酶联免疫吸附测定诊断试剂盒使用中出现的问题和解决方法

自从1971年Engvall等发表了酶联免疫吸附测定(En—zynle linked immunosorbent assay ELISA)用于IgG定量测定的文章后,使1966年开始用于抗原定位的酶标抗体技术发展成液体标本中微量物质的测量方法,即当今广泛使用的ELISA     

对HBsAg酶联免疫吸附试剂盒二次利用的探讨

目的探讨HBsAg酶联免疫吸附试剂盒二次利用的可行性。方法利用乙型肝炎表面抗原酶联免疫吸附法（ELISA）试剂盒使用后的反应板进行二次利用。结果对363份HBsAg阳性标本和159份HBsAg阴性标本，用首次使用的反应板和二次利用的反应板进行了对比检测，阳性符合率为100％，阴性符合率为98．7％（x^2=0．019，P〉0．05）。二次利用前、后的实验结果差异无显著性意义。结论对乙肝表面抗原酶联免疫吸附试剂盒可以进行二次利用，是一项保质保量的开源节流的方法。并可推广到HBsAb、HBeAg等双抗体夹心法的检测中。     

临床ELISA试剂盒的选择与使用体会

目前 ,肝炎病毒学标志、甲胎蛋白、性腺激素等项目的检测方法以酶联免疫吸附试验 (EL ISA)最常用。 EL ISA试剂盒虽有质量标准 ,但质量高低不一、国家也加大了检查监督力度 ,尤其是对用于供血员检查的试剂盒实行“批批检”,贴有防伪标志。但实验室如何选择和使用试剂盒 ,才能确     

白喉抗体(IgG)定量检测试剂盒(酶联免疫法)使用评价

目的 应用白喉抗体(IgG)定量检测试剂盒(酶联免疫法),对健康人群进行抗体水平检测,与标准法检测进行比较,评价试剂盒的灵敏度和特异性.方法 根据试剂盒说明书,采用双盲法检测300份健康人血清,依照标准品绘制标准曲线,计算白喉抗体浓度,通过与标准检测方法比较,计算敏感性、特异性、相关性等指标.结果 通过检测标准品,计算线性回归方程y=8.1119x+0.0358,r=0.9987,敏感性为98.2%,特异性为99.3%,约登指数为0.97,阳性预测值为99.4%,阴性预测值为97.8%.相关性分析结果r=0.992676,P<0.05,标准法测定结果与国产试剂盒测定结果之间有显著的正相关.结论 该国产试剂操作规范,简单快捷,不受条件限制,利于大量标本的快速检测,对该病的临床诊断、流行病调查,提供了一种更为简捷精确切实可行的检测手段.     

破伤风抗体(IgG)定量检测试剂盒(酶联免疫法)使用评价

目的 应用破伤风抗体(IgG)定量检测试剂盒(酶联免疫法),对健康人群进行抗体水平检测,与标准法检测进行比较,评价试剂盒的灵敏度和特异性.方法 根据试剂盒说明书,采用双盲法检测300份健康人血清,依照标准品绘制标准曲线,计算破伤风抗体浓度,通过与标准检测方法比较,计算敏感性、特异性、相关性等指标.结果 通过检测标准品,计算线性回归方程y=7.7489x-0.0018,r=0.99,国产试剂敏感性为94.1%,特异性为96.8%,约登指数为0.909,阳性预测值为98.5%,阴性预测值为88.5%.相关性分析结果r=0.987798,P<0.05,标准法测定结果与国产试剂盒测定结果之间有显著的正相关.结论 该国产试剂操作规范,简单快捷,不受条件限制,利于大量标本的快速检测,对该病的临床诊断、流行病调查,提供了一种更为简捷精确切实可行的检测手段.     

