益气活血中药复方对CVB3乳鼠心肌细胞感染模型线粒体核糖体蛋白L51表达的影响

目的 研究益气活血中药复方对CVB3乳鼠心肌细胞感染模型线粒体核糖体蛋白L51(mitochondrial ribosomal protein L51,MRPL51)表达的影响,以期从基因水平揭示CVB3心肌炎的发病机制及益气活血中药复方治疗病毒性心肌炎的作用机制,并进一步证实益气活血中药复方治疗CVB3病毒性心肌炎的有效性.方法 通过乳鼠心肌细胞培养,建立病毒组和益气活血中药复方组心肌细胞模型,以改良的抑制性消减杂交技术(suppression subtractive hybridization,SSH),分离两组差异表达的基因,并通过荧光RT-PCR对上述结果进行验证.结果 SSH结果显示,MRPL51基因在益气活血中药复方组为低表达,而在病毒组则呈高表达状态,荧光RT-PCR结果显示益气活血中药复方组中MRRPL51基因达到阈值的循环数(Ct)明显多于病毒组,提示MRPL51在病毒组中的表达较中药组中高.结论 MRPL5基因表达上调可能是CVB3致病毒性心肌炎机制之一;益气活血中药复方通过下调MRPL5基因的表达而实现治疗病毒性心肌炎的目的 .     

益气活血中药复方对CVB3乳鼠心肌细胞感染模型线粒体核糖体蛋白L51表达的影响

目的 研究益气活血中药复方对CVB3乳鼠心肌细胞感染模型线粒体核糖体蛋白L51(mitochondrial ribosomal protein L51,MRPL51)表达的影响,以期从基因水平揭示CVB3心肌炎的发病机制及益气活血中药复方治疗病毒性心肌炎的作用机制,并进一步证实益气活血中药复方治疗CVB3病毒性心肌炎的有效性.方法 通过乳鼠心肌细胞培养,建立病毒组和益气活血中药复方组心肌细胞模型,以改良的抑制性消减杂交技术(suppression subtractive hybridization,SSH),分离两组差异表达的基因,并通过荧光RT-PCR对上述结果进行验证.结果 SSH结果显示,MRPL51基因在益气活血中药复方组为低表达,而在病毒组则呈高表达状态,荧光RT-PCR结果显示益气活血中药复方组中MRRPL51基因达到阈值的循环数(Ct)明显多于病毒组,提示MRPL51在病毒组中的表达较中药组中高.结论 MRPL5基因表达上调可能是CVB3致病毒性心肌炎机制之一;益气活血中药复方通过下调MRPL5基因的表达而实现治疗病毒性心肌炎的目的 .     

益气活血中药复方对CVB_3大鼠心肌细胞感染模型核糖体蛋白L27a表达的影响

目的:研究益气活血中药复方对CVB3大鼠心肌细胞感染模型核糖体蛋白L27a(ribosomal protein L27a)表达的作用机制,进一步证实益气活血中药复方是治疗CVB3病毒性心肌炎的有效方剂。方法:本实验用新生2～3天大鼠心肌细胞建立柯萨奇病毒B3(CVB3)感染模型,通过改良的抑制性消减杂交技术(SSH),克隆了受CVB3攻击的宿主细胞中被中药(益气活血中药复方)调控的基因。结果:核糖体蛋白L27a在中药组中呈高表达,病毒组中表达减弱或被抑制。结论:益气活血中药复方能够影响受CVB3攻击的宿主细胞核糖体蛋白L27a的表达,有效保护心肌、阻断病程进度,实现治疗病毒性心肌炎的目的。     

