PCR—SSP快速检测胰腺癌Ki—ras基因点突变

为判定有Ｋｉ－ｒａｓ基因突变及突变方式，我们采用针对Ｋｉ－ｒａｓ基因点突变方式 顺序特异性引物，对冰冻胰腺癌组织进行聚合酶链反应。产物借助常规电泳即可判定有无Ｋｉ－ｒａｓ基因突变及突变方式，无需酶切，杂交，放射性及非放射性显影。     

髓细胞白血病—1基因及其产物研究进展

髓细胞白血病-1(myeloid cell lekemia-1,MCL-1)基因是高度可调节的分化早期活化基因,属于抗凋亡基因家族成员,其编码产物Mcl-1蛋白与正常和异常造血细胞的生存及分化有密切关系.细胞外调节蛋白激酶通路、Janus激酶/信号转导与转录活化因子(JAK/STAT)通路、磷酸肌醇3-激酶(PI3K)/丝氨酸/苏氨酸激酶Akt通路等多个信号转导途径参与了正常和异常造血细胞内MCL-1表达的调控.     

膀胱癌组织中K—ras基因点突变及其基因产物P21的表达研究

为在分子生物学水平探讨膀胱癌的发生发 以及恶性程度的判别和预后评价的指标，作者应用聚合酶链反应结合单链构象多态性分析和免疫组织化学方法，研究了５４例膀胱癌组织和５例正常膀胱组织的Ｋ－ｒａｓ基因第１２位密码子点突变和其六物Ｐ２１的表达情况。     

HLA-DRB1基因多态性与急性淋巴细胞白血病和慢性髓性白血病易感性关联的研究

目的探讨急性淋巴细胞白血病（ALL）和慢性髓性白血病（CML）易感性与HLA-DRB1基因多态性之间的关联性,找出急性淋巴细胞白血病和慢性髓性白血病的易感基因。方法采用序列特异性引物聚合酶链反应（PCR-SSP）DNA分型技术对56例ALL患者、48例CML患者和105例健康对照进行了HLA-DRB1基因分型。结果ALL患者组与HLA-DR7基因关联,基因频率为24.1%,RR=2.56,χ     

急性髓系白血病PRAME基因转录本的定量研究

目的 探讨黑色素瘤优先表达抗原(preferentially expressed antigen of melanoma,PRAME)基因转录本在急性髓系白血病(acute myeloid leukemia,AML)患者中的表达和临床意义.方法 建立荧光染料EvaGreen实时定量聚合酶链反应(real-time quantitative PCR,RQ-PCR)对56例初诊AML患者和20例对照的骨髓单个核细胞标本中PRAME转录本进行检测,分析其临床相关性.结果 PRAME转录本含量在对照组和AML患者中分别为0～1.46%(中位0.18%)和0～21 618.09%(中位9.79%)(P＜0.01);FAB亚型中M1、M2、M3和M4患者中PRAME转录本含量较对照组明显增高,而M5患者与对照组差异无统计学意义.PRAME转录本含量与染色体预后分组显著负相关(r=-0.438,P=0.001),低危组患者中PRAME转录本含量显著高于中危组和高危组患者.AML-M2患者中t(8;21)易位阳性者PRAME转录本含量(135.06%～21 618.09%,中位2 201.88%)明显高于无t(8;21)易位者(0.14%～1696.30%,中位17.97%)(P=0.002).对1例AML患者不同阶段的标本检测发现诱导缓解后PRAME转录本明显下降,复发时又明显升高.结论 PRAME转录本在AML患者中高表达,是患者预后良好的一个标记,可用于AML患者的随访监测.     

parkin基因的一个新的点突变

目的：研究parkin基因外显子2-10点突变与散发性早发帕金森病发病的关系。方法：应用聚合酶链反应（polymerase chain reaction ，PCR）、琼脂糖电泳、单链构象多态性（single strand conformation polymorphism，SSCP）、DNA测序及限制性核酸内切酶酶切方法，检测了60例散发性早发帕金森病患者以及120名正常人外周血白细胞DNA的parkin基因外显子2-10点突变。结果：发现1例患者的parkin基因外显子2存在纯合突变（G237→C），限制性内切酶酶切证实，其它外显子未见突变，120名正常对照也未见突变。结论：parkin基因外显子存在点突变，可能与部分散发性早发帕金森病发病有关。     

HLA-DRB1基因多态性与慢性髓性白血病的相关性研究

目的:探讨HLA-DRB1等位基因多态性与慢性髓性白血病(CML)关联性。方法:采用序列特异性引物聚合酶链反应(PCR-SSP)DNA分型技术对762例慢性髓性白血病患者(男性492例,女性270例)及2 264例正常对照进行了HLA-DRB1基因分型。结果:正常人群的HLA-DRB1*15等位基因频率最高(17.25%),其次为DRB1*09(14.05%)、DRB1*12(11.73%)和DRB1*04(10.98%),DRB1*10等位基因频率最低(1.39%)。CML患者HLA-DRB1*08等位基因频率显著高于正常对照组(7.48%vs 5.39%,χ2=8.963,OR=1.023,P=0.004),男性患者的DRB1*08基因频率也明显高于正常对照(7.72%vs 5.39%,χ2=8.059,OR=1.025,P=0.007)。女性患者的DRB1*08基因频率也高于正常对照(7.04%vs 5.39%,χ2=0.115,OR=0.995,P=0.774),但没有统计学差异。结论:CML男性患者HLA-DRB1*08的表达明显高于正常人群,提示DRB1*08可能是男性CML患者的易感基因。     

