TSP-1 promotes glomerular mesangial cell proliferation and extracellular matrix secretion in Thy-1 nephritis rats

The proliferation of glomerular mesangial cells (GMC) and secretion of the extracellular matrix (ECM) in rat with Thy-1 nephritis (Thy-1N) resembling human mesangioproliferative glomerulonephritis have been explored for many years; however, the molecular mechanisms of GMC proliferation and ECM production remain unclear. Our previous studies have demonstrated that the thrombospondin-1 (TSP-1) gene was involved in mediating rat GMC proliferation and ECM synthesis induced by sublytic C5b-9 in vitro. In the pre...     

L-EGCG对脂多糖诱导的大鼠系膜细胞增生影响

目的 :探讨L ( ) 表没食子基儿茶素没食子酸酯 (L epigallocatechinsgallicacidester,L EGCG)对大鼠肾小球系膜细胞 (glomerularmesangialcells ,GMCs)增生影响及可能的机制。方法 :首先应用不同剂量 (1 0 0 ,2 0 0 ,5 0 0mg/L)EGCG观察其在不同时间 (2 4 ,4 8,72h)对GMCs增生的影响 ,筛选出EGCG对GMCs增生影响的最佳剂量与最佳时间 ;在此基础上 ,将GMCs分为LPS组、对照组、EGCG组、激素组与激素 +EGCG组分瓶培养 ,实验末收集培养细胞 ,涂片 ,应用免疫组化法检测GMCs的增生细胞核抗原 (proliferatingcellnuclearantigen ,PCNA)阳性表达率 ,TUNEL(terminaldeoxynucleotidyltransferasemediateddUTPnickendlabeling,TUNEL)法检测GMCs有效凋亡率 ;应用生化法对培养上清进行 OH ,MDA(malonydialdehyde ,MDA)及SOD (superoxideDismutase ,SOD)活性测定。结果 :2 0 0mg/LEGCG对GMCs增生的抑制效果在 4 8h最佳 ;EGCG组细胞上清中 OH ,MDA较LPS组降低 (P <0 .0 1 ) ,SOD活性较LPS组增高 (均P <0 .0 1 ) ;EGCG组培养细胞PCNA阳性率低于脂多糖组 ,有效凋亡率高于脂多糖组 (P <0 .0 1 )。PCNA阳性率与 OH ,MDA呈正相关 ,与SOD活性呈负相关 (P <0 .0 1 )。结论 :EGCG可能通过减轻 OH对SOD的活性抑制 ,降低MDA的过     

青蒿琥酯对大鼠肾小球系膜细胞细胞周期的影响

目的 观察青蒿琥酯（An）对大鼠肾小球系膜细胞（glomerular mesangial cells,GMC）细胞周期的影响。方法 用不同浓度的青蒿琥酯刺激多糖诱导增殖的大鼠肾小球系膜细胞,流式细胞仪检测其细胞周期的变化。结果 青蒿琥酯使细胞有丝分裂被阻滞于G0期,S期细胞比例下降,G0期细胞比例增加。结论 青蒿琥酯能够抑制脂多糖诱导的大鼠肾小球系膜细胞增殖,这种作用可能是通过其抑制细胞分裂、复制实现的。     

蟾蜍灵对大鼠肾小球系膜细胞增殖和细胞外基质分泌的影响

目的:探讨蟾蜍灵(bufalin)对脂多糖(LPS)诱导的大鼠肾小球系膜细胞(GMC)增殖及细胞外基质(ECM)分泌的影响.方法:体外培养大鼠肾小球系膜细胞,分为对照组、LPS刺激组(LPS5mg/L)和蟾蜍灵干预组(LPS5mg/L和蟾蜍灵1×10-8mol/L),应用台盼蓝拒染法检测蟾蜍灵对GMC的细胞毒性作用,通过MTT、流式细胞技术检测GMC增殖变化,RT-PCR检测转化生长因子-β1(TGF-β1)的mRNA的表达,ELISA法检测GMC培养上清中纤维连接蛋白(FN)及TGF-β1的表达.结果:MTT结果显示蟾蜍灵浓度在1×10-8mol/L及以上时呈剂量依赖性抑制GMC增殖(P<0.01).细胞周期分析显示蟾蜍灵组S期细胞比例较脂多糖组降低(P<0.01).蟾蜍灵干预组与脂多糖组相比TGF-β1的mRNA相对表达量减少(P<0.05),FN,TGF-β1蛋白分泌量减少(P<0.01).结论:蟾蜍灵对LPS作用后肾小球系膜细胞增殖及细胞外基质分泌具有抑制作用.     