益气活血中药复方影响CVB_3病毒性心肌炎模型乳鼠心肌细胞MCP-1、Rps4基因表达的实验研究

目的:观察益气活血中药复方对CVB3病毒性心肌炎模型大鼠心肌细胞small inducible cytokine A2(MCP-1/CCL2)、ribosomal protein S4基因表达的影响,以期从基因水平揭示益气活血中药复方治疗CVB3心肌炎的作用机制,进一步证实益气活血中药复方是治疗CVB3病毒性心肌炎的有效方剂。方法:通过改良的抑制性消减杂交技术(SSH),克隆了受CVB3攻击的宿主细胞中被中药调控的基因,并通过荧光rt-PCR对上述结果进行验证。结果:益气活血中药复方能够上调CVB3病毒性心肌炎模型大鼠心肌细胞small inducible cytokine A2(MCP-1/CCL2)、ribosomal protein S4基因的表达。结论:益气活血中药复方可能通过调节small inducible cytokine A2(MCP-1/CCL2)、ribosomal protein S4基因的表达而实现治疗病毒性心肌炎的目的。     

过表达及定点突变缝隙连接蛋白Cx43小鼠黑色素瘤细胞模型的构建

目的 构建小鼠黑色素瘤细胞（B16）过表达野生型及点突变型缝隙连接蛋白43（Connexin43,Cx43）细胞模型,为以缝隙连接（Gap Junction,GJ）为靶点的中药复方、中药单药及药物单体的研究提供可靠阳性对照和阴性对照。方法 构建野生型Cx43、突变型Cx43G21R、突变型Cx43G138R重组荧光蛋白融合慢病毒表达质粒,用定点突变技术获得Cx43G21R和Cx43G138R突变体,对上述3种质粒进行双酶切和测序鉴定,并分别包装病毒感染B16细胞,使B16细胞过表达野生型Cx43、突变型Cx43G21R、突变型Cx43G138R。Western blot检测Cx43蛋白表达水平变化,荧光示踪法观察缝隙连接通讯（Gap Junction Intercellular Communication,GJIC）功能变化。结果 ①酶切及测序证明,成功构建pLVCx43-mCherry、pLVCx43-mCherryG21R、pLVCx43- mCherryG138R重组荧光蛋白融合慢病毒表达质粒。②成功感染B16细胞并筛选稳定过表达Cx43、Cx43G21R、Cx43G138R细胞株,Western blot检测显示上述细胞株Cx43蛋白表达均高于对照组。③过表达野生型Cx43后B16细胞GJIC功能较对照组增强;过表达突变型Cx43后B16细胞GJIC功能较对照组减弱。结论 过表达野生型Cx43可增强B16细胞GJIC功能,过表达突变型Cx43可抑制B16细胞GJIC功能。     

益气活血中药复方对CVB3乳鼠心肌细胞感染模型NADH脱氢酶亚基1和2表达的影响

目的:研究益气活血中药复方对CVB乳鼠心肌细胞感染模型NADH脱氢酶亚基1和2表达的影响,以期从基因水平揭示益气活血中药复方治疗CVB3心肌炎的作用机制,进一步证实益气活血中药复方是治疗CVB3病毒性心肌炎的有效方剂。方法:通过改良的抑制性消减杂交技术(suppression subtractive hybridization,SSH),分离大鼠心肌细胞病毒组和益气活血中药复方给药组差异表达的基因,并通过荧光RT-PCR对上述结果进行验证。结果:SSH结果显示中药组中NADH脱氢酶亚基1和NADH脱氢酶亚基2基因的表达均比病毒组中低,这一结果通过荧光RT-PCR得到验证。结论:益气活血法能够通过调节NADH脱氢酶亚基1和2的表达而实现治疗病毒性心肌炎的目的。     

益气活血中药复方对CVB_3大鼠心肌细胞感染模型细胞色素C氧化酶亚基Ⅰ、Ⅱ表达的影响

目的:研究益气活血中药复方调控CVB3大鼠心肌细胞感染模型细胞色素C氧化酶亚基Ⅰ(cytochromeC oxidase subunitⅠ)及细胞色素C氧化酶亚基Ⅱ(cytochrome C oxidase subunitⅡ)表达的作用机制。方法:本实验用Wistar大鼠心肌细胞建立柯萨奇病毒B3(CVB3)感染模型,通过改良的抑制性消减杂交技术(SSH),克隆受CVB3攻击的宿主细胞中被中药(益气活血中药复方)调控的基因。结果:细胞色素C氧化酶亚基Ⅰ、Ⅱ在中药组中呈高表达,病毒组中表达减弱或被抑制。结论:益气活血中药复方能够影响受CVB3攻击的宿主细胞色素C氧化酶亚基Ⅰ、Ⅱ的表达,有效保护心肌,阻断病程进度,实现治疗病毒性心肌炎的目的。     

