外科手术联合自体骨髓干细胞动员治疗大鼠脑缺血

背景：研究表明干细胞治疗能够促进脑功能恢复,联合外科干预能更有效地改善预后。目的：分析外科手术联合自体骨髓干细胞动员治疗脑缺血的疗效和机制。方法：用线栓法制作SD大鼠脑缺血模型后随机分为4组：对照组不干预,其他3组分别行外科手术、重组人粒细胞集落刺激因子和粒/巨噬细胞集落刺激因子动员自体骨髓干细胞治疗或联合治疗。结果与结论：外科手术联合自体骨髓干细胞动员组大鼠的神经功能缺损评分、缺血坏死面积和细胞凋亡数明显低于对照组、外科手术组和自体骨髓干细胞动员组（P〈0.01）;BrdU、BDNF阳性细胞数、微血管数较其他组明显增多（P〈0.05）。结果显示外科手术联合自体骨髓干细胞动员可减少大鼠脑梗死面积,抗细胞凋亡,促进神经再生和修复,改善脑功能。     

外科手术联合自体骨髓干细胞动员治疗大鼠脑缺血

背景:研究表明干细胞治疗能够促进脑功能恢复,联合外科干预能更有效地改善预后。目的:分析外科手术联合自体骨髓干细胞动员治疗脑缺血的疗效和机制。方法:用线栓法制作SD大鼠脑缺血模型后随机分为4组:对照组不干预,其他3组分别行外科手术、重组人粒细胞集落刺激因子和粒/巨噬细胞集落刺激因子动员自体骨髓干细胞治疗或联合治疗。结果与结论:外科手术联合自体骨髓干细胞动员组大鼠的神经功能缺损评分、缺血坏死面积和细胞凋亡数明显低于对照组、外科手术组和自体骨髓干细胞动员组(P<0.01);BrdU、BDNF阳性细胞数、微血管数较其他组明显增多(P<0.05)。结果显示外科手术联合自体骨髓干细胞动员可减少大鼠脑梗死面积,抗细胞凋亡,促进神经再生和修复,改善脑功能。     

自体骨髓干细胞动员治疗脑创伤的实验研究

目的探讨自体骨髓干细胞（BMSCs）动员治疗脑创伤（TBI）的疗效、机制及治疗时机。方法SD大鼠参照Feeney方法制作TBI模型,随机分为对照组（A组）、自体BMSCs动员TBI急性期治疗组（B组）和亚急性期治疗组（C组）。采用神经功能缺损评分（NSS）和电迷宫试验检测大鼠脑功能,脑组织病理和免疫组织化学检测5-溴脱氧尿嘧啶核苷（Brdu）、胶质纤维酸性蛋白（GFAP）、脑源性神经营养因子（BDNF）、Nestin和Ⅷ因子抗原,TUNEL检测细胞凋亡。结果B、C两组大鼠NSS评分、电迷宫试验错误反应次数均较A组显著降低（P〈0．05）。B、C组创伤早期脑组织水肿和坏死面积及晚期神经瘢痕形成均少于A组;B、C组BrdU＋GFAP荧光双标阳性、BDNF表达和微血管计数均较A组显著增多（P〈0．05）,B组较C组增多但无统计学意义（P〉0．05）;B组Nestin表达显著高于A、C组（P〈0．05）,而细胞凋亡数较A、C组显著减少（P〈0．05）。结论动员的自体BMSCs向脑创伤组织区聚集、增殖、分化,分泌神经营养因子、促进血管生成、减少细胞凋亡,促进神经再生与TBI修复,改善大鼠脑功能;自体BMSCs动员治疗急性期和亚急性期TBI均有效,急性期疗效优于亚急性期。     

