河豚毒素对缺血再灌注大鼠心肌细胞凋亡及相关蛋白表达的影响

目的 研究河豚毒素（TTX）心脏停搏液对缺血再灌注大鼠心肌细胞凋亡及凋亡相关蛋白表达的影响。     

河豚毒素对缺血再灌注大鼠心肌细胞凋亡及相关蛋白表达的影响

目的研究河豚毒素（TTX）心脏停搏液对缺血再灌注大鼠心肌细胞凋亡及凋亡相关蛋白表达的影响。方法取Wistar大鼠24只,建立Langendorff-Neely离体心脏灌注模型,随机分为3组（n=8）：基础组、STH-2组、TTX组。用TUNEL法检测心肌细胞凋亡指数,免疫组化测定凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、p53的表达,Westernblot检测Bcl-2蛋白表达。结果STH-2组凋亡指数（AI）（11.20±0.79）%高于TTX组（6.92±1.10）%和基础组（1.34±0.23）%（P〈0.01）。TTX组Bcl-2的PEI为（22.63±1.10）%高于STH-2组（13.51±0.67）%和基础组（2.52±0.58）%（P〈0.01）;STH-2组Bax的PEI为（8.04±0.57）%高于TTX组（6.05±0.46）%和基础组（2.14±0.57）%（P〈0.01）。TTX组Bcl-2/Bax为3.78±0.41高于STH-2组1.75±0.15（P〈0.01）。TTX组Bcl-2的相对蛋白含量为（86.1±0.98）%高于STH-2组（53.2±1.76）%和基础组（23.7±2.61）%（P〈0.01）。p53蛋白在各组均未见明显阳性表达。结论与STH-2比较,TTX能减少缺血再灌注大鼠心肌细胞凋亡数,其抗凋亡的机制可能与上调Bcl-2表达,下调Bax表达,提高Bcl-2/Bax比值有关。     

芹菜素对大鼠缺血/再灌注心肌细胞凋亡及相关蛋白Bcl-2、Bax、Caspase-3表达的影响

目的探讨黄酮类化合物芹菜素对大鼠实验性心肌缺血/再灌注(ischemia/reperfusion,I/R)时心肌细胞凋亡与Bcl-2、Bax、Caspase-3蛋白表达的影响,并分析心肌组织病理学损伤程度。方法采用结扎左冠状动脉前降支,心肌缺血45 min,再灌注2 h制作缺血/再灌注模型。将大鼠随机分为8组,即正常组(normal group,Normal)、假手术组(sham oper-ation group,Sham)、生理盐水缺血/再灌注组(saline ischemi-a-reperfusion group,NS)、溶剂对照组(solvent control group,Sol)、美托洛尔对照组(metoprolol control group,Meto)、芹菜素低、中、高剂量(1、2、4 mg.kg-1)用药组(apigenin low,medium and high dose treatment group,Api1,Api2,Api4)。再灌注2 h后迅速取出心脏,TUNEL法原位标记凋亡的心肌细胞;免疫组化法测Bcl-2、Bax和Caspase-3蛋白表达;做病理组织切片检查心肌损伤情况。结果芹菜素各剂量组心肌细胞凋亡率明显低于NS组(P<0.05),Api1,Api2,Api4能剂量依赖性地降低大鼠缺血/再灌注心肌细胞凋亡率;芹菜素各剂量组剂量依赖性地提高大鼠心肌缺血/再灌注的Bcl-2蛋白表达量(P<0.05)、降低大鼠心肌缺血/再灌注的Bax、Caspase-3蛋白表达量(P<0.05);芹菜素各剂量组与NS组比较,心肌组织损伤的病理学变化明显减轻(P<0.05)。结论芹菜素对缺血/再灌注心肌的保护效应可能与其抑制缺血/再灌注心肌细胞凋亡有关;芹菜素抗心肌凋亡作用的机制可能与其上调Bcl-2蛋白表达和下调Bax、Caspase-3蛋白表达有关;芹菜素能明显减轻心肌组织损伤。     