益气活血中药复方对CVB3病毒性心肌炎心肌细胞损伤的影响

目的观察益气活血中药复方对CVB3病毒性心肌炎心肌细胞损伤的影响。方法以体外细胞培养方法,建立CVB3病毒性心肌炎心肌细胞感染模型。将细胞分为正常组、病毒组、中药组。采用荧光探针Hoechst33258染色法检测心肌细胞凋亡;采用激光共聚焦显微镜检测心肌细胞内钙离子浓度;采用SABC免疫组化法检测心肌细胞心肌肌钙蛋白（cTnI）表达;采用透射电镜检测各组心肌细胞超微结构。结果病毒组与正常组心肌细胞相比,细胞超微结构损伤严重,并可见明显的凋亡细胞核形态,而中药组心肌细胞形态及细胞器结构接近正常组,未见明显的凋亡细胞核形态;正常组心肌细胞cTnI呈阴性表达,病毒组cTnI呈强阳性表达,与正常组比较,差异有统计学意义（P〈0.05）,中药组cTnI呈弱阳性表达,与病毒组比较,差异有统计学意义（P〈0.01）;正常组心肌细胞经中药干预后,钙离子荧光强度无明显变化（P〉0.05）,而病毒组心肌细胞经中药干预后,钙离子平均荧光强度升高（P〈0.01）,与正常组比较,差异无统计学意义（P〉0.05）。结论益气活血中药复方可抑制CVB3感染后细胞凋亡发生,抑制cTnI蛋白表达,防御并减轻CVB3造成的心肌损伤,具有修复损伤心肌细胞超微结构、改善心肌细胞舒缩功能和血液动力学作用。     

益气活血中药复方与CVB3对乳鼠心肌细胞基因表达的影响

目的:克隆和筛选CVB3乳鼠心肌细胞感染相关基因,以期从基因水平揭示CVB3心肌炎的发病机制,同时探索益气活血中药复方治疗病毒性心肌炎的作用机制.方法:通过改良的抑制性消减杂交技术(suppression subtractive hybridization,SSH),分离大鼠心肌细胞CVB3感染组和益气活血中药复方给药...     

抗柯萨奇B病毒性心肌炎胶囊复方新制剂抗CVB3作用

目的 通过体内外实验观察抗柯萨奇B病毒性心肌炎胶囊K-CoXB-JN复方新制剂对柯萨奇B3(CVB3)病毒感染的心肌细胞和病毒性心肌炎(VMC)小鼠的保护作用.方法 体外实验用1000 TCID50的CVB3感染心肌细胞后,分别加入不同浓度的K-CoXB-JN复方新制剂和利巴韦林,并设定正常对照组和模型对照组,当细胞病变达到75％后,测定细胞上清液中肌酸激酶(CK)、天冬氨酸转氨酶(AST)、乳酸脱氢酶(LDH)活性;体内实验用CVB3感染Balb/c小鼠造成病毒性心肌炎模型,分别予K-CoXB-JN复方新制剂高、中、低剂量,利巴韦林和纯水连续灌胃14 d,记录小鼠死亡数,观察药物对小鼠的死亡保护情况.结果 K-CoXB-JN复方新制剂可降低CVB3感染的心肌细胞培养上清液中CK、AST、LDH含量,降低病毒性心肌炎小鼠的死亡率,给药组和模型对照组相比较P＜0.05.结论 K-CoXB-JN复方新制剂对CVB3感染的心肌细胞和病毒性心肌炎小鼠具有保护作用.     

