不同应力对成骨细胞和细胞骨架影响的实验研究

目的：研究两种不同应力对体外培养的成骨细胞及其细胞骨架形态的影响。方法：分别给第3代的大鼠成骨细胞施加剪切力和静压力,用相差显微镜和考马斯亮蓝染色方法观察加力后不同时间细胞及其细胞骨架形态的变化特征。结果：剪切力作用后6h,部分细胞出现形态学、细胞骨架排列等方面的变化;12h后,部分组织死亡、脱落。较大的静压力（＞20kPa）作用12h后,可引起细胞间隙增大等变化,细胞骨架无明显改变。结论：一定的外力可引起成骨细胞骨架的重排及细胞形态的变化。静压力作为一种类拟于生理状态的外力与剪切力相比,对成骨细胞的形态及细胞骨架影响较轻。     

细胞骨架完整性对流体剪切力诱导成骨细胞c-fos基因mRNA和蛋白表达的影响

目的 研究细胞骨架完整性在流体剪切力诱导成骨细胞c-fos基因mRNA和蛋白表达中的作用,为进一步探索骨组织力传导机制提供依据.方法 原代培养BALB/c小鼠成骨细胞,将原代培养的成骨细胞分为对照组和细胞松弛素 D组,细胞松弛素D组使用细胞松弛素D破坏细胞骨架.每组一半细胞加载1.2 Pa的流体剪切力,另一半不加载.分别用实时荧光定量聚合酶链反应(real-time PCR)和免疫荧光检测c-fos基因mRNA和蛋白、细胞骨架蛋白的表达水平,并对结果进行双因素方差分析和成组t检验.结果 无论是对照组还是细胞松弛素D组,流体剪切力加载均可使成骨细胞c-fos基因mRNA相对水平(分别为0.1637±0.0303和0.0104±0.0070)和蛋白荧光强度(分别为177.14±9.37和150.95 ±6.17)升高,与未加载流体剪切力的对照组和细胞松弛素D组细胞(mRNA相对水平分别为0.0057±0.0021和0.0032±0.0014,蛋白荧光强度分别为117.96±4.11和119.77±5.19)相比,差异均有统计学意义(P＜0.05).流体剪切力加载下,细胞松弛素D组细胞c-fos基因mRNA和蛋白的表达均低于对照组,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 细胞松弛素D对流体剪切力诱导成骨细胞c-fos基因mRNA和蛋白的表达起拮抗作用.保持细胞骨架的完整性是流体剪切力诱导成骨细胞c-fos基因表达过程中的重要条件.     

抑制细胞骨架改建对流体剪切力作用下成骨细胞增殖与分化影响研究

目的 探讨RNA干扰抑制细胞骨架改建对流体剪切力(FSS)下成骨细胞增殖和分化的影响.方法 对小鼠颅骨分离的成骨细胞分别给予RNA干扰、阴性RNA干扰两种处理后,进行FSS加载或不加载.分别应用噻唑蓝(MTT)比色法观测细胞增殖、检测细胞碱性磷酸酶(ALP)活性、采用流式细胞仪检测细胞周期,并进行统计分析.结果 在无FSS加载条件下,单纯应用RNA干扰方法抑制细胞骨架改建,并不能促进成骨细胞的细胞周期中处于S期的细胞百分比[(3.600±0.447)%与(3.420±0.217)%,t=-0.810,P>0.05]、成骨细胞增殖性能(0.208±0.724与0.211±0.044,t=0.251,P>0.05)及ALP活性(0.095±0.001与0.090±0.020,t=-1.857,P>0.05)增高;FSS能使成骨细胞的细胞周期中处于S期的细胞百分比[(11.110±3.840)%>(3.420±0.217)%,t=-4.460,P<0.05]、成骨细胞的增殖性能(0.336±0.029>0.211±0.044,t=-13.878,P<0.05)及ALP的活性(0.110±0.010>0.090±0.012,t=-7.937,P<0.05)增高;RNA干扰处理可显著提高FSS下的细胞周期中处于S期的细胞百分比[(25.140±3.329)%>(3.600±0.447)%,t=-14.339,P<0.05]、成骨细胞增殖性能(0.480±0.953>0.208±0.724,t=-13.454,P<0.05)及ALP活性(0.140±0.006>0.095±0.001.t=-7.384,P<0.05).抑制细胞骨架改建与FSS作用两因素对提高成骨细胞的细胞周期中处于S期的细胞百分比(F=240.125,P<0.05)、成骨细胞增殖性能(F=44.550,P<0.05)及ALP活性(F=13.798,P<0.05)存在正交互作用.结论 采用RNA干扰抑制细胞骨架改建,可以 促进FSS作用下成骨细胞的增殖和分化.     