环孢素 A对心肌缺血再灌注 Fas／Fas L蛋白表达及心肌细胞凋亡的影响

目的：探讨环孢素A （CSA ）对心肌缺血再灌注大鼠Fas／FasL蛋白表达的影响及CSA对心肌细胞的保护作用。方法选取30只SD大鼠随机分为假性手术组（S组）、缺血在灌注组（IR组）、CSA预处理组（CSA组）,每组各10只,CSA组给予每天10 mg／kg的CSA与腹腔内注射,10 d后建立大鼠心肌缺血再灌注模型,IR组及CSA组结扎左冠状动脉前降肢30 min后复灌注3 h ,S组仅行穿线处理,不进行结扎。分别于结扎前（T0）、再灌注即刻（T1）、30 min（T2）、60 min（T3）、90 min（T4）、120 min（T5）采用ELISA测定各组大鼠血清超敏肌钙蛋白I（cT‐nI）、肌酸激酶同工酶（CK‐MB）水平。于试验结束后采用流式细胞仪测定各组大鼠血清心肌细胞凋亡率、钙调神经磷酸酶（CaN）活性,采用免疫组织化学法测定Fas／FasL蛋白水平。结果与T0,IR组、CSA组T1～ T5时段cTnI、CK‐MB水平显著升高（ P＜0．05）。与 S 组相比,IR 组、CSA 组 T1～ T5时段 cTnI、CK‐MB 水平显著升高（P＜0．05）。CSA组T1～T5时段cTnI、CK‐MB水平显著低于IR组（P＜0．05）。与IR组,CSA组心肌缺血再灌注后心肌细胞凋亡率、CaN活性及Fas／FasL蛋白水平显著下降（P＜0．05）。结论 CSA预处理心肌缺血再灌注大鼠可通过抑制CaN信号降低大鼠心肌梗死面积,同时能有效减少Fas／FasL蛋白表达,延缓心肌细胞缺血再灌注损伤,具有保护心肌细胞作用。     

依那普利干预对缺血-再灌注大鼠模型心肌细胞凋亡Bcl-2和Bax基因蛋白表达的影响

目的探讨依那普利干预对缺血再灌注大鼠模型心肌细胞凋亡Bcl-2和Bax基因蛋白表达的影响。方法雄性Wistar大鼠45只,随机分成3组:①缺血-再灌注(I/R)组15只,结扎左冠状动脉45min,松解4h,结扎前15min以及再灌注1h分别静脉注射生理盐水2ml/kg。②依那普利组(L)组15只:结扎左冠状45min,松解4h,结扎前15min以及再灌注1h分别静脉注射依那普利10mg/kg(依那普利以5mg/kg溶于生理盐水)。③假手术(C)组15只,冠状动脉下穿线不结扎,持续4.75h股静脉注射生理盐水2ml/kg。于实验结束时,取出心脏于4%多聚甲醛固定、石蜡包埋切片,按TUNEL法检测凋亡细胞,以S-P免疫组化法检测Bcl-2和Bax基因蛋白表达。结果①I/R组和L组标本中分别有13例和11例心肌细胞发生凋亡,L组凋亡细胞百分数较I/R组明显减少,差异具有高度显著性(P<0.05)。C组15例样本中12例均未检测到TUNEL阳性细胞。②L组Bcl-2表达较I/R组和C组均增强,L组Bax阳性心肌细胞较I/R组明显减少(P<0.05)。结论缺血-再灌注心肌细胞存在明显的凋亡现象,且受Bax蛋白与Bcl-2基因蛋白下调影响,Bax蛋白与Bcl-2蛋白共同调节心肌细胞凋亡,依那普利干预可诱导心肌细胞表达Bcl-2,减少心肌细胞凋亡。     

复方温心汤对缺血再灌注心肌细胞凋亡及相关基因的影响

为研究中药复方温心汤预处理对家兔缺血再灌注损伤心肌细胞凋亡和凋亡抑制基因Bcl-2mRNA、凋亡刺激基因Fas mRNA表达的影响，采用TUNEL法和原位杂交法测定家兔缺血再灌注心肌细胞凋亡和Bcl-2mRNA及Fas mRNA的表达。结果表明，缺血预适应组、温心汤预处理组的心肌细胞凋亡率比缺血再灌注损伤组明显减少(P&;lt;0．01)；缺血预适应组、温心汤预处理组心肌细胞Bcl-2 mRNA的阳性表达明显增强，Fas mRNA的阳性表达明显较低，与缺血再灌注组相比差异有显著意义(P&;lt;0．05)。结论：复方温心汤可能是通过激发机体内源性保护作用，模拟缺血预适应而减轻缺血再灌注心肌细胞的凋亡程度，对实验性家兔心肌缺血再灌注损伤的保护作用通过预处理的途径产生的。     

