短期能量限制对成年雌性大鼠生殖寿命的影响

目的：探讨短期能量限制对雌性大鼠生殖寿命的影响。方法：21只8周龄雌性sD大鼠随机分为对照组和能量限制组,并监测大鼠体质量及动情周期变化,8周后取大鼠卵巢,其切片由苏木精．伊红染色,观察存活卵泡数和不同发育阶段的卵泡比例。结果：对照组体质量持续上升,能量限制组较平缓。能量限制组健康卵泡（135．3．4±11．7）比对照组（90．7±7．1）多（P〈0．05）,原始卵泡数（57．7±7．7）与对照组（19．4±4．0）比显著增多（P〈0．001）,原始卵泡比例（41．9±2．9）比对照组（20．5±3．5）要多（P〈0．01）,而发育和成熟卵泡比例与对照组比则降低。结论：短期能量限制可能通过抑制卵泡发育启动、减少每个周期成熟卵泡的个数来降低卵泡消耗,有益于生殖寿命延长。     

雷帕霉素通过抑制mTOR信号延长成年雌性大鼠卵巢的寿命

目的探讨雷帕霉素对成年雌性大鼠卵泡发育及卵巢寿命的影响,并研究mTOR信号在其中的作用。方法将16只8周龄雌性SD大鼠随机分为对照组和雷帕霉素干预组,观察两组大鼠动情周期的变化;10周后取大鼠卵巢,组织切片经苏木精-伊红染色,计数不同发育阶段的各级卵泡数;用蛋白免疫印迹（Western-blot）检测卵巢中mTOR和其磷酸化的靶分子S6K的蛋白表达水平。结果雷帕霉素干预组大鼠健康卵泡数（225.0±16.2）显著多于对照组（178.4±5.3）,差异有统计学意义（P〈0.05）。其中原始卵泡数（132.5±13.7）是对照组（59.6±5.2）的2倍多,而窦状卵泡和闭锁卵泡数则明显低于对照组,差异均有统计学意义（P〈0.01）。雷帕霉素干预组mTOR和P-P70S6K蛋白表达水平明显低于对照组,差异有统计学意义（P〈0.05）。结论雷帕霉素可能通过抑制mTOR信号,从而抑制原始卵泡向发育卵泡转化,保存原始卵泡储备,由此使卵巢的寿命延长。     

壬基酚对成年雌性SD大鼠生殖功能的影响

目的:观察壬基酚对成年雌性SD大鼠生殖功能的影响.方法:对成年雌性SD大鼠每天灌胃壬基酚(50、100、200 mg·kg-1),阳性对照组每天灌胃乙蔗酚(0.2 mg·kg-1),阴性对照组管饲花生油.通过阴道涂片观察性周期的变化,28 d后处死大鼠,放免法测定血清雌激素、黄体生成素浓度,并作垂体、子宫、卵巢组织病理学检查,免疫组化技术检测子宫的雌激素受体(ER)表达情况.结果:壬基酚剂量≥100 mg·kg-1可使大鼠出现持续动情期,血清雌激素、黄体生成素水平降低(P＜0.05),卵巢组织病理学切片显示卵泡数目减少(P＜0.05),子宫ER表达无明显差异.结论:壬基酚在较高浓度时可抑制雌性大鼠的生殖功能.     