细胞骨架完整陛在流体剪切力诱导成骨细胞COX-2基因表达中的作用

目的探讨细胞骨架完整性在流体剪切力诱导成骨细胞COX-2基因表达中的作用。方法原代培养BALB／c小鼠颅骨成骨细胞,采用细胞松弛素D（CD）破坏细胞骨架完整性：以12dyne／cm2的流体剪切力对成骨细胞加载1．5h;分别应用实时荧光定量巢式PCR和免疫荧光的方法检测COX-2基因mRNA和蛋白的表达水平．并对结果进行双因素方差分析。结果采用CD破坏细胞骨架完整性．可以对流体剪切力诱导成骨细胞COX-2mRNA和蛋白的表达起拮抗作用（P〈0．05）：在无流体剪切力加载条件下,CD处理对COX-2mRNA和蛋白的表达水平无显著影响（P〉0．05）;流体剪切力加载1．5h能使成骨细胞COX-2mRNA和蛋白的表达水平显著升高（P〈0．05）;CD处理可显著降低流体剪切力诱导成骨细胞COX-2mRNA和蛋白的表达水平（P〈0．05）。结论保持细胞骨架完整性是流体剪切力诱导成骨细胞COX-2基因表达过程中所必需的。     

流体剪切力对大鼠成骨细胞增殖及细胞周期的影响

目的：观察流体剪切力对大鼠成骨细胞增殖及细胞周期的影响。方法：大鼠成骨细胞受强度为13dyne／cm^2的流体剪切力刺激60min,应用四甲基偶氮唑蓝（MTT）法和流式细胞仪检测细胞的增殖能力和细胞周期。结果：流体剪切力作用后,大鼠成骨细胞增殖能力提高,细胞活性增强。加力组S期细胞百分比（14．67±1．18）％,较对照组S期细胞百分比（8．05±1．08）％约增高82．2％（P〈0．01）。结论：流体剪切力具有提高大鼠成骨细胞增殖能力以及增强其细胞活性的作用。     

流动剪切力作用下原代大鼠成骨样细胞PGE2的表达

目的探讨流动剪切力调节成骨细胞增殖和分化的信号转导过程中PGE     

丝切蛋白在成骨细胞细胞骨架改建中的作用探讨

目的 采用流体剪切力加载成骨细胞,通过观察细胞骨架改建和测定丝切蛋白及磷酸化丝切蛋白的含量,探讨丝切蛋白在流体剪切力引起成骨细胞细胞骨架改建中的作用.方法 采用1.2 Pa的流体剪切力作用于成骨细胞0(空白对照组)、15、30、45、60、120 min后,蛋白质印迹法测定细胞内丝切蛋白及磷酸化丝切蛋白的含量,采用异硫氰酸荧光素标记的鬼笔环肽染色观察纤维型肌动蛋白的变化.结果 成骨细胞受流体剪切力刺激后,随加载时间延长,细胞内磷酸化丝切蛋白含量持续升高.流体剪切力作用60 min内丝切蛋白随加载时间延长有所下降,但加载120 min时细胞内丝切蛋白含量(0.254±0.026)为加载60 min(0.162±0.004)的1.5倍.随流体剪切力作用时间延长,各组细胞纤维型肌动蛋白染色逐渐增强,纤维增粗;加载120 min时的平均荧光强度(42.93±6.41)为空白对照组(15.41±3.60)的2.8倍(P＜0.05).结论 流体剪切力刺激可通过丝切蛋白磷酸化,使成骨细胞细胞骨架发生改建.     