PCR-RNA转录本分子杂交用于急性淋巴细胞白血病微小残留病的检测

目的为了快速、敏感地检测急性淋巴细胞白血病（急淋）微小残留病。方法以Ｔ细胞受体γ链基因重排为标志基因，将确诊时标本扩增后的ＰＣＲ产物转录成放射标记的ＲＮＡ探针，而不同病期标本的ＰＣＲ产物转录成待测ＲＮＡ，待测ＲＮＡ与探针杂交后经ＲＮａｓｅＡ消化，之后再经聚丙烯酰胺凝胶电泳和放射自显影。结果急淋细胞系ＤＮＡ对数稀释试验表明本方法的敏感度在１０－５水平。１例急淋完全缓解期微小残留病也被成功地检测出来。而当探针和待测ＲＮＡ并非来自同一个体时，交叉杂交的结果为阴性。结论为临床检测急淋微小残留病提供了一种有效手段     

中国人K-ras原癌基因外显子1序列分析

目的 为了解肺癌患者血液中Ｋ－ｒａｓ原癌基因突变情况。方法 采用聚合酶链式反应－测序方法对１２例肺癌患者及３１例正常人血细胞中Ｋ－ｒａｓ原癌基因外显子１进行测序分析。结果 所有４３例标本中Ｋ－ｒａｓ基因第１１位密码子均为ＣＣＴ（编码脯氨酸），和对侧链测定为ＡＧＧ，与国外测定的标准序列不同，考虑可能为人种变异，结论 中国人Ｋ－ｒａｓ原癌基因第１１位密码子ＣＣＴ，因该密码子与突变位点紧邻，这对临床基因     

急性髓系白血病细胞遗传学的分型诊断意义

为探讨细胞遗传学在急性髓系白血病（ＡＭＬ）分型诊断中的意义，回顾性分析了１６７例原发性初诊ＡＭＬ患者的核型与ＡＭＬ亚型之间的关系。结果表明：６７．７％的患者有克隆性染色体异常，ｔ（８；２１）、ｔ（１５；１７）、ｉｎｖ（１６）／ｄｅｌ（１６）分别与Ｍ２ｂ、Ｍ３、Ｍ４Ｅｏ特异性相关，１１号染色体异常常见于Ｍ４、Ｍ５。细胞遗传学可作为ＡＭＬ亚型的分型诊断手段之一。     

THE ANALYSIS OF GENE REARRANGEMENT OF ACUTE LEUKEMIAS IN DIFFERENT CLASSIFICATION BETWEEN MORPHOLOGY AND IMMMUNOLOGY

为探讨形态学和免疫学分型不一致的急性白血病细胞起源，采用ＰＣＲ技术分析１４例形态学和免疫学分型不一致急性白血病的ＩｇＨ和ＴＣＲγ基因重排。结果发现在９例分别表达Ｂ或Ｔ细胞分化抗原的白血病中，有７例检测到相应的ＩｇＨ或ＴＣＲγ基因重排，２例具有ＩｇＨ和ＴＣＲγ基因双重排；在５例缺乏细胞系限抗原表达的白血病中，有４例检测到ＴＣＲγ基因重排，１例未检测到ＩｇＨ或ＴＣＲγ基因重排，其白血病细胞分别起源于Ｔ细胞和髓细胞。表明基因重排分析在白血病分型中具有重要参考价值     

苯丙酮尿症突变基因分析和产前诊断

应用多重等位基因特异ＰＣＲ方法检测分析了３０个苯丙酮尿症家系的５种苯丙氨酸羟化酶基因点突变：外显子７（Ａｒｇ２４３Ｇｌｎ），外显子１２（Ａｒｇ４１３Ｐｒｏ），外显子３（Ａｒｇ１１１Ｔｅｒｍ），外显子１１（Ｔｙｒ３５６Ｔｅｒｍ）和外显子６（Ｔｙｒ２０４Ｃｙｓ）。结果表明，这五种突变占ＰＫＵ基因的４６．６％，其中最常见的突变为前两种，分别占２３．３％和１０．０％。完成了１例ＰＫＵ风险胎儿的产前诊断。     

