干扰素体外释放酶联免疫法在结核潜伏感染诊断中的价值

目的探讨干扰素体外释放酶联免疫法(TB-IGRA)在诊断诊断结核分枝杆菌潜伏感染的价值。方法分枝杆菌相关γ-干扰素检测试剂盒(WT-IGRA)检测140例健康者IFN-γ分泌水平,并对其进行结核菌素皮试及采用Cellestis Limited生产的QuantiFERON-TB试剂盒进行IFN-γ平行检测。结果 140例健康者中,WT试剂和QFT试剂阳性率分别是25.7%(36/140)、21.4%(30/140),PPD3+～4+为14.3%(20/140)。两试剂阳性符合率为81.3%,阴性符合率为88.9%,总符合率86.7%。28例密接者中,PPD3+～4+为39.3%(11/28),WT试剂和QFT试剂阳性率分别是46.4%(13/28)和67.8%(19/28)。结论 TB-IGRA在诊断结核分枝杆菌潜伏感染的价值优于PPD皮试,可以用于潜伏感染者的筛查。     

卡介苗对结核分枝杆菌IFN-γ酶联免疫斑点检测法的影响

目的探讨卡介苗（BCG）对结核分枝杆菌IFN-γ酶联免疫斑点（简称Elispot）检测影响,评价Elispot检测在诊断结核分枝杆菌潜伏感染的价值。方法对98例某高校学生同时进行Elispot检测和PPD皮试,其中27例PPD皮试结果和Elis-pot检测均为阴性的受试者进行卡介苗接种。结果 98例受试者中,48例PPD皮试阳性,13例Elispot检测阳性,两种检测结果比较差异有统计学意义。对上述27例受试者接种BCG后PPD皮试结果全转为阳性,Elispot检测仍为阴性。在BCG接种前后,ESAT-6和PoolA作用下IFN-γ分泌水平均无差异;但在BCG作用下,BCG接种后IFN-γ分泌水平显著高于接种前。结论 Elis-pot检测体外IFN-γ应答反应不受卡介苗接种影响,在诊断结核分枝杆菌潜伏感染的价值优于PPD皮试。     

采用干扰素释放反应试验和PPD皮试对深圳市高校学生结核分枝杆菌潜伏感染筛查的研究

目的采用结核分枝杆菌特异性IFN-γ免疫酶联斑点法（ELISPOT）和传统的结核菌素皮试（PPD皮试）对深圳市高校学生结核分枝杆菌潜伏感染现状进行筛查,并比较两种方法的差异。方法采用自主研制的Elispot试剂盒（简称Elispot）和PPD皮试,对133例健康志愿者进行平行检测。结果A高校99例志愿者中PPD皮试有49例阳性（49.5％）,Elispot检测有20例阳性（20.2％）;B高校34例志愿者中PPD皮试有27例阳性（79.4％）,Elispot检测有2例阳性（5.9％）。对两种方法进行平行比较分析,结果有统计学差异（X^2=41.31,P〈0.005）;在PPD（卅）组中Elispot阳性率最高为28.57％;在（廾）-（-）组中分别为22.2％、12.5％及12.28％。结论结核菌特异性IFN-γ Elispot试剂盒在健康人群中检测阳性率比传统的PPD皮试要低,在诊断结核分枝杆菌潜伏感染的价值优于PPD皮试,在结核分枝杆菌潜伏感染早期诊断有较好的发展前景。     