十溴联苯醚孕期暴露对雌性子代大鼠生殖发育的影响

目的 观察十溴联苯醚(BDE-209)孕期暴露对雌性子代大鼠生殖发育的影响.方法 将24只SD孕鼠随机分为BDE-209低剂量(100 mg·kg1·d-1)组、BDE-209中剂量(300 mg·kg-1·d-1)组、BDE-209高剂量(900 mg·kg-1·d-1)组和对照组(玉米油),每组6只.在雌性子鼠出生后第4天(PND4)、PND10、PND16、PND21、PND30和PND40时测量体质量、身长和尾长;在PND16和PND21时测量肛殖距;分别于PND21和PND40时处死1只雌性子鼠检测血清雌二醇水平;PND40时计算卵巢、肝脏和肾脏脏器系数,观察卵巢质量及病理变化.结果 BDE-209高剂量组雌性子鼠体质量、身长和尾长在部分生长发育时期明显低于对照组(P＜0.05).PND21时,BDE-209低剂量组雌性子鼠肛殖距明显大于对照组(P＜0.05);PND40时,BDE-209中剂量组次级卵泡数量明显多于对照组(P＜0.05);PND21和PND40时,各组雌性子鼠血清雌二醇水平比较,差异均无统计学意义(P＞0.05).结论 BDE-209孕期暴露可影响雌性子代大鼠的生殖发育.     

辛基酚对雌性大鼠生殖能力的影响

目的:研究环境雌激素辛基酚(octylphenol,OP)对雌性大鼠生殖能力的影响。方法:将50只初成年雌性大鼠随机分为5组,其中设阴性对照和己烯雌酚(30μg/kg)阳性对照各1组。隔日染毒60d后与未染毒的雄性成年大鼠交配,研究OP对母鼠的受孕、分娩及子代发育的影响。结果:随着染毒剂量的升高,每窝平均产仔量下降。低剂量组子鼠平均出生体重与对照组相比差异无统计学意义(P>0.05),中、高剂量组与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05和P<0.01)。断乳后,各剂量组母鼠的体重和卵巢、子宫、肝脏、肾脏、脑体系数差异均无统计学意义(P>0.05)。结论:在本实验剂量下,随着母鼠交配前OP接触剂量的升高,子鼠的出生体重有降低的趋势。     

肥胖对雌性大鼠交感肾上腺系统的长期程序化作用

目的：研究肥胖对雌性大鼠交感肾上腺系统的长期程序化作用。方法：将雌性sD大鼠在出生当E1分成2组：①实验组,小窝喂养,每窝4只;②对照组,正常喂养,每窝12只。每周测体质量,出生后28d开始监测阴道口初开放时间和阴道细胞学涂片。出生后10周,用免疫组织化学方法测定肾上腺和卵巢交感神经兴奋性的改变;用原位杂交技术测定中枢蓝斑核的酪氨酸羟化酶（TH）mRNA的表达变化。结果z与对照组相比,实验组动物明显肥胖,持续终生;青春期启动明显提早[实验组（35．5土0．8）d,对照组（37．6±0．3）d];卵巢和肾上腺的TH免疫染色明显增强和蓝斑核的THmRNA表达明显增加,其差异均有统计学意义（均尸〈0．05）。结论：肥胖通过上调交感肾上腺兴奋性影响雌鼠的生殖功能。     

转基因植物乳杆菌对雌性大鼠生殖发育的影响

目的 探讨转基因植物乳杆菌对连续传代雌性大鼠生殖发育的影响.方法 将雌雄SD大鼠分组,6只雌性一笼,6只雄性一笼.对照组与实验组,分别为一笼雌和一笼雄.对4周龄SD大鼠进行灌胃,对照组予以非转基因植物乳杆菌,实验组予以转基因植物乳杆菌,连续灌胃4周后进行雌雄配对,对子一代、子二代、子三代进行同样的灌胃实验8周.比较两组雌性大鼠不同时间点身长、尾长、体质量、肛殖距、卵巢质量、激素水平.结果 对照组与实验组子一代、子二代、子三代雌性大鼠灌胃同时间点比较,身长、尾长、体质量、肛殖距差异无统计学意义(P＞0.05).无论是对照组还是实验组,灌胃同时间点子一代、子二代、子三代雌性大鼠身长、尾长、体质量、肛殖距均有不同程度的增加,但差异无统计学意义(P＞0.05).子一代、子二代、子三代雌性大鼠比较,对照组与实验组初级卵泡、次级卵泡、黄体计数、雌二醇、孕酮、阴道开口时间差异无统计学意义(P＞0.05).无论是对照组还是实验组,子一代、子二代、子三代雌性大鼠初级卵泡、次级卵泡、黄体计数、雌二醇、孕酮均有不同程度的增加,阴道开口时间均有不同程度的减少,但差异无统计学意义(P＞0.05).结论 转基因植物乳杆菌对连续传代雌性大鼠生殖发育无明显影响.     

