组织工程技术尿道重建的实验研究

目的 利用组织工程技术进行人工管状皮肤的培养，探讨其用于尿道重建的可行性。方法 用Wistar大鼠乳鼠皮肤为细胞来源，结合管状壳多糖基质网架，在体外共同培养成复层皮肤结构，移植到裸鼠皮下。分别于移植的5、7、14、28、35d收取标本，光镜下观察移植物生长情况。以没有种植细胞的壳多糖基质网架作为对照组，进行对比分析。结果 移植物在裸鼠皮下生长良好，未发生收缩。移植初期细胞数量少，排列不规律；随着时间的延长，细胞数量逐渐增多，排列趋于规律。所有移植物均见成纤维细胞生长，约57层，细胞呈长梭形，成纤维细胞向表皮细胞层游走，并规律的生长在表皮细胞层下，细胞大致按层生长，只有少量细胞相互长人对方。在移植后的5d，可见有毛细血管长入。之后，毛细血管的数目日渐增多。移植物的表皮层生长良好，呈4-6层，但分化较差。对照组可见有大量炎性细胞。结论 移植物的成纤维细胞生长、分化较好，表皮细胞增殖较好，但分化差。以壳多糖为支架的人工皮肤进行尿道修复具有可行性。     

复合壳多糖人工皮肤修复家兔全层皮肤缺损的实验研究

目的　探讨复合壳多糖人工皮肤在修复新西兰家兔全层皮肤缺损中的作用。　方法　在无菌条件下将成纤维细胞与复方真皮基质凝胶混合制成真皮替代物 ,然后接种角质形成细胞 ,培养1周后升至液面 ,继续培养 1～ 2周 ,形成人工皮肤。将复合壳多糖人工皮肤移植于家兔的全层皮肤缺损处 ,观察家兔反应 ,定期活检 ,作组织病理检查。　结果　所有家兔创面愈合良好 ,无一例出现移植物下积脓、出血和感染 ,没有明显的免疫排斥反应 ,能长期覆盖创面 ,且具有较好的弹性和抗撕拉性 ,便于操作。　结论　复合壳多糖人工皮肤是一种操作简便的具有良好的组织相容性的生物活性敷料。     

用毛囊隆突细胞构建复合皮的实验观察

目的 以人毛囊隆突细胞为种子细胞体外构建组织工程复合皮，在体观察其功能性修复全层皮肤缺损的可行性。方法 胶原酶消化法体外分离培养人毛囊隆突细胞和毛乳头细胞，实验分为A、B两组。A组将毛囊隆突细胞与毛乳头细胞按1：2混合，接种于胶原包被的聚羟基乙酸纤维支架中；B组单纯接种相同数量的毛乳头细胞。而后覆盖角质形成细胞膜片，构成组织工程复合皮，移植于裸鼠全层皮肤缺损创面。观察创面愈合情况，分别于术后2、4、6周在光学显微镜下观察移植物组织学变化。结果 组织工程复合皮能够有效修复A、B两组裸鼠全层皮肤缺损。术后2周，A、B组创面均可见完整的表皮及真皮结构。术后4-6周，A组复合皮表皮层明显增厚并形成基膜的钉突，可见毛囊样结构；B组仅表皮层有所增厚但基膜平整，未见钉突和毛囊结构形成。结论 以聚羟基乙酸真皮基质为支架，用角质形成细胞、毛囊隆突细胞和毛乳头细胞共同构建的组织工程复合皮，可以有效修复裸鼠全层皮肤缺损。其中毛囊隆突细胞参与了创面解剖修复，同时可能引导组织结构和功能的修复。     

组织工程口腔黏膜固有层修复皮肤缺损的初步研究

目的探讨两种组织工程口腔黏膜固有层移植修复皮肤缺损的效果.方法分别以胶原凝胶和壳多糖-胶原凝胶为网架与体外培养的Wistar大鼠口腔黏膜成纤维细胞构建胶原凝胶口腔黏膜固有层(fibroblast-populated collagen lattice,FPCL)、壳多糖-胶原凝胶口腔黏膜固有层(fibroblast -populated chitosan collagen lattice,FPCCL),用BrdU标记其中的成纤维细胞后,移植修复同种异体大鼠背部全层皮肤圆形缺损.将36只21～25周龄Wistar大鼠分为FPCL组、FPCCL组及创口仅覆盖纱布的对照组,每组12只.术后行大体观察创面愈合情况;4、7、14和21 d 3组创面直径测量;组织学及免疫组织化学染色观察其组织修复情况.结果术后大鼠创面均无感染,创面结痂在14及17 d自然脱落,创面逐渐愈合,被新生表皮覆盖,术后21 d新生皮肤光滑,颜色与正常皮肤接近,无体毛.术后各时间点3组创面直径均逐渐变小,差异有统计学意义(P＜0.01),14 d以后,创口大小较稳定.术后7 d,FPCL组受植创面比FPCCL组受植创面和对照组创面小(P＜0.01).组织学观察:术后7 d,3组创面未完全表皮化;14、21 d,FPCL组、FPCCL组受植区完全表皮化,有钉突,对照组无明显钉突,表皮已分层,基底细胞层完整,最表面有角化物;真皮中新生胶原纤维细,含毛细血管.免疫组织化学染色显示,FPCL组、FPCCL组术后各时间点阳性成纤维细胞出现在肉芽组织的细胞密集处和新生真皮中,与新生肉芽组织共同参与了皮肤缺损的修复重建,未出现免疫排斥现象.结论口腔黏膜成纤维细胞作为修复皮肤缺损的种子细胞是可行和有效的,壳多糖胶原凝胶在限制受植区创面收缩变小方面优于单纯胶原凝胶.FPCL和FPCCL两组新生皮肤的质量优于对照组,两种组织工程口腔黏膜固有层作为皮肤缺损区永久性真皮替代物是可行和有效的.     