雌激素对原代成骨细胞骨形成的影响

了解雌激素对培养的原代成骨细胞骨形成的影响。观察添加雌激素后直接对成骨细胞骨形成的作用，并用VOnKossa免疫染色法定量表示骨形成。结果显示：雌激素对该原代成骨细胞无促进骨形成作用。     

流动剪切力作用下原代大鼠成骨样细胞PGE_2的表达

目的 :探讨流动剪切力调节成骨细胞增殖和分化的信号转导过程中PGE2 的作用机制。方法 :对体外培养的大鼠成骨样细胞施加 0 12mN cm2 的流动剪切力 ,采用放射免疫法检测细胞受力 5、10、15、30、6 0、12 0min后不同时段的PGE2 的表达。结果 :大鼠成骨样细胞受到 0 12mN cm2 流动剪切力作用后PGE2 的生成与空白对照组相比明显提高 (P <0 0 1) ,PGE2 的生成在受力后 10min开始显著增加 (P <0 0 1) ,6 0min后达到高峰 (P <0 0 1)。结论 :PGE2 途径是将流动剪切力刺激信号转导进入成骨细胞 ,促进骨改建的信号转导途径之一。     

雌激素和流体剪切力对成骨细胞增殖和功能的影响

目的：初步了解雌激素与流体剪切力单独作用及联合作用对体外培养的成骨细胞增殖和功能的影响。方法：采用酶消化法进行SD大鼠新生子鼠颅盖骨成骨细胞的原代培养，将生长活跃、特性稳定的Ⅲ～Ⅳ代成骨细胞，用于实验。选择恒定的雌激素浓度及合适的振荡频率分4种组合方式施加于成骨细胞上，比较这4种方式在不同时间段对细胞增殖和碱性磷酸酶活性有何不同影响。结果：雌激素和流体剪切力均可促进成骨细胞的增殖和ALP的活性，但长时间的剪切力作用则抑制细胞增殖。流体剪切力早期可迅速提高成骨细胞的ALP活性，比雌激素作用显著。雌激素和流体剪切力联合作用对成骨细胞的增殖和分化也有促进作用，但两者并非总是协同作用，在细胞分化早期对细胞增殖表现为协同作用，但对ALP活性却表现为拮抗作用。结论：雌激素和流体剪切力及两者复合作用均可促进体外培养的成骨细胞增殖，提高ALP的活性。     

流体剪切力作用下人脂肪基质细胞体外成骨分化的实验研究

目的:分离人体脂肪基质细胞(hADSCs)并研究流体剪切应力对其成骨分化的影响。方法:将脂肪抽吸术获取的人体脂肪进行分离,应用强度为3 dyne/cm²的流体剪切力刺激30 min后观察细胞形态;应用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞的增殖能力, 绘制细胞生长曲线;碱性磷酸酶(ALP)及茜素红染色对其成骨分化进行鉴定。结果:胶原酶消化后的脂肪基质细胞呈梭形, 经流体剪切力作用培养后,细胞体积明显增大,胞浆丰富并含有较多的细胞器,细胞排列方向与加力方向一致, 呈漩涡状生长,生长速度加快。此外,流体剪切力加载后脂肪基质细胞内碱性磷酸酶活性增高,茜素红染色表明聚集的细胞团中心能形成矿化结节。结论:脂肪基质细胞中的成体干细胞经过流体剪切力作用后可向成骨细胞分化并具有明显的成骨表型,可作为骨组织工程的种子细胞。     

含不同浓度氟化钠的酸蚀液对托槽抗剪粘接强度的影响

医科大学附属口腔医院　正畸科,辽宁　沈阳110002;2.泰山齿科　正畸科,辽宁　沈阳110032) [摘要]　目的　在确保托槽粘接强度的条件下,探讨35%磷酸酸蚀液中添加氟化钠的最佳浓度。方法　64颗离体 牙随机分成A、B、C组和对照组,分别采用添加4种不同浓度氟化钠(1·23%、2%、3%和0%)的酸蚀液进行酸蚀并 常规粘接托槽,于1周、4周、12周和24周分别从每组样本中随机抽取4颗牙进行抗剪粘接强度测试,并观测托槽 脱落后界面粘接剂残留情况,记录粘接材料残留指数(ARI)。结果　A、B、C组和对照组的抗剪粘接强度在4个观 测时间点进行组内比较均无统计学差异,组间比较则有统计学差异,C组低于其他3组(P<0·05)。4组间ARI分 值无统计学意义。结论　35%磷酸酸蚀液中添加不高于2%的氟化钠,与单纯应用35%磷酸的粘接效果相似;当氟 化钠浓度高于3%后,托槽的抗剪粘接强度下降。     