二甲双胍对心肌缺血再灌注大鼠心肌细胞凋亡的影响

摘 要 目的：探讨二甲双胍对心肌缺血再灌注大鼠心肌凋亡的影响。方法: 采用结扎冠脉前降支30 min,再灌注2 h的方法制备大鼠心肌缺血再灌注模型,随机分为正常对照（NC）组、假手术（Sham）组、缺血再灌注（IR）组、二甲双胍高（HD）、中（MD）、低（LD）3个剂量组（150,300,500 mg·kg-1）,每组10只,于建模前3 d至处死前每天灌胃给药,TUNEL法检测心肌细胞凋亡,RT PCR法检测心肌组织中HIF 1α基因表达,Western blot法检测心肌组织中Fas、Bcl 2、Bax和caspase 3蛋白表达。结果: 与IR组相比,LD组、MD组和HD组大鼠24 h和7 d时心肌细胞凋亡率均降低,差异均有统计学意义（P<0.01）;与IR组相比,LD组、MD组和HD组大鼠24 h和7 d时心肌组织中HIF 1α mRNA相对表达量均降低,差异均有统计学意义（P<0.01）;与IR组相比,LD组、MD组和HD组大鼠24 h和7 d时Fas、caspase 3和Bax蛋白相对表达量均降低,而Bcl 2蛋白相对表达量均升高,差异均有统计学意义（P<0.01）。二甲双胍各剂量组的作用均呈剂量相关性,其中MD组和HD组与LD组相比,差异有统计学意义（P<0.01）。结论: 二甲双胍可减少缺血 再灌注大鼠心肌细胞凋亡发生,其机制可能与改善心肌缺血环境、抑制Fas死亡信号通路激活、增加凋亡抑制因子Bcl 2表达有关。     

心肌缺血／再灌注损伤与心肌细胞凋亡

心肌缺血／再灌注损伤的机制十分复杂。触发和效应阶段是多种成分参与的综合作用结果，各条信号转导途径并非孤立的，而是交叉联系、立体的、错综复杂的调节网络系统。多种不同的通路会聚于线粒体信号通路并被其整合。     

蜂胶总黄酮对大鼠心肌缺血再灌注损伤Fas、Bax和Bcl-2基因蛋白表达的影响

目的研究蜂胶总黄酮对大鼠心肌缺血再灌注损伤相关基因蛋白表达的影响。方法建立大鼠心肌缺血再灌注损伤模型,研究Fas、Bax、Bcl2、p53基因蛋白表达。结果缺血30min,再灌注48h后,模型组和蜂胶总黄酮组的大鼠心肌Fas基因蛋白表达均明显高于假手术组,差异有显著性;且蜂胶总黄酮组的Fas表达均低于模型组,证明蜂胶总黄酮对Fas表达具有明显的抑制作用。Bax基因的蛋白表达:模型组与蜂胶总黄酮组均高于假手术组,但蜂胶总黄酮组与模型组之间并无差异。Bcl2基因蛋白的表达:模型组与蜂胶总黄酮组均高于假手术组,其中蜂胶总黄酮高剂量组与假手术组比较差异有显著性,而其它各组间比较差异无显著性。p53基因蛋白表达:各组切片经免疫组化反应后,均未见明显的p53基因蛋白表达迹象。结论蜂胶总黄酮通过抑制Fas蛋白表达,上调Bcl2蛋白表达而减少了心肌细胞的凋亡,保护了心肌组织的结构与功能。     

