支气管哮喘患者肺泡巨噬细胞释放内皮素-1的研究

为研究支气管哮喘患者肺泡巨噬细胞（Ａｍ）所释放的内皮素１（ＥＴ１）在哮喘发病中的作用,对发作期哮喘患者２０例,对照组８例,经纤支镜行支气管肺泡灌洗术获得Ａｍ,调整Ａｍ至１×１０６／ｍｌ后分３孔体外培养（１ｍｌ／孔）;生理盐水对照孔、氟美松孔（１μｇ／ｍｌ）、氨茶碱孔（１５μｇ／ｍｌ）,培养６ｈ后取上清液,采用放免法测定ＥＴ１。显示哮喘组血浆ＥＴ１明显高于对照组,并于第１秒用力肺活量（ＦＥＶ１．０）呈显著负相关。哮喘组Ａｍ体外释放ＥＴ１与对照组无显著差异,与ＦＥＶ１．０无相关性。氟美松孔Ａｍ释放ＥＴ１明显低于生理盐水对照孔;氨茶碱孔与生理盐水孔或氟美松孔无差异。提示哮喘Ａｍ所释放ＥＴ１在哮喘发病中意义不大     

哮喘大鼠肺泡巨噬细胞电压依赖性钾通道的活性研究

目的探讨哮喘模型大鼠肺泡巨噬细胞(AM)电压依赖性钾通道(Kv)活性的变化及其对巨噬细胞功能的影响。方法利用卵蛋白(OVA)致敏并激发大鼠建立哮喘模型,收集支气管肺泡灌洗液(BALF)培养AM。利用全细胞电压钳模式记录AM细胞膜上的Kv电流,观察比较哮喘模型组和对照组Kv通道活性的变化。结果病理学检测发现哮喘模型组(n=7)炎性细胞浸润明显增加,BALF细胞总数显著增高,与对照组(n=7)比较差异显著(P<0.01),但AM百分比无明显差异;应用Kv通道特异性阻断剂4-氨基吡啶(4-AP)后电流幅度明显降低,证实检测到的AM细胞膜上的电流为Kv电流;哮喘大鼠AM细胞Kv电流幅度[(243.56±133.56)pA,n=10]较对照组[(656.23±162.34)pA,n=11]明显降低(P<0.01)。结论哮喘大鼠AM细胞Kv通道活性降低,可能导致AM兴奋性增高,易被激活分泌各种炎性介质和细胞因子,从而参与哮喘炎症的形成。     

矽尘对大鼠肺泡巨噬细胞功能损害观察

免疫细胞功能变化 ,尤其是巨噬细胞功能变化在矽肺发生、发展过程中起重要作用 ,了解巨噬细胞功能改变对于矽肺防治具有重要意义。我们对染尘大鼠肺泡巨噬功能进行检测 ,结果报告如下。材料与方法1.染尘动物模型复制[1] :雌性Ｗｉｓｔａｒ大鼠 30只 ,体重2 0 0～ 2 5 0ｇ ,随机分为实验组 2 0只 ,对照组 10只。大鼠乙醚麻醉后 ,进行喉气管插管 ,实验组注入石英粉尘 (石英粉尘颗粒直径≤ 5ｕｍ)生理盐水悬液 5 0ｍｇ/ｍｌ(只 ) ,而对照组仅注入生理盐水 1ｍｌ/只。2 .大鼠肺泡巨噬细胞收集、纯化 :大鼠经 2 .5 %硫贲妥纳麻醉后 ,暴露支气管和…     

慢病毒介导siRNA干扰MyD88表达对大鼠肺泡巨噬细胞功能的影响

目的采用RNA干扰技术,通过构建表达大鼠髓样分化因子88（MyD88）siRNA慢病毒干扰大鼠肺泡巨噬细胞MyD88g／表达,检测其对细胞功能的影响。方法针对MyD88基因,设计并构建3对siRNA表达质粒,分别与预先构建好表达MyD88N质粒共转染HEK-293T细胞,Westernblot检测MyD88的表达情况,筛选出其中1对干扰效率最高的siRNA,用Gateways方法构建慢病毒干扰载体包装成慢病毒,将慢病毒转染大鼠肺泡巨噬细胞系NR8383胞并加入内毒素（LPS）诱导,未转染慢病毒的细胞作为空白对照组和LPS激活组：空白对照组加入与LPS等体积的PBS;LPS激活组加入LPS刺激。ELISA测定各组细胞因子（IL-18、IL-6）释放情况。结果成功筛选出了1对干扰效率最高的siRNA并包装成慢病毒,病毒滴度为2．0×10^6TU／ml。LPS诱导后,与对照组相比．感染慢病毒的NR8383细胞MyD88表达明显受到抑制,IL-1β、IL-6的释放均显著减少,差异有统计学意义。结论慢病毒介导RNA干扰能够有效抑制NR8383细胞MyD88基因的表达,显著减少胞因子的释放,为以抗原提呈细胞（APC）为靶向的体内实验治疗大鼠肺移植相关闭塞性细支气管炎（obliterative bronchitis,OB）的研究提供了手段。     