献血员血清中抗－HCV阳性率调查

献血员血清中抗－ＨＣＶ阳性率调查杨世明，杨枨林，解华，洪丙炎（唐都医院血库）关键词献血员；丙型肝炎病毒抗体；酶联免疫吸附试验中图法分类号Ｒ５１２．６为了确保医疗用血质量，减少血源性肝炎的传播，我科自１９９２年６月开始采用酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）...     

武汉地区献血员血清抗HCV表达状况及其与HBVm关系的探讨

输血后肝炎是输血疗法的重要并发症之一。通过特异性抗原或抗体的检测进行献血员筛选是其主要的预防措施。为探讨这一措施对输血后丙型肝炎防治的必要性,我室对一组献皿员血清进行了抗HCV检测,并结合其HBVm携带状况进行了探讨。     

两次酶联法筛检抗—HCV阻断HCV传播途径的价值

对献血员两新酶联法筛检抗ＨＣＶ，结果８８１５人复检后又检出２例抗－ＨＣＶ阳性，说明两次严格筛检是阻断ＨＣＶ传播途径的重要措施。     

小鼠肝炎病毒多价抗体ELISA试剂盒研制

作者用5株小鼠肝炎病毒(MHV-1、MHV-3、-JHM、-A_(59)和-沪_(79))研制了以多价抗原检测MHV抗体的ELISA试剂盒。该试剂盒与MHV-3抗体试剂盒对222份淘汰小鼠血清的MHV抗体检出率分别为60.81％(135/222)与49.55％(110/222),对44份普遍鼠群血清样本的检出率也表明该试剂盒较单价抗原敏感;试剂盒与Ect、LCM、EHF、Sendai和R_(eo)-3病毒的抗体无交叉反应,阻断试验结果也表明其特异性好;试剂盒在-20℃至少可保存4个月,在室温或2～8℃至少可保存5周;其重复性好,操作简便。     

贵阳地区无偿献血人群HCV筛查的结果分析

目的 比较献血人群抗-HCV反应性、HCV核酸检测结果及HCV重组免疫印迹试验(RIBA)确证实验结果.方法 对2013年10月至2015年3月采集的无偿献血者血液标本,采用2个不同厂家的国产酶联免疫吸附试验(ELISA)试剂检测和1个进口核酸检测试剂及配套检测系统对HCV进行筛查,对抗-HCV呈反应性或/和NAT检测阳性标本进行RIBA,将2种ELISA试剂检测反应性的结果与核酸检测结果、RIBA确证实验结果进行分析与比较.结果 共检测133 959例无偿献血者标本,其中覆盖核酸检测结果的标本113 380例,抗-HCV检测呈反应性标本比例0.19％(252/133 959),NAT检测阳性共27例,阳性检出的比例0.02％(27/113 380);HCV反应性标本经RIBA确证实验确证阳性的比例19.8％(50/252)、阴性的比例54.8％(138/252)、不确定的比例25.4％(64/252);27例核酸检测阳性的标本均为ELISA检测双试剂反应性和确证实验阳性;2家ELISA试剂检测结果、RIBA确证实验结果和核酸检测结果差异有统计学意义(P＜0.05).结论 选用2次ELISA+1次核酸检测的检测策略更为安全;针对较高比例的假阳性标本,应建立献血者跟踪随访制度,最大限度地保留献血人群.     

风疹病毒特异性IgM诊断试剂盒的研制和临床应用

目的 :建立风疹病毒特异性IgM诊断试剂的技术方法并应用于临床。方法 :对传统的间接ELISA方法进行了改良 ,定性检测人血清中风疹病毒IgM。结果及结论 :本法克服了类风湿因子 (RF)和特异性IgG对实验的干扰 ;与HSV 1、HSV 2和HCMV抗原无交叉反应 ;具有快速、敏感、特异性强、重复性好等优点。在 16 5例临床可疑风疹病例中检出阳性 142例 ,用进口风疹病毒捕获法试剂盒检出阳性 133例 ,阴阳符合率为 84.0 %。     