肌肽对高糖环境下肾小球系膜细胞增殖的影响及机制

目的探讨肌肽(carnosine)对高糖诱导的大鼠肾小球系膜细胞(rat mesangial cells,RMCs)增殖的影响及作用机制。方法以RMCs为研究对象,分别采用MTT法和BrdU-ELISA法观察肌肽对高糖诱导的RMCs增殖的影响;乳酸脱氢酶(LDH)法检测肌肽对细胞的毒性作用;酶生化法测定丙二醛(MDA)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH)含量及细胞内超氧化物歧化酶(SOD)活性等。结果肌肽可显著抑制高糖诱导的RMCs增殖,在5～30 mmol/L范围内呈一定的浓度依赖效应,且与其抗氧化作用密切相关。结论肌肽通过抗氧化作用抑制高糖诱导的RMCs增殖,且有浓度依赖趋势。     

甲羟戊酸对人类肾小球系膜细胞增殖的影响

目的探讨甲羟戊酸(MVA)对人类肾小球系膜细胞(HMC)增殖的作用和机制。方法用酶联免疫检测仪检测不同浓度MVA作用下HMC在490 nm波长处的光吸收(A490 nm)值以测定不同浓度和时间点MVA作用下HMC的增殖水平。结果MVA在10-100 nmol/L范围内对HMC增殖有促进作用,且作用呈浓度依赖性,100 nmol/L MVA作用下A490 nm值从正常组0.408±0.019上升到0.509±0.011。100 nmol/L MVA对HMC的增殖作用在12-48 h内呈时间依赖性。12,24,48 hA490 nm值分别为0.201±0.040,0.326±0.019,0.509±0.011。结论MVA是HMC增殖的促进剂。     

辛伐他汀对高糖培养肾小球系膜细胞增殖和细胞周期的影响及机制

目的：研究辛伐他汀（SIM ）对高糖培养肾小球系膜细胞（GMC）增殖和细胞周期的影响,并观察其炎症因子和细胞外基质的变化。方法将大鼠 GMCs 分为4组：低糖组[LG 组,葡萄糖（Glu）5．6 mmol／L ],高糖组（HG 组,Glu 30 mmol／L ）, HG ＋ SIM （10μg／L）组和 HG ＋ SIM （25μg／L）组。采用4-甲基偶氮四唑蓝（M TT ）法检测各组细胞的增殖能力,同时比较各组细胞的 G0／G1,G2＋ M 期和 S 期细胞比例。比较各组细胞上清液中的转化生长因子β1（TGF-β1）、纤维黏连蛋白（FN）和Ⅳ型胶原（COL4）水平。结果 HG 组不同时刻的吸光度（A）高于 HG ＋ SIM （10μg／L）组、HG ＋ SIM （25μg／L）和 LG 组,差异有统计学意义（P＜0．05）。 LG 组的 G0／G1期细胞比例为（35．67±3．38）％,S 期细胞比例为（41．24±5．64）％;HG 组的 G0／G1期细胞比例为（25．88±4．02）％,S 期细胞比例为（28．65±1．88）％;HG ＋ SIM （10μg／L）组的 G0／G1期细胞比例为（28．12±2．01）％,S 期细胞比例为（35．55±2．09）％;HG ＋ SIM （25μg／L）组的 G0／G1期细胞比例为（31．85±3．52）％,S 期细胞比例为（39．82±2．23）％,差异有统计学意义（P＜0．05）。 HG 组上清液 TGF-β1、FN 和 COL4水平高于 HG ＋ SIM （10μg／L）组、HG ＋ SIM （25μg／L）和 LG组,差异有统计学意义（P＜0．05）。结论 SIM 可以通过降低 TGF-β1水平来抑制 GMCs 的增殖并调整细胞周期,抑制 GMCs 肥大。     

