游离甲状腺素时间分辨荧光免疫试剂盒的研制

目的研制一种人游离甲状腺素(FT4)时间分辨荧光免疫分析法(TRFIA)试剂盒。方法采用直接竞争法建立FT4检测方法(固相包被T4-复合物,与样本中的FT4竞争结合Eu标记的T4单克隆抗体),并对该试剂盒各项性能指标进行评价。结果该试剂盒的分析灵敏度为不高于2.0pmol/L,工作范围为2.0～120.0pmol/L。分析内变异系数为4.4%～5.7%、分析间变异系数为6.5%～8.2%,其总变异系数小于9.0%。与T3、FT3、rT3和rT4的交叉反应率分别为:1.12%、0.34%、0.56%和1.51%。稳定性试验表明该试剂盒可以在2～8℃稳定1年,37℃稳定7d。用该试剂盒对500份健康人血清标本进行测试,统计该试剂盒的正常参考值范围是11.5～22.7pmol/L。200份血清标本用本试剂盒与国外的化学发光试剂盒同时检测FT4,其相关系数为0.993。结论该试剂盒各项指标均达到临床检测要求,可替代国外化学发光法的同类产品试剂盒。     

1例甲状腺毒症致游离三碘甲状腺原氨酸一过性升高的临床分析

<正>甲状腺毒症是一种甲状腺激素分泌过多,引起以神经、循环、消化等系统兴奋性增高和代谢亢进为主要表现的临床综合征。美国甲状腺协会在2016年发布的《甲状腺功能亢进和其他病因导致的甲状腺毒症诊治指南》中指出,甲状腺毒症的病因包括营养因子过度刺激甲状腺,甲状腺激素合成和分泌的持续激活导致过量甲状腺激素释放,甲状腺中的激素前体被过量释放,额外的甲状腺激素暴露史等[1]。其临床表现为心悸、脱发、胸痛、月经稀少或月经紊乱等,常伴有     

慢性心力衰竭患者游离三碘甲状腺原氨酸下降40例及其临床意义

目的：观察慢性心力衰竭（CHF）病人中部分存在游离三碘甲状腺原氨酸（FT3）水平下降,在规范化治疗慢性心力衰竭时,加用小剂量甲状腺素片治疗进行疗效比较。方法采用放射免疫方法测定40例CHF患者血清三碘甲状腺原氨酸（T3）、四碘甲状腺原氨酸（T4）、FT3、游离四碘甲状腺原氨酸（FT4）、促甲状腺激素（TSH）水平,CHF患者治疗后上述指标再次测定,了解治疗前后甲状腺激素水平变化;根据心功能（按纽约心脏病协会心功能分级进行评定）变化评定疗效。结果治疗组的显效率较对照组差异有统计学意义（P＜0.05）,而总有效率2组间差异无统计学意义（P＞0.05）,2组的FT3、T3水平治疗后较治疗前均有提高（P＜0.05）,且治疗组比对照组升高更显著（P＜0.05）,心衰改善后FT3水平较前回升,而且加用甲状腺素片后回升更为明显。结论老年CHF患者往往伴血浆FT3水平下降,在治疗心衰时,加用小剂量甲状腺激素治疗会明显提高心衰治疗效果,心衰的症状改善更加显著。     

C-肽时间分辨荧光免疫分析试剂盒的研制

目的研制血清C-肽的时间分辨荧光免疫分析（TRFIA）试剂盒。方法采用双抗体夹心法建立C-肽TRFIA试剂盒,并进行方法学评价。结果C-肽可测量范围为0．4-20ng／mL;分析敏感性为0．23ng／mL;分析批内、批间精密度分别为7．99％、11．97％;C-肽回收率为99．57％;与胰岛素和胰岛素原无交叉反应。稳定性试验表明,试剂可以贮存在4℃稳定9个月,37℃稳定7d;该试剂盒测试200份正常人血清样本,其参考范围为0．358-3．590ng／mL;收集122份血清样本,用该试剂盒与国外其他方法的同类试剂盒同时检测,其相关系数为0．9432,线性方程为Y=0．9854X＋0．5063。结论C-肽TRFIA试剂盒各项指标均达到临床检测要求,适合临床推广使用．     

