人LAK细胞对胃癌细胞的杀伤作用

用人重组白细胞介素—２（ｒＩＬ－２）体外激活健康献血员外周血单个核细胞（ＰＢＭＣ），使之形成淋巴因子激活杀伤（ＬＡＫ）细胞，借助中性红摄入法，研究了ＬＡＫ细胞对胃癌细胞的杀伤作用机制。结果表明：①ＬＡＫ细胞对胃癌细胞具有明显杀伤作用，诱导４天后其活性达峰值；②ＩＬ一２对已诱导的ＬＡＫ细胞杀伤胃癌细胞活性无协同作用；③ＬＡＫ细胞上清液有明显杀瘤活性物质，而ｒＩＬ一２对胃癌细胞无明显毒性作用。提示在ＬＡＫ细胞诱导过程中，淋巴细胞可能自身分泌一些细胞毒因子。     

肿瘤坏死因子对宫颈癌上皮细胞毒敏感性的影响

应用非同位素细胞毒试验方法，观察了肿瘤坏死因子α（ＴＮＦα）对淋巴因子激活的杀伤细胞（ＬＡＫ）介导的子宫颈癌上皮ＳｉＨａ细胞毒作用的影响。结果表明，ＴＮＦα可增强ＬＡＫ细胞对ＳｉＨａ的杀伤作用，其作用强度与ＴＮＦα的浓度有关；ＴＮＦα预处理靶细胞使ＳｉＨａ对ＬＡＫ的敏感性无明显增强（Ｐ＞０．０５）；当ＴＮＦα对ＬＡＫ及靶细胞二者都进行预处理时的细胞毒作用显著升高（Ｐ＜０．０１）。     

人胚脾LAK细胞体外抗肿瘤作用的实验研究

本文对人胚脾ＬＡＫ细胞的制备及其体外抗肿瘤作用进行了实验研究，为临床推广应用提供了可行性的依据。实验表明，在红细胞低渗休克法，溶血盐法，淋巴细胞分离液分离法中，以最后一种方法制备人胚脾ＬＡＫ前体细胞的效果最佳。用重组白细胞介素２诱导的人胚脾ＬＡＫ细胞在培养的第５～８ｄ对Ｋ５６２靶细胞的细胞毒活性最高，达６５．１％；而对Ｒａｊｉ靶细胞的细胞毒活性较低，在培养的第５ｄ为２６．７％。由此可见，人胚脾ＬＡＫ细胞对Ｋ５６２和Ｒａｊｉ两种肿瘤细胞均有杀伤活性。     

脐血LAK细胞生物学特性影响因素的研究

采集２３名产妇的脐带血和８名正常成人的外周血制备ＬＡＫ细胞，随机分为４组，在培养第３，５，７，１４天，分别利用ＭＴＴ法和＾１２５Ｉ－ＵｄＲ释放法对４组ＬＡＫ细胞的增殖力和杀伤活性进行了测定，同时用细胞毒方法测定培养７天的ＬＡＫ细胞的免疫表型。结果发现，在不同培养时间，脐血来源的ＬＡＫ细胞增殖力显著高于成人血ＬＡＫ细胞（Ｐ〈０．０５或Ｐ〈０．０１），成人血清组，脐血血清组，红细胞组ＬＡＫ细胞增殖力有     

植物血凝素激活的LAK细胞激活培养条件与其生物学特性关系的研究

将ＰＨＡ和ｒＩＬ ２合理配伍应用于ＬＡＫ细胞的激活培养中，研究了ＰＨＡ ＬＡＫ细胞的增殖、细胞毒活性及表型。结果表明：培养条件中加入适量ＰＨＡ可促进ＰＨＡ ＬＡＫ的增殖（Ｐ＜０．０５），不影响其细胞毒活性。ＰＨＡ／ｒＩＬ ２共同预刺激组于培养第２ｄ细胞数明显下降（３０％～４０％），但其到达增殖高峰的时间、峰值及扩增倍数与同一培养条件下的ＰＨＡ单独预刺激组相比，差别无显著性（均为Ｐ＞０．０５）；但前者对Ｋ５６２和Ｒａｊｉ的杀伤高峰值大于后者（Ｐ＜０．０１）。各组ＰＨＡ ＬＡＫ中有０．６０～０．７７的细胞为ＣＤ３＋Ｔ细胞，但ＰＨＡ ＬＡＫ／ｒＩＬ ２共同预刺激者的ＣＤ３＋、ＣＤ８＋细胞所占比率较ＰＨＡ单独预刺激者为高（Ｐ＜０．０５）。     