异丙酚对大鼠离体心脏缺血／再灌注损伤时Bcl-2蛋白表达和细胞凋亡的影响

为探讨异丙酚对大鼠离体心肌缺血再灌注损伤后心肌细胞凋亡的影响及与Bcl—2蛋白表达的关系，将Wistar大鼠36只随机分为对照组和异丙酚处理组各18只；每组再分为缺血前、缺血30min和复灌30min3个亚组各6只。分别用TUNEL法测定调亡细胞和用免疫组化法测定Bcl—2蛋白的表达。结果表明，与缺血前相比，缺血30min及再灌注30min亚组的凋亡指数(AI)显增加(P＜0．01)，Bcl—2蛋白的光密度值显减少(P＜0．01)；与对照组相比，异丙酚组缺血30min及再灌注30min亚组的AI显降低(P＜0．01)，Bcl—2蛋白的光密度值显增加(P＜0．01)。结论：缺血30min及再灌注30min的心肌均发生了细胞凋亡，且再灌注组的细胞凋亡现象更为显。异丙酚通过调控Bcl—2表达而减少心肌缺血再灌注时心肌细胞凋亡的发生。     

参麦注射液对肺缺血-再灌注损伤时Fas/FasL表达的影响

目的:探讨参麦注射液对肺缺血-再灌注损伤(PIRI)时Fas/FasL配体(Fas/FasL)表达的影响。方法:采用在体兔单肺原位缺血-再灌注模型。实验兔30只,随机分为假手术对照组(sham,n=10)、肺缺血-再灌注组(I-R,n=10)和肺缺血-再灌注加参麦注射液组(SM,n=10)。分别于再灌注3h取左肺组织,观察Fas/FasLmRNA定位表达、凋亡指数(AI)、肺组织湿干重比(W/D)、肺损伤组织学定量评价指标(IQA)及光镜、电镜下的组织形态学改变。结果:SM组Fas/FasLmRNA在肺小动脉内(外)膜、肺小静脉内膜、肺泡上皮及肺支气管上皮呈弱阳性表达,明显低于I-R组(P<0.05);AI、W/D和IQA值显著低于I-R组(P<0.01和P<0.05);肺组织形态学异常改变程度减轻。结论:参麦注射液可下调肺组织Fas/FasLmRNA的表达而减轻细胞凋亡,对PIRI发挥积极的防治作用。     

泻肺汤对肺纤维化模型鼠肺组织病理形态变化及Fas/FasL蛋白表达的影响

目的 观察泻肺汤对博莱霉素致肺纤维化模型鼠肺组织病理形态变化及Fas/FasL蛋白表达的影响。方法 SPF级SD大鼠84只随机分为空白对照组,博来霉素模型对照组,泻肺汤低、中、高剂量组,醋酸泼尼松组,每组14只。除空白对照组外,其余各组采用气管滴注博莱霉素法制备肺纤维化大鼠模型,空白对照组气管内滴注等量生理盐水,造模24 h后,泻肺汤低、中、高剂量组灌胃泻肺汤（10,20,40 g·kg^-1·d^-1）,醋酸泼尼松组灌胃醋酸泼尼松（1.8 mg·kg^-1·d^-1）,空白对照组和博来霉素模型对照组用等体积生理盐水灌胃,第29天处死动物,HE染色法观察肺组织的病理形态变化,ELISA法测定各组大鼠细胞间黏附因子-1（intercellular cell adhesion molecule-1,ICAM-1）和血清结缔组织生长因子（connective tissue growth factor,CTGF）的含量,实时荧光定量PCR法测定各组大鼠肺组织Fas和FasL的基因表达,Western blotting检测各组大鼠肺组织Fas和FasL的蛋白表达。结果 与博来霉素模型对照组相比,泻肺汤各剂量组血清ICAM-1和CTGF均显著降低,肺组织Fas和FasL的基因表达也均显著减弱（P<0.05或P<0.01）;同时,泻肺汤中、高剂量组肺组织Fas和FasL的蛋白表达均显著减弱（P<0.05或P<0.01）。结论 泻肺汤可降低ICAM-1、CTGF含量和Fas/FasL表达来显著改善博来霉素诱导的肺纤维化,表明泻肺汤对博来霉素诱导的大鼠纤维化改善与Fas/FasL凋亡通路有关。     