血清三碘甲状腺原氨酸与急性心肌梗死患者预后的关系

目的 探讨急性心肌梗死(AMI)患者血清三碘甲状腺原氨酸(Ta)水平与预后的关系.方法 选取66例AMI患者,根据疾病严重程度分为轻度18例、中度26例、严重22例;选择我院同期健康体检者66名为健康对照组;采用放射免疫法测定其血清T3、甲状腺素(T4)、游离三碘甲状腺原氨酸(FT3)、游离甲状腺素(FT4)、反三碘甲状腺原氨酸(rT3)、促甲状腺激素(TSH),并进行比较.结果 轻度、中度、重度AMI患者血清T3、FT3、rT3与健康对照组比较,差异均具有统计学意义[T3:(1.89±0.65)、(1.56±0.47)、(0.79 ±0.36)、(2.49 ±0.29) nmol/L,FT3:(5.53 ±0.62)、(4.73±0.58)、(3.28±0.45)、(6.39±0.35) pmol/L,rT3:(0.89±0.26)、(1.05 ±0.18)、(1.12±0.09)、(0.54±0.13) nmol/L,P＜0.05或P＜0.01];而FT4、TSH和T4差异均无统计学意义(P均＞0.05).结论 AMI患者伴有低T3综合征,并且T3越低,患者的心肌梗死越严重,T3对预测患者疾病严重程度和预后有重要价值.     

C-肽时间分辨荧光免疫分析试剂盒的研制

目的研制血清C-肽的时间分辨荧光免疫分析(TRFIA)试剂盒。方法采用双抗体夹心法建立C-肽TRFIA试剂盒,并进行方法学评价。结果C-肽可测量范围为0.4~20 ng/mL;分析敏感性为0.23 ng/mL;分析批内、批间精密度分别为7.99%、11.97%;C-肽回收率为99.57%;与胰岛素和胰岛素原无交叉反应。稳定性试验表明,试剂可以贮存在4℃稳定9个月,37℃稳定7 d;该试剂盒测试200份正常人血清样本,其参考范围为0.358~3.590 ng/mL;收集122份血清样本,用该试剂盒与国外其他方法的同类试剂盒同时检测,其相关系数为0.9432,线性方程为Y=0.9854X+0.5063。结论C-肽TRFIA试剂盒各项指标均达到临床检测要求,适合临床推广使用。     

低三碘甲状腺原氨酸综合征56例临床分析

低三碘甲状腺原氨酸（T3）综合征患者血清总T3和总甲状腺素（T4）水平可明显降低，游离T4水平可降低、正常或升高，代水平升高。现对我院2003年1月至2005年6月收治的56例诊断为低T3综合征且患不同重症疾病患者的临床资料进行回顾性分析。     

新生儿促甲状腺素的时间分辨荧光免疫分析方法及其试剂盒研制

目的 利用时间分辨荧光免疫分析(TrFIA)技术,建立新生儿促甲状腺素(Neonatal TSH)微量检测法,并研制其检测试剂盒.方法 采用一株TSH单克隆抗体用于固相包被,另一株TSH单克隆抗体用于标记铕(Eu3+),固相双抗体夹心时间分辨荧光免疫分析法检测Neonatal TSH.结果 自建的Neonatal hTSH TrFIA法灵敏度高,可达2.28 μU/ml,且在测量范围内,自制试剂盒剂量-反应曲线的相关系数r达0.998 7,与hLH,hFSH,HCG无明显交叉反应.分析内或分析间质控结果在靶值±25%内,室内低质控、高质控分析内和分析间变异系数(CV)分别为7.12%和6.09%,7.82%和7.03%.与DELFIA(R) Neonatal TSH试剂标准品进行准确性比对,实测值与标示效价比平均值为1.05.与DELFIA(R) Neonatal TSH试剂比对试验符合率一致,相关系数r可达0.982 2.试剂盒室间质评能力比对成绩100%.结论 自建的Neonatal TSH TrFIA法具有灵敏度高,特异度强,准确度高,精密性好和非放射性等优点,具有良好的临床应用价值.     