T—AK细胞上清液抑瘤活性的研究

本文应用ＭＴＴ比色法检测了ｒＩＬ－２和抗ＣＤ３单抗共同诱导激活的Ｔ－ＡＫ细胞培养上清液对Ｋ５６２细胞和ＢＥＬ－７４０２细胞增殖的抑制效应，并观察了Ｔ－ＡＫ上清液抑瘤活性与Ｔ－ＡＫ细胞杀伤活性的相关性，结果表明：（１）Ｔ－ＡＫ细胞能够自发分泌一些抑制Ｋ５６２细胞和ＢＥＬ－７４０２细胞增殖的抑制因子，但活性很低；（２）Ｔ－ＡＫ细胞在杀伤Ｋ５６２细胞过程中释放的抑制肿瘤细胞生长的物质，抑瘤活性比较高，共     

人LAK细胞的细胞化学活性与其细胞毒性关系的探讨

对诱导１ｄ、３ｄ、５ｄＬＡＫ细胞作ＡＮＡＥ、ＡＣＰ、ＰＯＸ及ＰＡＳ细胞化学染色，同时采用ＬＤＨ释放法对ＬＡＫ细胞的细胞毒性进行了检测。结果显示，随诱导天数的延长，ＬＡＫ细胞胞质中ＡＮＡＥ、ＡＣＰ和ＰＡＳ的反应物逐渐增多、增强，阳性率也逐渐增高，不同天数组间有显著性差异（Ｐ＜０．００１）。ＰＯＸ均为阴性反应。细胞毒性试验证实，随诱导天数的延长ＬＡＫ细胞杀伤活性逐渐增强。这表明ＬＡＫ细胞的细胞化学活性与其细胞毒性密切相关，为了解ＬＡＫ细胞的激活状态提供了形态学依据。     

淋巴因子对人PBMNC的LAK细胞形成、增殖和细胞毒作用的影响

应用乳酸脱氢酶释放法对重组白介素２，粗制天然白介素２，重组肿瘤坏死因子和天然免疫活性肽等淋巴因子诱导人ＰＢＭＮＣ为ＬＡＫ细胞以及ＬＡＫ细胞对靶细胞（人外周血淋巴细胞，人食管癌１０９细胞株和人红白血病细胞株＿（５６２）的细胞毒作用分别于培养的第４ｄ和第７ｄ进行了检测。结果显示：①四个配伍组和一个重组白介素２组的多克隆ＬＡＫ细胞攻击溶解１０９细胞株和Ｋ＿（５６２）细胞株的水平波动子２８％和６６％之间，中位数为４７％，而对正常人外周血淋巴细胞均无细胞毒作用；②重组白介素２和粗制天然白介素２配伍培养ＬＡＫ细胞的增殖协力约高于重组白介素２和重组肿瘤坏死因子组，以及重组白介素２和免疫活性肽组增殖协力的３倍，③在诱导ＬＡＫ细胞的过程中其增殖量和其细胞毒活性可以不同步。建议临床上治疗晚期肿瘤病人除用ＬＡＫ细胞和重组白介素２外，首先选用天然白介素２。     