自体骨髓干细胞动员联合辛伐他汀治疗脑出血的实验研究

目的探讨自体骨髓干细胞(BMSCs)动员联合辛伐他汀治疗脑出血的疗效、机制。方法选用成年SD大鼠制备脑出血动物模型,随机分为对照组、辛伐他汀治疗组、自体BMSCs动员组和自体BMSCs动员联合辛伐他汀组。采用改良神经功能缺损程度评分(mNSS)检测大鼠脑功能,组织病理和免疫荧光双标及免疫组织化学检测BrdU/GFAP、BrdU/NSE及Nestin、BDNF和Ⅷ因子抗原,TUNEL检测细胞凋亡。结果脑出血4周时,自体BMSCs动员联合辛伐他汀组mNSS评分明显低于辛伐他汀治疗组和自体BMSCs动员组,后两组均显著低于对照组;脑组织病理显示炎症水肿、缺血由重至轻依次为对照组、辛伐他汀治疗组、自体BMSCs动员组和自体BMSCs动员联合辛伐他汀组;自体BMSCs动员联合辛伐他汀组BrdU/GFAP和BrdU/NSE免疫荧光双标阳性细胞数显著高于辛伐他汀治疗组(P1=0.000,P2=0.000)和自体BMSCs动员组(P1=0.000,P2=0.000),后两组均显著高于对照组(P1=0.000,P2=0.000);自体BMSCs动员联合辛伐他汀组Nestin和Ⅷ因子阳性表达数分别显著高于辛伐他汀治疗组(P1=0.000,P2=0.000)和自体BMSCs动员组(P1=0.000,P2=0.000),后两组均显著高于对照组(P1=0.000,P2=0.000)。自体BMSCs动员联合辛伐他汀组BD-NF阳性表达数与自体BMSCs动员组相比较差异无统计学意义(P=0.225),但显著高于辛伐他汀组(P=0.005),后两组均显著高于对照组(P1=0.000,P2=0.000);自体BMSCs动员联合辛伐他汀组细胞凋亡数明显低于辛伐他汀治疗组(P=0.000)和自体BMSCs动员组(P=0.000),后两组均显著低于对照组(P1=0.000,P2=0.000)。结论自体BMSCs动员联合辛伐他汀可协同促进BMSCs向出血区脑组织聚集、增殖、分化,分泌神经营养因子、促进血管生成、减少细胞凋亡,增强脑出血后神经再生与脑损伤的修复,明显改善脑出血大鼠脑功能。     

自体骨髓干细胞动员联合生长激素治疗大鼠急性心肌梗死

目的 粒细胞集落刺激因子（G—CSF）单用或合用重组人生长激素（rhGH）动员急性心肌梗死大鼠自体骨髓干细胞，观察梗死区心肌和血管再生状况。方法 液氮冷冻法制备心肌梗死模型。动物随机分为正常动员组（N，n=8）、假手术组（SO，n=6）、梗死组（MI，n=8）、G—CSF治疗组（G，n=8）、rhGH治疗组（GH，n=8）和G—CSF＋rhGH治疗组（GG，n=8）。计数动员前后白细胞计数（WBC）及单个核细胞百分比（MNC％）；术后4周处死动物，取心脏称重，行苏木素-伊红（HE）染色及免疫组化染色。结果 ①N组及G组动员后WBC和MNC％较动员前均明显增加（P均〈0．01）。MI组动员后WBC明显高于动员前（P〈0．01），但MNC％与动员前比较差异无显著性（P〉0．05）。G组动员后WBC和MNC％均显著高于MI组动员后（P均〈0．05）。②MI、G、GH、GG4组间梗死面积无明显差别（P〉0．05）。③GH、GG组动物处死时体重和心脏重量均明显高于SO、MI和G组（P均〈0．05）。GG组心脏重量／体重比高于SO、MI和G组（P〈0．05）。①G、GH和GG组毛细血管计数明显多于MI、SO组，GG组多于G、GH组（P均〈0．01）。⑤G、GH和GG组均可见BrdU（＋）新生细胞，部分形成新生毛细血管；G、GG组还可见新生心肌样细胞。结论 ①G—CSF可动员正常和心肌梗死后大鼠自体骨髓干细胞到外周血循环并进入梗死区，使大鼠梗死区心肌样细胞及毛细血管再生。②rhGH可促进梗死区毛细血管新生，但不再生心肌样细胞。③G—CSF联合rhGH治疗使大鼠梗死区毛细血管密度明显增加，提示两药合用有相加作用。     

