应用Amp—FLP单体型连锁分析进行Wilson病基因诊断

应用Ａｍｐ－ＦＬＰ单体型连锁分析进行Ｗｉｌｓｏｎ病基因诊断贡昌春刘国仰谢久永施惠平罗会元高秀贤张学孙开来Ｗｉｌｓｏｎ病（Ｗｉｌｓｏｎ＇ｓｄｉｓｅａｓｅ，ＷＤ）又称肝豆状核变性，临床表现为铜代谢障碍而引起的肝和神经系统病变。该病为较常见的常染色体隐性遗...     

染色体单体型分析及突变检测在Wilson病临床诊断中的应用

目的建立染色体单体型分析法与突变检测相结合的Ｗｉｌｓｏｎ病（Ｗｉｌｓｏｎ＇ｓｄｉｓｅａｓｅ,ＷＤ）的基因诊断方法。方法以８个汉族ＷＤ家系为对象,用Ｄ１３Ｓ３１６、Ｄ１３Ｓ１３３和Ｄ１３Ｓ３１４３个［ＣＡ］ｎ重复遗传标记构建染色体单体型,进行ＷＤ家系内的诊断研究;对先证者的致病突变已明确的５个家系,同时用ＰＣＲ－ＳＳＣＰ检测法检测突变以完善诊断。结果找到了１例无症状期ＷＤ患者,５例杂合子。结论通过分析Ｄ１３Ｓ３１６、Ｄ１３Ｓ１３３、Ｄ１３Ｓ３１４构成的染色体单体型,基本可为先证者同胞兄妹明确诊断;对致病突变已确定的家系,突变检测能为诊断提供直接而肯定的依据。两种方法的联合使用可为诊断提供更多的依据     

中国人D13S31等位点的多态性及其在Wilson‘s病家系中的应用

本文对９０名无亲缘关系的正常中国人进行了Ｄ１３Ｓ３１和Ｄ１３Ｓ２５区域的限制性片段长度多太性分析（ＲＦＬＰ），表明中国上述位点的多态等位片段与西方人相同，但两者各等位片段的频率差异明显，杂合率亦不同。应用上述位点对４个Ｗｉｌｓｏｎ’ｓ病（ＷＤ）家系进行多位点连锁分析，证实它们可用于ＷＤ的症状前诊断。     

微卫星标记AFM238vc3多态性及Wilson病基因诊断的研究

目的：评估中国人群Ｗｉｌｓｏｎ病（ＷＤ）基因（ＷＮＤ）侧翼微卫星ＤＮＡ（ＳＴＲ）位点ＡＦＭ２３８ｖｃ３的基因多态性及在ＷＤ基因诊断中的价值。方法：采用聚合酶链反应（ＰＣＲ）、变性聚丙烯酰胺凝胶电泳和银染法分析８９名无血缘关系中国人ＡＦＭ２３８ｖｃ３的片段长度多态性；并对１９个ＷＤ家系进行ＳＴＲ连锁分析。结果：ＡＦＭ２３８ｖｃ３有２１个等位片段，长度范围为２９１～３４５ｂｐ，多态信息含量（ＰＩＣ）为０９３８。共检出８例症状前患者，８例基因携带者及１４例正常人，６例未能确定，基因诊断率达８３％。结论：ＡＦＭ２３８ｖｃ３在中国人群是优秀的多态性标记，对ＷＤ基因诊断有较重要价值。     

肝豆状核变性（Wilson病）的发病曲线及其在遗传咨询中的应用

本文在分析了２６５例Ｗｉｌｓｏｎ病（ＷＤ）患者的初始发病年龄后，运用函数统计学中的曲线模拟方法，首次获得了中国人群ＷＤ的发病年龄与发病风险的相关曲线，再把发病年龄这一遗传咨询中的重要因素代入到ＷＤ的遗传咨询中，并探讨了年龄因素在应用Ｂａｙｅｓ定理对ＷＤ家系再发风险进行计算机综合判别分析中的意义。分析结果显示，年龄因素对再发风险的评估有着很重要的影响，可大大提高ＷＤ遗传咨询的准确性。本研究不仅填补了我国ＷＤ发病年龄的分布规律方面的资料，也为ＷＤ家系中再发风险的评估增添了有用的信息     

