手性衍生化-反相高效液相色谱法测定L-肌肽的光学纯度

目的建立柱前手性衍生化-反相高效液相色谱法(HPLC)测定L-肌肽对映体的纯度。方法以邻苯二甲醛/N-乙酰基-L-半胱氨酸(OPA/NAC)为手性衍生化试剂,反应生成具有荧光吸收的一对非对映异构体衍生物,采用C18色谱柱(250mm×4.6mm,5μm),流速1.0mL·min-1,50mmol·L-1乙酸铵缓冲溶液(pH6.0)-甲醇(70:30,V/V)流动相,柱温35℃,λex=350nm,λem=450nm。结果L-肌肽与其光学异构体分离度大于3,在0.104～2.68mg·L-1范围内,D-肌肽衍生物色谱峰面积与其浓度呈良好线性关系,检测限浓度为0.02mg·L-1。结论建立的L-肌肽光学异构体(杂质)手性衍生化-HPLC拆分检查法方便准确,可用于L-肌肽的光学纯度控制。     

柱前衍生高效液相色谱法测定门冬氨酸的含量

目的建立测定门冬氨酸含量的异硫氰酸苯酯柱前衍生化方法。方法采用高效液相色谱法测定门冬氨酸的含量。色谱柱为Phe—nomenexGeminiC18柱（250mmX4．6mm,5μm）,流动相A为12．5mmol／L磷酸钠溶液（用磷酸调pH至6．8）、B为乙腈-水（80：20）,梯度洗脱,流速为1．0mL／min,检测波长为254nm。结果门冬氨酸质量浓度在50．0～800．0μg／mL范围内与峰面积呈良好的线性关系（r=0．9998）,平均回收率为99．18％,RSD=1．74％（n=9）。结论该方法准确、专属性强,稳定且无干扰,可用于门冬氨酸的含量测定。     

柱前衍生化RP-HPLC测定米格列奈钙光学纯度

目的 建立柱前衍生化-反相高效液相色谱法测定S-米格列奈钙的光学纯度。方法 采用手性衍生化试剂S-萘乙胺(S-NEA),以1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(EDC·HCl)和1-羟基苯并三唑(HOBt)为偶联剂对样品S-米格列奈钙进行衍生化。衍生产物以乙腈- 0.01 mol·L-1磷酸二氢钾缓冲液(pH 2.5)(50∶50)为流动相,在Agilent Zorbax C18(250 mm × 4.6 mm,5 μm)色谱柱上进行分离,流速为1.5 mL·min-1,检测波长为225 nm,柱温为30 ℃。结果 R-米格列奈在0.3~3.0 μg·mL-1内线性关系良好,检测限和最低定量下限分别0.1和0.3 μg·mL-1,平均回收率为102.4%,日内日间精密度考察中RSD均小于5%。结论 该方法灵敏度高,衍生化产物稳定,重复性好,可用于S-米格列奈钙光学杂质的检测。     

柱前衍生化RP-HPLC测定米格列奈钙光学纯度

目的建立柱前衍生化-反相高效液相色谱法测定S-米格列奈钙的光学纯度。方法采用手性衍生化试剂S-萘乙胺（S-NEA）,以1-（3-二甲氨基丙基）-3-乙基碳二亚胺盐酸盐（EDC·HCl）和1-羟基苯并三唑（HOBt）为偶联剂对样品S-米格列奈钙进行衍生化。衍生产物以乙腈-0.01mol·L^-1磷酸二氢钾缓冲液（pH2.5）（50∶50）为流动相,在AgilentZorbax C18（250mm×4.6mm,5μm）色谱柱上进行分离,流速为1.5mL·min^-1,检测波长为225nm,柱温为30℃。结果R-米格列奈在0.3～3.0μg·mL^-1内线性关系良好,检测限和最低定量下限分别0.1和0.3μg·mL^-1,平均回收率为102.4%,日内日间精密度考察中RSD均小于5%。结论该方法灵敏度高,衍生化产物稳定,重复性好,可用于S-米格列奈钙光学杂质的检测。     

柱前衍生-高效液相色谱法测定丙戊酸钠血药浓度

目的建立快速柱前衍生-高效液相色谱法测定丙戊酸钠(VPA)血药浓度的方法.方法选择2-溴-对硝基苯乙酮为衍生试剂,环己烷羧酸为内标,Nova-pak C18柱(150 mm×3.9 mm,4μm)为分析柱;流动相为甲醇-水(7723,V/V),检测波长为262nm,流速1 mL·min-1,柱温25℃.结果内标环己烷羧酸和VPA的保留时间分别为3.0 min和4.5 min,线性范围为20～180mg·L-1,平均回收率为100.2%,日内、日间RSD均＜3.5%;230例服用VPA的癫癎患者应用本法监测,有77.8%的患者血药浓度在有效浓度范围之内,还有22.2%的患者血药浓度低于或高于有效浓度.结论本法快速、简便、准确,适合临床常规监测需要.     