γ干扰素释放反应在结核分枝杆菌潜伏感染及结核病诊断中的临床意义

目的 探讨三种结核分枝杆菌抗原刺激外周血单个核细胞（PBMC)后γ干扰素(IFN-γ)释放反应对结核分枝杆菌潜伏感染及结核病的诊断意义。并与结核菌素皮试(TST)进行比较。方法 研究对象共分三组，活动性结核组(57例)，健康对照组(27例)，肿瘤组(29例)，分别用结核分枝杆菌纯蛋白衍生物(PPD)，早期分泌抗原靶6kDa蛋白(early secretary antigenic target 6kDa protein ESAT-6)，38kDa抗原与PBMC共同培养5天，后采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测培养上清液中IFN-γ的浓度。结果 ①健康组：TST与BCG接种史及排菌病人密切接触程度呈正相关(B=0．047和P=0．041)，ESAT-6为抗原的IFN-γ释放水平与结核病接触程度密切相关(P=0．005)，而与BCG接种史无明显相关。②当阴阳性界定值定为1000pg／ml时。38kDa抗原刺激后的IFN-γ浓度对于结核病诊断的敏感性为64．9％，特异性为89．3％.结论 ESAT-6刺激后的IFN-γ释放反应对结核分枝杆菌潜伏感染的诊断意义可能优于TST。38kDa抗原刺激后的IFN-γ释放反应可能有结核病的辅助诊断意义。     

γ干扰素释放试验在检测结核分枝杆菌潜伏感染中的应用

结核病（tuberculosis,TB）是严重危害人民群众健康的呼吸道传染病,被列为我国法定重大传染病之一。据世界卫生组织估计,全球约有1/3人群存在潜伏性结核感染(latent tuberculosis infection, LTBI),其中感染人群一生中约有5%～10%会发展为活动性结核。我国为结核病高发国家,LTBI数目十分庞大。根据现有资料显示,我国Mtb感染率为44.5％（结核菌素试验硬结直径≥5 mm为阳性）。第五次全国结核病流行病学抽样调查报告显示,我国活动性、涂阳和菌阳肺结核的患病率分别为459/10万、66/10万和119/10万。存在LTBI的人没有明显的症状和体征,也没有传染性,但是一旦机体免疫系统发生变化,其发展为活动性结核的可能性极高,并且会变得有传染性。因此,早期发现和早期预防LTBI是结核病感染控制最有效的措施。目前,国内外对诊断LTBI还缺乏统一的金标准,现阶段用于诊断LTBI的方法主要有2种：结核菌素皮肤试验（tuberculin skin test,TST）和γ干扰素释放试验（interferon gamma release assays,IGRAs）。前者是目前还在应用中的一种传统的试验方法,后者是一种新型的检测LTBI的方法,国内外对IGRAs检测LTBI已有一定的研究,笔者对IGRAs的原理和方法、敏感度和特异度、成本和成本 效益分析,以及在不同年龄和不同免疫状况人群中的应用等方面进行综合评价。     

深圳献血员结核分枝杆菌潜伏感染调查研究

目的了解深圳献血员结核分枝杆菌潜伏感染的情况和相关特点。方法使用ELISPOT技术检测结核分枝杆菌特异性IFN-γ来了解1503例合格献血员结核分枝杆菌潜伏感染情况。结果 1503例合格献血员中有148例为结核分枝杆菌潜伏感染阳性,阳性率为9.85%,男性与女性阳性率没有差异,年龄在25岁以下人群阳性率低于年龄在25岁以上人群。结论献血员结核分枝杆菌潜伏感染问题不容忽视。     

抗原刺激后外周血单个核细胞γ干扰素释放反应在结核分枝杆菌感染和结核病诊断中的意义

目的 探讨3种结核分枝杆菌抗原刺激后外周血单个核细胞（PBMC）γ干扰素（IFN-γ）释放反应对结核性感染和结核病的诊断意义。方法 获取活动性结核病患者（结核组，57例）、肺癌患者（肺癌组，29例）和健康人（健康对照组，27名）外周血单个核细胞。分别将结核分枝杆菌纯蛋白衍生物（PPD）、结核分枝杆菌早期分泌抗原靶6000蛋白（ESAT6）和38000抗原与PBMC共培养5d，采用酶联免疫吸附测定（ELISA）法检测培养上清液中IFN-γ浓度。比较3种抗原PBMC IFN-γ释放水平和PPD皮试（TST）结果。结果 （1）健康对照组：TST反应与BCG接种史及排菌患者接触密切程度经Logistic回归分析显示均呈正相关（P=0．047和P=0．041）；以ESAT6为抗原的PBMC IFN-γ释放水平与结核病患者接触密切程度相关（P=0．005），而与BCG接种史无明显相关性。（2）3组间TST结果差异无显著性。（3）以38000抗原刺激后IFN-1释放水平为观察指标，经受试者操作特性（ROC）曲线分析获得最佳域值为1000pg／ml，以此判断38000抗原刺激后IFN-γ释放水平诊断结核病敏感性为64．9％，特异性为89．3％，准确性为77．0％，阳性预测值为86．0％，阴性预测值为71．0％。结论 ESAT6抗原的IFN-γ释放反应对结核分枝杆菌感染的诊断意义优于TST，38000抗原刺激后IFN-γ释放反应对结核病的临床诊断有辅助意义。     

