陈旧褪色病理教学HE切片颜色恢复技术探讨

在病理学实习教学中,病理常规HE切片是重要的教学工具.对病理学教学切片要求所选病例典型,组织切片应完整、无皱褶、无摺叠、无破损,并且切片染色鲜艳,红蓝对比鲜明.由于时间的关系,一些教学切片发生褪色,其中主要是苏木精颜色的减退,有些切片甚至完全褪色,整张切片呈现一片红色,从而严重影响了教学效果.本文旨在在原有HE染色的基础上,探索一种促染方法,改善这些褪色教学切片的颜色,恢复其鲜艳的红蓝对比颜色,使其发挥正常的教学作用.     

成年斑马鱼石蜡连续切片的制作和苏木精-伊红染色

目的介绍斑马鱼石蜡连续切片的制作和苏木精-伊红(HE)染色的方法。方法利用ThermoShandonExcelsior组织处理机、ThermoShandonHistocentre2型石蜡包埋机、ThermoShandonFinesse325型切片机、ThermoShandonVaristainGemini全自动染片机和ThermoShandonConsul全自动封片机制作成年斑马鱼石蜡连续切片并进行HE染色。结果利用上述方法获得清晰的成年斑马鱼石蜡连续HE染色切片。结论斑马鱼石蜡连续切片的制作和HE染色与哺乳类动物组织切片和染色在操作和某些工作参数上有所不同。     

影响淋巴结HE制片因素的探讨

淋巴瘤因其组织结构致密、细胞丰富等特点,使组织在脱水、透明、浸蜡、切片、染色等方面都受到一定的影响,导致病理诊断困难。作为一名合格的病理医师,要求懂得组织的石蜡包埋和HE染色的机制,熟练掌握石蜡切片和HE染色技术的操作并能够制出一张优质的病理玻片标本。本实验从石蜡切片和HE染色的机制出发,重点探讨淋巴结HE制片的注意事项。     

一种改良包埋模具和改良载玻片的设计与应用

在常规病理技术中[1,2],石蜡切片是诸多操作环节中非常重要的关键技术,能够为常规HE染色、特殊染色、免疫组化染色[3]及分子筛查等检测技术提供不同规格要求的组织切片。若宫腔刮出物、小脑占位组织、椎管内取出物等组织中的小灶组织疑有恶变或性质不能确定,可通过对原组织蜡块深切、连切、薄切等方式再进行常规HE染色,也可对重新切片的组织进行特殊染色、免疫组化染色等检测方法,以明确小灶组织的性质。     

一种处理HE染色细胞核灰染的新方法

HE染色是病理形态学诊断最常用的方法。一张优质的HE染色切片是正确诊断的前提,其细胞核和细胞质的对比染色必须是清晰的。而在日常外检制片过程中由于一些人为因素的影响,HE切片偶尔会出现细胞核发灰的现象,即组织结构模糊不清,细胞核淡染,甚至核内见不到染色质等。这种HE切片使病理诊断困难或误诊。     

抗原热修复退色法在HE切片改做免疫组化染色中的探索

HE染色与免疫组化染色在病理诊断中处于重要的地位,是目前病理科较常用的常规方法。在实际病理诊断工作中,经常遇到HE染色的会诊组织切片和细胞涂片,而无相应的组织蜡块或多余的细胞涂片白片,为进一步明确诊断只能在原HE染片上做免疫组化染色,此时需将HE染片退去     

二次包埋法手工制作病理学教学组织芯片

目的探讨手工制作教学组织芯片方法的可行性。方法利用组织芯片制备系统,通过二次包埋法,手工制作病理教学组织芯片,经HE染色,光镜下检测组织芯片制作质量。采用四川省病理技术专业委员会对石蜡切片HE制片质量评定得分标准对切片进行评分,并与传统教学组织切片比较。结果组织微阵列(TMA)蜡块中的组织芯点排列整齐,与受体蜡块融合紧密;组织芯片切片基本完整,厚薄均匀,经HE染色后组织形态可利用率为94%～100%,切片质量评分优秀率79%,良好率10%。二次包埋法手工制作的教学组织芯2片与传统组织切片制作方法制作的教学组织切片质量无明显差异性(χ=3.073,P0.05)。结论二次包埋法手工制作教学组织芯片方法简便易行,经济实用低消耗,具有高效快速染色均一性好、自身内对照和可比性强的特点,可在病理教学中推广应用。     