白细胞介素—13对肾小球系膜细胞增殖的影响

目的 :观察白细胞介素 - 1 3(IL - 1 3)对肾小球系膜细胞增殖的影响。方法 :应用流式细胞仪检测加入不同浓度 IL - 1 3作用后对肾小球系膜细胞 DNA含量的变化。结果 :各实验组的 DNA合成前期 (G1期 )细胞数增加 ,而合成期 (S期 )细胞数降低 ,各实验组与对照组比较 ,差异均有显著性 (P<0 .0 1 )。结论 :IL - 1 3具有抑制肾小球系膜细胞增殖作用     

洛伐他汀对肾小球系膜细胞增殖及细胞周期时相的影响

目的探讨洛伐他汀对人肾小球系膜细胞（HMC）增殖和细胞周期时相的影响及机制。方法用３H-TdR掺入量法测定HMC增殖水平,以流式细胞术测定HMC的细胞周期。结果洛伐他汀剂量依赖性抑制HMC增殖,从细胞周期水平,洛伐他汀可使HMC由G１期向S期的进展受阻,这些抑制作用可被外源甲羟戊酸和法呢醇恢复。结论洛伐他汀是HMC增殖的抑制剂,本研究为重新认识和评价他汀类药物在治疗肾脏疾病中的作用提供了一定的理论及实验依据。     

红参发酵产物对高糖下大鼠肾小球系膜细胞增殖和细胞外基质降解的影响

目的：探讨红参发酵产物（FRGE）对高糖刺激下大鼠肾小球系膜细胞（GMCs）增殖和细胞外基质（ECM）降解的影响,阐明FRGE对糖尿病肾病（DN）的防治作用及可能机制。方法：将GMCs分为正常对照（NG）组、高糖（HG）组、高糖＋不同浓度（3.75、7.50和15.00 mg·L^-1）FRGE组。四甲基偶氮唑盐（MTT）光吸收法观察各组GMCs的增殖率,酶联免疫吸附法（ELISA）检测培养细胞上清中Ⅳ型胶原蛋白（Col Ⅳ）的水平,蛋白免疫印迹技术（Western blotting）检测基质金属蛋白酶2（MMP-2）和基质金属蛋白酶组织抑制物2（TIMP-2）蛋白表达水平。结果：与NG组比较,HG组GMCs增殖率升高（P<0.01）,Col Ⅳ水平升高（P<0.01）,TIMP-2蛋白表达水平上调（P<0.01）,MMP-2蛋白表达水平下调（P<0.01）;与HG组比较,高糖＋不同浓度FRGE组GMCs增殖率均降低（P<0.01）,Col Ⅳ水平降低（P<0.01）,TIMP-2蛋白表达水平下调（P<0.01）,MMP-2蛋白表达水平上调（P<0.01）。结论：FRGE可通过抑制高糖诱导的大鼠GMCs增殖,促进ECM的降解,延缓DN的发生发展。     

HBV X蛋白通过激活PI3K/Akt信号通路诱导大鼠肾系膜细胞增殖

目的 探讨乙型肝炎病毒X蛋白(HBV X)通过激活PI3K/Akt信号通路诱导大鼠肾小球系膜细胞(GMC)增殖的作用机制.方法 通过PCR扩增HBVX基因,将目的基因HBVX与空载体PCI-neo连接,采用脂质体转染法转染大鼠GMC,LY294002阻断PI3K/Akt信号通路,MTT法测定各组细胞不同时间点的增殖情况,Western blotting检测转染后大鼠系膜细胞中HBV X、Akt、p-Akt和β-actin的表达情况.结果 PCI-neo-X质粒转染大鼠GMC后,于36 h和48 h时间点可稳定表达HBx,MTT法测得GMC+PCI-neo-X组细胞在36 h和48 h时间点明显增殖,与GMC+pCI-neo组比较,差异有统计学意义(P ＜0.05);GMC+PCI-neo-X组中加入抑制剂LY294002后,与未加抑制剂组相比细胞增殖受到明显抑制,Western blotting测得其Akt磷酸化程度显著减弱(P＜0.05).结论 HBVX蛋白能诱导大鼠肾小球系膜细胞增殖,PI3K/Akt信号通路是HBV X蛋白调节GMC增殖的重要信号通路之一.     