结核分枝杆菌的潜伏感染与检测方法

结核分枝杆菌是一种复杂的病原微生物。人感染结核分枝杆菌后，大约有10％的初始感染者发生结核病，对于那些没有临床表现的感染者，有相当数量的一部分人体内存在潜伏感染的结核分枝杆菌，即机体的免疫系统能够控制结核分枝杆菌的复制而不表现出临床症状但又不能彻底清除感染的结核分枝杆菌。     

Hsp16.3在结核分枝杆菌潜伏感染中的作用

结核病(Tuberculosis,TB)主要是结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,Mtb)引起的细菌感染性疾病。当宿主免疫力减弱,潜伏感染的Mtb得以复苏,导致TB感染的复发。巨噬细胞自噬作为宿主先天性和适应性免疫反应的重要组成部分,在保护宿主抗Mtb感染方面发挥着重要作用。热休克蛋白16.3(Hsp16.3)是Mtb潜伏感染(LTBI)期间表达的重要蛋白,它可能通过抑制巨噬细胞自噬而维持Mtb长期生存,从而导致LTBI的发生。本文综述了Hsp16.3在LTBI中调控巨噬细胞自噬的作用,期望Hsp16.3能够成为LTBI的生物标志物和抗结核药物的新靶点。     

糖尿病合并结核分枝杆菌潜伏感染的研究进展

糖尿病和结核病是两种严重危害人类健康的慢性疾病,两者之间相互影响。糖尿病不仅增加了患者感染结核病的风险,还加重了结核病的严重程度和治疗难度。全球范围内,糖尿病和结核病的共患率正在上升,给公共卫生带来了巨大的挑战。目前,关于糖尿病合并结核分枝杆菌潜伏感染的流行病学资料还很缺乏,但有证据表明,糖尿病患者的结核分枝杆菌潜伏感染患病率是非糖尿病人群的两倍。为了有效地控制糖尿病合并结核分枝杆菌双重流行,需要对糖尿病合并结核分枝杆菌潜伏感染的患者进行及时的筛查、诊断和预防性治疗。本文综述了近年来关于糖尿病合并结核分枝杆菌潜伏感染的流行病学特征、相互作用、诊断方法以及预防策略等方面的最新进展,旨在为临床实践和公共卫生干预提供参考和启示。     

马拉维结核分枝杆菌感染危险性:1994年全国结核菌素调查

目的:估算马拉维学生结核年感染率。方法:在马拉维随机选择12个区的学校进行调查。以1-4年级6-11岁的儿童为调查对象。根据世界卫生组织/国际防痨与肺病联合会指南进行结核菌素皮肤试验。结果:在17123名符合条件的儿童中,80％接受皮试。在进行皮试的儿童中,79％复验了结果。根据不同的标准,无卡痕儿童的结核感染率界于9％-12％之间。皮试结果≥10mm的反应率女童低于男童,反应率随年龄增加而增加,有BCG卡痕儿童的结核感染率高于无BCG卡痕者。估计年感染率在0.6％-1.4％之间。结论:马拉维结核年感染率为1％。本研究将为评价马拉维人类免疫缺陷病毒(HIV)感染对结核病传播的影响提供有价值的基线资料。     

结核分枝杆菌潜伏感染动物模型及评价

结核分枝杆菌（MTB）感染动物模型是用于阐明结核病发病机制，评估抗结核新药、疫苗和诊断试剂。多年来，为探讨结核病的发病机制，寻找有效的治疗、预防措施，研究者已在包括小鼠、大鼠、豚鼠、猴、兔等不同的动物体内成功复制出结核病模型。由于对MTB进入机体后感染潜伏的生物学特性和宿主免疫特性缺乏了解，而动物模型为研究潜伏和复发、新药及疫苗提供了工具。     