乳腺癌细胞抗原和自身淋巴结树突状细胞对细胞因子诱导的杀伤细胞作用研究

目的：从乳腺癌患者淋巴结　中分离和定向诱导培养扩增　树突状细胞（ＤＣ），观察其经自身肿瘤细胞抗原冲击后对自身细胞因子诱导的杀伤细胞（ＣＩＫ）　杀伤活性的影响。方法：取手术切除肿瘤周围转移的淋巴结，提取单个核　细　胞，将贴壁生长的细胞用细胞因子基因重组粒巨集落生长因子（ｒｈＧＭ－ＣＳＦ）、基因重组白介　素４（ｒｈＩＬ－４）、基因重组α－肿瘤坏死因子（ｒｈＴＮＦ－α）联合诱导培养ＤＣ，然后用　自身肿瘤细胞抗原冲击ＤＣ并作用ＣＩＫ，最后检测ＣＩＫ杀伤３种靶细胞（自身乳腺癌细胞、Ｋ５６２和　ＳＧＣ－７９０１细胞）的活性。结果：乳腺癌患者转移淋巴结中的贴壁细胞，经　细胞因子联合诱导培养，ＤＣ含量可达１５．３％～３７．０％。经自身肿瘤抗原冲击的淋巴结ＤＣ活化的Ｃ　ＩＫ，杀伤自身肿瘤细胞活性达７１．３％，单纯ＣＩＫ为３７．０％，两者比较差异有显著性（Ｐ＜０　．０１）；而对Ｋ５６２和ＳＧＣ－７９０１细胞杀伤活性无明显差异。结论：肿瘤周围转　移淋巴结贴壁细胞在体外能定向诱导扩增出大量ＤＣ；ＤＣ经自身肿瘤抗原冲击后能明显提高ＣＩ　Ｋ对自　身肿瘤细胞的杀伤活性。     

正常鼠和免疫鼠CD3AK细胞和LAK细胞杀伤活性的比较研究

实验取正常鼠和Ｐ８１５肿瘤细胞致敏的免疫鼠脾细胞，经抗ＣＤ３抗体与低剂量ＩＬ－２或高剂量ＩＬ－２分别诱生为ＣＤ３ＡＫ细胞和ＬＡＫ细胞，用改良的乳酸脱氢酶释放法以Ｐ８１５细胞和ＹＡＣ－１细胞为靶细胞，测定ＣＤ３ＡＫ和ＬＡＫ细胞的杀伤活性。结果表明：正常鼠ＣＤ３ＡＫ细胞对Ｐ８１５细胞的杀伤活性高于ＬＡＫ细胞，对ＹＡＣ－１细胞的杀伤活性低于ＬＡＫ细胞。免疫鼠ＬＡＫ细胞对Ｐ８１５细胞的杀伤活性明显增高，高     

N K 细胞、 L A K 细胞抗弓形虫作用机理的研究

目的：观察 Ｉ Ｌ ２在小鼠抗弓形虫机理中的作用。方法：应用３ Ｈ 尿嘧啶（３ Ｈ Ｕ）特异性标记弓形虫在小鼠腹腔巨噬细胞（ Ｍ ｏｕｓｅ ｐｅｒｉｔｏｎｅａｌｍ ａｃｒｏｐｈａｇｅ, Ｍ Ｐ Ｍ ）内的增殖实验及１２５ Ⅰ 尿嘧啶核苷（１２５Ⅰ Ｕｄ Ｒ）标记的细胞毒实验,观察 Ｉ Ｌ ２的抗弓形虫作用。结果： Ｉ Ｌ ２对 Ｍ Ｐ Ｍ 的抗弓形虫作用及对 Ｉ Ｆ Ｎ γ诱导的 Ｍ Ｐ Ｍ 抗弓形虫作用无明显影响;正常小鼠 Ｎ Ｋ 细胞杀伤弓形虫感染靶细胞的能力,显著低于杀伤肿瘤细胞的能力（ Ｐ＜ ０００１）;而经 Ｉ Ｌ ２诱导的 Ｌ Ａ Ｋ 细胞杀伤自身感染弓形虫靶细 胞的能力, 明显高于 Ｎ Ｋ 细胞（ Ｐ＜ ０００１）, 并与 Ｌ Ａ Ｋ 杀伤肿瘤细胞的能力无明显差别（ Ｐ＞ ００５）。结论：提示 Ｉ Ｌ ２体内应用提高弓形虫小鼠的生存能力的机理可能与提高体内 Ｌ Ａ Ｋ 细胞杀伤自身感染弓形虫细胞的能力有关。     

螺旋藻多糖对CD3AK细胞增殖能力的影响

研究了螺旋藻多糖（ＰＳ）对ＣＤ３ＭｃＡｂ激活的杀伤细胞（ＣＤ３ＭｃＡｂ ａｃｔｉｖａｔｅｄ ｋｉｌｌｅｒ ｃｅｌｌｓ，ＣＤ３ＡＫ ｃｅｌｌｓ）增殖能力的影响。结果表明，当ＰＳ浓度为２．５μｇ／ｍｌ培养体系条件下，对ＣＤ３ＡＫ细胞具有明显的刺激细胞增殖作用（Ｐ〈０．０２）；对培养长达２３ｄ的ＣＤ３ＡＫ细胞杀伤肿瘤细胞（ＫＬ５６２细胞）的活性仍维持在较高的水平（４６．５％￣５０％）。     

