筛选与确诊试验在检测香港海鸥菌中的建立与应用

目的 建立简便、快速、准确、特异的香港海鸥菌实验室诊断技术.方法 采集淡水鱼类、胃肠炎腹泻患者新鲜粪样,接种于改良头孢哌酮MacConkey(CMA)培养基,对典型菌落分别进行氧化酶、触酶、三糖铁(TSI)3项筛选试验和常规生化鉴定,凡氧化酶、触酶试验阳性以及三糖铁(TSI)试验阴性的菌株,采用特异性PCR检测确诊;通用引物扩增16S rRNA并与香港海鸥菌HKUI株进行同源性分析.结果 在92份淡水鱼样品和211份胃肠炎腹泻患者粪样中,共检出香港海鸥菌11株和1株,阳性率分别为11.96%(11/92)和0.48%(1/211).筛选与确诊试验和常规生化试验的检测结果一致,符合率为100%(12/12).分离的香港海鸥菌16S rRNA序列与HKU1株同源性在99.5%～100%之间,仅差1～2个碱基.结论 本文建立的筛选与确诊试验适用于香港海鸥菌的诊断.     

深圳市售海产品中创伤弧菌检测分析

目的了解深圳市售海产品中创伤弧菌污染状况,为预防创伤弧菌引起的食源性疾病做好预警。方法从深圳的超市、集贸市场和餐厅按照无菌采样原则采集海产品48份,经碱性蛋白胨水增菌,选择性培养基筛选培养,进行创伤弧菌荧光定量PCR检测和生化鉴定。结果 48份海产品样本中有17份检出创伤弧菌,阳性率为35.42%。结论深圳市售海产品中创伤弧菌的污染情况严重。     

香港海鸥形菌TaqMan-MGB探针实时荧光PCR的建立与应用

目的建立快速、灵敏、特异的香港海鸥形菌TaqMan-MGB探针实时荧光PCR体系,用于食源性致病菌监测和淡水鱼产品贸易往来的快速检测。方法根据GenBank公布的香港海鸥形菌16SrRNA基因高保守序列,设计特异引物对和TaqMan-MGB探针,建立和优化快速检测体系,评价反应体系的特异性、灵敏度、重复性,并在淡水鱼类、急性胃肠炎腹泻患者标本中临床应用,结合细菌分离方法和序列测定分析进行验证。结果建立的香港海鸥形菌TaqMan-MGB探针实时荧光PCR反应体系检测时限短,仅40min就可出结果,特异性好,与沙门氏菌、志贺氏菌、副溶血弧菌等非目标菌无交叉反应,灵敏度高,检测下限达10拷贝／反应,稳定性好,同一浓度阳性质粒进行16次重复检测的Ct值变异系数0．183％。92份淡水鱼及211份医院急性胃肠炎腹泻标本实时荧光PCR与常规细菌分离结果完全一致,均检出了12株香港海鸥形菌。16SrRNA测序结果显示与HKU1株同源性在99．5％以上,进一步验证了实时荧光PCR的特异性。结论本研究建立的香港海鸥形菌TaqMan—MGB探针实时荧光PCR反应体系快速、特异、灵敏,在防止食源性疾病的传播和加快贸易通关速度方面,具有较强的的应用价值。     

海南省2008～2011年鲜水产品香港海鸥菌污染监测

目的了解海南省鲜水产品中香港海鸥菌污染状况及海南分离株的形态、培养、生化和药敏等特性。方法2008年10月～2011年10月在海南省不同农贸市场采集监测样本,用改良头孢哌酮麦康凯平板进行分离培养,API20E、API 20NE和VITEC2GN进行生化鉴定,采用AST-GN31进行药敏测定。结果在1 656份鲜水产品和119份涂抹拭子中,分离出6株香港海鸥菌,其生化特点：氧化酶、过氧化氢酶、尿素酶、硝酸盐还原和精氨酸双水解酶阳性,对糖和醇类不利用。结论海南省鲜水产品中存在香港海鸥菌污染,今后应继续加强对香港海鸥菌的监测。     

海南省鲜水产品中香港海鸥菌污染调查

目的了解海南省鲜水产品中香港海鸥菌污染状况为饮食工作提供依据。方法 2008年10月～2009年8月于海口市农贸市场采集520份鲜水产品及砧板涂抹拭子119份,用改良头孢哌酮麦康凯进行分离,API20E、API20NE和VITEC2 GN鉴定。结果在检测的639份样品中未分离到香港海鸥菌,检出21株人苍白杆菌。结论海南鲜水产品尚未发现受到香港海鸥菌污染,但存在人苍白杆菌污染,应加强对香港海鸥菌和人苍白杆菌的监测。     