肺腺癌中p16基因外显子2的突变分析

为了解肺腺癌ｐ１６基因外显子２的突变情况，应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）及ＰＣＲ双链ＤＮＡ循环测序技术分析了２２例肺腺癌中的ｐ１６基因，结果显示：２２例肺腺癌中存在２例纯合缺失，３例点突变。其中病例１密码子５６由ＣＴＧ→ＣＡＧ的突变，编码的氨基酸由亮氨酸变为谷氨酰胺；病例１２密码子１２１由ＴＡＣ→ＴＧＣ的突变，编码的氨基酸由酪氨酸变为半胱氨酸；病例１０密码子８０由ＧＡＧ→ＡＡＧ的突变，编码的氨基酸由谷氨酸变为赖氨酸，同时这例密码子７９存在一个由ＣＧＧ→ＡＧＧ的同义突变。另外还发现１例由单碱基缺失导致的移码突变。ｐ１６基因在２２例肺腺癌中纯合缺失频率为９．１％，基因突变频率为２７．３％。可见，多重肿瘤抑制基因ｐ１６与肺腺癌的发生发展密切相关并在其演进过程中起着一定的作用。     

16例苯丙酮尿症PAH基因Exon7突变的检测

应用选择突变扩增系统方法对１６例苯丙酮尿症患儿ＰＡＨ基因Ｅｘｏｎ７区域的多聚酶链反应扩增产物进行了突变位点的检测。结果在３２个突变位点中Ｒ２４３Ｑ和Ｒ２６１Ｑ突变位点的检出率分别为４６．８８％和９．３８％，二者占整个突变位点的５６．２５％。表明ＰＡＨ基因Ｅｘｏｎ７突变在中国苯丙酮尿症患者中具有很高的发生频率。     

应用YAC探针进行荧光原位杂交检测慢性粒细胞白血病BCR基因重排

为检测慢性粒细胞白血病（ＣＭＬ）中ＢＣＲ基因重排，采用酵母人工染色体（ＹＡＣ）ＤＮＡ的Ｉｎ－ｔｅｒ－Ａｌｕ－ＰＣＲ产物为探针进行荧光原位杂交（ＦＩＳＨ）研究了１０例ＣＭＬ，其中包括初诊患者２例，ＣＭＬ急变并接受化疗２例，α干扰素治疗２例，自体骨髓移植术（ＡＢＭＴ）后３例和Ｐｈ染色体阴性ＣＭＬ１例。同时进行细胞遗传学和ＲＴ－ＰＣＲ检测。结果：９例ＣＭＬ的４６％～１００％的可分析核型显示ｔ（９；２２）易位，其中携带ｔ（９；２２）细胞最少者为１例自体骨髓移植术后８个月的患者，其６４％的分裂相存在ｔ（９；２２），３６％为正常核型；１例Ｐｈ（－）ＣＭＬ未见ＢＣＲ基因易位，而ＲＴ－ＰＣＲ（＋），提示ＡＢＬ基因片段插入２２ｑ１１，造成隐匿性Ｐｈ染色体。结果表明：应用ＹＡＣ探针进行原位杂交的定位明确。ＦＩＳＨ检测微小残留病（ＭＲＤ）比常规细胞遗传学方法更敏感，而且可以完成ＰＣＲ方法不易进行的定量分析。     

膀胱癌组织中K－ras基因点突变及其基因产物P21的表达研究

为在分子生物学水平探讨膀胱癌的发生发展以及恶性程度的判别和预后评价的指标，作者应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）结合单链构象多态性分析（ＳＳＣＰ）和免疫组织化学方法，研究了５４例膀胱癌组织和５例正常膀胱组织的Ｋ－ｒａｓ基因第１２位密码子点突变和其产物Ｐ２１的表达情况。结果表明：５４例膀胱癌组织中，仅有４例Ｋ－ｒａｓ基因第１２位密码子点突变和３４例Ｐ２１蛋白阳性表达，并且浅表性肿瘤Ｐ２１阳性表达率明显低于浸润性肿瘤。提示Ｋ－ｒａｓ基因点突变在膀胱癌中发生率较低，Ｐ２１蛋白的过量表达主要是膀胱癌晚期表现，它可能与Ｈ－ｒａｓ和Ｎ－ｒａｓ基因突变有关。为肿瘤病因学研究和临床研究提供了有用的资料。     

隐匿型t(15;17)易位伴inv(11)(p12q23)核型的急性早幼粒细胞白血病

为进一步探讨无ｔ（１５；１７）易位而伴有其它染色体改变的急性早幼粒细胞白血病（ＡＰＬ）患者分子生物学变化与预后的关系，应用短期细胞培养、胰酶消化、Ｇ显带技术进行骨髓细胞染色体检测及使用巢式ＲＴ／ＰＣＲ技术检测ＰＭＬ／ＲＡＲａ融合基因及ＨＲＸ基因。在被检测的３２例ＡＲＬ患者中，发现１例４６，ＸＸ，ｉｎｖ（１１）（ｐ１２ｑ２３），无ｔ（１５；１７）易位的ＡＰＬ患者。分子生物学见ＰＭＬ／ＲＡＲａ融合基因转录本，未见ＨＲＸ基因重排。该患者使用全反式维甲酸诱导治疗１０５天，无缓解征象，改用ＨＯＡＰ方案化疗也未显效。