自体LAK高效扩增法的建立及活性诱导实验

目的建立体外高效扩增自体ＬＡＫ细胞方法，并测定诱导扩增的ＬＡＫ细胞是否具有杀瘤细胞作用及表型变化。②方法取２８例不同类型的肿瘤病人外周静脉血液，经密度梯度离心获取ＬＡＫ细胞前体，以白细胞介素２（ＩＬ－２）作为诱导剂，应用独特的液相三步扩增方法扩增自体ＬＡＫ细胞。分别用间接免疫荧光（ＩＦＡ）和四甲基偶氮唑盐（ＭＴＴ）法，测定细胞表型和对肿瘤细胞的杀伤活性，并与对照组细胞进行比较。③结果以该法诱导扩增４～１２ｄ，细胞数量增加１２０倍，对Ｋ５６２和Ｒａｊｉ细胞杀伤活性最高达６１．７％和４０．１％（效∶靶＝５０∶１），与对照组细胞比较，差异有极显著性（ｔ＝４．５～４．７，Ｐ＜０．０１）。自体ＬＡＫ细胞具有成熟Ｔ细胞表型特点（ＣＤ３和ＣＤ８）。④结论此法可扩增出高数量和高效杀肿瘤细胞活性的自体ＬＡＫ细胞，并可推广临床应用     

鸡血藤对小鼠LAK,NK细胞的影响

观察了鸡血藤水煎液对正常小鼠淋巴因子活化杀伤细胞（ＬＡＫ细胞）及自然杀伤细胞（ＮＫ细胞）的影响，结果表明，鸡血藤能够明显提高小鼠ＬＡＫ细胞的活性（Ｐ〈０．０５），且鸡血藤高剂量（１ｇ／ｍｌ）亦能促进小鼠ＮＫ细胞活性（Ｐ〈０．０５）。     

锌对老年人自然杀伤细胞活性的影响

应用原于吸收光谱法和１２５ＩＵＲ释放法测定外周血血浆锌值和自然杀伤（ＮＫ）细胞活性，结果表明，老年组显著低于青年组（Ｐ＜０．０１和Ｐ＜０．０５）；老年锌补充组两项均明显增高（Ｐ＜０．０１和Ｐ＜０．０５），且此两组血浆锌值和ＮＫ细胞活性均呈正相关关系（ｒ＝０．５４１，Ｐ＜０．０５和ｒ＝０．７８１，Ｐ＜０．０５）．提示，锌可能对ＮＫ细胞活性的恢复有着调节作用。     

A－LAK细胞与LAK细胞体外增殖及抗肿瘤作用的比较

本实验观察了Ａ－ＬＡＫ细胞的体外扩增及其抗肿瘤作用，并与ＬＡＫ细胞进行了比较。结果表明，Ａ－ＬＡＫ细胞在短期内大量扩增，在培养第７天时达到增殖高峰，Ａ－ＬＡＫ细胞增加１２．０２倍，而ＬＡＫ细胞增加２．６９倍，培养３周后Ａ－ＬＡＫ细胞增加５３．５０倍，而ＬＡＫ细胞仅增加４．４５倍。１８小时ＬＤＨ－Ｌ释放试验表明，Ａ－ＬＡＫ细胞对Ａｎｉｐ９７３和Ｋ５６２细胞均显示较高的杀伤活性，与ＬＡＫ细胞相比有显著差异（Ｐ＜０．０５）。通过ＦＡＣＳ细胞表型分析显示，Ａ－ＬＡＫ细胞大量表达ＣＤ１６、ＣＤ５６抗原，提示Ａ－ＬＡＫ细胞可能来源于ＬＧＬ－ＮＫ细胞群。     