国产AFP时间分辨荧光免疫分析试剂盒的方法学评价

目的对本所研制的AFP时间分辨荧光免疫分析(TRFIA)试剂盒进行方法学评价。方法用精密度、灵敏度、稳定性及回收率等对AFP试剂盒进行方法学評价,并与进口试剂进行比较。结果国产AFP(TRFIA)试剂盒的批内和批间的CV分别为1.87%和7.95%,平均回收率为102.06%,灵敏度为0.43μg/L,同Roche公司Elecsys2010的所测值相关系数为0.7832,同Wallac公司Auto Delfia-1235的所测值相关系数为0.9739,阳性符合率为100%。结论国产AFP(TRFIA)试剂盒具有高精密度、高特异性、高稳定性,同进口试剂比较具有较高相关性,阳性符合率较好,值得临床推广应用。     

国产AFP时间分辨荧光免疫分析试剂盒的方法学评价

目的 对本所研制的AFP时间分辨荧光免疫分析(TRFIA)试剂盒进行方法学评价.方法 用精密度、灵敏度、稳定性及回收率等对AFP试剂盒进行方法学評价,并与进口试剂进行比较.结果 国产AFP(TRFIA)试剂盒的批内和批间的CV分别为1.87%和7.95%,平均回收率为102.06%,灵敏度为0.43 μg/L,同Roche公司Elecsys2010的所测值相关系数为0.7832,同Wallac公司Auto Delfia-1235的所测值相关系数为0.9739,阳性符合率为100%.结论 国产AFP(TRFIA)试剂盒具有高精密度、高特异性、高稳定性,同进口试剂比较具有较高相关性,阳性符合率较好,值得临床推广应用.     

甲状腺过氧化物酶抗体间接时间分辨荧光免疫分析法的建立及临床应用

目的建立甲状腺过氧化物酶（TPO）抗体间接时间分辨荧光免疫分析法（TRFIA）。方法用TPO抗原包板,用铕（Eu^3＋）标记兔抗人IgG做标记物,建立检测人血清TPO抗体的间接TRFIA。结果TPO抗体-TRFIA的敏感性为1.0 IU/mL;线性范围达1 000 IU/mL;批内变异系数（CV）为3.1%-3.6%,批间CV为3.3%-3.6%;平均回收率为98.89%;与电化学发光分析法（ECLIA）比对,相关系数达0.983 2;与临床诊断高度相关。结论本研究建立的TPO抗体-TRFIA是一个高灵敏和可靠的检测方法,有助于甲状腺疾病的临床诊断。     

抗弓形虫IgM抗体时间分辨荧光免疫分析法的建立及初步应用

目的采用时间分辨荧光免疫分析法（TRFIA）建立高灵敏的抗弓形虫（TOX）IgM抗体的检测方法。方法采用二抗间接法建立抗TOX IgM抗体的TRFIA。结果方法的批内和批间变异系数（CV）分别为1.9%和3.8%,敏感性为0.4 U/mL,可测范围为0.4-200 U/mL,20%、50%和80%的有效剂量（ED20、ED50和ED80）分别为36.3、88.2和147.8 U/mL。检测健康体检人员的血清,标本的测定值为（5.3±2.3）U/mL,建议阳性阈值为10 U/mL。结论抗TOX IgM抗体的TRFIA敏感性高、稳定性好,在优生优育及器官移植上具有很好的应用前景。     

抗弓形虫IgM抗体时间分辨荧光免疫分析法的建立及初步应用

目的采用时间分辨荧光免疫分析法(TRFIA)建立高灵敏的抗弓形虫(TOX)IgM抗体的检测方法。方法采用二抗间接法建立抗TOX IgM抗体的TRFIA。结果方法的批内和批间变异系数(CV)分别为1.9%和3.8%,敏感性为0.4 U/mL,可测范围为0.4~200 U/mL,20%、50%和80%的有效剂量(ED20、ED50和ED80)分别为36.3、88.2和147.8 U/mL。检测健康体检人员的血清,标本的测定值为(5.3±2.3)U/mL,建议阳性阈值为10 U/mL。结论抗TOX IgM抗体的TRFIA敏感性高、稳定性好,在优生优育及器官移植上具有很好的应用前景。     