2013-2019年深圳市龙华区外环境禽流感病毒监测分析

目的了解深圳市龙华区市场外环境禽流感病毒污染情况,及时发现人禽流感潜在危险因素,为科学防控禽流感疫情提供依据。方法采用荧光定量PCR法对2013-2019年龙华区综合市场采集的1 211份禽类外环境标本进行甲型流感病毒(FluA)及亚型检测。结果 2013-2015年禁售活禽前626份外环境标本中,检出H7亚型病毒核酸阳性117份,阳性率18.69%;2016-2019年禁售活禽后采集外环境样本585份,检出H7亚型病毒核酸阳性54份,阳性率9.23%;禁止活禽交易前后外环境标本H7阳性率差异有统计学意义(χ~2=22.313,P=0.000)。禁止活禽交易后2016-2019年标本总阳性率逐年分别为41.82%、36.89%、36.67%、20.00%,A型流感病毒检出率呈现逐年下降趋势,差异有统计学意义(χ~2=15.564,P=0.001);其中H9亚型阳性率最高(21.54%),H7亚型最低(9.23%),2018、2019年均未检出H7亚型病毒核酸阳性。各类标本中阳性率最高的为砧板(43.59%),各类型标本阳性率差异无统计学意义(χ~2=9.398,P=0.052)。结论深圳市龙华区市场环境中存在禽流感病毒污染,禁止活禽销售可有效降低禽流感病毒污染及发生禽流感疫情的风险。     

深圳市肉类食品空肠弯曲菌的污染情况调查

目的了解我市常见肉类食品中空肠弯曲菌的污染状况,为控制和预防空肠弯曲菌食物中毒提供科学依据。方法在食品污监测点随机抽检肉类食品样品117份,用传统国标法和荧光PCR法进行检测。结果从117份肉类食品中检出4份空肠弯曲菌,阳性检出率为3.4%。结论深圳市肉类食品中存在空肠弯曲菌的污染,如果加工、销售不当,及监督不严,会对群众健康构成潜在威胁。     

荧光PCR技术批量快速筛查肠道致病菌混合样本的研究

目的：寻找从业人员肠道传染病菌的快速筛查技术方法。方法以参加健康体检的从业人员作为研究对象,采集健康体检从业人员的肛拭子标本,采用荧光PCR技术批量快速筛查肠道致病菌混合样本的方法进行沙门氏菌和志贺氏菌检测,并与国家标准方法进行对照,比较两种检测方法的检出率结果。结果58176份样本中,共检出52份沙门菌阳性标本,阳性率为0.89‰,检出51份志贺氏菌阳性标本,阳性率为0.88‰。合计共检出致病菌103份,检出率为1.77‰。荧光PCR对沙门菌和志贺氏菌的灵敏度达到了100%,特异性也保持在99%以上。结论采用荧光PCR技术进行肠道致病菌的快速筛查能缩短检验时间,检验准确性高,从而有效阻断肠道传染病的传播和食物中毒的发生。     

传统细菌培养法与荧光PCR法分离公共场所嗜肺军团菌结果比较

目的:对公共场所环境样本(水、土壤、气溶胶)进行嗜肺军团菌监测,掌握南京市公共场所中军团菌的污染情况和菌型分布。方法:对12家商场、医院中央空调系统采集水样(冷却水、景观水、淋浴水、自来水),土壤类样品(背景土、花卉土、风管积尘、景观土),采用传统细菌培养法及荧光PCR法进行嗜肺军团菌的分离鉴定。结果:12家单位共采样234份(水样88份、土壤146份),传统细菌培养法检出嗜肺军团菌9份(主要类型为Lp1型),检出率为3.85%;而实时荧光PCR法检出47份阳性(主要类型为Lp1型),检出率为20.08%。两者检出阳性率比较差异有统计学意义(P0.05)。结论:南京市公共场所存在嗜肺军团菌污染,荧光PCR法总检出率明显高于传统细菌培养法,荧光PCR方法较培养法灵敏性较好。     