一种病理组织切片恒温染色台的设计

目的设计一种可提高组织切片苏木精-伊红(HE)染色速率及染色质量的病理组织切片染色装置。方法设计制作由水浴箱、带盖染色缸、电控箱三部分构成的组织切片恒温染色台,实验比对组织石蜡切片上的石蜡膜溶于二甲苯的互溶速率和镜下染色效果。结果在37.0℃条件下,石蜡膜在二甲苯中的溶脱时间比室温条件下缩短了近一半的时间,互溶速率两组比较差异有显著统计学意义(P<0.001);在减少1/2染色时间染制的切片组织色泽与室温条件下的染色效果类似,而且细小颗粒着色清晰。结论应用该设备条件的组织切片染色效果优于传统常温方法。     

油红O染色在甲醛固定的乳腺富于脂质癌中的实践应用

在临床病理诊断中,常规HE切片中常可见到胞质透亮或胞质内有许多大小不等的圆形空泡,此现象是水泡样变、黏液样物质、脂肪或脂质组织,还是溶解了的糖原,往往不易区分,这就要依赖于脂肪染色、黏液染色、糖原染色等来鉴别.黏液染色和糖原染色可用石蜡包埋后切片染色即可,而脂肪染色不能用常规石蜡包埋组织切片.日常病理诊断工作中,很多标...     

大鼠不同器官组织的脱水方法改进

<正>近期,本实验室于大鼠组织病理学实验中发现,若按大鼠常规脱水时间和流程制备大鼠的组织蜡块,则组织切片易碎裂,染色易脱片,造成后续工作无法进行。即便使用防脱片剂效果亦不佳,尚未脱片的组织切片HE染色及特殊染色结果亦不理想。本实验室根据大鼠各个器官组织特点进行试验后,改进了大鼠组织的脱水方法取得较好效果,现介绍如下。     

琼脂糖明胶在组织脱水前预包埋中的应用

优质的HE切片是病理诊断的前提条件,在病理工作中占据重要地位[1 ].HE染色与诸多环节有关,组织包埋质量是其中重要的一环,正确的组织包埋是HE制片及诊断的基础[2].     

HE染色质控组织的选取及优化

<正>良好的HE切片对病理诊断至关重要，高质量的HE染色红蓝对比鲜明；可见3种红色(大红、粉红和紫红),显示色彩亮丽、对比鲜明及细腻的细节；核染色质清晰^[1]。使用质控组织评估染色效果是HE染色质量控制的重要手段，以往质控组织多选用单一类型组织，存在较大的局限性，无法全面地反映不同类型标本的染色效果。本科室运用组织芯片进行HE染色质控，取得了良好的效果，同时也遇到了组织收集和芯片蜡块制备难度大、对质控人员能力要求高、质控时间偏长等问题，     

冷冻切片干燥处理对HE染色效果的影响

<正>冷冻切片是术中快速提供病理诊断和观察组织细胞有效成分的一种重要的手段,在低温条件下使组织快速冷却到一定硬度,再进行切片染色的快速制片。在制片的过程中,临床快速诊断的组织除了需要防冰晶形成外,笔者在实际工作中注意到不同的固定液及不同的处理方案对冷冻制片HE染色质量同样会带来影响,现分析总结如下。     

石蜡切片免疫组化套染PAS在肾活检组织病理诊断中的应用

在肾穿刺组织的病理诊断中,采用常规冷冻切片免疫荧光染色、石蜡切片HE染色、PAS染色、Masson染色、PASM染色以及电镜观察,以得到准确的病理诊断。但由于肾穿刺为有创性检查,再加上术者技术精疏有别以及患者个体差异,不仅所取组织十分细小,而且标本质量亦常不尽人意;另外,没有能力购置电镜的单位难以做超微诊断。因此需要我们摸索新的方法,以达到最大限度获得疾病信息,同时又省时、省力,且节约成本。作者实验室前期已经建立了石蜡切片免疫荧光染色法,其他学者也有相关报道[1-3]。最近又建立了肾活检组织石蜡切片免疫组化结合PAS染色方法,取得了较好的效果,现报道如下。     

石蜡切片免疫荧光染色在肾活检病理诊断中的应用

在肾脏的病理诊断中,肾穿刺组织必须进行冷冻切片免疫荧光染色[1,2]、石蜡切片HE、Masson、PAS、PASM染色和电镜检查等,以达到正确的诊断.光镜观察时须有10个以上的肾小球才能作出客观的诊断[3,4].在肾脏的病理诊断中,冷冻切片免疫荧光染色具有不可或缺的作用,但有时各种原因导致所取的肾小球数目不够或基层单位无冷冻切片设备等因素均给诊断带来困难.因此,我们通过对肾活检组织石蜡切片进行免疫荧光染色,取得了较好的效果,现介绍如下.     