γ-干扰素释放试验在活动性肺结核诊断中的价值

目的在我国西南部结核病高发区,评价结核γ-干扰素释放试验(tuberculosis interferonγ release assay, TB-IGRA)在疑似肺结核中诊断活动性肺结核的价值。 方法纳入2018年12月20日至2019年12月20日在贵州省织金县人民医院诊断的疑似肺结核患者1 627名,用TB-IGRA、结核菌素皮肤实验(TST)、结核分枝杆菌抗体(TBAb)或结核分枝杆菌免疫球蛋白(TB-Ig)检测诊断活动性肺结核,比较其敏感性、特异性、准确性。并分析卡介苗(Bacillus Calmette-Guérin, BCG)接种对结果的影响。 结果TB-IGRA的敏感性、特异性和准确性,依次为：91.26%、80.13%和89.37%,均高于TST、TB-IgG的检测。TB-IGRA诊断疑似肺结核中的活动性肺结核,不受BCG接种的影响(χ²＝0.05,P＝0.83)。BCG接种对TST诊断疑似肺结核中的活动性肺结核影响明显(χ²＝108.17,P<0.001)。 结论TB-IGRA在我国西南部结核病高发区诊断活动性肺结核有很高的敏感性、特异性,较TST、TB-Ig有更高价值,且不受BCG接种的影响。     

结核分枝杆菌潜伏感染相关蛋白ICL的表达及鉴定

目的　表达结核分枝杆菌潜伏感染相关蛋白ICL ,鉴定其生物学活性并制备其多克隆抗体。方法　采用PCR法从结核分枝杆菌H37Rv基因组DNA中扩增出icl基因片段 ,将其插入原核表达质粒pQE30 ,构建重组质粒 pQE30 icl。将pQE30 icl转化大肠杆菌 ,用IPTG诱导目的基因表达。Western blot免疫印迹法鉴定后纯化该表达产物 ,测定其酶活性并用此纯化蛋白免疫新西兰兔制备多克隆抗体。结果　序列分析发现PCR扩得的icl有两个核苷酸突变 ,但均为无义突变。在大肠杆菌中表达的目的产物经SDS PAGE分析约为 4 7kDa。免疫印迹分析证实目的蛋白与阳性结核病患者抗血清产生特异性反应。纯化的目的蛋白异柠檬酸裂解酶的酶活性为 16 .7u/mg。双向免疫扩散法测定目的蛋白免疫兔血清的抗体效价为 1 32。结论　研制出的结核分枝杆菌重组ICL具有异柠檬酸裂解酶活性和抗原性 ,重组ICL和抗ICL免疫血清的制备为抗结核分枝杆菌潜伏感染的研究奠定了必要的物质基础。     

结核潜伏感染的新型诊断方法研究进展

<正>在全球22个结核病高发地区中,我国是结核病高发地区,居全球第二。国家卫生部2000年第4次结核流行病学调查中显示,我国全年龄组结核分枝杆菌(MTB)感染率已达到44.5%,全国约5.5亿人感染了该菌,感染率高于全球人口感染率约1/3水平〔1〕。结核病是MTB通过微核传播的一种呼吸道疾病,与结核患者密切接触而感染MTB导致潜伏结核感染     