沉默caspase-3基因影响骨髓间充质干细胞的增殖和凋亡

背景：缺血缺氧的心肌微环境导致植入的细胞存活率低。目的：观察沉默caspase-3基因对大鼠骨髓间充质干细胞增殖和体外缺血缺氧环境下凋亡的影响。方法：构建靶向caspase-3的shRNA重组慢病毒并转染骨髓间充质干细胞为转基因组,以正常细胞组和空载体组做对照,采用MTS法检测各组细胞增殖情况。建立缺血缺氧模型,real-timePCR和免疫组织化学分别检测缺血缺氧环境各组细胞的caspase-3mRNA和蛋白表达水平,应用流式细胞术检测不同缺血缺氧时间点（0,6,12,24,48h）各组细胞的凋亡率。结果与结论：重组慢病毒成功转染骨髓间充质干细胞,且细胞增殖活性升高（P〈0．05）。缺血缺氧环境下,转基因组细胞caspase-3在mRNA和蛋白表达水平相比对照组下降（P〈0．05）。沉默caspase-3能显著降低骨髓间充质干细胞的凋亡率（P〈0．05）,且随着缺血缺氧时间的延长凋亡率缓慢升高。结果提示,沉默caspase-3能加快骨髓间充质干细胞的生长速度和提高在体外缺血缺氧环境下的抗凋亡能力。     

外科手术联合自体骨髓干细胞动员治疗急性大面积脑梗死疗效观察

目的：探讨外科手术联合自体骨髓干细胞动员治疗急性大面积脑梗死的疗效及安全性。方法：将61例急性大面积脑梗死患者随机分为外科手术对照组和外科手术联合自体骨髓干细胞动员治疗组。比较患者治疗前后Barthel in-dex（BI）和中国卒中评分（Chinese stroke scale,CSS）。结果：对照组死亡2例,治疗组失访1例;治疗后1个月两组BI和CSS评分无统计学意义（P〉0.05）;治疗后3个月,治疗组BI评分明显高于对照组（P〈0.05）,CSS评分较对照组显著下降（P〈0.05）,治疗组未出现严重不良反应。结论：外科手术联合自体骨髓干细胞动员治疗急性大面积脑梗死安全有效,可显著改善患者神经功能和预后。     

颅脑损伤术后带肌蒂颅骨成形联合干细胞动员及综合康复治疗临床分析

目的探讨带颞肌蒂颅骨成形联合自体干细胞动员及综合康复治疗重型颅脑损伤后神经功能障碍的临床疗效。方法重型颅脑损伤术后患者95例,随机分为对照组47例和观察组48例,对照组行带肌蒂颅骨成形＋综合康复治疗,观察组在对照组治疗基础上给予自体干细胞动员（重组人粒细胞集落刺激因子和粒巨噬细胞集落刺激因子联合辛伐他汀）治疗;治疗后3个月比较2组临床疗效。结果治疗3个月后观察组Barthel指数评分（78.42±13.09）和Glasgow预后评分（4.89±0.83）均明显高于对照组（65.61±18.36）、（3.04±0.76）（P〈0.05）;治疗3周后,观察组外周血CD34＋CD133＋占外周单核细胞比率（（6.12±1.31）%）高于对照组（（2.24±0.26）%）（P〈0.01）,治疗中均未出现明显不良反应。结论带肌蒂颅骨成形联合干细胞动员及综合康复治疗重型颅脑损伤安全、有效,对改善患者神经功能和预后有促进作用。     