柱前衍生反相高效液相色谱法测定天花粉中γ-氨基丁酸含量

目的测定天花粉中γ-氨基丁酸的含量。方法在碱性条件下，将氨基酸与异硫氰酸苯酯反应生成异硫氰酸苯一氨基酸的衍生物，采用Venusil-AA氨基酸分析柱（250mm×4．6mm，5μm），二元梯度洗脱，流动相A为0．05mol／L醋酸钠溶液（pH=6．5），流动相B为乙腈-水（80：20），检测波长为248am。结果γ-氨基丁酸质量浓度在8．224～41．120μg／mL范围内与峰面积线性关系良好，平均加样回收率为99．1％（n=5）。结论该方法结果准确，重现性好。     

柱前衍生液相色谱法测定藻酸双酯钠的含量

目的建立测定海洋药物藻酸双酯钠(PSS)含量的柱前衍生化高效液相色谱方法。方法利用0.1mol/L稀硫酸将PSS降解为D-甘露糖醛酸(M)和L-古罗糖醛酸(G),并与1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮(PMP)进行柱前衍生化反应,采用高效液相色谱法测定PSS降解液中M和G的峰面积,以葡萄糖醛酸(GlcUA)为内标,以PSS对照品绘制标准曲线计算含量。色谱柱:Zorbax KP-C18(150mm×4.6mm,5μm),流动相:磷酸盐缓冲液(0.1mol/L,pH 7.0)/CH3CN(83/17,体积分数);流速:0.8mL/min;柱温30℃,检测器:可变波长检测器(VWD),检测波长:245nm。结果PSS在0.3～15mg/mL浓度范围内与峰面积比值呈良好的线性关系(R2=0.9966);在低、中、高3个浓度的日内精密度平均RSD为0.78%(n=6),日间精密度平均RSD为3.08%(n=5),重复性RSD为3.24%(n=5),24h内稳定性良好,RSD为2.93%,3个浓度平均回收率为115.77%,方法的最低检测限为0.25μg/mL。结论该方法专属性好,灵敏度高,重复性好,适合PSS的质量控制。     

柱前衍生-高效液相色谱法测定人血清中丙戊酸钠的浓度

目的：建立快速柱前衍生．高效液相色谱法测定人血清中丙戊酸钠（VPA）的浓度。方法：血样经酸化后用正戊烷提取,以环已烷羧酸为内标,w-溴苯乙酮为衍生化试剂,采用Agilent HC—C18柱（250mm×4．6mm,5μm）,流动相为甲醇·水（73：27）,检测波长为262nm,流速1．0ml·min^-1,柱温40℃。结果：血清中VPA浓度在10．12～182．16μg·ml^-1范围内具有良好的线性关系（r=0．9997）,平均相对回收率为99．17％,日内、日间RSD均小于6％,最低定量浓度为10．12μg·ml^-1。结论：本法简便、快速、准确,适合临床常规血药浓度监测。     

柱前手性衍生化-反相高效液相色谱法拆分布洛芬对映异构体

目的：建立一种柱前手性衍生化-反相高效液相色谱紫外法检测布洛芬的异构体。方法：以N′N-羰基二咪唑（CDI）作为活化剂活化布洛芬的羧基基团,再以（R）-（+）-1-（1-萘基）乙胺（R-NEA）作为手性衍生化试剂进行反应。选用Kromasil C18色谱柱,流速1.0 mL·min-1,柱温30 ℃,以乙腈-0.05%磷酸（68∶32）为流动相,检测波长225 nm。结果：布洛芬的非对映异构体色谱峰的保留时间分别为25.6 min和27.9 min。结论：本方法操作简单,条件温和,衍生化产物稳定,且衍生化试剂价格便宜,更准确地实现了对布洛芬对映异构体的分离检测。     

改进的柱前衍生-高效液相色谱法测定人血中丙戊酸钠

目的:建立高效液相色谱法测定人血清中丙戊酸钠浓度的方法.方法:血样用正戊烷提取,以环己烷羧酸为内标,d-溴苯乙酮为衍生化试剂,用高效液相色谱法测定丙戊酸钠血药浓度.采用Kromasil C18柱(150 mm×4.6 mm,5 μm),流动相为甲醇-水(72:28),检测波长为266 nm,流速1.2 mL·min.结果:血清中丙戊酸钠线性范围为15～200mg·L-1,平均回收率为101.0%,日内、日间RSD＜5%.结论:本法快速、简便、准确,适用于临床常规监测需要.     