益心康对柯萨奇B_(3m)病毒性心肌炎小鼠作用的实验研究

目的 :实验观察中药复方益心康 ,对实验性病毒性心肌炎小鼠心肌细胞保护作用和对心肌细胞内病毒复制的抑制作用。方法 :诱导Balb/c小鼠形成病毒性心肌炎模型 ,分别予益心康、病毒唑稀释液、生理盐水灌胃。测每个小鼠血清磷酸肌酸激酶 (CK)及其同功酶MB(CK -MB) ,测心肌细胞感染CVB3mRNA量。结果 :中药治疗组小鼠的血清CK和CK -MB明显低于其它两个治疗组。中药治疗组小鼠的心肌细胞含有的病毒RNA量明显少于其它两个治疗组。结论 :益心康对柯萨奇B3m病毒性心肌炎小鼠有保护作用 ,并抑制柯萨奇病毒B3m在心肌细胞中的复制。     

黄芪对柯萨奇B_3病毒感染培养大鼠心肌细胞Ca~（2＋）内流及该病毒RNA复制

本研究结果发现，黄芪对柯萨奇Ｂ_３病毒（ＣＶＢ_３）感染大鼠心肌细胞及正常对照心肌细胞的Ｃａ~（２＋）内流均呈显著抑制作用（ｐ＜０．０１，Ｐ＜０．０５））；若在病毒感染１ｈ后加黄芪，经４８ｈ培养，对正常对照及感染细胞的Ｃａ~（２＋）内流亦有抑制作用（Ｐ＜０．０５）；同时细胞中ＣＶＢ_３－ＲＮＡ含量显著少于病毒对照组（Ｐ＜０．００１）。提示黄芪具有钙拮抗作用，可减少病毒感染引起的心肌Ｃａ~（２＋）内流量，有可能减轻感染细胞的继发性Ｃａ~（２＋）损伤；且对细胞中病毒ＲＮＡ的复制具有抑制作用，显示了其在病毒性心肌炎临床治疗上的应用价值。     

黄芪对柯萨奇B3病毒感染培养大鼠心肌细胞Ca2＋内流及该病毒RNA复制

本研究结果发现,黄芪对柯萨奇Ｂ３病毒（ＣＶＢ３）感染大鼠心肌细胞及正常对照心肌细胞的Ｃａ＾２＋内流均呈显著抑制作用（Ｐ＜０．０１,Ｐ＜０．０５）;若在病毒感染１ｈ后加黄芪,经４８ｈ培养,对正常对照及感染细胞的Ｃａ＾２＋内流亦有抑制作用（Ｐ＜０．０５）。同时细胞中ＣＶＢ３－ＲＮＡ含量显著少于病毒对照组（Ｐ＜０．００１）。提示黄芪具有钙拮抗作用,可减少病毒感染引起的心肌Ｃａ＾２＋内流量,有可能减轻感染     

益气活血药对心肌梗死大鼠心脏结构和Cx43表达的影响

目的 探讨益气活血药对心肌梗死（myocardial infarction,MI）大鼠心脏结构及心肌电偶联的关键结构缝隙连接蛋白43（connexin 43,Cx43）表达的影响.方法 结扎雄性SD大鼠冠状动脉前降支建立MI模型,将30只MI大鼠随机分为模型组、益气活血组（参芍片0.25 g/kg联合复方丹参片0.75 g/kg）和倍他乐克组（12 mg/kg）,每组10只,于造模成功后24 h开始灌胃,1次/日,连续4周.另设假手术组10只,给予等量去离子水灌胃.4周后取材进行苏木素-伊红染色观察心肌组织病理,图像分析测量左室内径和心肌梗死百分比,免疫组织化学法检测心肌Cx43的表达.结果 与假手术组比较,术后4周模型组大鼠左室内径明显增大,心肌Cx43表达的平均光密度值（average optical density,AOD）、阳性表达面积（Area）和积分光密度（integral optical density,IOD）明显降低（P〈0.01）.与模型组比较,益气活血组和倍他乐克组的左室内径和心肌梗死百分比均明显减少（P〈0.05或P〈0.01）,在心肌Cx43的表达上,仅益气活血组心肌Cx43表达的AOD和IOD明显增加（P〈0.05或P〈0.01）.结论 益气活血治疗能减少MI大鼠左室内径和心肌梗死百分比,增加心肌Cx43表达强度和部分好转Cx43弥散表达状态,对MI后缺血心肌有保护作用,可能是稳定MI后心肌细胞间电偶联的机制之一.     