肺癌患者肺泡巨噬细胞和外周血单个核细胞IL-10、IL-12测定的临床意义

目的:测定肺癌患者肺泡巨噬细胞(Alveolar marcrophage,AM)和外周血单个核细胞(Peripheral blood mononuclear cell,PBMC)分泌IL-10、IL-12的水平,了解其细胞免疫功能状态;为IL-12应用于肺癌的治疗提供理论依据.方法:从57名肺癌(Lung cancer,LC)患者、33名良性肺病(Benign pulmonary disease,BPD)患者、12名健康者(Normal control,NC)的支气管肺泡灌洗液(Brochoalveolar larage,BALF)及外周血中分别获取AM和PBMC,用ELISA法测定培养上清液中IL-10、IL-12的水平.结果:(1) LC组IL-10的水平显著高于NC、BPD组,IL-12则比NC、BPD组显著降低.(2) LC组IL-10与IL-12的水平呈负相关.(3) Ⅲ、Ⅳ期患者IL-10水平比Ⅰ～Ⅱ期显著升高,Ⅳ期患者IL-12水平比Ⅰ～Ⅱ期显著降低.(4) 小细胞肺癌(Small cell lung cancer,SCLC)组IL-10水平显著高于腺癌组及鳞癌组,而PBMC分泌的IL-12水平低于腺癌组,AM分泌的IL-12水平低于腺癌组及鳞癌组.结论:(1) LC患者全身及局部的细胞免疫功能严重缺陷.(2) IL-10、IL-12基础水平与LC的分期、恶性程度有关.     

RERG钾通道在大鼠肺泡巨噬细胞中的表达

目的:观察RERG钾通道在大鼠肺泡巨噬细胞中有无表达.方法:以大鼠肺泡巨噬细胞系NR8383为研究对象,RT-PCR方法检测NR8383细胞膜rerg钾通道mRNA,并测序验证;免疫细胞化学方法检测NR8383细胞膜上RERG钾通道蛋白.结果:NR8383细胞中可以检测到rerg钾通道mR-NA,并经测序证实;NR8383细胞膜上可以检测到RERG蛋白.结论:从mRNA和蛋白水平证明RERG钾通道在大鼠肺泡巨噬细胞上有表达,为进一步探索RERG钾通道与肺泡巨噬细胞功能的关系提供了依据.     

前列腺素E2对大鼠肺泡巨噬细胞内皮素生成的调控

采用放射免疫分析法观察大鼠肺泡巨噬细胞（ＡＭ）的内皮素（ＥＴ）生成。结果显示：①未受刺激的ＡＭ存在ＥＴ的基础分泌；②脂多糖（ＬＰＳ）、佛波醇酯（ＰＭＡ）和Ｃａ＾２＋导入剂Ａ２３１８７均可显著促进ＡＭ的ＥＴ生成；③钙调蛋白（ＣａＭ）抑制剂Ｗ７可阻断ＰＭＡ的促ＥＴ生成效应；④外源性前列腺素Ｅ２（ＰＧＥ２）可抑制ＬＰＳ和ＰＭＡ的促ＥＴ生成效应，消炎痛可增强ＬＰＳ的作用。结果显示，ＡＭ具有产生ＥＴ的功能，     

磁场对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能及IL-1产生的影响

本文用磁场体外作用于小鼠腹腔巨噬细胞。实验结果表明:磁场可使巨噬细胞的吞噬功能及IL-1（白细胞介素-1）活性增高,与对照组比较差异非常显著。磁场对巨噬细胞具有明显的生物效应。     

