基肽酶 (cytosolaminopeptidase ,CA) ,并对表达产物进行免疫保护效果测定。 方法　将SjMf1基因和SjCA基因亚克隆至 pGEX - 5X - 3载体 ,转化入感受态大肠杆菌ER2 688,在IPTG诱导下进行表达 ,表达产物免疫小鼠 ,免疫用抗原剂量为 50 μg/次 /鼠 ,免疫 3次后进行攻击感染 ,观察诱导产生的减虫效果。结果　在IPTG诱导下 ,表达载体中的SjGST基因与重组的SjMf1基因和SjCA基因在大肠杆菌中获得了高效表达 ,形成SjGST -Mf1和SjGST -CA融虫蛋白 ,用这两种融合蛋白免疫小鼠 ,分别诱导产生了 39 1 5 %和 2 6 57%的减虫率。结论　SjMf1和SjCA基因亚克隆至pGEX - 5X - 3载体后可在大肠杆菌中高效表达 ,表达产物能诱导小鼠产生一定程度的抗Sj保护性免疫力     

日本血吸虫多价分子疫苗的保护性免疫力研究

本实验将从日本血吸虫成虫分离纯化出的２８ｋＤａ、３１／３２ｋＤａ及９７ｋＤａ蛋白混合组成多价分子疫苗免疫小鼠,再行攻击感染,观察其保护性免疫力。结果：疫苗加佐剂组成虫减虫率、肝组织减卵率及肠壁组织减卵率分别为５０．３％、７２．０％和８１．５％,均显著高于对照组（Ｐ＜０．０１）;实验组肝虫卵肉芽肿较对照组炎症反应程度轻,虫卵肉芽肿周长及面积均低于对照组（Ｐ＜０．０１）。结果提示,由日本血吸虫成虫２８ｋＤａ、３１／３２ｋＤａ及９７ｋＤａ蛋白联合组成的多价分子疫苗,具有较高的减虫率、减卵率及抑制虫卵肉芽肿形成的作用,有一定的应用前景     

日本血吸虫Sj-Ts1基因的亚克隆表达与免疫保护效果测定

在大肠杆菌中高效表达日本血吸虫 (Schistosomajaponicum ,Sj)Sj -Ts1融合蛋白并测定其免疫保护效果。将Sj-Ts1基因亚克隆至 pGEX - 5X - 3原核载体 ,转化入大肠杆菌ER2 5 6 6 ,并用IPTG对该重组菌进行诱导表达中。将此表达产物进行WesternBlot分析后免疫小鼠 ,免疫剂量为 10 0 μg/次 /鼠。并设蛋白佐剂对照和PBS对照。免疫三次后进行攻击感染 ,计数虫负荷及肝卵负荷。在IPTG诱导下 ,亚克隆至 pGEX - 5X - 3的Sj-Ts1基因在大肠杆菌内高效表达融合蛋白SjGST -Ts1,用此融合蛋白免疫小鼠 ,能诱导产生 2 4 16 %的减虫率和 4 8 74 %的减卵率。Sj-Ts1基因亚克隆至 pGEX -5X - 3载体后可在大肠杆菌中高效表达 ,表达产物可诱导小鼠产生一定程度的抗Sj保护性免疫力。