深圳市外环境水源军团菌污染调查

目的了解深圳市外环境中不同水体军团菌污染和血清型别分布状况。方法利用传统的检验方法与实时荧光PCR技术相结合,对深圳市环境中243份水源进行军团菌的检测,用传统细菌分离培养法分离鉴定,用实时荧光PCR法加以验证。结果共检测环境水源243份,52份水样检出军团菌阳性,其中49份水样为嗜肺军团菌,3份水样为非嗜肺军团菌,军团菌和嗜肺军团菌总检出率分别为21.4%（52/243）和20.2%（49/243）;空调系统嗜肺军团菌检出率为25%（29/116）,宾馆淋浴热水嗜肺军团菌检出率为23.3%（20/86）,二次供水、游泳池水、景观水池水均未检出军团菌。血清型以LP1和LP6为优势菌型,占检出菌的65.3%（32/49）和22.5%（11/49）,LP3、LP5、LP6、LP7、LP10均检出1株。结论深圳市环境水源中军团菌污染主要分布于空调冷却塔水和宾馆淋浴热水中,嗜肺军团菌血清型以LP1、LP6为主,相关部门需引起足够重视,防止军团菌病发生。     

肝吸虫病流行区实施生态养殖对肝吸虫传播的影响

目的研究改建鱼塘上厕所和养猪栏等的生态养殖方式对肝吸虫传播的影响。方法选择深圳市自然环境相似的两个村庄,对其中一个流行村进行鱼塘上厕所和养猪栏的改建等综合处理,实施干预两年后,用直接镜检和PCR法比较检测两村淡水螺体内肝吸虫尾蚴和鱼体内肝吸虫囊蚴的感染情况。结果在两个村共抽肝吸虫第一中间宿主淡水螺2000只,各类淡水鱼240份,在实验村淡水螺肝吸虫尾蚴和淡水鱼肝吸虫囊蚴的感染率分别为0．7％（7／1000）和6．67％（8／120）,而在对照村沼螺肝吸虫尾蚴和淡水鱼肝吸虫囊蚴的感染率分别为1．6％（16／1000）和14．1％（17／120）。结论在肝吸虫病流行区实施鱼塘上厕所改造,防止粪便直接投入鱼塘可以降低肝吸虫第一和第二中间宿主的感染率,有效的阻断肝吸虫的传播,防止人群感染肝吸虫病。     

敦化市雁鸣湖镇淡水鱼虾吸虫囊蚴感染情况调查

[目的]调查分析敦化市雁鸣湖镇境内淡水鱼虾吸虫囊蚴感染情况.[方法]收集当地21种1 810条淡水鱼和315只淡水虾,解剖提取鱼的肌肉和虾的软体组织,压片,显微镜下观察,进行动物试验以确定寄生虫种类.[结果]在当地淡水鱼虾体内未发现有华支睾吸虫囊蚴的感染;而在大川丁鱼、小川丁鱼及麦穗体内发现有横川后殖吸虫囊蚴的感染,其感染率分别为81.7%,16.1%,3.9%.     

深圳市2015—2017年市售淡水鱼中孔雀石绿污染状况及居民膳食暴露评估

目的 为了解深圳市市售淡水鱼中孔雀石绿的污染现状,通过监测市售淡水鱼中孔雀石绿的含量,计算深圳市民孔雀石绿的膳食暴露量,对市民通过淡水鱼摄入孔雀石绿的人体健康风险进行评估。方法 依照《深圳市疾控系统食品安全风险监测工作方案》的要求,在深圳市10个（新）区共采集340份淡水鱼样品,按照《GB/T 19857-2005 水产品中孔雀石绿和结晶紫残留量的测定》进行样品检测。结果 深圳市2015—2017年共采集市售淡水产品340份,其中,30份样品检出孔雀石绿,检出率为8.82%,检测最大值为855.3 µg/kg;孔雀石绿超标率由高到底按淡水鱼种类依次为：桂花鱼20.00%（4/20）>鲩鱼16.33%（8/49）>鲤鱼14.63%（4/41>鲫鱼11.11%（1/9）>鲢鱼10.53%（2/19）>生鱼10.00%（3/30）>其他鱼8.33%（1/12）>鳙鱼6.52%（3/46）>罗非鱼5.00%（2/40）,其中多宝鱼、鲈鱼、草鱼和大头鱼未检出孔雀石绿。深圳居民每人每日孔雀石绿的膳食暴露量为87.75 µg。结论 通过连续3年监测深圳市市售淡水鱼中孔雀石绿的含量,发现深圳市市售淡水鱼中孔雀石绿超标率维持在较高水平,需从渔业的农药使用、市售淡水鱼中孔雀石绿的监测两个方面来加强对孔雀石绿超标的控制。膳食暴露评估显示淡水鱼中的孔雀石绿未对深圳市民健康构成危害。     