烟雾吸入性损伤大鼠肺泡巨噬细胞吞噬功能与炎症消散关系研究

本研究以大鼠烟雾吸入伤为模型 ,造成中至重度吸入性肺损伤 ,观察肺泡巨噬细胞体外对鸡红细胞吞噬功能及肺泡巨噬细胞体内吞噬凋亡中性粒细胞的动态变化 ,以探讨肺泡巨噬细胞吞噬功能与肺内炎症消散的关系。1　材料与方法1.1　动物分组与致伤　　健康成年Ｗｉｓｔａｒ大鼠 90只 (本校动物中心提供 ) ,体重 (2 2 0± 2 0 )ｇ ,领回后喂养 4～ 5ｄ以适应环境 ,随机分为正常对照组(ｎ =10 )和吸入伤组 (ｎ =80 )。按本所烟雾吸入伤模型[1] 制作造成中至重度吸入性损伤。若大鼠不在致伤时因窒息死亡 ,大部动物都能存活 ,逐渐痊愈。分别于致伤后 …     

川芎嗪对哮喘大鼠Th2型细胞因子作用的研究

目的 探讨川芎嗪对哮喘大鼠白细胞介素-4（IL-4）、白细胞介素-13（IL-13）水平的影响及其防治哮喘的作用机制。方法 60只SD大鼠随机分为正常对照组、哮喘模型组、地塞米松组、小剂量及大剂量川芎嗪组、联合用药组，以卵蛋白致敏和激发制备大鼠哮喘模型，用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测支气管肺泡灌洗液（BALF）中IL4、IL—13的水平。结果 哮喘模型组BALF中IL-4、IL—13水平均高于正常对照组（P〈0．001）；地塞米松组和川芎嗪治疗各组均显著低于哮喘模型组（P〈0．001）；川芎嗪大剂量组和联合用药组降低IL-4和IL—13的作用与地塞米松组无显著性差异（P〉0．05）；川芎嗪大剂量组降低IL-4的作用与川芎嗪小剂量组无显著性差异（P〉0．05），川芎嗪大剂量组降低IL—13的作用优于川芎嗪小剂量组（P〈0．05）；BALF中IL-4和TL—13水平呈显著正相关（r=0．714，P〈0．01）。结论 川芎嗪通过抑制IL-4和IL—13的水平而抑制哮喘气道炎症。     

矿盐粉粒吸入疗法对哮喘小鼠肺组织病理形态及血清IL-4、IL-5、IL-13水平的影响

目的： 探讨天然矿盐粉粒吸入对哮喘小鼠肺组织病理及血清IL-4、IL-5、IL-13水平的影响。方法： 将40只Balb/c雌性小鼠随机分为对照组、模型组、30 min治疗组、60 min治疗组,每组10只。第0、7天分别在模型组、30 min治疗组、60 min治疗组小鼠腹腔注射致敏液鸡卵清蛋白（Ovalbumin,OVA）,对照组注射生理盐水。第14天对模型组和治疗组行超声雾化吸入OVA以诱发哮喘;对照组则以生理盐水雾化吸入。第15天起,两治疗组每天分别用矿盐粉粒吸入治疗30 min或60 min,对照组和模型组则吸入空气,各组共吸入10 d。第22至第24天连续诱发哮喘3天,第25天处死小鼠,取肺组织常规行病理切片,ELISA法检测血清IL-4、IL-5、IL-13水平。结果： 与对照组比较,模型组小鼠肺组织病理出现支气管收缩、管腔狭窄、黏膜上皮坏死脱落,大量炎症细胞浸润、嗜酸性粒细胞聚集。与模型组比较,治疗组上述表现明显减轻。与对照组比较,模型组小鼠血清IL-4、IL-5和IL-13含量明显升高（P＜0.01或P＜0.05）;与模型组比较,两治疗组的IL-4、IL-5、IL-13含量则明显降低(P＜0.01)。结论： 吸入天然矿盐粉可减轻支气管哮喘小鼠气道炎症,降低血清中哮喘相关细胞因子IL-4、IL-5、IL-13的含量。     

维生素D2对哮喘大鼠肺组织ICAM-1及IL-4的影响

目的探讨维生素D2(VD2)对哮喘大鼠的气道炎症的影响。方法 30只SD大鼠随机分3组,其中哮喘组和VD2组用卵清白蛋白致敏激发制备哮喘模型。VD2组于激发前给予腹腔注射VD2,哮喘组及空白对照组给予注射生理盐水。观察大鼠肺泡灌洗液(BALF)细胞计数和分类及白细胞介素4(IL-4)含量,肺组织标本中细胞间黏附分子-1(ICAM-1)阳性细胞平均光密度值。结果哮喘组炎症指标较空白对照组明显升高,VD2组炎症指标较哮喘组减低。结论 VD2对哮喘大鼠的气道炎症有一定的减轻作用。     