松果菊苷对人肝癌细胞HepG2生长和缝隙连接细胞通讯的影响

目的观察松果菊苷(ECH)对人肝癌细胞Hep G2生长和缝隙连接细胞通讯(GJIC)的影响。方法 Alamar Blue法绘制Hep G2细胞生长曲线,并检测ECH的细胞毒作用;划痕标记染料示踪技术(SL/DT)法观察空白对照组、API阳性对照组、AGA阴性对照组和ECH组对GJIC的影响;异硫氰酸荧光素(FITC)间接免疫荧光法观察ECH对缝隙连接蛋白Cx43表达的影响。结果 Hep G2细胞在20 000个/m L的细胞密度Alamar Blue还原率与时间有线性关系。ECH(5、10、20、40和80μM)处理Hep G2细胞24 h,细胞存活率分别为(92.69±3.35)%、(88.33±2.12)%、(80.97±2.50)%、(76.95±1.40)%和(69.09±1.11)%(P0.01)。抑制率最高(80μM浓度下)为30.91%。IC50为467.8μM(368.3μg/m L)。SL/DT显示阳性对照芹黄素和ECH处理24 h后,荧光染料在划痕外4列细胞出现了明显荧光(++++),说明细胞出现染料传输的现象。间接免疫荧光法对Cx43表达进行计分,空白对照组细胞得分为(1.40±0.55)分,ECH组得分为(1.60±0.55)分。结果表明ECH组的Cx43表达增强不明显。结论 ECH对Hep G2细胞有细胞毒作用,同时可增强GJIC功能,但Cx43表达不明显,为ECH抗肿瘤机制提供依据。     

益心康对感染柯萨奇病毒B3的大鼠体外心肌细胞CVB3 mRNA复制及相关细胞因子的影响

[目的]通过检测益心康药液作用于感染柯萨奇病毒B3(CVB3)后的乳鼠心肌细胞中柯萨奇病毒mRNA的复制情况及其所释放的肿瘤坏死因子-α(TNF-α)及转化生长因子-β(TGF-β)表达情况,进一步探讨益心康对病毒性心肌炎的病毒复制及相关细胞因子的作用机制。[方法]使益心康的药液作用于乳鼠心肌细胞,用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测心肌细胞中柯萨奇病毒mRNA的复制情况及其所释放的TNF-α及TGF-β的表达水平。[结果]益心康在CVB3感染的病毒性心肌炎的发病及发展过程中有抑制CVB3复制的作用,同时可以减少相关细胞因子TNF-α、TGF-β的分泌。益心康组(D组)、益心康加地塞米松组(E组)的细胞中的CVB3 mRNA、TNF-α、TGF-β表达水平明显低于病毒感染组(P<0.01),同时低于利巴韦林组(P<0.05),均有统计学意义;D组、E组之间P>0.05,无统计意义。[结论]益心康对柯萨奇病毒感染心肌细胞具有显著保护作用。     

