转录因子Nanog在恶性肿瘤发展中的作用

Nanog是一个参与胚胎干细胞自我更新的转录因子,在多能细胞保持未分化状态的维持中起关键性作用.越来越多的资料表明Nanog基因在肿瘤细胞恶性表型的发展过程中异常高表达.Nanog特异性参与肿瘤的发生过程,是一种潜在的恶性肿瘤生物学和预后的标志物.     

Nanog与肿瘤细胞和干细胞的关系

Nanog是维持干细胞自我更新增殖和亚全能性的关键性基因,胚胎干细胞的转录因子。近年来,随着对Nanog在干细胞和肿瘤细胞中的表达相关研究的不断深入,为研究肿瘤的起源和生物学行为以及治疗肿瘤提供了新途径。     

Nanog蛋白在CD73+小鼠脂肪源间充质干细胞中的表达

目的 探讨Nanog蛋白在小鼠脂肪源间充质干细胞(ADMSCs)中的表达规律.方法 体外分离培养ADMSCs,利用流式细胞仪从ADMSCs中分选出CD73+和CD73 -两个细胞亚群.体外分别培养两组细胞,用免疫细胞化学和免疫荧光测定两组细胞Nanog蛋白的表达,并比较其差异.结果 CD73+ ADMSCs细胞约占总细胞的5％,形态上分为大细胞和小细胞.Nanog蛋白在CD73+ ADMSCs细胞中强阳性表达率(16.85±6.83)％,弱阳性表达率(81.78 ±7.19)％,阴性表达率(1.63±3.59)％;nanog蛋白在CD73 - ADMSCs细胞中强阳性表达率(5.74±2.79)％,弱阳性表达率(85.84 +37.31)％,阴性表达率(8.42±4.12)％.在Nanog阳性表达的细胞中可见不同分裂时相的有丝分裂细胞,CD73+细胞的分裂象明显多于CD73 -细胞.结论 CD73和Nanog可能均是ADMSCs特异性表达的标志,Nanog蛋白强阳性的细胞可能更具幼稚性.通常采用分离培养方法获得的ADMSCs是多种细胞的复合物.     

胶质瘤干细胞研究进展

随着对肿瘤干细胞（tumor stem cells）理论的深入认识和分离、培养肿瘤干细胞实验技术的不断进步,胶质瘤内肿瘤干细胞的存在已经有较多的证据和研究。这方面的研究不仅有助于深化人们对胶质瘤发生、复发和侵袭机制的认识,更重要的是可能改变以往胶质瘤的治疗策略,影响十分深远。新近,有学者将来自胶质瘤的肿瘤干细胞或具有干细胞特性的胶质瘤细胞称为“胶质瘤干细胞（glioma stem cells,GSC）”,较好地反映了这类细胞的特性。     

人脐带间充质干细胞表达胚胎干细胞相关转录因子

背景：Nanog、Oct4和Sox2通过调节胚胎干细胞的基因转录,对其多潜能性和自我更新的能力具有关键性的调控作用,脐带间充质干细胞中这些胚胎干细胞相关转录因子的表达情况如何还不太清楚。 目的：研究脐带间充质干细胞中Nanog、Oct4和Sox2等这些胚胎干细胞相关转录因子的表达情况。 方法：胶原酶和胰酶消化法培养脐带间充质干细胞;mTeSRTM1体系进行无滋养层培养人胚胎干细胞,定量PCR比较上述两种细胞中Nanog、Oct4和Sox2 mRNA表达量的差异;免疫荧光检测上述两种细胞中Nanog、Oct4和Sox2的表达情况。 结果与结论：间充质干细胞表达胚胎干细胞标记Nanog、Oct4和Sox2,但Oct4主要表达在胞浆,且以Oct4B为主。脐带间充质干细胞Nanog、Oct4A和Sox2的表达量明显低于胚胎干细胞,其mRNA表达量分别为胚胎干细胞的20%,0.3%,10%左右。通过了解两种细胞Nanog、Oct4和Sox2的表达差异,可为优化脐带间充质干细胞重编程提供依据,也为进一步研究胚胎干细胞相关转录因子在成体干细胞表达起何种作用提供参考。     

癌-睾丸抗原基因在神经胶质瘤干细胞中的表达

背景：癌-睾丸抗原基因在胶质瘤干细胞表达还不甚清楚。 目的：检测癌-睾丸抗原基因在神经胶质瘤干细胞中的表达。 方法：通过神经球培养的方法而分离干细胞。以半定量PCR及实时荧光定量PCR检测癌-睾丸抗原基因在母细胞、干细胞与分化细胞中的表达。 结果与结论：以神经球培养方式从胶质瘤细胞系中可分离出肿瘤球,将肿瘤球培养在含血清的培养基中,它的形态呈贴壁分化,且与母细胞没有区别。半定量PCR及实时荧光定量PCR检测发现与母细胞和分化细胞相比,癌-睾丸抗原基因在干细胞中的表达最高。提示癌-睾丸抗原基因可能为肿瘤干细胞的表面抗原。     