慢性焦虑刺激对成年雌性大鼠性激素水平的影响

目的 探讨慢性焦虑刺激对成年雌性大鼠性激素水平的影响.方法 将雌性成年大鼠随机分成空白组、模型组,采用不确定性空瓶刺激法建立焦虑应激大鼠模型.以高架十字迷宫实验评价其行为学;采用化学发光法检测大鼠性激素六项:促黄体生成素(LH),促卵泡激素(FSH),泌乳素(PRL),睾酮(T),孕酮(P),雌二醇(E2)水平;光镜观察大鼠子宫、卵巢的形态学变化.结果 与空白组相比,模型组大鼠血清T浓度显著升高(P＜0.01),LH浓度显著减少(P＜0.01),FSH、PRL、P、E2水平差异无统计学意义;模型组卵巢组织闭锁卵泡多,黄体和成熟卵泡少,子宫内膜较薄,间质纤维增生.结论 在焦虑状态下,成年雌性大鼠的血清T浓度升高,LH浓度降低,子宫、卵巢出现病理改变,提示焦虑是影响雌性大鼠生殖机能的重要因素.     

能量限制对化疗大鼠卵巢的形态结构与功能的保护作用

目的探讨能量限制对环磷酰胺处理大鼠卵巢的保护作用。方法将48只10周龄大鼠随机分为对照组、能量限制组、环磷酰胺组、能量限制加环磷酰胺组。观察各组动物的动情周期,实验结束时称取卵巢重量,并进行卵巢组织形态学观察及卵泡计数,测定血清雌二醇、促黄体生成素、促卵泡生成激素评估卵巢储备功能。结果经环磷酰胺处理的大鼠出现精神萎靡、体重下降、动情周期逐渐消失,卵巢体积缩小,颗粒细胞变性、坏死,各期卵泡数均明显减少,闭锁卵泡数增加(P<0.01)。能量限制组大鼠卵巢的原始卵泡数比对照组明显增多(P<0.01),窦状卵泡数减少(P<0.01)。能量限制加环磷酰胺组的原始卵泡和初级卵泡数比环磷酰胺组明显增多(P<0.01),且卵巢组织受损程度较单用环磷酰胺轻。环磷酰胺处理组大鼠血清雌二醇显著低于对照组和能量限制组,促黄体生成素和促卵泡生成素水平则显著高于对照组和能量限制组(P<0.01)。结论能量限制模型可以抑制原始卵泡的的转化使其数量明显增多,并可以适度减轻化疗造成的结构与功能损伤,使卵巢保留有一定储备功能。     

谷氨酸钠诱导雌性大鼠肥胖后对其生殖-内分泌的影响

目的 探讨谷氨酸钠诱导雌性大鼠肥胖后对其生殖-内分泌的影响.方法 给新出生雌性Wistar大鼠皮下注射谷氨酸钠,连续5 d,以建立肥胖模型.通过持续阴道涂片确定肥胖不孕模型,动物存活至90日龄,自股动脉取血,测定血清雌二醇(E2)、睾酮(T)、瘦素(leptin)、卵泡刺激素(FSH)、黄体生成素(LH)的水平.结果 80%的注射谷氨酸钠大鼠呈能量失衡致肥胖不孕状态;血清E2、T、leptin水平较对照组明显升高(P＜0.05),FSH、LH水平较对照组明显降低(P＜0.05).结论 谷氨酸钠诱导大鼠肥胖后由于生殖内分泌改变而引起功能失调性无排卵,导致不孕.     