组织工程化表皮膜片移植中厚皮供区预防瘢痕增生30例

整形、烧伤外科修复面颈部及功能部位皮肤缺损，广泛使用方法是切取大张中厚皮片移植。中厚皮供区常规治疗方法愈合后遗留增生性癞痕。我科自2003年以来采用组织工程化表皮膜片移植中厚皮供区创面30例，该法在促进创面愈合及抑制瘢痕增生方面取得了显著疗效，报道如下。     

PDGF-B基因表达在组织工程化皮肤移植后血管重建中的作用

目的构建含有血小板衍化生长因子B(PDGFB)基因的组织工程化皮肤,进行动物移植实验,研究PDGFB基因表达在真皮血管重建中的作用。方法构建PDGFB真核表达质粒,用脂质体LipofectAMINE介导转染成纤维细胞。分别构建3种不同类型的组织工程化皮肤角质形成细胞 脱细胞猪真皮基质(A组),角质形成细胞 脱细胞猪真皮基质 成纤维细胞(B组),角质形成细胞 脱细胞猪真皮基质 PDGFB基因转染的成纤维细胞(C组),分别移植于大鼠背部创面,观察术后2、4、6周真皮血管重建情况。结果术后2周C组真皮浅层内可见较多新生毛细血管长入,B组次之,A组毛细血管长入较少(P<005);术后4周各组真皮浅层内毛细血管数逐渐增加,但C组毛细血管数仍明显高于B、A两组(P<005);术后6周各组织工程化皮肤内毛细血管数差异无显著性意义。结论PDGFB基因在组织工程化皮肤移植后早期真皮血管重建中发挥了重要的作用,为移植后皮片成活提供了保障。     

真皮源干细胞复合人血浆促进皮肤创面神经修复的实验研究

目的观察真皮源干细胞复合人血浆移植对皮肤创面神经修复的影响。方法培养人真皮源干细胞（DMSC），观察其体外分化情况；以人血浆为载体构建DMSC移植物；60只裸鼠背部制作皮肤缺损创面，随机分为干细胞移植组（A组）、单纯血浆支架组（B组）和空白组（C组）；创面愈合后第1、2、4、8周取材，免疫荧光检测表皮下及真皮层PGP9、5的表达．以此反映皮肤神经再生情况。结果DMSC体外向神经元样、胶质样、许旺细胞样分化。A组创面愈合后第1、2周表皮下及真皮层PGP9．5荧光密度高于B组、C组（P〈0．01）；B组第2周真皮层和第4周表皮下PGP9．5荧光密度高于C组（P〈0.05）。结论真皮源干细胞复合血浆移植有利于皮肤创面的神经修复。     

表皮细胞膜片与猪去细胞真皮基质复合的移植

目的观察鼠表皮细胞膜片与猪去细胞真皮基质复合移植修复全层皮肤缺损的可行性和效果。方法以SD乳鼠的第3代表皮细胞制备细胞膜片,高渗盐水/氢氧化钠法制备猪去细胞真皮基质。36只SD大鼠全层皮肤缺损创面,分别行去细胞真皮基质与表皮细胞膜片复合移植和单纯表皮细胞膜片移植。结果两组创面术后均未见对移植物的急性期免疫排斥反应,第2、4、6周复合植皮组移植物成活率分别为(77.05±4.69)%、(83.12±5.13)%、(90.66±4.87)%,与细胞膜片移植组差异无统计学意义(P>0.05),但移植物收缩率显著减低,分别为(9.84±2.33)%、(18.97±3.40)%、(25.92±3.11)%(P<0.05)。复合植皮组上皮化良好,胶原纤维排列有序,基底膜结构完整。结论复合移植适用于修复全层皮肤缺损,能改善创面愈合质量。     

毛乳头细胞和表皮细胞构建带附属器的组织工程皮肤

目的根据毛囊形成原理,以人毛乳头细胞和表皮细胞为种子细胞,构建带附属器的组织工程皮肤替代物。方法分实验组和对照组,实验组皮肤替代物真皮层接种人毛乳头细胞和表皮细胞;对照组真皮层不接种任何细胞。在裸鼠背部作一圆形全层皮肤缺损,将两组皮肤替代物气-液界面培养5 d后移植到裸鼠背部。观察创面愈合情况,并在移植后第4、6、8周取材,进行组织学观察。结果皮肤替代物移植后2周,实验组创面已完全愈合,移植后4周对照组创面才完全愈合,并且对照组创面收缩比实验组明显。移植后6周,实验组真皮层内见到毛囊样结构和皮脂腺结构,对照组未见毛囊样结构和皮脂腺样结构。结论将人的毛乳头细胞和表皮细胞共同种植在皮肤替代物的真皮层,可以构建出带附属器的组织工程皮肤替代物,这种替代物对创面的修复能力更强。     

组织工程化皮肤研究新进展

组织工程化皮肤是指运用工程及生命科学的原理和方法构建出的用于修复、维持和改善损伤皮肤组织功能的替代物 ;其核心是建立由细胞和生物材料构成的三维空间复合体。理论上 ,组织工程化皮肤应具有如下功能 :①作为损伤皮肤的替代物 ;②作为基质植入宿主体内并生长 ;③或作为含药理成分的化学刺激物 ,促进创面愈合[1] 。但现阶段 ,还不能作为永久性的皮肤替代物。本文对以胶原为细胞外基质材料所形成的组织工程化皮肤的研究进展作一简要综述。一、胶原作为细胞外基质材料及特点胶原蛋白是真皮结缔组织的主要成分 ,占皮肤干重的70 % ,具有天然…