EDTA在HE染色中的应用

正苏木精-伊红(hematoxylin-eosin,HE)染色是病理技术中最基本的染色方法,染色理想状态是在镜下见细胞核与细胞质蓝红相映,对比明显;核膜及核染色质颗粒清晰可见。实际工作中因组织干涸、固定脱水不足、脱钙等原因会造成切片染色困难,细胞核染色淡或出现局部灰染,给临床病理诊断带来困扰。经过大量实验,本科室对处理不好的组织切片染色前用EDTA抗原修复液进行高压修复,使染色质量得     

热处理法在常规HE染色发灰组织切片中的应用

在常规HE染色过程中,经常发现固定前已干涸的组织、过度固定、脱钙及烤片过长的组织易造成切片着色困难,细胞核着色淡、不着色或一片灰染.此时若组织较少或已用完,无法重新再取材,势必给临床病理诊断带来严重影响.经大量实验,我们对原组织切片在染色前进行热处理,使染色质量得到了明显改善.     

文昌鱼石蜡连续切片的制作和苏木精-伊红染色

目的介绍文昌鱼石蜡连续切片的制作和苏木精-伊红(HE)染色的方法。方法利用Leica EG1150分体式石蜡包埋机;Leica VT1000S手动轮转切片机;Leica HI1210摊片机;Leica HI1220烘片机制作文昌鱼石蜡连续切片并进行HE染色。依据对脱水和透明过程中文昌鱼外观的变化以及镜下切片结果的反复比较,总结出各个步骤的时间参数。结果利用上述方法获得清晰的文昌鱼石蜡连续HE染色切片,我们选择了头部、胸部、腹部、尾部四个有代表性的文昌鱼断面,在片中可以清楚地分辨脊索、神经管、鳃、卵巢、肌节、肠等结构。结论本文成功建立文昌鱼石蜡连续切片的制作和HE染色方法,并为研究脊椎动物的起源提供基础资料。     

输卵管妊娠组织制片的技巧

目的通过此制片法解决了输卵管妊娠血块组织制片本身的问题,可制作出输卵管妊娠组织的优良切片,便于临床工作和科研及基础医学教学和科研。方法最好选择快速固定液;脱水时也不用常规乙醇脱水,改用丙酮脱水;浸蜡温度应控制在56℃为宜,浸蜡时间控制在1h左右;血块组织切片厚度最好为3μm;苏木精-伊红(HE)染色时,苏木素浸染时间长些,伊红浸染时间短些。结果用此法制作输卵管妊娠组织切片,不是那么脆和硬,也不易碎,能够顺利切出连续蜡带;染色时也不易脱片,染色对比度也好。结论在输卵管妊娠组织制片过程中,只要解决输卵管妊娠血块组织制片本身的问题,就能制作出优良的切片。     

TUNEL法原位检测心肌细胞凋亡的改进

目的：脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法（TUNEL）是检测细胞凋亡的常用方法,但以往仍有TUNEL假阳性率高的报道。本实验目的在于探讨应用TUNEL检测心肌细胞凋亡时增强其特异性的方法。方法：缺血再灌注心肌组织的石蜡切片（2 μm）和冰冻切片（3 μm）进行TUNEL染色。分为石蜡切片HE染色组,石蜡切片常规TUNEL组,冰冻切片改良TUNEL组。石蜡切片常规TUNEL组完全按照试剂盒说明书进行,光学显微镜下观察;冰冻切片改良TUNEL组使用荧光素（FITC）标记的dUTP及4’,6-二脒基-2-苯基吲哚(DAPI）双重荧光染色,在共聚焦显微镜下观察。结果：TUNEL改良法凋亡背景清晰,阳性细胞主要分布在缺血再灌注损伤区域,其凋亡检出率与石蜡切片HE染色相比无显著差异（P>0.05）;常规TUNEL组凋亡背景清晰度较差,非缺血再灌注损伤区域亦有大量阳性细胞出现,其凋亡率明显高于石蜡切片HE染色（P<0.01）。结论：冰冻切片改良TUNEL法可能是更适宜研究SD大鼠缺血再灌注心肌细胞凋亡的方法。