EX527对热量限制保护SH-SY5Y细胞的影响

目的 观察SIRT1抑制剂EX527对热量限制处理的人神经母细胞瘤株SH-SY5Y细胞的影响。方法 体外培养SH-SY5Y细胞,分为正常对照组(NC组)、热量限制组(CR组)和热量限制加SIRT1抑制剂组(CR+EX527组),光镜下观察细胞形态学改变,测定各组细胞噻唑蓝(thiazolyl blue tetrazolium bromide, MTT)代谢率及乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)漏出率,应用蛋白免疫印迹(Western blotting)法测定SIRT1表达量。结果 与NC组相比,CR组细胞形态好,表现为细胞胞体饱满、突起伸展、贴壁牢固,MTT代谢率升高(P<0.05),LDH漏出率有降低趋势,CR组和CR+EX527组SIRT1表达均增加(P<0.05);与CR组相比,CR+EX527组细胞形态较差,突起回缩,贴壁性不好,MTT代谢率降低(P<0.05),LDH漏出率有升高趋势,SIRT1表达略减少。结论 热量限制对神经细胞具有保护作用,而SIRT1抑制剂EX527能够减弱热量限制的神经保护作用,提示热量限制对SH-SY5Y细胞的保护作用可能是由SIRT1介导的。     

能量限制和高能量培养对HepG2细胞SIRT7表达的影响

目的观察能量限制(CR)、高能量[包括高糖(HG)、高脂(HP)]培养基对HepG2细胞SIRT7表达的影响,为进一步研究SIRT7的功能及其在相关代谢疾病中的作用机制提供线索。方法采用RT-PCR、Westernblotting等方法检测在不同培养条件下HepG2细胞SIRT7的表达水平。结果与HG[mRNA:(0.3001±0.09661)、蛋白质:(0.2435±0.01240)]培养基相比,CR和HP均上调HepG2细胞SIRT7的mRNA转录水平[(0.4185±0.07617)、(0.4443±0.04717)]和蛋白质表达水平[(0.3300±0.04769)、(0.7834±0.045937)],差异有统计学意义(P<0.05);且CR与HP相比,后者中SIRT7mRNA转录水平和蛋白质表达水平更高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 SIRT7可能参与肝糖和脂代谢调节,影响脂肪肝的形成。     

限制饮食对老年早期大鼠空间学习记忆能力的影响

目的 研究限制饮食(CR)对老年早期大鼠的学习记忆能力的影响.方法 18月龄的健康雄性SD大鼠,分为2组,一组为CR组(n=18)给予60%的食量,自由进食(adlibitum,AL)组(n=15)自由进食,6个月后,用Morris水迷宫(MWM)检测大鼠逃避潜伏期(EL)各象限中的时间和路程等;制作脑组织冰冻切片,利用SA-β-GAL染色,计数海马区阳性细胞率.结果 CR组的EL明显比AL组短(P=0.038),2组大鼠在象限Ⅱ占总象限的时间[AL(30.61±6.10)s;CR(26.58±5.06)s]和路程[AL(31.23±7.82)cm;CR(26.27±5.5)cm]差异有显著性(P=0.027和P=0.029);海马CA3区CR组的SA-β-GAL阳性细胞率明显低于AL组,差异有显著性(P＜0.01).结论 CR延缓老年早期大鼠空间学习能力减弱,提高参考记忆力的准确性,可能与CR延缓海马区神经元衰老有关.     

限制饮食对老年早期大鼠生存状态和旷场行为的影响

目的 研究热量限制对老年早期大鼠的生存状态和行为学的影响.方法 选用18月龄的健康雄性SD大鼠,根据进食情况分为2组,一组为CR组(n=29)给予对照组进食量60%的食量饲养,对照组为ad libitum(AL)组(n=31)自由进食,观察6个月,在此期间,记录大鼠的生存状况,每周测定大鼠体质量;6个月后,进行旷场实验观察自发活动能力.结果 CR组给予60%的饮食控制后,体质量维持在低于对照组约20%左右(P<0.01).CR组的生存率为89.66%显著高于AL组67.74%(P=0.039);在旷场实验中测定的CR组大鼠自发活动路程为(201.06±78.35)m,显著长于AL组[(147.38±36.89)m,P=0.021],而CR组的自发活动速度为(78.10±34.38)mm/s也显著高于AL组[(48.96±14.87)mm/s,P=0.021],并且CR组大鼠具有在中央区域的活动距离长(P=0.048)和在周边区域活动速度快(P=0.012)的特点.结论 对老年早期的大鼠给予6个月的热量限制可以提高大鼠的生存率以及旷场活动能力,反映了大鼠的健康状况改善.     