静脉移植脐血干细胞可抑制脑缺血大鼠的神经细胞凋亡

背景：已有实验证实脐血干细胞移植后可迁移至脑损伤区域,存活并分化为神经细胞。目的：探讨经静脉移植脐血干细胞治疗大鼠脑缺血的疗效以及对神经细胞凋亡的影响。方法：改良线栓法建立大鼠大脑中动脉闭塞再灌注模型,48只大鼠随机数字表法分成治疗组和对照组,分别在造模1d后经尾静脉注射脐血干细胞和PBS进行观察。结果与结论：治疗后3,7d两组神经功能评分比较,差异无显著性意义（P〉0.05）;14,21d治疗组神经功能评分明显低于对照组（P〈0.05）。对照组未见BrdU阳性细胞,治疗组大鼠脑组织切片中可见BrdU阳性细胞,对侧半球也可见少量BrdU阳性细胞。对照组大鼠缺血侧凋亡细胞显著多于治疗组（P〈0.05）。提示经静脉移植的脐血干细胞可迁移至大鼠缺血侧脑组织,抑制神经细胞凋亡,并显著改善大鼠神经功能。     

颞浅动脉-大脑中动脉搭桥联合颞肌贴敷术治疗成人烟雾病的近期疗效

目的 探讨颞浅动脉-大脑中动脉搭桥联合颞肌贴敷术治疗成人烟雾病的近期疗效。方法 选取2017年12月至2019年7月濮阳市人民医院收治的68例烟雾病患者为研究对象,根据随机数字表法分为研究组与对照组,每组34例。研究组行颞浅动脉-大脑中动脉搭桥联合颞肌贴敷术,对照组行单纯颞肌贴敷术。记录两组术前、术后3个月生活能力变化情况。结果 术前1 d,两组生活能力评分量表(MRS)评分比较,差异未见统计学意义(P0. 05);术后3个月,两组MRS量表评分均较术前1 d有所下降,研究组该量表评分变化幅度优于对照组,组间、组内数据比较差异有统计学意义(P 0. 05)。结论 应用颞浅动脉-大脑中动脉搭桥+颞肌贴敷术治疗成人烟雾病效果显著。     

骨髓间充质干细胞联合丹红注射液干预脑梗死组织GAP-43、Bcl-2的表达

背景：丹红注射液能够清除自由基和抑制脂质过氧化反应,能够改善中枢神经系统梗死后损伤区的微环境。目的：探讨骨髓间充质干细胞移植联合丹红注射液对大鼠脑梗死组织GAP-43、Bcl-2表达的影响。方法：选取Wistar大鼠60只,建立大脑中动脉闭塞模型,随机分为对照组、骨髓间充质干细胞组和联合治疗组。对照组尾静脉注射PBS、骨髓间充质干细胞组尾静脉注射2.5×109L-1的骨髓间充质干细胞悬液、联合治疗组联合注射2mL/kg丹红注射液＋2.5×109L-1的骨髓间充质干细胞悬液,均连续5d,1次/d。结果与结论：移植后24h,3d各组间大鼠神经功能障碍评分差异无显著性意义（P〉0.05）,移植后1周、2周,联合治疗组大鼠神经功能障碍评分低于骨髓间充质干细胞组及对照组（P〈0.05）;在联合治疗组中,GAP-43、Bcl-2的表达明显高于骨髓间充质干细胞组及对照组（P〈0.05）。说明骨髓间充质干细胞移植与丹红注射液联合应用可明显促进脑梗死局部GAP-43、Bcl-2的表达,对大鼠脑梗死细胞凋亡具有明显抑制作用。     