RAPD分析在Hp菌株鉴定中的应用

目的建立一种快速准确地鉴定不同幽门螺杆菌（Ｈｐ）菌株的ＲＡＰＤ分析方法，并评价它在区分Ｈｐ复发和再感染中的应用价值。方法用苯酚－氯仿方法提取ＨｐＤＮＡ，以一个１０ｎｔ的寡核苷酸引物，建立ＨｐＰＣＲ扩增体系，所得ＰＣＲ产物以２％琼脂糖凝胶电泳分析（ＲＡＰＤ分析）。同一菌株验证方法的重复性，对４例十二指肠溃疡伴Ｈｐ感染者三联治疗前后及根除后一年内再现的Ｈｐ菌株进行ＲＡＰＤ分析，鉴别复发和再感染。结果（１）同一Ｈｐ菌株于不同时间进行的２次ＲＡＰＤ分析，所得的ＰＣＲ产物完全一致，说明该方法具有良好的可重复性。（２）５０株不同的Ｈｐ菌株各产生不同的ＲＡＰＤ图谱，可按此图谱的不同将它们区分开来。（３）对４例十二指肠溃疡伴Ｈｐ感染治疗前及治疗后１年再现的菌株的ＲＡＰＤ分析，发现３例患者的菌株具有相同的ＲＡＰＤ图谱，证实为原菌株的复发，而１例患者的菌株则产生不同的ＲＡＰＤ图谱，推测为新菌株的再感染，４例患者随访１年均为十二指肠溃疡复发。结论ＲＡＰＤ分析只需单一的随机引物，方法简单、快速、经济、重复性好，可用于区分不同来源的Ｈｐ菌株，特别对治疗前后再现的菌株复发和再感染的鉴别更具临床应用价值     

Rb1基因位点P123M1．8多态性的建立及其在Wilson病中的连锁关系

视网膜母细胞瘤易感基因（Ｒｂ１）基因位点位于１３ｑ１４～２１，与Ｗｉｌｓｏｎ病基因位点相距４．４分摩（ｃｅｎｔｉｍｏｒｇａｎｓ，ｃＭ）．中国人Ｒｂ１基因５′端第１个内含子中Ｐ１２３Ｍ１，８标记的等位片段与白种人相同，但杂合率有差异。中国人Ｐ１２３Ｍ１．８／ＢａｍＨⅠ的多态性信息含量（ＰＩＣ）为０．５２，并与Ｗｉｌｓｏｎ病基因位点呈紧密连锁关系（θ＝０．０５，Ｚ＝３．８４６）。应用Ｐ１２３Ｍ１．８标记对９个Ｗｉｌｓｏｎ病家系进行连锁分析，证实该标记可用于Ｗｉｌｓｏｎ病的症状前诊断及杂合子检出。     

昆明汉族人群D21S1411、IFNAR位点多态性及其在Down综合征基因诊断中的应用价值

目的 调查昆明汉族人群第21号染色体上D21S1411和IFNAR两个短串联重复序列（short tandem repeat,STR）的遗传多态性,探讨该2个STR基因座在唐氏综合征基因诊断中的应用价值。 方法 随机抽取100名昆明地区无血缘关系汉族正常个体及2名唐氏综合征患者的静脉血,应用PCR技术扩增D21S1411和IFNAR位点的STR片段,采用聚丙烯酰胺凝胶电泳,硝酸银染色分型,结合图像分析系统测定等位基因片段大小。 结果 昆明汉族人群D21S1411和IFNAR等位片段分别为6、7;2个位点的基因型分布均符合Hardy-Weinberg平衡;各位点杂合度分别为0.87、0.82,多态信息含量分别为0.8062、0.8365。2例Down综合征患者,在IFNAR位点上,均出现DNA含量为2：1的2条带;在D21S1411位点上,1名出现DNA含量为1：1：1的3条带,1名出现2：1的2条带。 结论 D21S1411、IFNAR是两个多态信息含量比较高的基因座,在法医学及唐氏综合征基因诊断中具有较高的应用价值。     

昆明汉族人群D21S1411、IFNAR位点多态性及其在唐氏综合征基因诊断中的应用

目的 调查昆明汉族人群第21号染色体上D21S1411和IFNAR两个短串联重复序列（short tandem repeat，STR）的遗传多态性，探讨该2个STR基因座在唐氏综合征基因诊断中的应用价值。 方法 随机抽取100名昆明地区无血缘关系汉族正常个体及2名唐氏综合征患者的静脉血，应用PCR技术扩增D21S1411和IFNAR位点的STR片段，采用聚丙烯酰胺凝胶电泳，硝酸银染色分型，结合图像分析系统测定等位基因片段大小。 结果 昆明汉族人群D21S1411和IFNAR等位片段分别为6、7；2个位点的基因型分布均符合Hardy-Weinberg平衡；各位点杂合度分别为0.87、0.82，多态信息含量分别为0.8062、0.8365。2例Down综合征患者，在IFNAR位点上，均出现DNA含量为2：1的2条带；在D21S1411位点上，1名出现DNA含量为1：1：1的3条带，1名出现2：1的2条带。 结论 D21S1411、IFNAR是两个多态信息含量比较高的基因座，在法医学及唐氏综合征基因诊断中具有较高的应用价值。     

