荧光定量RT-PCR检测白血病多药耐药基因及其临床意义

目的　在Light-CyclePCR仪上对多药耐药基因 (MDR1)定量的技术方法和临床应用进行探讨。方法　应用荧光定量逆转录 -多聚酶链反应 (RT -PCR)检测了 30例急性白血病患者和 8例正常人外周血MDR1基因的表达。结果　该实验方法标准曲线线性良好 (r=1.0 ) ,耐药组MDR1基因拷贝数与非耐药组有显著性差异 (P <0 .0 1) ,正常人亦有低水平MDR1基因的表达。结论　荧光逆转录 -多聚酶链反应 (RT -PCR)是一种可靠的定量方法 ,能快速、特异地检测临床肿瘤标本中MDR1,为临床医生用药、预防MDR发生、考核逆转MDR效果等方面提供了有价值的量化指标。     

建立酶切图谱法从日本历年本土基因型麻疹病毒株中鉴别中国输入株H1基因型麻疹病毒

目的本文主要研究建立一种酶切图谱法从日本历年本土C1、D3、D5基因型麻疹病毒中鉴别中国输入株H1基因型麻疹病毒,即逆转录多聚酶链式反应—限制性片段长度多态性分析方法(RTPCRRFLP)。方法对C1、D3、D5及H1基因型麻疹病毒H基因全长的序列进行分析,寻找能够从日本本土株中鉴别出输入株H1基因型麻疹病毒的限制性内切酶酶切位点,建立RTPCRRFLP方法。同时,我们又应用多株已经过序列分析确定为C1、D3、D5、H1基因型的麻疹病毒用该RTPCRRFLP方法进行验证。结果应用该RTPCRRFLP方法所得结果与序列分析方法结果一致。结论该RTPCRRFLP方法是一种简单、快速又实用的从日本本土株中筛查H1基因型输入株的方法。     

2012年辽宁省铁岭市食源性致病菌监测中检测出1例诺如病毒

目的 了解辽宁省铁岭市水产品中食源性致病菌的污染状况,有效预防控制食源性疾病的发生。 方法 应用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)对2012年第一季度食源性致病菌常规监测采集到的6份水产品进行检测,对阳性PCR产物进行基因测序。 结果 6份水产品中,有1份检测出诺如病毒RNA阳性。测序结果分析显示,该阳性标本的诺如病毒VP1全基因序列测定和分析显示为GⅡ-4型诺如病毒。 结论 铁岭市首次在食源性致病菌日常监测中检测出诺如病毒GⅡ-4型。因此应加大对生食水产品的监督检查力度,避免因诺如病毒引起的病毒性胃肠炎暴发。     

内毒素性急性肺损伤大鼠肺HO-1的表达及其意义

目的观察内毒素(LPS)性急性肺损伤(ALI)大鼠肺组织血红素氧合酶-1(HO-1)的表达,探讨其意义。方法18只SD大鼠随机均分为ALI、锌原卟啉(ZnPP)预处理和正常对照3组,尾静脉注射给药。ALI组注入LPS 5 mg/kg,对照组注入生理盐水,ZnPP预处理组注入ZnPP 10μmol/kg 10 min后再注入LPS 5 mg/kg,各组注入液体总量相同。3 h后腹主动脉放血处死大鼠,生理盐水肺灌洗,取左肺制作组织匀浆,TRIZOL法提取总RNA后,用半定量逆转录聚合酶链反应(SqRT-PCR)测定HO-1 mRNA;另取右下肺制作病理切片,光镜观察并盲法评分比较肺组织学变化。结果静脉注入LPS后大鼠肺组织HO-1 mRNA的表达明显上调(P<0.05),肺损伤严重,评分显著增加;ZnPP预处理组ALI大鼠肺组织HO-1 mRNA的表达明显受抑,肺损伤更严重,评分更高(P<0.05);直线相关分析显示,HO-1 mRNA的受抑程度与损伤评分呈显著负相关(P<0.05)。结论内毒素性ALI肺组织表达上调的HO-1对肺损伤有一定的保护作用。     

Koutango病毒TaqMan反转录聚合酶链式反应方法的建立

目的建立Koutango病毒(KOUTV)的实时荧光定量TaqMan反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测方法。方法从GenBank中下载KOUTV基因序列,进行多序列比对分析,针对NS5基因中的高保守序列片段设计KOUTV的特异引物与探针,用4科9种病毒进行检测方法特异性验证,通过平行重复实验验证检测方法稳定性,利用体外转录的RNA标准品建立了KOUTV的NS5基因拷贝数的绝对定量分析模型。结果引物与探针工作特异性良好,同一样品重复检测循环阈值(Ct)的变异系数均小于1.5%,定量分析模型灵敏度达到1.0×10^2拷贝/反应。通过本研究建立的快速检测方法对新疆采集的112批,6328只蚊虫进行了测定,结果均为阴性。结论成功建立了KOUTV的高特异性、高敏感性的TaqMan RT-PCR检测方法,可应用于实验室和临床诊断。     