骨髓动员单个核细胞向血管内皮细胞和心肌样细胞的转化简

背景：目前骨髓动员能否归巢到心肌病心衰受损部位,分化成心肌样细胞和血管内皮细胞尚无定论。目的：观察骨髓动员剂粒细胞集落刺激因子对心肌病心衰大鼠心肌和血管的影响。方法：选取阿霉素心肌病心衰模型大鼠50只,分成2组,骨髓动员组30只皮下注射重组人粒细胞集落刺激因子,心衰组20只给予相同体积的生理盐水。骨髓动员组其中10只在动员第6天处死,留取心肌标本,行CD34免疫荧光检测。各组在治疗前及治疗后第5天剪尾取血,测量白细胞总数及单个核细胞百分比,同时提取外周血中单个核细胞行流式细胞仪检测。治疗第5天,腹腔注射Brdu 50 mg/kg,连续4周直至动物处死。留取心肌组织,通过心肌BrdU单染、BrdU与肌球蛋白重链双染及BrdU与肌动蛋白双染确定单个核细胞的归巢,评价移植的单个核细胞向心肌和血管内皮细胞的生成、分化。采用苏木精-伊红染色评价血管密度。结果与结论：骨髓动员组白细胞数及单个核细胞数较治疗前明显增高（P＜0.05）。流式细胞仪证实骨髓动员组外周血单个核细胞CD34阳性率显著高于心衰组（P＜0.05）。心肌CD34免疫荧光检测,心衰组阴性,骨髓动员组阳性。骨髓动员组心肌BrdU单染和肌球蛋白重链、肌动蛋白双染均呈阳性,心肌损伤处血管内皮细胞核呈BrdU阳性;心衰组均为阴性。骨髓动员组血管密度显著高于心衰组（P＜0.001）。提示骨髓动员出单个核细胞,归巢到心肌受损处,对心肌病心衰大鼠模型心肌和血管有明显修复作用。     

骨髓间充质干细胞移植联合依达拉奉治疗大鼠脑梗死

背景：依达拉奉具有清除自由基和抑制脂质过氧化反应的作用,能够改善中枢神经系统损伤区的微环境.目的：观察骨髓间充质干细胞移植联合依达拉奉治疗大鼠脑梗死的效果.方法：采用线栓法建立大鼠大脑中动脉阻塞模型,随机分为3组,对照组经尾静脉注射细胞培养液,骨髓间充质干细胞组经尾静脉注射2.0×10^9 L^-1的骨髓间充质干细胞悬液,依达拉奉＋骨髓间充质干细胞组经尾静脉注射2.0×10^9 L^-1骨髓间充质干细胞悬液同时经腹腔注射依达拉奉3 mg/（kg·d）,连续5 d.移植后行神经功能缺损评分,应用RT-PCR测定脑梗死组织水通道蛋白9及水通道蛋白4 mRNA的表达,并经全脑冷冻切片苏木精-伊红染色及荧光显微镜观察细胞自然存活及分布情况.结果与结论：移植后24 h,3 d各组间神经功能缺损评分差异无显著性意义（P〉0.05）,移植后2周,依达拉奉＋骨髓间充质干细胞组大鼠神经功能缺损评分低于骨髓间充质干细胞组及对照组（P〈0.05-0.01）.骨髓间充质干细胞组大鼠脑梗死周围组织水通道蛋白9及水通道蛋白4 mRNA的表达高于依达拉奉＋骨髓间充质干细胞组,却低于对照组（P 〈0.05）.依达拉奉＋骨髓间充质干细胞组CM-Dil阳性细胞和神经元数量多于骨髓间充质干细胞组及对照组（P〈0.05）.提示移植的骨髓间充质干细胞可移行至大鼠脑梗死灶周围并存活,分化为神经元样细胞.联合注射用依达拉奉治疗可明显改善脑梗死大鼠的神经学功能.     