流体剪切力对MLO—Y4骨细胞骨性标志物表达的影响

目的通过研究MLO-Y4骨细胞受流体剪切力作用前后骨性标志物在mRNA水平的表达变化,探讨机械力影响骨组织代谢中骨细胞的作用。方法以小鼠成骨细胞(MOB)为参照,逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测MLO-Y4细胞在体外培养条件下,以及受流体剪切力作用0.5 h,1 h,2 h,4 h,6 h,12 h,24 h后骨性标志物在mRNA水平的表达特征和变化。结果以MOB为参照,在mRNA水平,体外培养条件下MLO-Y4细胞骨钙素(OCN)、碱性磷酸酶(ALP)和骨桥蛋白(OPN)高表达;破骨细胞分化因子(RANKL)、骨保护因子(OPG)低表达,但RANKL/OPG比值明显高于MOB。受流体剪切力作用后,MLO-Y4细胞ALP、OCN表达降低;RANKL和OPN表达增加;OPG随加力时间也有一定变化。结论 MLO-Y4细胞具有分化终末骨细胞的特点;流体剪切力作用后,RANKL/OPG比值以及ALP、OCN和OPN等骨性标志物的表达发生变化,为其参与机械力信号到生物信号的传导过程提供了间接证据。     

辛伐他汀对人牙周膜细胞增殖和分化的影响

目的:研究辛伐他汀对人牙周膜细胞增殖和成骨分化的影响.方法:将第4 代人牙周膜细胞在条件矿化培养液中诱导培养,同时加入不同浓度的辛伐他汀(10-9、10-8、10-7、10-6 mol/L),噻唑蓝(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)法检测细胞增殖情况,4-硝基苯基磷酸二钠盐(4-nitrophenyl phosphate,hexahydrate,PNPP)偶氮法检测碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)活性.结果:辛伐他汀各浓度组均能促进人牙周膜细胞的增殖和分化,其中10-8、10-7、10-6 mol/L组与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05),10-7 mol/L的辛伐他汀组促进细胞增殖和ALP活性的作用最明显.结论:适宜浓度的辛伐他汀可有效促进人牙周膜细胞的增殖和成骨分化.     

Shear Bond Strength Evaluation of Different Veneering Systems on Ni-Cr Alloys

PURPOSE: The aim of this study was to evaluate the shear bond strength of four esthetic veneering materials on nickel-chromium (Ni-Cr) alloy. MATERIALS AND METHODS: Forty square patterns (10 x 10 x 1.5 mm) were cast with Ni-Cr, divided equally into four groups, and received four treatments for veneering: conventional porcelain-fused-to-metal (PFM), Artglass, Targis/Vectris, and Biodent light-cured prosthodontic composite resins. After sandblasting of the cast metal surfaces with 50 micro m alumina, the composites were applied to the surfaces according to manufacturers' recommendations. Shear bond strength was determined at a crosshead speed of 0.5 mm/min. Results were analyzed statistically with Kruskal-Wallis analysis of variance and multiple comparison tests. RESULTS: Mean shear bond strength values were 34.96 MPa for PFM, 14.17 MPa for Targis/Vectris, 13.64 MPa for Artglass, and 10.56 MPa for Biodent. The PFM group exhibited significantly higher bond strength values compared with the other three groups (p < 0.001). CONCLUSION: PFM showed considerably higher shear bond strength values than the three metal-resin bonding techniques.     

流体剪切力对RGD肽修饰纯钛表面细胞粘附稳定性影响的研究

目的研究精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸（Arg-Gly-Asp,RGD）肽修饰的纯钛表面是否有助于提高成骨细胞的抗剪切能力,比较剪切力大小对细胞粘附的影响。方法实验分为空白处理纯钛组（CpTi组）、对照处理碱-热陈化组（AWTi组）、对照处理溶胶涂层组（ATTi组）和实验处理粘附肽修饰组（RGDTi组）。利用流体应力加力系统,定常流下作用于4组纯钛表面的成骨细胞,计算平均剪切力分别为2.05、3.12、4.20Pa时4组纯钛表面细胞残留率。结果细胞脱落量与剪切力的大小成正比,RGDTi组在2.05、3.12、4.20Pa的流体剪切力作用下,表面细胞残留率分别为92.8%、70.1%、66.8%,多于其他3组。结论RGD有利于提高成骨细胞在纯钛表面粘附稳定性,增加成骨细胞的抗剪切力。