急性乙型肝炎患者外周血单个核细胞颗粒溶素mRNA定量测定及临床意义

目的应用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测乙型肝炎(简称乙肝)患者外周血单个核细胞(PBMC)中颗粒溶素(GNLY)mRNA的表达,探讨GNLY基因表达水平与急性乙肝的关系。方法实时荧光定量RT-PCR分别检测40例急性乙肝患者及100名正常对照的PBMC的GNLY基因表达水平,同时检测血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)水平。结果急性乙肝患者发病期mRNA表达显著高于正常对照组(P<0.01),恢复期GNLY基因表达与正常对照组差异无统计学意义(P>0.05)。乙肝患者GNLYmRNA与血清ALT、AST呈正相关。结论实时荧光定量RT-PCR检测GNLY mRNA的表达准确可靠。患者外周血GNLY基因表达水平与急性乙肝的发生发展存在一定的相关性。     

急性乙型肝炎患者外周血单个核细胞颗粒溶素mRNA定量测定及临床意义

目的应用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测乙型肝炎（简称乙肝）患者外周血单个核细胞（PBMC）中颗粒溶素（GNLY）mRNA的表达,探讨GNLY基因表达水平与急性乙肝的关系。方法实时荧光定量RT-PCR分别检测40例急性乙肝患者及100名正常对照的PBMC的GNLY基因表达水平,同时检测血清丙氨酸氨基转移酶（ALT）、天冬氨酸氨基转移酶（AST）水平。结果急性乙肝患者发病期mRNA表达显著高于正常对照组（P〈0.01）,恢复期GNLY基因表达与正常对照组差异无统计学意义（P〉0.05）。乙肝患者GNLYmRNA与血清ALT、AST呈正相关。结论实时荧光定量RT-PCR检测GNLY mRNA的表达准确可靠。患者外周血GNLY基因表达水平与急性乙肝的发生发展存在一定的相关性。     

应用多重套式RT-PCR检测儿童急性淋巴细胞白血病的融合基因

目的　研究染色体结构易位所致的融合基因在儿童急性淋巴细胞白血病 (ALL)的表达。方法　采用多重套式RT PCR结合染色体R带或G带核型分析、流式细胞仪细胞免疫表型检测对 64例儿童ALL进行分析。结果　64例ALL患儿中 23例(36. 0% )具有 13种染色体畸变产生的融合基因,包括E2A/PBX1,E2A/HLF,TEL/AML1,TLS/ERG,MLL/AF4,MLL/AF9,MLL/AF10,MLL/AFX,MLL/AF6,MLL/ELL,dupMLL,TAL1D,HOX11。ALL患儿融合基因和染色体总畸变率为 67. 2%(43 /64)。结论　多重套式RT PCR结合染色体核型、免疫表型是儿童ALL临床诊断、治疗和预后判断的重要依据。     

恶性细胞中巨噬细胞集落刺激因子及其受体的异源表达

业已证明血清M-CSF(可溶性M-CSF)水平在白血病前期、白血病、淋巴瘤、乳腺癌和肝癌患者明显升高,但机制不明。为探讨细胞内M-CSF及其受体表达在病态造血,肿瘤和白血病中的作用,采用RT-PCR和ABC免疫酶标技术,对12名正常人静脉血,21例初诊血液病患者骨髓和6株血源细胞系的M-CSF/M-CSF-R mRNA及抗原表达进行了分析。结果表明M-CSF及其受体的表达呈多态性分布,无论是因子还是受体在白血病患者的粒、单、红、巨核系的细胞膜、质、核呈不同程度的反应,提示其在不同状态和病种作用中的复杂性,值得深入研究。     

Orexin-A mRNA表达的脏器分布及在急性炎症反应中的变化

目的研究Orexin—A mRNA表达在体内主要脏器的分布及在急性炎症损伤后的变化，探讨Orexin—A在急性炎症反应中的作用。方法取正常雄性SD大鼠和肠缺血-再灌注(IR)损伤模型大鼠的下丘脑、胃、肺、肾、附睾脂肪垫、睾丸、肝、脾、十二指肠等主要脏器，采用逆转录-聚合酶链反应(RT—PCR)检测Orexin—A mRNA在各主要脏器的分布情况，同时检测IR损伤后下丘脑内Orexin—A mRNA的表达变化。结果所取各脏器均有0rexin—A mRNA表达，尤其是在胃、肺、肾的表达丰度较高。在IR损伤的急性刺激作用后，下丘脑0rexin—A mRNA表达水平出现波动式的下降趋势。结论0rexin—A mRNA广泛分布于机体主要脏器，对急性炎症刺激具有时间依赖性的应答效应，其表达水平变化可以作为一种新型的急性炎症反应监测指标。