健脾益肾中药对HIV特异性T细胞免疫功能的影响

目的探讨健脾益肾中药对HIV/AIDS患者、HIV感染者特异性T细胞免疫功能的影响。方法从2010年6月—2012年6月在北京佑安医院随访的HIV/AIDS感染者中随机抽出健脾益肾中药联合高效抗逆转录病毒疗法（highly active anti-retroviral therapy, HAART）治疗组患者20例,单独HAART治疗组患者23例。检测CD4＋T淋巴细胞绝对计数及病毒载量,同时使用HIV全基因重叠多肽作为刺激抗原,应用酶联免疫斑点实验（enzyme-linked immunospot,ELISPOT）技术测定两组HIV特异性T淋巴细胞免疫反应强度。结果两组CD4＋T淋巴细胞绝对计数及病毒载量差异无统计学意义（P〉0.05）。与单独HAART治疗组比较,健脾益肾中药联合HAART治疗组患者的HIV特异性T细胞免疫应答强度明显增强,差异有统计学意义（P〈0.05）。随着治疗时间的延长（6、12、18、24个月）,健脾益肾中药联合HAART组HIV特异性T细胞有增强的趋势,但差异无统计学意义（P〉0.05）。结论健脾益肾中药治疗可增强HIV/AIDS患者HIV特异性T细胞免疫功能。     

几种常见的细胞因子对Cx43的作用

缝隙连接是介导相邻细胞间离子和小分子信号物质直接交换的跨膜通道,连接蛋白43（connexin43,Cx43）是比较常见的缝隙连接蛋白,在很多细胞中都有表达。很多细胞因子能影响Cx43的表达及其缝隙连接功能。本文综述了Cx43的结构和功能及几种常见的细胞因子与Cx43表达之间的关系。     

小柴胡汤君臣药及其配伍提取物 对感染CVB3m心肌细胞的血清药理学研究

目的:探讨小柴胡汤(XCT)君臣药及其配伍提取物对感染CVB3m心肌细胞的抗病毒与保护作用,并试阐述机制。方法:制取3种提取物的含药血清,并测定体外对CVB3m毒力的影响。培养乳鼠心肌细胞建立心肌炎模型,从3个方面检测:应用MTT法检测含药血清对心肌细胞的保护率;检测各孔上清液中乳酸脱氢酶(LDH)及天冬氨酸氨基转移酶(AST)的释放量;RT-PCR法检测感染CVB3m的心肌细胞中CVB3m的含量。结果:黄芩提取物含药血清对CVB3m有直接灭活的作用。3个方面检测结果均显示:含药血清组与空白血清组比较,有显著性差异(P<0.01),黄芩组和配伍组分别与柴胡组比较,均有显著性差异(P<0.01),配伍组与黄芩组比较,无显著性差异。结论:黄芩提取物有直接灭活病毒的作用,黄芩和配伍提取物具有明显的抑制病毒复制和对病毒感染后细胞的保护作用,等量配伍提取物没有表现出作用增强的优势。     

Effects of Gingko biloba extract on gap junction changes induced by reperfusion/reoxygenation after ischemia/hypoxia in rat brain

Gap junction communication between astrocytes plays an important role in the brain. The purpose of this study was to investigate the effects of Gingko biloba extract (GBE) on the changes of connexin 43 (Cx43) mRNA and protein expression levels of rat cortex and hippocampus induced by ischemia-reperfusion and astrocyte gap junction intercellular communication (GJIC) induced by hypoxia-reoxygenation. After 2 hours of middle cerebral artery occlusion (MCAO) followed by 24 hours of reperfusion, there was obvious neurological deficit in rats. Cx43 mRNA and protein expression levels of rat cortex and hippocampus in the ischemia hemisphere were decreased significantly. When GBE at doses of 50 and 100 mg/kg body weight was administrated by p.o. daily for 7 days, the neurological deficit was improved, and lower Cx43 mRNA and protein expression levels induced by ischemia-reperfusion were recovered to normal. The i.p. injection of nimodipine (0.7 mg/kg weight body) also showed improvement on neurological deficit and Cx43 expression levels. Astrocyte GJIC was measured by the fluorescence recovery after photobleaching (FRAP). Hypoxia-reoxygenation induced a significant decrease in GJIC. Pretreatment with GBE (100 mg/l) and nimodipine (1.6 mg/l) significantly prevented the hypoxia-reoxygenation inhibition of GJIC. These results suggest that GBE could exert its neuroprotective effects by improvement of Cx43 expression and GJIC induced by hypoxia/ischemia-reoxygenation/ reperfusion injury.