Wilson病的发病年龄与风险及其在遗传咨询中的应用

本文分析了265例WD患者的初始发病年龄。运用函数统计中的曲线模拟方法,在PC计算机上绘制和模拟WD发病风险与年龄分布的相关曲线,并探讨了年龄因素在WD家系再发风险评估中的意义,结果显示年龄因素为WD的遗传咨询提供了有价值的信息。     

抗肌营养不良蛋白基因内MP1P位点多态性分析及其应用

应用银染聚丙烯酰胺凝胶法，对抗肌营养不良蛋白基因３＇非翻译区ＭＰ１Ｐ位点进行了扩增片段长度多态性分析。此位点在中国人中有多态性，共检出３个等位片段，汉族人群中３个等位片段的频率分别为０．１４１、０、７０３、０．１５６，ＰＩＣ为０．４６２，回族人群中的频率分别为０．１８２、０．５９１、０．２２７，ＰＩＣ为０．５６６。此位点与３＇不翻译区的３＇ＣＡ位点存在连锁不平衡性，在连锁分析中可替代３＇ＣＡ作为基     

中国人群DXS102座位多态性鉴定及其应用

目的探讨中国人群中ＤＸＳ１０２座位的多态分布。方法应用ＰＣＲ扩增片段长度多态性（Ａｍｐ－ＦＬＰ）研究了无亲缘关系的２３４条Ｘ染色体。结果ＤＸＳ１０２座位等位片段有８个，核心单元ＡＣ二核苷酸重复数为１３～２１，频率分布在０．０１３～０．１５６之间，杂合度观察值和无偏估测值分别为０．８７和０．８０，多态信息含量（ＰＩＣ）０．８０，女性基因型数为２２个，男性基因型数为８个，该座位多态分布符合Ｈａｒｄｙ－Ｗｅｉｎｂｅｒｇ平衡定律。ＤＸＳ１０２座位在中国人群和欧洲人群的分布有明显的种族差异，在中国人群中发现了两个新的等位片段。应用ＤＸＳ１０２座位的短串联重复序列多态性对一接受基因治疗的血友病Ｂ家系进行分析和携带者筛查。结论ＤＸＳ１０２座位连锁分析有望成为一种有效的血友病Ｂ基因诊断的方法。     

中国人FRAXAC2多态性及在连锁分析中的应用

应用聚合酶链反应扩增脆性Ｘ智力低下基因５＇侧的二核苷酸重复序列，通过聚丙烯酰胺凝胶电沪及放射自显影的方法检测扩增产物。结果表明：ＦＲＡＸＡＣ２重复序列在我们所检测的中国人群中共有７种等位片段，其频率分布为０．００４８－０．６０６３。     

SM6的多态性及其在成人多囊肾病基因诊断中的初步应用

为了评估与成人多囊肾病ＰＫＤ１基因肾密连锁的微卫星ＤＮＡＳＭ６在基因诊断中的有效性，采用ＰＣＲ，聚丙烯酰胺凝胶电泳和银染法分析了９５名无血缘关系的中国汉族人，结果表明：在汉族人群中ＳＭ６具有２４种等位片段，其杂合度为０．６６３，多态信息量为０．８０．人群与文献报道的白种人群相比，ＳＭ６在种类和分布上均有差异。     

东北地区正常人群St14(DXS52)位点VNTR多态分布及在甲型血友病基因诊断中的应用

目的探讨中国正常人群Ｓｔ１４（ＤＸＳ５２）位点ＶＮＴＲ多态分布，为甲型血友病基因诊断提供依据。方法应用ＰＣＲ方法检测东北地区遗传上无相关的正常汉族个体６０人，男１２人，女４８人，总计１０８条Ｘ染色体。结果共检出８种等位基因片段，最短片段为０．７ｋｂ（Ａ），依次为１．３（Ｂ），１．３９（Ｃ），１．５７（Ｄ），１．６３（Ｅ），１．６９（Ｅ），２．１（Ｇ），２．４ｋｂ（Ｈ）等不同长度的等位片段，其等位基因频率为Ａ０．３９，Ｂ０．０４６，Ｃ０．０８３，Ｄ０．２３２，Ｅ０．１１１，Ｆ０．１３０，Ｇ０．００９，Ｈ０．００９等，其ＰＩＣ为７６．３６％。利用此ＶＮＴＲ多态作为遗传标记，对３个甲型血友病家系进行连锁分析，在一个家系中确定了一名女性为正常人，而非携带者；在另两个家系中各检出一名男性胎儿患者。结论Ｓｔ１４（ＤＸＳ５２）位点ＶＮＴＲ多态是对甲型血友病基因诊断很有应用价值的遗传标记。