黄芪对支气管哮喘大鼠支气管肺泡灌洗液及血清中NO、IL-5和炎症细胞的影响

目的:探讨黄芪对支气管哮喘模型大鼠血清及支气管肺泡灌洗液(BALF)中一氧化氮(NO)、白细胞介素5 (IL-5)和炎症细胞的影响,阐明黄芪对哮喘的治疗效果.方法:60只Wistar大鼠随机分为正常对照组、模型组、激素干预组及黄芪干预低、中、高剂量组,每组10只,除正常对照组外以卵白蛋白(OVA)致敏并吸入激发法制备大...     

支气管哮喘患者血清免疫球蛋白E和支气管肺泡灌洗液中白介素8测定及意义

目的探讨免疫球蛋白E(IgE)和白介素8(IL-8)在支气管哮喘发病机制中的作用以及在诊疗中的意义。方法选择25例支气管哮喘急性发作患者为哮喘组,另选正常健康体检者16例为对照组。采集所有研究对象血清和支气管肺泡灌洗液(BALF),使用多抗体夹心酶联免疫吸附方法检测2组血清IgE和BALF中IL-8含量,比较2组血清IgE和BALF中IL-8含量,并进行相关性分析。结果哮喘组血清IgE水平和BALF中IL-8水平均较对照组明显增高(P<0.01);哮喘组血清IgE和BALF中IL-8水平之间呈显著正相关(r=0.73,P<0.01)。对照组血清IgE和BALF中IL-8水平之间无明显相关性(r=0.26,P>0.05)。结论IL-8和IgE可能参与了哮喘的发病过程,测定二者的水平,对临床诊断支气管哮喘有一定的应用价值。     

谷氨酰胺对哮喘模型小鼠血清和肺泡灌洗液中白细胞介素-4及白细胞介素-6水平的影响

[目的]观察谷氨酰胺对哮喘模型小鼠白细胞介素(IL)-4,IL-6水平的影响.[方法]取Balb/c小鼠,应用卵蛋白及氢氧化铝致敏,再利用雾化吸入卵蛋白激发气道的方法制作哮喘小鼠模型.随机分为正常对照组、哮喘模型组、谷氨酰胺小、中、大剂量组.谷氨酰胺小、中、大剂量组分别在末次哮喘激发后腹腔注射给予0.40,0.75,1.50g/kg谷氨酰胺,并在注射后30min采血.取小鼠血清,用ELISA方法检测IL-4,IL-6水平.气管插管后取肺泡灌洗液,离心后取上清液检测IL-4,IL-6水平.[结果]哮喘模型组血清及肺泡灌洗液中IL-4,IL-6水平均明显高于正常对照组(P<0.05),谷氨酰胺小、中、大剂量组血清及肺泡灌洗液中IL-4,IL-6水平与哮喘模型组比较明显降低(P<0.05),且呈剂量效应(P<0.05).[结论]谷氨酰胺可降低哮喘小鼠血清和肺泡灌洗液中的IL-4,IL-6水平,起到抗炎作用,对哮喘有治疗作用,且作用呈现剂量依赖性.     

GBE 对COPD 大鼠血清和肺泡灌洗液中IL-1、IL-8 含量的影响

目的 探讨银杏叶提取物（GBE）对慢性阻塞性肺疾病（COPD）大鼠血清和肺泡灌洗液（BALF）中白细胞介素1（IL-1）、白细胞介素8（IL-8）含量的影响。方法 将90 只清洁级Wistar 大鼠称重后,随机分为A、B、C、D、E、F 组,每组15 只。B、C、D、E、F 5 组采用烟雾吸入等复合因素复制COPD 大鼠模型;C、D 组分别在1 ～ 14 d 和29 ～ 42 d 用GBE 干预;E、F 组分别在1 ～ 14 d 和29 ～ 42 d 用红霉素干预,实验结束取各组大鼠肺动脉血和BALF,检测各组血清和BALF 中IL-1、IL-8 的含量。结果 A、C、D、E、F 组与B 组相比,血清中IL-1、IL-8 含量及BALF 中IL-1 含量低于B 组（P <0.05）。在降低血清IL-1 水平方面,早期GBE 干预优于晚期;在降低大鼠血清和BALF 中IL-1、IL-8 水平方面,GBE 与红霉素比较差异无统计学意义（P >0.05）。结论 GBE 具有抑制COPD 气道及全身炎症反应的作用。     