γ干扰素释放试验在肺结核和非结核分枝杆菌肺病鉴别诊断中的应用价值

目的 探讨结核分枝杆菌特异性γ干扰素释放试验（interferon gamma release assays,IGRAs）在鉴别诊断肺结核和非结核分枝杆菌（non-tuberculous mycobacteria,NTM）肺病中的应用价值.方法 选择深圳市第三人民医院2011年1月至2013年5月334例收住于肺科住院部感染了分枝杆菌的肺病患者.采用反向斑点杂交技术对334例分枝杆菌感染的肺病患者痰培养分离的分枝杆菌进行菌种鉴定;采用IGRAs测定患者外周血结核分枝杆菌抗原特异性γ干扰素（IFN-γ）应答;采用结核分枝杆菌特异性荧光定量PCR技术检测痰标本中结核分枝杆菌DNA.结果 在334例分枝杆菌感染的患者中,240例的菌株为结核分枝杆菌,94例为NTM; 240例肺结核患者中痰结核分枝杆菌DNA PCR检测阳性率为74.58％（179/240）,IGRAs检测阳性率为77.08％（185/240）;94例NTM肺病患者中,结核分枝杆菌DNA PCR检测阳性率为10.64％（10/94）,IGRAs检测阳性率为20.21％（19/94）.结核分枝杆菌DNA PCR和IGRAs检测鉴别诊断肺结核和NTM肺病的敏感度分别为74.58％（179/240）、77.08％（185/240）,特异度分别为89.36％（84/94）、79.79％（75/94）;两种方法联合检测肺结核的敏感度为%.75％（225/240）、特异度为77.66％（73/94）.结论 IGRAs对于鉴别肺结核和NTM肺病具有较好的应用价值,联合应用结核分枝杆菌DNA PCR和IGRAs可以显著增加鉴别诊断的准确性,对于早期抗结核药物的选择具有重要的指导意义.     

涂阳肺结核患者密切接触者结核感染及危险因素分析

目的了解涂阳肺结核患者密切接触者结核感染情况及影响因素。方法采用T-SPOT.TB试剂盒检测与76例涂阳肺结核患者的243例密切接触者结核潜伏感染(LTBI)情况,采用Pearsonχ2检验分析LTBI的影响因素。结果 248例密切接触者中活动性肺结核检出率为2.02%,在243例密切接触者(剔除5例活动性肺结核患者)中T-SPOT.TB的阳性率为46.9%,经单因素分析显示于涂阳肺结核患者确诊前2个月内接触者及夫妻关系的密切接触者,LTBI危险性高,且差异有统计学意——分别为(χ2=6.925,P=0.006)和(χ2=8.447,P=0.038)。结论与涂阳肺结核患者密切接触者较普通人群结核感染发生率高,且不同接触人群LTBI发生比率不同。     

γ-干扰素释放试验(IGRA)对于诊断结核分枝杆菌感染的应用

目前世界上有三分之一的人有结核分枝杆菌感染,而且其中大约10％会发展成活动性结核。但是没有一种试验可以做为诊断结核分枝杆菌感染的金标准。     

结核分枝杆菌IFN-γ体外检测试剂的生产质量控制与临床研究探讨

依据《体外诊断试剂注册管理办法(试行)》等相关的法律法规,分别针对结核分枝杆菌IFN-γ（interferon gamma,γ干扰素）体外检测试剂盒的主要原材料、生产工艺、产品质量控制,以及临床研究的技术要求进行了概述,为该类试剂盒的研发和注册提供技术支撑。     

结核潜伏感染诊断新型候选标志物的筛选及临床验证

目的 筛选及临床验证结核潜伏感染(LTBI)新型候选标志物,为研究LTBI诊断新方法提供科学基础。方法 选择2013年1月至2015年12月就诊于遵义医学院附属医院的活动性肺结核患者(ATB组)、LTBI者(LTBI组)及健康人群(H组)血清。小样本分别独立地与包含4262个结核分枝杆菌(MTB)重组蛋白的Mtbprot^TM芯片反应进行初筛,选择差异较为明显的蛋白质,定制成蛋白小芯片,进行较大样本验证,对有效数据进行归一化处理,根据单个蛋白的P值进行评价,进一步通过SPSS统计软件,优化出最优组合。结果 用Mtbprot^TM芯片,经32份血清(H组7份、LTBI组9份及ATB组16份)试验验证,初筛出前100个可能与LTBI相关蛋白质,用这些蛋白质制成小芯片,分别与204份血清(H组44份,LTBI组60份,ATB组100份)进行进一步验证试验,优选出8个蛋白标志物,分别为Rv1860、Rv2031c、Rv1441c、Rv0494、Rv3301c、Rv0351、Rv1821和Rv0280,其组合诊断LTBI的特异性及敏感性分别为90.9%和83.1%。结论 成功筛选鉴定出8个LTBI新型候选蛋白标志物,其组合应用在LTBI诊断和鉴别诊断上具有较大的潜在应用前景。