康脑液对脑缺血大鼠Fas、FasL蛋白表达的影响

目的观察康脑液对脑缺血再灌注损伤大鼠Fas、FasL蛋白表达的影响。方法线栓法制作大鼠脑缺血再灌注模型,将雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组、依达拉奉组(2.7 mg·kg-1)、康脑液高、中、低(24,12,6 g·kg-1.d-1)剂量组;于缺血后2 h再灌注3,6,12,24,48 h后处死,用免疫组化法观察Fas、FasL蛋白的表达。结果与模型组比较,康脑液高、中、低剂量组均能明显下调Fas、FasL蛋白的表达(P<0.05或P<0.01)。结论康脑液可通过抑制Fas、FasL蛋白的表达,减轻脑缺血后神经功能损伤,从而保护脑组织。     

芍药苷对醋酸铅诱导海马神经元凋亡及Bcl-2/Bax蛋白表达的影响

目的 探讨芍药苷(paeoniflorin,PF)对醋酸铅诱导海马神经元凋亡及Bcl-2/Bax蛋白表达的影响。方法 分离培养胎鼠海马神经元细胞,细胞免疫荧光染色鉴定纯度。MTT测定海马神经元细胞活力以确定醋酸铅最适造模浓度及时间,同时筛选合适剂量PF干预海马神经元凋亡。依据MTT测定结果,分为空白组、模型组和20,40,80 μmol·L^-1 PF组干预海马神经元细胞,作用24 h后,加醋酸铅染毒,检测细胞色素C (cytochrome C,Cyt-C)含量、线粒体膜电位及细胞内Ca²⁺浓度。流式细胞仪检测细胞凋亡情况,Western blotting测定海马神经元细胞中caspase-3、cleaved-caspase-3、caspase-8、cleaved-caspase-8、caspase-9、cleaved-caspase-9、Bax、Bcl-2蛋白表达水平。结果 细胞免疫荧光染色鉴定结果显示分离培养的细胞为海马神经元细胞,且纯度较高。MTT测定结果显示醋酸铅最适造模浓度及时间为25 μmol·L^-1染毒24 h;PF剂量为20,40,80 μmol·L-1可显著改善海马神经元细胞活性,呈剂量依赖性。与空白组相比,模型组Cyt-C含量、凋亡率、细胞内Ca²⁺浓度显著升高(P<0.01),线粒体膜电位显著降低(P<0.01)。与模型组相比,40 μmol·L^-1 PF组和80 μmol·L^-1 PF组可降低Cyt-C含量、凋亡率、细胞内Ca²⁺浓度(P<0.05或P<0.01),升高线粒体膜电位(P<0.01),20 μmol·L^-1PF组可显著升高线粒体膜电位(P<0.05)。此外,一定剂量的PF可下调cleaved-caspase-3、cleaved-caspase-8、cleaved-caspase-9、Bax蛋白表达,上调Bcl-2蛋白表达。结论 PF可抑制醋酸铅诱导的海马神经元凋亡,可通过调控Bcl-2/Bax蛋白表达发挥神经保护作用。     

川芎嗪对儿茶酚胺诱导大鼠心肌损伤时Bcl-2和Fas蛋白表达的影响

目的 :观察川芎嗪对儿茶酚胺诱导大鼠心肌损伤时心肌细胞Bcl 2和Fas蛋白表达的影响。方法 :采用皮下多点注射异丙肾上腺素 (ISO ,5mg·kg- 1)每天 1次 ,连续 3d ,诱导大鼠心肌损伤 ,采用免疫组化方法检测Bcl 2和Fas蛋白的水平 ,并利用图像分析系统分析蛋白阳性表达区域平均光密度值。结果 :损伤组和川芎嗪保护组心肌细胞Bcl 2蛋白表达较对照组均显著升高 (P <0 .0 1 ) ,损伤组Fas蛋白水平较对照组也显著升高 (P <0 .0 1 ) ,川芎嗪保护组的Fas蛋白水平较损伤组显著下降 (P <0 .0 1 ) ,且Bcl 2 Fas比值也较损伤组和对照组明显增加。川芎嗪保护组的病理损伤程度明显低于损伤组。结论 :川芎嗪可抑制儿茶酚胺诱导的心肌损伤时心肌细胞中促凋亡基因Fas的表达 ,提高心肌细胞中Bcl 2 Fas比值     

Urantide对缺血/再灌注损伤诱导的心肌细胞凋亡的影响(英文)