柱前衍生-反相高效液相色谱法测定转移因子胶囊中游离氨基酸

目的用柱前衍生-反相高效液相色谱法测定转移因子胶囊中游离氨基酸的含量。方法采用二硝基氯苯(DNCB)为衍生试剂进行衍生,Waters Novapak C8(3.9 mm×150 mm,4μm)色谱柱分离,以乙腈-乙酸钠水溶液为流动相,梯度洗脱,检测波长360 nm,在65 min内,测定各氨基酸含量。结果回收率为97.5%~103.5%,RSD为0.7%~3.0%。结论DNCB柱前衍生-反相高效液相色谱法可测定转移因子胶囊中游离氨基酸的含量。     

柱前衍生-固相萃取高效液相色谱法快速测定丙戊酸血药浓度

目的:建立柱前衍生-固相萃取高效液相色谱法测定丙戊酸血药浓度分析方法,去除过量未反应的衍生试剂。方法:选择2-溴-对硝基苯乙酮为衍生试剂,环己烷羧酸为内标,采用 Accubond SPE C_(18)小柱处理反应液,Nova-pak C_(18)柱(4μm,3.9mm×150mm)为分析柱;甲醇-水(77:23)为流动相,检测波长为262nm,流速1 mL·min~(-1),柱温25℃。结果:反应液中90%以上未反应的衍生试剂被去除,内标及丙戊酸衍生物被保留和纯化。内标环己烷羧酸和丙戊酸的保留时间分别为3.0和4.5min,线性范围为16.6～265μg·mL~(-1),相关系数为0.9998。平均回收率为99.85%,日内日间误差 RSD 均小于5.16%。结论:本法快速简便、结果准确,非常适合临床常规监测需要。     

柱后衍生阳离子交换色谱法与柱前衍生高效液相色谱法测定人胎盘组织液中18种氨基酸含量比较

摘 要 目的：比较柱前衍生高效液相色谱法（HPLC法）和柱后衍生阳离子交换色谱法（AARO法）测定人胎盘组织液中18种氨基酸含量的差异。方法: HPLC法采用 C₁₈柱和2,4 二硝基氯苯（DNCB）进行柱前衍生化,加入0.1 mol·L^-1硼砂缓冲液（pH=9.1）,进行测定;AARO法采用强酸性阳离子交换色谱柱和柱后衍生化,直接测定。结果: 柱前衍生高效液相色谱法和柱后衍生阳离子交换色谱法的重复性考察,AARO法各组分RSD为0.91%～1.84%,HPLC法RSD为1.04%～1.87%。结论:柱后衍生阳离子交换色谱法与柱前衍生高效液相色谱法测定人胎盘组织液种 18种氨基酸,均可采用,两种方法对测定上述各氨基酸结果一致性较好, 但柱前衍生HPLC法可能易造成衍生不彻底和衍生物不稳定。     

柱前衍生-高效液相色谱荧光法测定硫普罗宁片含量

目的：建立了柱前衍生-高效液相色谱荧光法测定硫普罗宁片含量。方法：供试品经N-（1-芘）马来酰亚胺（NPM）衍生化后，采用Kromasil C18柱（250mm×4.6mm，5μm），流动相为水（含0．02％磷酸和0．8％冰乙酸）-乙腈（52：48），pH=3．0；流速0，8mL·min^-1，在λex=330nm，λem=380nm处荧光检测。结果：硫普罗宁在5．0～50．0μg·mL^-1浓度范围内与其衍生化主产物峰面积呈良好的线性关系，r=0．9993，平均回收率为99．5％（RSD=1．0％）。结论：该法准确可靠，专属性强，能满足制剂质量控制的要求。     

柱前衍生-高效液相色谱荧光法测定大鼠血浆中硫普罗宁

建立了测定大鼠血浆中硫普罗宁含量的柱前衍生-高效液相色谱荧光法。血浆样品经二硫苏糖醇(DTT)还原后，再经N-(1-芘)马来酰亚胺(NPM)衍生化后进样测定。以0.2%乙酸(含0.015 mol·L^-1磷酸二氢钾)-乙腈(56∶44)为流动相，采用Kromasil C₁₈色谱柱分离，在λ_ex=340 nm，λ_em=375 nm下荧光检测。硫普罗宁线性范围为0.1～10.0 μg·mL^-1，定量下限为0.1 mg·L^-1，日内、日间精密度(RSD)分别为5.3%～10.8%和7.0%～10.8%，提取回收率在73.7%～79.7%。大鼠单剂量给予硫普罗宁后，药代动力学行为符合二室模型。该法准确可靠，专属性强，适用于硫普罗宁的药代动力学研究。     