电化学发光与酶免疫分析检测HBsAg的比较

目的: 比较电化学发光(ECLIA)和酶联免疫吸附试验(ELISA)检测HBsAg的结果。方法: 选择HBsAg阳性标准品和99例4种模式样本[①HBsAg(+)/HBeAg(+)/HBcAb(+);②HBsAg(+)/HBeAb(+)/HBcAb(+);③HBsAg(+)/HBcAb(+);④HBeAg(+) HBcAb(+)],分别采用ECLIA和ELISA一步法、二步法检测HBsAg。结果: ECLIA的日内CV比ELISA一步法、二步法分别提高3.3%和3.2%,日间CV分别提高3.5%和3.3%,敏感度各为0.063、0.5和0.25ng/ml。①②③模式3种方法HBsAg100%阳性率。④模式2例ECLIA1:50稀释和ELISA二步法为阳性,而ECLIA原倍和ELISA一步法为阴性。①模式1:50稀释后的HBsAgCOI值比原倍血清高。结论: ELISA一步法检测HBsAg,简便快速,标本的含量较低或浓度过高可出现假阴性。为避免一步法Hook效应造成的假阴性,可采用经典的两步法。ECLIA灵敏度高,但也存在Hook效应,必要时应稀释标本进行检测或进行中和确证试验。     

FLC-ELISA用于多发性骨髓瘤早期诊断的临床评价

目的对酶联免疫吸附法测定免疫球蛋白κ和λ自由轻链(FLC-ELISA)用于多发性骨髓瘤早期诊断进行临床评价。方法应用一种新型酶联免疫吸附法来测定多发性骨髓瘤病人血清及尿液中的免疫球蛋白κ和λ自由轻链并与免疫电泳法和免疫比浊光散射法测定的结果进行比较。结果 40例多发性骨髓瘤病人 FLC-ELISA总检出率为100％,而免疫固定电泳法和免疫比浊光散射法的总检出率则分别为57．5％和85．5％。同时,病人样品的测试还表明酶联免疫吸附法可以将多发性骨髓瘤的诊断提前两年以上。结论用酶联免疫吸附法来测定免疫球蛋白κ和λ自由轻链,具有较高的灵敏度,精确性和可重复性,适用于临床多发性骨髓瘤病的早期检测,同时对此疾病进程的跟踪及治疗效果的评价也具有重要意义。     

胶体金法与ELISA法在检测丙型肝炎病毒抗体中的比较

目的探讨胶体金法与酶联免疫吸附试验(ELISA)法在检测丙型肝炎病毒(HCV)抗体中的应用价值。方法选择2012年3月至2013年3月泸州医学院附属医院收治的860例HCV患者,采用胶体金法和ELISA法进行HCV抗体检测。结果胶体金法和ELISA法检测HCV抗体的阳性检出率分别为3.60%和3.72%,差异无统计学意义(P>0.05)。以ELISA法作为检测HCV抗体阳性的标准,胶体金法对于HCV抗体检测的灵敏度为93.75%,特异度为99.88%。结论胶体金法进行HCV抗体检测与ELISA法并无差异,且胶体金法具有快速简便的优点,值得在临床检测中进行推广。     

抗-HCV不同试剂检测结果分析

目的探讨不同检测方法、试剂对丙型肝炎病毒（HCV）抗体检测结果的影响。方法以不同试剂采用酶联免疫吸附试验（ELISA）对献血者血浆标本进行抗-HCV检测,呈反应性标本采用HCV RNA RT—PCR荧光定量确证检测。结果ELISA再次检测抗HCV抗体阳性率明显低于初次检测阳性率,差异有统计学意义（P〈0．01）,确证试验阳性率低于初次检测和再次检测的阳性率,差异有统计学意义（P〈0．05）。结论ELISA测定结果为HCV抗体阳性者应经HCVRNART—PCR荧光定量加以确认。     