肿瘤患者外周血单个核细胞诱导的CD3AK细胞体外抗肿瘤作用的初 …

采用抗ＣＤ３单抗体（１０μｇ／ｍ）联合ＩＬ－２（５０Ｕ／ｍｌ）诱导肿瘤病人外周血单个核细胞成为ＣＤ３ＡＫ细胞，并观察其体外增殖及抗肿瘤作用，结果显示：肿瘤病人的ＮＫ活性显著低于正常人，但其ＣＤ３ＡＫ细胞体外杀伤Ｋ５６２细胞的细胞毒活性与正常人比较无明显差异（Ｐ〉０．０５）。本研究初步表明：由肿瘤病人外周血单个核细胞诱导的ＣＤ３ＡＫ细胞，可作为过继免疫治疗的效应细胞进行自身淋巴细胞治疗。     

CD3AK细胞对人肺癌细胞株的细胞毒作用

目的研究ＣＤ３ＡＫ细胞对人肺癌细胞株的细胞毒作用。方法应用抗ＣＤ３单克隆抗体及重组白细胞介素２（ｒＩＬ－２）刺激培养ＣＤ３ＡＫ细胞,体外实验研究ＣＤ３ＡＫ细胞的增殖及对人肺癌细胞株Ａ５４９、ＳＰＣ－Ａ１细胞的杀伤能力。结果刺激培养４ｄ,ＣＤ３ＡＫ细胞增殖及杀伤能力与ＬＡＫ细胞无差异;培养８ｄ,ＣＤ３ＡＫ细胞的增殖及杀伤能力明显优于ＬＡＫ细胞（Ｐ＜０．０１）;培养１６ｄＣＤ３ＡＫ细胞仍见增殖,且杀伤作用保持在５０％以上。结论ＣＤ３ＡＫ中细胞作为一种新的肿瘤过继性免疫治疗效应细胞具有潜在的临床应用价值。     

人实体瘤肿瘤浸润淋巴细胞的高效扩增及功能评价

目的体外高效扩增肿瘤浸润淋巴细胞（ＴＩＬ），为进一步开展基因治疗肿瘤奠定基础。②方法采用机械分离、酶消化和不连续密度梯度离心法分离提取ＴＩＬ前体细胞；以ＩＬ－２作为诱导剂，采用液相三步扩增方法扩增培养，并分别用ＭＴＴ和ＩＦＡ法与对照的自体ＬＡＫ细胞比较细胞动力学。同时对Ｋ５６２细胞和自体肿瘤细胞（ＡＴＣ）进行杀伤试验以及表型检测。③结果从２８例实体瘤组织和肿瘤引流淋巴结中获取的ＴＩＬ前体细胞，２６例培养成功，其中２３例ＴＩＬ数量达到治疗数量级；ＴＩＬ细胞对ＡＴＣ杀伤作用强于自体ＬＡＫ细胞（ｔ＝１１．４，１８．９，Ｐ＜０．０１）。ＴＩＬ细胞表型特点为ＣＤ３，ＣＤ４，ＣＤ８淋巴细胞亚群。④结论ＴＩＬ细胞具有高效杀肿瘤细胞作用，ＴＩＬ细胞可作为基因治疗的理想载体细胞。     

用IL－2／LAK细胞对中晚期癌症病人细胞免疫的影响

为了探讨ＩＬ－２／ＬＡＫ细胞对中晚期癌症病人细胞免疫的影响，用３Ｈ－ＴｄＲ掺入ＤＮＡ法测定了１７例中晚期癌症病人在ＩＬ－２／ＬＡＫ细胞治疗前后外周血加ＰＨＡ或不加ＰＨＡ淋巴细胞体外增殖试验，结果显示无论空白对照（１１／１６）还是ＰＨＡ诱导的Ｔ淋巴细胞增殖试验（１２／１６），ｃｐｍ值较治疗前均有明显的提高（Ｐ＜０．０５，Ｐ＜０．０１）；在Ｔ细胞亚群的测定中，ＩＬ－２／ＬＡＫ细胞治疗前后比较，ＣＤ３＋和Ｃ８＋细胞都未发现明显的差异，只有Ｃ４＋细胞较治疗前（１３／１７）有了显著提高（Ｐ＜０．０１）；ＮＫ细胞虽未达到正常水平，但也显示较治疗前有显著增高的倾向；结果表明，ＩＬ－２／ＬＡＫ细胞疗法既对肿瘤细胞有直接杀伤作用，也对细胞免疫起了明显的促进作用。