火把花根片对哮喘豚鼠肺泡灌洗液白细胞介素3受体mRNA的表达及嗜酸性粒细胞浸润的影响

目的探讨火把花根片对哮喘豚鼠肺泡灌洗液(BALF)白介素-3(IL-3)受体mRNA的表达及嗜酸性粒细胞(Eos)浸润的影响。方法32只健康豚鼠随机分为4组:正常对照组、哮喘组、地塞米松治疗组和火把花根片治疗组。后3组制作成哮喘豚鼠模型,再激发用药。测定BALF的细胞总数和细胞分类,观察肺组织的病理改变,进行BALF的IL-3受体mRNA RT-PCR半定量分析。结果火把花根片治疗组BALF的Eos数较正常组和哮喘组有显著差异(P<0.05和P<0.01)。火把花根片组肺组织充血水肿明显,但Eos肺组织浸润较哮喘组有明显减少。BALF的IL-3受体mRNA RT-PCR半定量分析显示,火把花根片治疗组与地塞米松治疗组无显著差异,但与正常组和哮喘组比较有显著差异(P<0.01)。结论火把花根片能显著抑制哮喘豚鼠的气道炎症,为临床治疗哮喘提供初步的实验依据。     

哮喘大鼠模型血清IL-12及IL-18的变化及相关性研究

目的：探讨哮喘大鼠模型血清中自细胞介素-12（IL-12）与白细胞介素-18（IL-18）之间的关系及其在气道炎症发生中的机制．方法：48只Wistar大鼠随机分为3组,分别为正常对照组、哮喘组、地塞米松干预组,用卵白蛋白（OVA）腹腔注射致敏,雾化吸入OVA激发制备大鼠哮喘模型,对照组用生理盐水代替OVA,地塞米松干预组每次雾化前经腹腔注射地塞米松．雾化激发后24h取各组肺泡灌洗液进行嗜酸性细胞计数,并用ELISA方法测定血清IL-12,IL-18的水平,分析二者相关性．结果：哮喘组、地塞米松组和对照组血清IL-12水平分别为（53．1±9．6）ng／L,（82．4±8．1）ng／L和（140．1±13．4）ng／L,与哮喘组比较,地塞米松组血清IL-12水平显著升高,但低于对照组（P〈0．01）．三组血清IL-18水平分别为（353．5±11．9）ng／L,（250．6±8．4）ng／L和（100．5±12．7）ng／L,哮喘组与地塞米松组显著高于对照组（P〈0．01）．肺泡灌洗液中嗜酸性细胞数（49．3±4．0）×10^5／L,（31．9±3．6）×10^5／L和（14．8±4．1）×10^5／L,哮喘组与地塞米松组显著高于对照组．哮喘组血清IL-12,IL-18水平分别与肺泡灌洗液中EOS数量进行两两相关分析,显示IL—12与肺泡灌洗液EOS呈负相关（r=-0．746,P〈0．01）,而IL—18与肺泡灌洗液EOS呈正相关（r=0．682,P〈0．01）．结论：IL-12与IL-18可能共同参与哮喘气道炎症发病过程,并且两者的作用相互拮抗．     

哮喘患儿血清IL-10、IL-4与IgE水平的检测及意义

目的:研究哮喘患儿白细胞介素10(IL-10)、白细胞介素4(IL-4)与免疫球蛋白E(IgE)水平的变化。方法:采用酶联免疫(ELISA)法测定不同时期支气管哮喘患儿血清IL-10、IL-4和IgE水平,并与正常对照组进行统计分析。结果:哮喘急性发作组血清IL-10水平显著低于缓解组和对照组(P<0.05),而IL-4和IgE水平却显著高于缓解期和对照组(P<0.05)。IL-10与IgE呈负相关(r=-0.536,P<0.05),而IL-4与IgE呈正相关(r=0.548,P<0.05)。结论:IL-10和IL-4参与支气管哮喘发病的整个过程,IL-10降低和IL-4升高是哮喘发病的重要因素;在支气管哮喘患儿不同时期检测血清IL-10和IL-4水平具有重要的临床意义。