低剂量辐射联合环磷酰胺对肿瘤细胞凋亡、细胞周期及骨髓增殖影响

目的探讨低剂量辐射联合环磷酰胺对小鼠移植肿瘤细胞的凋亡、细胞周期以及骨髓增殖的影响。方法昆明种雄性小鼠60只随机分为空白对照组、荷瘤对照组（假照组）、低剂量照射组（LDR组）、CTX化疗组（CTX组）和低剂量照射联合化疗组（LDR＋CTX组）,小鼠左后肢腹股沟皮下接种S180肉瘤细胞（空白组除外）,接种后第5、8天LDR组和LDR＋CTX组小鼠给予γ射线全身照射75 mGy,照射36 h后CTX组和LDR＋CTX组小鼠采用环磷酰胺（CTX）化疗,测量肿瘤大小变化,并取肿瘤组织采用流式细胞仪分析凋亡、细胞周期,取冲洗骨髓组织分析骨髓增殖情况。结果与假照组相比,各处理组肿瘤生长缓慢;LDR组肿瘤细胞凋亡增加;CTX组、LDR＋CTX组G1期细胞比例明显增加,S期细胞比例明显减少,后者较前者为著（t=2.52,P〈0.05）。与空白对照组相比,假照组、LDR组骨髓细胞浓度未见明显变化,化疗组（CTX组、LDR＋CTX组）明显减少,后者较前者有明显提高（t=4.71,P〈0.05）;CTX组、LDR＋CTX组的增殖指数（PI）明显增加,LDR＋CTX组较CTX组进一步升高（t=3.41,P〈0.05）。结论低剂量辐射联合环磷酰胺可使机体肿瘤细胞G1期阻滞加剧,对肿瘤增殖细胞杀伤作用增强,明显提高机体抗肿瘤的作用,同时保护机体的骨髓造血机能,具有辅助肿瘤化疗的实际临床意义。     

骨髓间充质干细胞在急性心肌梗死后心室重构中的应用

背景：动物实验和初期的临床研究表明,干细胞移植可以取代坏死心肌细胞、增加有功能心肌细胞的数量,改善心功能,从而为心肌梗死的治疗开辟了一条崭新的途径。目的：观察心肌梗死后自体骨髓间充质干细胞移植及骨髓动员对心功能的影响。方法：经猪髂前上棘抽取骨髓30mL,培养得到骨髓间充质干细胞。15只猪分为3组,模型组仅建立心肌梗死模型,干细胞移植组在造模3h后经冠状动脉注射骨髓间充质干细胞,干细胞动员组在造模3h后连续5d注射粒细胞集落刺激因子150μg/（kgd）。结果与结论：心肌梗死后8周,干细胞动员组、干细胞移植组左心室收缩、舒张末期内径都明显减小,射血分数较心肌梗死前提高,但差异无显著性意义（P〉0.05）;干细胞动员组及干细胞移植组血清血管内皮生长因子水平较心肌梗死前有上升趋势（P〈0.05）;干细胞动员组和干细胞移植组梗死交界区的毛细血管密度均大于模型组（P〈0.05）。提示心肌梗死后行自体骨髓间充质干细胞移植及骨髓动员均能明显改善心功能,但具体效果仍需进一步大样本实验研究。     

自体骨髓单个核细胞移植治疗糖尿病下肢周围神经病变

背景：有研究表明移植骨髓单个核细胞治疗糖尿病下肢神经病变动物模型,通过在组织内能促进血管再生和增加血管生成因子及神经营养因子能改善临床症状。目的：观察自体骨髓单个核细胞移植治疗糖尿病下肢周围神经病变的临床效果。方法：30例糖尿病下肢闭塞症患者60条下肢,按治疗方式的不同分为2组：自体骨髓单个核细胞移植的治疗组和对侧下肢非自体骨髓单个核细胞移植的对照组,各30条下肢。结果与结论：移植4周后,治疗组总有效率高于对照组（P〈0.05）。两组治疗后神经病变自主症状问卷神经病变主觉症状问卷评分均较治疗前明显降低,治疗组评分降低更明显（P〈0.01）,治疗组胫神经和腓总神经感觉和运动神经传导速度均较对照组快（P〈0.01）,患者未出现并发症和不良反应。说明自体骨髓单个核细胞移植治疗糖尿病下肢周围神经病变的临床效果较好。