深圳市淡水鱼市场卫生状况调查

目的了解深圳市售淡水鱼的卫生状况。方法采集全市各区的超级市场、农贸市场、餐饮单位的淡水鱼样品,并按国家相关标准[1,2]进行检测评价。结果 162份样品中污染状况的合格率为96.91%;农贸市场检出3份不合格样品,餐饮单位检出2份不合格样品,超级市场采集未检出不样品合格,差异无显著性;华支睾吸虫囊幼检出率为10.34%。结论深圳市淡水鱼市场卫生状况较好,但仍需重视华支睾吸虫的防治工作。     

深圳市淡水鱼华支睾吸虫感染调查及实验研究

目的了解深圳市淡水鱼华支睾吸虫(肝吸虫)囊蚴感染情况,阻断和控制肝吸虫病在深圳市的传播和流行。方法用鱼体消化法筛查肝吸虫囊蚴;以肝吸虫过氧化物酶(SOD)基因保守序列作为摸板,RT- PCR鉴别肝吸虫囊蚴。结果对深圳市淡水鱼肝吸虫感染情况进行调查,共抽检16种鱼257份样品,其中检出肝吸虫囊蚴45份,检出率为17．50％。检出率最高的鱼种依次为鲩鱼40．74％、鲮鱼26％、鲤鱼22．5％、大头鱼 22．85％、生鱼16．6％、非洲鲫鱼14．5％;RT-PCR检测结果与镜检结果完全一致。结论检测结果显示深圳市淡水鱼中肝吸虫的感染情况严重,尤其是鲩鱼的感染率较高,为了控制和阻断肝吸虫的传播必须改变吃淡水鱼生的生活习惯。     

深圳市华支睾吸虫感染现状的调查

目的 了解深圳市淡水鱼及人群华支睾吸虫的感染现状，分析其流行病学特征，为制订深圳市肝吸虫病防治对策提供科学依据。方法 抽检深圳市各区水产品15个品种257份样品，用消化法筛查淡水鱼华支睾吸虫囊蚴；收集3088份人群血清标本，酶联免疫吸附法（ELISA）检测血清中特异性抗体；描速流行病学分析人群华支睾吸虫感染的血清流行病学特征。结果 淡水鱼样品中检出含华支睾吸虫囊蚴45份，检出率为17．50％。在所抽检的15个品种中检出率较高的鱼种依次为鲩鱼40．74％、鲮鱼26．O％、鲤鱼22．5％、大头鱼22．85％、生鱼16．6％、非洲鲫鱼14．5％；深圳5个区淡水鱼的感染率由高到低是龙岗、宝安、南山、罗湖和福田，分别为26．0％、17．9％、15．0％、14．0％和14．0％；检测3088份血清标本，特异性抗体阳性标本105份，总阳性率3．40％；男性阳性率为3．26％，女性为3．93％；20-29岁、30，39岁、40-49岁与50-81岁各年龄段人群的阳性率分别1．16％、2．44％、4．75％和7．67％。结论 深圳市淡水鱼中华支睾吸虫的感染情况严重，尤其是鲩鱼的感染率较高；人群血清抗体阳性率有随年龄增高而上升的趋势，总阳性率与广东省平均感染水平相比较低。     

人工繁育蝇蛆对鸡免疫应答功能的影响

目的 :观察在饲料中添加鲜蛆、进口鱼粉、国产鱼粉对鸡免疫应答功能的影响。方法 :选成年罗曼褐壳蛋鸡 ,在基本饲料相同的前提下 ,添加鲜蝇蛆、进口鱼粉、国产鱼粉养鸡 ,每种饲料均设全量和减量两组 ,共 6组 ,每隔一定时间以伤寒沙门菌O抗原免疫 ,测定血清凝集效价和脾脏指数 ,观察鸡的免疫应答情况 ,每组随机设立未免疫对照。结果 :血清凝集效价各全量组之间差别无显著性意义 (P >0 0 5 ) ,减量鲜蝇蛆和减量国产鱼粉差别无显著性意义 (P >0 0 5 ) ,但均高于减量进口鱼粉组 (P <0 0 5 ) ;各饲料减量组凝集效价均明显高于全量组 (P <0 0 5 ) ;脾脏增大以全量和减量鲜蛆组、全量进口鱼粉组、减量国产鱼粉组最为明显 ,增大率达 77 2 8%(P <0 0 0 1 )。结论 :在饲料中添加适量家蝇幼虫对罗曼褐壳蛋鸡具有免疫调节作用