柱前衍生高效液相色谱法测定人血浆中尿囊素浓度

目的:建立血浆中尿囊素的浓度测定方法.方法:采用柱前衍生反相高效液相色谱法,尿囊素与2,4-二硝基苯肼(DNPH)反应生成2,4-二硝基苯腙,色谱柱为PhenomeneJx,D Luna C18色谱柱(150mm×4.6mm,5μm),柱温为室温.流动相A为0.2%冰醋酸(用三乙胺调pH至5.0),流动相B为乙腈.梯度洗脱程序:A与B的体积比变化为0～3min 85∶15～65∶35(曲线系数为7),3～5min 65∶35～15∶85 (曲线系数为7),5～9min 15∶85～15∶85 (曲线系数为6),9～10min 15∶85～85∶15(曲线系数为6),10～15min 85∶15(曲线系数为6).PAD检测波长:340nm,流速1.0mL·min-1.内标为加替沙星.结果:在此色谱条件下,尿囊素衍生物与血浆中其他成分的分离完全,线性检测范围为2.5～40mg·L-1,最低检测浓度为2.5mg·L-1,相对回收率在99.35%～103.14%之间,日内及日间精密度RSD小于2.1%.结论:柱前衍生反相高效液相色谱法稳定、灵敏、可靠,可用于人体血浆中尿囊素浓度的测定.     

柱前衍生-反相高效液相色谱法测定阿胶补血口服液中主要氨基酸的含量

目的建立柱前衍生-反相高效液相色谱法同时测定阿胶补血口服液中主要氨基酸的含量。方法该方法以异硫氰酸苯酯为衍生剂,以Phenomenex Gemini C 18110(250 mm×4.6 mm,5μm)为色谱柱;以乙腈-水(4∶1)为流动相A,以乙腈-0.1 mol·L^-1乙酸钠溶液(用乙酸调节pH值为6.5)(7∶93)为流动相B,进行梯度洗脱;柱温为43℃;流速为1 mL·min-1;检测波长为254 nm。结果L-羟脯氨酸、甘氨酸、丙氨酸和L-脯氨酸分别在0.12~0.72,0.21~1.26,0.16~0.96和0.11~0.66μg范围内与峰面积呈良好的线性关系,r值均为0.9999;平均回收率分别为99.47%,98.51%,98.91%和98.84%;RSD值分别为1.6%,1.4%,1.6%和1.4%(n=9)。结论该方法快速灵敏,重复性好,可作为阿胶补血口服液中主要氨基酸的含量测定方法。     

柱前衍生—反相高效液相色谱法测定牡蛎提取物中的牛磺酸

采用邻苯二甲醛柱前衍生,反相高效液相色谱、荧光检测和单泵洗分析测定牡蛎提取物中的牛磺酸。分析方法为在２－巯基乙醇存在下,与ＯＰＡ衍生反应后,在ＯＤＳ柱上分离,本方法回收率较好,灵敏度高,对照品溶液测试在贮藏条件下稳定。     

柱前衍生化高效液相色谱法测定2-去氧葡萄糖的含量

目的建立柱前衍生化高效液相色谱法测定2-去氧葡萄糖(2-DG)含量的方法。方法采用1-苯基-3-甲基-5-吡唑酮(PMP)为柱前衍生化试剂,将2-DG在碱性条件下衍生化后直接进样测定。分离柱为HypersilODS2色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),流动相为100 mmol·L-1醋酸铵缓冲液(pH 5.5)-乙腈(78∶22),流速1.0 mL·min-1,波长249 nm。结果 2-DG在19.68~393.6μg·mL-1浓度范围内与峰面积具有良好的线性关系(r=0.9997);其定量限(S/N=10)和最低检出限(S/N=3)分别为7.8和3.1 ng;平均回收率为101.21%,RSD 0.63%。结论该方法简便实用、检测灵敏度高、测定结果准确,适用于2-DG的质量控制。     

柱前衍生化反相高效液相色谱法测定硫酸小诺霉素的含量

目的:建立测定硫酸小诺霉素含量的柱前衍生化反相高效液相色谱法。方法:色谱柱:KromasilC18柱（4.6mm×150mm,5μ）;流动相:水-冰醋酸-甲醇（30:5:65）配制的0.02mol/L的庚烷磺酸钠溶液;检测波长:330nm。结果:线性范围为0.0976-0.9760mg/ml（r=0.9999）,重复性试验的相对标准偏差RSD为1.0％（n=6）。结论:本法专属性强、准确、灵敏,可以作为硫酸小诺霉素含量测定的首选方法。