Nanog慢病毒载体构建及在胚胎干细胞分化调控中的应用

BACKGROUND:There is a lack of safe and effective modular lentivectors in differentiation regulation of embryonic stem cells. OBJECTIVE:To construct a modular lentivector, Puro-Nanog-hrGFP, with Nanog promoter-controlled humanized renilla reniformis green fluorescent protein (hrGFP) and puromycin and to observe the expression of Nanog during the differentiation of Nanog-hrGFP-transfected mouse embryonic stem cell lines. METHODS:After PCR amplification, Nanog, hrGFP and entry vector were recombined into the pDest-puro vectors to generate the lentiviral expression vector, Puro-Nanog-hrGFP, by the LR reaction. Through lentivirus production, transduction and puromycin screening, the transduced cell lines with Nanog-hrGFP gene were generated and identified. Expression of Nanog during the differentiation of transgenic mouse cell lines was detected. RESULTS AND CONCLUSION:The lentiviral expression vectors Puro-Nanog-hrGFP were constructed successfully by Gateway technology, and then the transducted cell lines were obtained by lentiviral infection. The expression of Nanog was gradually decreased during the process of transgenic cell lines differentiation, which provides a new tool for further investigation on regulation of stem cell differentiation.     

胶质母细胞瘤和胶质瘤干细胞

胶质母细胞瘤（GBM）是一种高度恶性、浸润性、异质性和致命性的脑肿瘤,虽然其治疗方法不断改进,但GBM患者的预后依然很差。近年来,肿瘤干细胞学说的提出为肿瘤的产生和治疗提供了新的思路。自脑肿瘤中分离出一群具有自我更新、增殖和神经分化等干细胞特性的肿瘤细胞以来,这群肿瘤干细胞使得GBM的研究也越来越广泛和深入。本文就GBM和胶质瘤干细胞的最新相关进展进行综述。     

WWC3蛋白在胶质瘤干细胞中的表达及作用

目的 探讨WWC3在胶质瘤干细胞(GSCs)中的表达,以及通过调节Hippo通路调控GSCs增殖、迁移和侵袭的作用.方法 Western blot检测Hippo通路相关分子的表达.过表达WWC3后,检测MST1、LATS1和YAP的磷酸化与表达;免疫荧光检测YAP分布变化;CCK8和Transwell检测GSCs增殖、...     

CD133+胶质瘤干细胞在胶质瘤中的分布

恶性胶质瘤是人类最致命的肿瘤之一,因其血管丰富和弥漫浸润性生长,使得手术不能全部切除并极易复发,患者预后差.因胶质瘤干细胞(GSCs)是胶质瘤发生、发展的源头,因而越来越多的受到关注.干细胞标志物CD133广泛表达于人体多种肿瘤中,同时,它也足研究得最多且应用最广泛的胶质瘤干细胞表面标志物.了解CD133+胶质瘤干细胞在胶质瘤中的分布可为临床靶向治疗恶性胶质瘤提供依据.     

无血清无饲养层人胚胎干细胞向胶质前体细胞的分化

目的 建立无血清无饲养层人胚胎干细胞(hESCs)胶质前体细胞分化体系.方法将生长在层黏连蛋白包被的培养板上的人胚胎干细胞,悬浮培养诱导拟胚体(EBs)形成,将25d的EBs转移至含有胰岛素、5μg/L碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)、20μg/L表皮生长因子(EGF)和5μg/L三碘甲状腺素(T3)的胶质细胞分化培...     

人胚胎干细胞在血清和无血清培养体系中的特性比较

目的 探讨血清培养体系和无血清培养体系对人胚胎干细胞（hES cells）生长特性的影响。 方法 将人胚胎干细胞株BG02接种在丝裂霉素C处理灭活的小鼠胚胎成纤维细胞饲养层上,分别在含血清hES完全培养基或无血清培养基中连续培养25~30代。在不同培养体系下比较人胚胎干细胞形态、集落贴壁率;运用BrdU掺入法检测人胚胎干细胞增殖,用细胞计数法计算细胞倍增时间;采用免疫荧光染色检测人胚胎干细胞特异性分子标志的表达;用流式细胞仪检测人胚胎干细胞Oct-4,Nanog阳性的比例;RT-PCR检测成纤维细胞生长因子(FGFs)家族基因的表达。 结果 在两种培养体系的BG02细胞都具有人胚胎干细胞的形态特征。在含血清培养体系下,BG02细胞集落贴壁率和表达OCT-4,Nanog的阳性细胞明显高于无血清培养体系( P<0.05)。无血清培养体系中,BG02细胞生长速度明显高于含血清培养体系,细胞倍增时间分别为(33.8±4.3) h、(45.9±5.7) h,( P<0.05)。无血清培养体系的BG02细胞高表达 FGF2 、 FGFR2 、 FGFR4 。 结论 两种不同培养体系中人胚胎干细胞的体外培养特性存在一定的差异,可能与BG02细胞 FGFs 家族基因激活有关。     