大鼠Thy-1肾炎增殖病变及sublytic C5b-9致其肾小球系膜细胞增生的实验研究

目的:检查大鼠Thy-1肾炎(Thy-1 nephritis,Thy-1N)肾小球系膜细胞(glomerular mesangial cell,GMC)的增生病变及亚溶解型(sublytic)C5b-9复合物在GMC增殖中的作用?方法:复制大鼠Thy-1N模型,分别于注射Thy-1抗体后18 h?3 d和7 d时,取肾组织,用real-time PCR和Western blot方法检查其肾组织中细胞增殖指标,即细胞周期蛋白D2(cyclin D2)和增殖细胞核抗原(proliferative cell nuclear antigen,PCNA)的mRNA丰度及蛋白表达水平?用免疫荧光观察肾小球中C5b-9复合物的沉积?同时,使用BrdU掺入法?光镜及电镜观察大鼠肾小球细胞的增殖情况?此外,体外培养大鼠GMC,进行不同分组处理后再给予sublytic C5b-9刺激,用3H-胸腺嘧啶核苷酸掺入法(3H-thymidine incorporation,3H-TdR)检查GMC的增殖情况?结果:大鼠Thy-1N病变18 h,肾组织中cyclin D2?PCNA表达和肾内BrdU阳性细胞数均开始升高,实验3 d和7 d,其表达进一步提高?同时肾小球内可见C5b-9复合物沉积,部分C5b-9包绕的肾细胞形态完好?另形态学观察还发现,实验18 h,部分GMC溶解坏死,而实验3 d,GMC数量明显增多,7 d增加更为显著?体外实验中,大鼠GMC在sublytic C5b-9刺激后18 h,其细胞增殖水平显著增高,而用sublytic C5b-9刺激GMC产生的培养上清处理正常的GMC后,亦能轻度刺激GMC增殖?结论:大鼠Thy-1N肾小球病变存在早期增殖和继发增生的病理改变,而GMC的早期增殖可能与sublytic C5b-9作用有关?     

过敏性紫癜肾炎患者血清对体外培养大鼠GMC增殖及活性氧产生的影响

目的:探讨过敏性紫癜肾炎(HSPN)患者血清对体外培养大鼠肾小球系膜细胞(rGMC)增殖及活性氧(ROS)产生的影响.方法:分别采用HSPN和正常人血清体外培养rGMC,比较二者在细胞增殖及ROS产生上的差别.结果:HSPN组的rGMC增殖显著快于对照组(P＜0.01);HSPN组超氧化物歧化酶值明显低于对照组,而产生活性氧单位则显著高于对照组(均为P＜0.01).结论:HSPN患者血清能显著刺激rGMC的增殖,且这一作用极可能与ROS产生过多相关.     

尿毒症患者血清对大鼠肾小球系膜细胞体外增殖及纤连蛋白分泌的影响

目的:观察尿毒症患者血清对体外培养的大鼠肾小球系膜细胞(GMC)增殖及纤连蛋白(FN)分泌的影响.方法:将尿毒症患者血清分为甲状旁腺素(PTH)正常组(A)、PTH增高组(B)、PTH严重增高组(C),正常人血清作为对照组(N),分别作用GMC 24 h、48 h,采用噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖,流式细胞仪测定细胞周期,免疫细胞化学结合计算机图文分析系统检测c-jun表达,ELISA法检测上清液中FN含量.结果:A、B、C 3组均抑制GMC增殖,促使S及G2M期细胞减少,G0-G1期细胞增多,抑制c-jun的表达,并促进FN分泌(P＜0.05).且B组与C组的抑制增殖及促进FN分泌的作用与N组比较差异有统计学意义(P＜0.01);B组作用强于A组(P＜0.01),C组48 h作用强于24 h(P＜0.01).结论:尿毒症患者血清可抑制GMC增殖并促进合成分泌FN,可能在肾小球硬化的形成中发挥作用.     