PCOS大鼠卵巢中 kisspeptin／kiss1r 系统的表达变化及对卵泡发育的影响

目的：对多囊卵巢综合征（PCOS）大鼠卵巢中kisspeptin／kiss1r系统的表达变化及对卵泡发育的影响进行研究。方法采用腹腔注射来曲唑构建PCOS大鼠模型,酶联免疫吸附（ELISA）法测定血清中性激素水平,苏木精‐伊红（H‐E）染色检测卵巢的形态学改变,免疫组化检测卵巢中kisspeptin／kiss1r、卵泡刺激素受体（FSHR）的蛋白水平变化。结果从灌胃后第10天开始,PCOS组大鼠体重明显增加,血清中睾酮（T）、黄体生成素（LH）的水平明显升高,卵泡刺激素（FSH）水平无明显改变;大鼠卵巢皮质中含有较多的小卵泡及闭锁卵泡,多数卵泡成囊性扩张,颗粒细胞层数明显减少;卵巢中kisspeptin／kiss1r、FSHR均在细胞质表达,kisspeptin／kiss1r主要在颗粒细胞、膜细胞和黄体中表达,而FSHR仅表达在颗粒细胞。PCOS组卵巢中kisspeptin／kiss1r、FSHR表达明显减少。结论在PCOS卵泡发育中,卵巢表达的kisspeptin／kiss1r系统发挥重要的作用,为PCOS的临床治疗和基础研究提供新思路。     

热卡限制对非酒精性脂肪肝病大鼠肝脏SIRT1表达的影响

目的研究热卡限制（CR）在非酒精性脂肪肝病（NAFLD）治疗中的分子作用机制。方法25只雄性Wistar大鼠分为2组,一组给予正常普通饲料喂养（NC组,7只）,一组给予高脂饲料喂养（HFM组,18只）。喂养2个月后,再将HFM组大鼠随机分为继续高脂饲料喂养组（HF组,9只）和60％热卡限制喂养组（CR组,9只）。1个月后将大鼠处死,观察大鼠体重、内脏脂肪含量、空腹血糖、空腹胰岛素及血脂的改变,电镜下观察各组大鼠肝脏超微结构变化,应用RT-PCR方法检测长寿基因SIRT1mRNA的表达,Westerm印迹法检测SIRT1的蛋白表达。结果HF组大鼠发生明显NAFLD,与正常对照组比较,大鼠内脏脂肪含量（15．1g±4．1g vs 9．0g±0．4g）、血脂（总胆固醇2．61mmol／L±0．29mmol／L vs 1．41mmol／L±0．28mmol／L;甘油三酯1．35mmol／L±0．21mmol／L vs 0．67mmol／L±0．10mmol／L）、血糖（6．2mmol／L±1．46mmol／L vs 4．4mmol／L±0．57mmol／L）,血胰岛素水平（29．22mU／L ± 7．28mU／L vs 13．09mU／L±1．18mU／L）明显增高,其肝脏超微结构亦发生明显异常,SIRTl表达在转录和翻译水平均低于正常组显著（P〈0．01）。相比较HF组,限制热卡后的CR组大鼠体重明显下降,内脏脂肪含量、血脂、血糖、血胰岛素水平显著降低,SIRT1的表达明显增加（P〈0．01）,同时肝细胞的超微病理改变亦显著改善。结论CR对大鼠NAFLD具有显著的逆转效应,其导致的肝脏SIRT1表达增加可能是改善NAFLD的重要分子作用机制。