Satb1 and Satb2 regulate embryonic stem cell differentiation and Nanog expression

Satb1 and the closely related Satb2 proteins regulate gene expression and higher-order chromatin structure of multigene clusters in vivo. In examining the role of Satb proteins in murine embryonic stem (ES) cells, we find that Satb1^−/− cells display an impaired differentiation potential and augmented expression of the pluripotency determinants Nanog, Klf4, and Tbx3. Metastable states of self-renewal and differentiation competence have been attributed to heterogeneity of ES cells in the expression of Nanog. Satb1^−/− cultures have a higher proportion of Nanog^high cells, and an increased potential to reprogram human B lymphocytes in cell fusion experiments. Moreover, Satb1-deficient ES cells show an increased expression of Satb2, and we find that forced Satb2 expression in wild-type ES cells antagonizes differentiation-associated silencing of Nanog and enhances the induction of NANOG in cell fusions with human B lymphocytes. An antagonistic function of Satb1 and Satb2 is also supported by the almost normal differentiation potential of Satb1^−/−Satb2^−/− ES cells. Taken together with the finding that both Satb1 and Satb2 bind the Nanog locus in vivo, our data suggest that the balance of Satb1 and Satb2 contributes to the plasticity of Nanog expression and ES cell pluripotency.     

人孤雌胚胎干细胞与正常胚胎干细胞分化能力的比较

目的 比较人类孤雌胚胎干细胞(pESCs)系与正常胚胎干细胞(nESCs)系的分化能力,探讨pESCs是否和nESCs一样具有多向分化潜能.方法 将pESCs和nESCs分别注射到重症联合免疫缺陷(SCID)小鼠体内形成畸胎瘤,瘤体组织切片和HE染色后进行组织学分析;将pESCs和nESCs体外悬浮培养形成拟胚体(EB),利用RT-PCR检测3个胚层主要器官以及滋养层细胞发育关键基因的表达;将pESCs和nESCs定向诱导分化为滋养层细胞,通过流式细胞仪测定人绒毛膜促性腺激素-β(hCG-β)阳性细胞比例以及通过酶联免疫吸附测定(ELISA)进行hCG-β的定量分析.结果 在体内生长和体外培养过程中,pESCs和nESCs均能够向3个胚层的细胞类型分化.在SCID小鼠体内可形成畸胎瘤,有神经上皮、软骨、腺上皮等3个胚层的衍生物产生;pESCs和nESCs来源的EB在体外自发分化5~21d后,均检测到3个胚层主要器官以及滋养层细胞发育关键基因的表达;pESCs定向分化为滋养细胞后,可以检测到hCG-β的表达,但其阳性细胞比例和分泌量均低于nESCs.结论 pESCs具有向3个胚层以及滋养层细胞分化的能力,但是向滋养层细胞分化的能力仍低于nESCs.     

Proteomic analysis of phosphotyrosyl proteins in human embryonic stem cell-derived neural stem cells

Phosphorylation can reveal essential cell functions, such as cell differentiation, signal transduction, metabolic maintenance and cell division. The aim of this study was to investigate phosphorylated protein expression changes during neuronal lineage differentiation from hESCs. To measure the phosphorylated protein expression change during neuronal differentiation, we performed a comparative phosphoproteome analysis using 2-DE after MALDI-TOF MS and an MS/MS protein identification method, making a comparison between neural lineage differentiating cells and normal embryoid bodies (EBs) differentiated from human embryonic stem cells (hESCs) and profiling constituent phosphorylated proteins. Of 36 differentially expressed protein spots, 12 spots were shown to be up-regulated in differentiating neural cells. Specifically, the 7 up-regulated proteins of the 12 have potential roles in neuronal differentiation or neuronal damage recovery, including ACTB, heterogeneous nuclear ribonucleoprotein A2B1 (hnRNP A2B1), heterogeneous nuclear ribonucleoprotein L (hnRNP L), SET, chaperonin-containing TCP-1, vimentin and voltage-dependent anion channel protein 1 (VDAC1). These proteins are discussed further below.     

人胚胎干细胞不同传代方法的比较

目的探讨不同传代方法对人胚胎干细胞生长和分化情况的影响。方法用1mg/mlⅣ型胶原酶和机械切割两种不同的方法传代人胚胎干细胞,比较这两种方法传代的人胚胎干细胞克隆生长和分化情况。结果 1.机械切割法传代的人胚胎干细胞克隆较传统酶消化法生长快速且不易分化。2.传代后的人胚胎干细胞仍然维持胚胎干细胞的特有形态：表达胚胎干细胞表面标记,具有正常核型和多潜能分化能力（在体外形成拟胚体在体内形成畸胎瘤）。结论采用机械切割法传代人胚胎干细胞更利于细胞的培养扩增,且传代后细胞在继续培养中仍可保持干细胞的所有特性。