阿托伐他汀对糖尿病肾病大鼠肾小球细胞增殖的影响及其意义

目的探讨阿托伐他汀对糖尿病肾病大鼠肾小球细胞增殖的影响及意义。方法将40只SD雌性大鼠随机分为四组:糖尿病肾病组(DN组)、预防组、治疗组、对照组,每组10只。DN组、预防组和治疗组糖尿病造模成功后,预防组和治疗组分别给予不同剂量的阿托伐他汀干预,对照组仅注射柠檬酸缓冲液。第8周测定相关生化指标,观察肾组织病理改变后,通过免疫组化法分析大鼠肾小球增殖细胞核抗原(proliferation cell nuclear antigen,PCNA)的表达。结果预防组和治疗组相关生化指标较DN组好转,肾脏病变减轻,PCNA表达于肾小球固有细胞。DN组肾小球中PCNA的表达均较预防组、治疗组、对照组明显上调。而预防组、治疗组肾小球中PCNA的表达较DN组下调,且预防组PCNA的下调更为显著。结论阿托伐他汀通过下调肾小球PCNA表达,抑制肾小球细胞增殖实现对DN的保护作用。     

牛磺酸抑制血小板衍生生长因子诱导的系膜细胞增殖及细胞外基质分泌

目的：观察牛磺酸对血小板衍生生长因子（PDGF）诱导的系膜细胞增殖及细胞外基质分泌的影响，并探讨其作用的可能机制。方法：体外传代培养的大鼠系膜细胞，经一定量的牛磺酸和（或）PDGF作用48h后，用噻唑蓝（MTT）法检测细胞增殖，流式细胞术检测细胞周期，ELISA检测细胞外基质（Ⅳ型胶原及层粘连蛋白）含量，免疫细胞化学方法检测C－jun,C-fos的表达。结果：与对照组比较，10，20ng/ml PDGF可明显促进系膜细胞增殖，影响细胞周期，使G0－G1期细胞减少，S期细胞增加，并能明显促进细胞外基质的分泌及C-jun,C-fos的表达（P＜0．01），而20或40mmol/L牛磺酸作用于系膜细胞后，可明显抑制PDGF（20ng/ml)诱导的细胞增殖，细胞外基质分泌及C-jun,C-fos的表达。结论：牛磺酸对PDGF诱导的系膜细胞增殖及细胞外基质分泌有显著抑制作用，其机制可能与牛磺酸抑制C-jun,C-fos表达有关。     

L—EGCG对Lp（a）诱导大鼠系膜细胞增生及ICAM-1表达的影响

目的探讨儿茶素的主要成分L-表没食子基儿茶素没食子酸酯（L—EGCG）对脂蛋白（a）[Lp（a）]诱导的大鼠肾小球系膜细胞（GMCs）增生影响及可能机制。方法选定最佳剂量与最佳时间将GMCs分为对照组、Lp（a）组[Lp（a）（5．0pg／ml）]、L—EGCG组[Lp（a）（5．0μg／ml）＋L—EGCG（200mg／L）处理]共三组分瓶培养。观察L—EGCG对GMCs增生率（MTT）、增生细胞核抗原（PCNA）阳性表达率及培养液上清的细胞间粘附因子-1（ICAM-1）浓度的影响，并与对照组相比较。结果在对照组、Lp（a）组及L—EGCG组，随着处理时间的延长，GMCs的MTT、PCNA、上清ICAM-1浓度呈增加趋势，经F检验，差异有统计学意义（P〈0．01）。与对照组比较，应用Lp（a）5．0g／ml处理后，在不同的处理时间，Lp（a）组MTT计数、PCNA阳性率、ICAM-1均明显增高，经两两之间的q检验，差异有统计学意义（P〈0．01）。与Lp（a）组比较，应用L—EGCG处理Lp（a）诱导的大鼠GMCs，在不同的处理时间，L—EGCG组MTT计数、PCNA阳性率、ICAM-1均明显降低，经两两之间的q检验，差异有统计学意义（P〈0．01）。在Lp（a）组、L—EGCG组，培养上清ICAM-1浓度与PCNA阳性率及与反映系膜细胞增生指标的MTT呈正相关。结论Lp（a）能明显促进肾脏GMCs的增生，L—EGCG可明显抑制Lp（a）诱导的大鼠GMCs增生，此可能与影响ICAM-1表达有关。     