抗心磷脂抗体IgG时间分辨荧光免疫分析法的建立

目的建立高灵敏度、宽量程的定量检测患者血清中的抗心磷脂抗体(anticardiolipin antibody,ACA)IgG的时间分辨荧光免疫分析方法。方法采用ACA抗原(心磷脂+β2糖蛋白I)和鼠抗人IgG抗体分别作为固相抗原和铕标记抗体,如果样本中存在ACA抗体,则形成ACA抗原-ACA抗体-铕标记鼠抗人IgG抗体复合物,加入解离增强液解离铕离子,检测荧光强度,样本中ACA-IgG抗体含量与荧光强度成正比;对建立的时间分辨荧光免疫(time-resolved fluoroimmunoassay,TRFIA)法检测ACA抗体的线性范围、精密度、检测范围进行分析;对25例ACA-IgG抗体阳性血清标本分别利用TRFIA及ELISA法检测ACA-IgG抗体,分析其相关性;收集50例健康献血者,利用TR-FIA检测其血清中的ACA-IgG抗体,计算临床特异度。结果 利用SPSS 13.0统计软件进行统计学分析,TRFIA法检测高、中、低3种浓度混合血清的批内(n=20)精密度分别为2.34%、3.25%和3.87%,批间(n=8)精密度分别为2.89%、3.67%和4.50%;方法的灵敏度为0.1GPL U/ml;TRFIA法检测健康献血者,临床特异度为98%;TRFIA与ELISA 2种方法检测结果的一致性检验采用相关性分析,相关系数为0.987;TRFIA比ELISA的检测范围更宽,稳定性能好。结论首次建立稳定的高灵敏度和宽检测范围的TRFIA法检测人血清中的ACA-IgG抗体,对早期诊断自身免疫性疾病及监测疗效具有重要意义,该方法以其优势有望在各检验科室得以普遍应用。     

Development of an improved time-resolved fluoroimmunoassay for simultaneous quantification of C-peptide and insulin in human serum

Objectives

Diabetes mellitus is a chronic disease affecting millions of people globally and resulting in significant death rates each year. A fast, inexpensive alternative to traditional testing and monitoring techniques is desirable, since secretion of insulin and C-peptide is impaired in diabetes mellitus.

Design and methods

A highly sensitive immunoassay was developed for the simultaneous measurement of C-peptide and insulin levels in human serum, utilizing dual-label time-resolved fluoroimmunoassay (TRFIA) and magnetic particle technologies. This assay was characteristic for a single-step sandwich-type immunoassay, wherein antibody-coated magnetic particles were used as the solid phase and Eu^3 + and Sm^3 + chelate labels were used for detection.

Results

Antibody-coated magnetic particles in a TRFIA format performed well in addressing a number of quantitative needs.

Conclusions

The results of this assay correlated well with commercial chemiluminescence assays and provided a number a advantages, including reduced sample volume, reduced reagent and personnel costs and reduced assay time, while maintaining the required clinical sensitivity.     

人C肽时间分辨免疫荧光分析试剂盒的研制

目的研制人C肽(C peptide)时间分辨免疫荧光分析(TRFIA)试剂盒。方法采用双抗体夹心一步法建立C肽TRFIA试剂盒,对试剂盒的各项指标进行评价。结果试剂盒的可测范围为0.5～22ng/ml,灵敏度为0.045ng/ml,批内、批间的变异系数(CV)分别为4.1%～6.7%和5.4%～6.8%;与胰岛素无交叉反应,与胰岛素原的交叉反应率为9.0%。30份血样用本试剂盒与国外同类试剂盒同时检测,其相关系数为0.992。结论试剂盒各项指标均达到临床检测要求,可替代国外同类产品试剂盒。     

血清透明质酸时间分辨荧光免疫分析法的反应条件优化及其临床应用

目的优化血清透明质酸（HA）时间分辨荧光免疫分析法（TRFIA）的反应条件,并探讨其临床应用价值。方法采用TRFIA检测血清中HA的含量,确定参与HA-TRFIA的各反应成分的浓度。结果最佳反应条件为包被浓度10 mg/L、HA结合蛋白（HABP）1∶500稀释、铕标记HA（Eu^3＋-BSA-HA）1∶200稀释。敏感性为5.17μg/L,批内变异系数（CV）为2.21%-3.78%,批间CV为3.73%-5.40%,平均回收率为100.4%。该法HA测定值与放射免疫测定值显著相关,且与临床结果一致。结论本研究建立的血清HA-TRFIA是一种灵敏准确的分析方法,适合临床应用。