不同厂家试剂盒检测血清胱抑素C的性能比较

目的探讨免疫透射比浊法试剂盒测定血清胱抑素C的性能比较和基质效应。方法选择迈克生物科技有限公司、金斯尔、四川新成生物科技有限公司3种胱抑素C试剂盒,比较他们的批间精密度、准确度,再以迈克生物有限公司试剂的测定结果为参照系统,评估金斯尔胱抑素C、四川新成生物科技有限公司2种试剂盒的测定结果和基质效应。结果 3种试剂盒及其与校准品组成的Aa、Bb、Cc 3个检测系统,批间精密度均〈6%,厂家提供的配套质控品检测结果良好,相对偏倚最大的为-4.58%,不同厂家配套质控品相对偏倚差异显著,Bb系统对Aa系统显示出良好的相关性。回归方程为Y=0.937 7X-0.057 6,R2=0.995 5。检测结果表明3种试剂盒检测血清胱抑素C的性能均符合说明书要求,满足临床检测要求。但是不同厂家检测结果缺乏可比性。结论 3种试剂盒的性能指标均完全符合试剂盒说明书要求,但是用不同厂家的试剂盒,必须使用配套质控品否则由于基质效应均值有时会超过质控品提供范围引起假失控,并且不同厂家检测结果偏差较大缺乏可比性,建议不同厂家的血清胱抑素C应有自己的参考值范围。     

原发性肝癌78例血清HCVRNA和抗HCV的观察

用逆转录－聚合酶链反应和酶联免疫吸附试验检测了７８例原发性肝癌患者清丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）ＲＮＡ、抗ＨＣＶ和乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）免疫学标物。     

ELISA测定抗结核菌素纯蛋白衍生物LgG诊断小儿结核病

为了探讨小儿结核病的血清学诊断方法,作者用ELISA法检测了216例健康儿童及63例结核病患儿微量耳垂血中抗结核菌素纯蛋白衍生物抗体(抗PPDIgG)水平.结果:健康儿童抗PPDIgG随着年龄增长而增高.学龄前儿童及学龄儿童抗PPDIgG水平与PPD皮试反应状态无明显关系.患儿组的抗PPDIgG水平显著高于同年龄对照组.如果以健康儿童95％位数的OD值为正常值上限,本试验检查患儿的特异性为95％,敏感性在结核感染儿、3月至7岁及至12岁结核病患儿分别为50％,72.5％和72.7％.作者认为本法可以做为小儿结核病的辅助诊断方法.     

B细胞激活因子水平ELISA检测方法的建立及临床初评

目的:建立血清B细胞激活因子(Blymphocyte stimulator,BlyS)水平的ELISA检测方法,并初步探讨其临床价值.方法:以商品化的抗人BlyS单克隆抗体、生物素化抗人BlyS多克隆抗体,采用双抗夹心法自行建立BlyS血清水平的ELISA检测方法;并对80例风湿性疾病患者[50例系统性红斑狼疮(SLE)、20例类风湿关节炎(RA)、10例干燥综合征(SS)]、60例自身免疫性肝病患者[35例原发性胆汁性肝硬化(PBC)、25例自身免疫性肝炎(AIH)]和40例正常人的血清BlyS水平进行检测.结果:成功建立血清BlyS水平的ELISA检测法且重复性较好,80例风湿性疾病患者的血清BlyS水平为(8.23±1.42)ng/ml,60例自身免疫性肝病患者为(3.40±0.79)ng/ml,40例正常人的血清BlyS水平为(3.19±0.88)ng/ml.与正常人相比,风湿性疾病组的BlyS血清水平明显升高(P＜0.01),而自身免疫性肝病组的BlyS血清水平升高则不明显.结论:本研究所建立的BlyS血清水平ELISA检测方法简便、可靠、准确,为后续研究BlyS与自身免疫性疾病尤其是风湿性疾病的关系奠定了基础.