洛伐他汀对人类肾小球系膜细胞增殖及细胞周期的影响

目的探讨洛伐他汀(LOV)对人类肾小球系膜细胞(HMC)增殖及细胞周期的影响。方法人类系膜细胞常规培养。实验分为3组:正常对照组(10%胎牛血清)、洛伐他汀组(10μmol/LLOV)、甲羟戊酸(MVA)干预组(10μmol/LLOV 100μmol/LMVA)。每组分别在干预因素作用24,48h时用MTT法检测HMC在490nm波长处的光吸收(A490nm)值,观察LOV对HMC增殖的影响。用流式细胞仪测定HMC的细胞周期G1(DNA合成前期)与S期(DNA合成期)的比率,观察LOV对HMC周期进展的影响。结果MTT法结果显示24,48hLOV抑制HMC增殖,A490nm值分别为0.108±0.010和0.216±0.009,与正常组比较P<0.05。100μmol/LMVA可逆转其作用。细胞周期结果显示24,48hLOV抑制HMC细胞周期进展,S/G1比例分别为0.150±0.009和0.301±0.010,与正常组比较P<0.05。100μmol/LMVA可逆转其作用。结论LOV抑制HMC增殖,阻止细胞周期进展,MVA可逆转其抑制作用。     

祛风通络方对大鼠系膜细胞增殖及转化生长因子β1和白细胞介素6mRNA表达的影响

目的：观察祛风通络方对脂多糖（lipopolysaccharide，LPS）诱导的大鼠肾小球系膜细胞（mesangial cell，MC）增殖及其分泌的转化生长因子β1（transforming growth factor—betal，TGF—β1）和白细胞介素6（interleukin-6，IL-6）mRNA表达的影响。方法：采用血清药理学方法，体外培养大鼠肾小球系膜细胞，分为正常对照组、模型组、蒙诺（福辛普利钠）组和祛风通络方组。并采用甲基噻唑基四唑（methyl thiazolyl tetrazolium，MTT）法检测大鼠MC增殖情况，逆转录聚合酶链反应法检测TGF—β1和IL-6mRNA的表达。结果：与正常对照组比较，模型组大鼠肾小球系膜细胞增殖升高（P〈0．05）；与模型组比较，祛风通络方组大鼠肾小球系膜细胞增殖受到抑制（P〈0．05），且祛风通络方作用优于蒙诺（P〈0．05）。模型组系膜细胞TGF-β1mRNA表达高于正常对照组（P〈0．01）；祛风通络方组和蒙诺组系膜细胞TGF—β1mRNA表达低于模型组（P〈0．01）；祛风通络方组与蒙诺组比较，TGF—β1mRNA的表达降低（P〈0．01）。LPS刺激后可提高大鼠系膜细胞内IL-6mRNA的表达，与正常对照组比较，模型组IL-6mRNA表达上升，差异有统计学意义（P〈0．01）；祛风通络方组、蒙诺组与模型组比较，IL-6mRNA表达下降（P〈0．01）；祛风通络方降低IL-6mRNA表达的作用亦优于阳性对照药蒙诺（P〈0．01）。结论：祛风通络方对大鼠MC增殖及其TGF—β1和IL-6mRNA表达均有明显的抑制作用。