目的探讨urantide对大鼠心肌缺血/再灌注(I/R)或缺氧/复氧损伤(H/R)诱导的心肌细胞凋亡的影响及其相关机制。方法①在体实验采用冠状动脉左前降支缺血30 min/灌注60 min法建立大鼠在体心肌I/R模型。Urantide 3,10和30μg.kg-1分别于缺血前10 min经舌下静脉给药。TUNEL法检测心肌细胞凋亡,免疫组织化学方法检测心肌细胞内Bcl-2和Bax蛋白的表达水平。②离体实验乳大鼠心肌细胞行缺氧3 h/复氧3 h处理制备H/R模型。Urantide 0.1,1和10 nmol.L-1分别于缺氧前加入。Ho-echst33258染色和流式细胞术检测心肌细胞凋亡。结果①在体实验与假手术组相比,I/R组TUNEL阳性细胞数量明显升高(P<0.01);Bcl-2蛋白表达量轻度升高,但无统计学差异,Bax蛋白表达量显著升高(P<0.01),Bcl-2/Bax比值明显降低(P<0.01)。与I/R组相比,urantide 10,30μg.kg-1组心肌凋亡细胞显著降低,分别较模型组降低36.6%和57.2%(P<0.05);Bax蛋白表达量显著降低(P<0.05),Bcl-2/Bax比值明显升高(P<0.05);同时,urantide 30μg.kg-1组Bcl-2蛋白表达量也明显升高(P<0.05)。②离体实验与正常对照组相比,H/R组细胞凋亡率明显升高(P<0.01);Hoechst33258结果显示,与模型组相比,uran-tide 0.1,1和10 nmol.L-1组细胞凋亡率分别显著降低了27.9%,59.0%和75.4%(P<0.05)。流式细胞术结果显示,urantide 1和10 nmol.L-1组细胞凋亡率显著降低,分别较H/R模型组降低32.8%和64.7%(P<0.01)。结论 Urantide可减轻I/R或H/R损伤诱导的心肌细胞凋亡,其机制可能与增加Bcl-2蛋白表达,降低Bax蛋白表达有关。     

JNK抑制剂保护肾缺血/再灌注损伤及其分子机制

肾脏对缺血/再灌注损伤(ischemic reperfusion injury,IRI)较敏感,在相关手术中易发生不同程度的再灌注损伤,可能与细胞凋亡及JNK信号通路的激活有关"[1,2].     

心肌缺血再灌注细胞凋亡过程一些细胞活素水平变化及黄芪的影响

目的：观察心肌缺血再灌注后心肌细胞凋亡与一些细胞活素水平变化的关系,以及黄芪的作用。方法69只大耳白家兔,随机分为心肌缺血-再灌注组、黄芪治疗组、心肌缺血坏死组、假手术对照组。采用脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法和心肌细胞DNA电泳检测心肌细胞的细胞凋亡情况,并应用MTT法检测外周血单个核细胞分泌IL-1、IL-4、TNF、IFNγ的水平。结果：缺血再灌注后,凋亡的心肌细胞增加,同时伴有IL-1、TNF、IFNγ升高和IL-4水平降低。黄芪治疗后只有少量的细胞凋亡及一些细胞活素的轻度变化。结论：心肌缺血再灌注心肌细胞凋亡过程中,细胞活素可能有重要的作用;黄芪可抑制再灌注时的心肌细胞凋亡,此作用可能与这些细胞活素的水平变化有关。     

红景天苷对实验性心肌缺血再灌注损伤的保护作用

目的探讨红景天苷对心肌缺血再灌注损伤的影响。方法采用冠状动脉结扎法制备大鼠急性心肌缺血模型,观察红景天苷对其心电图、心肌梗死范围以及血清中酶活性的影响。结果红景天苷可以改变缺血再灌注损伤大鼠心电图S-T段的变化幅度,降低大鼠急性心肌梗死面积,抑制血清中肌酸激酶(CK)、乳酸脱氢酶(LDH)的活性,提高超氧化物歧化酶(SOD)的活力,同时降低丙二醛(MDA)的含量。结论红景天苷对心肌缺血再灌注损伤具有较好的保护作用。