移植瘤体积不同计测方法的比较

目的比较不同计算和测量方法评价移植瘤体积的异同,以探索最佳的接近真实体积的计算和测量方法。方法利用裸鼠皮下移植人原发性肝癌细胞株SMMC-7721建立人肝癌移植瘤动物模型。将荷瘤裸鼠随机分为三组,分别注射PBS液、Ad-LacZ、Ad-p27mt。处理后2周、3周分别处死裸鼠,在体体外内测量移植瘤的长径（a）,宽径（b）及高（c）,通过4种不同的体积测量公式（πabb/6、abb/2、aab/2、πabc/6）计算出移植瘤体积。同时测出移植瘤近似真实体积。结果πabc/6法计算体积与近似真实体积无明显差异性（P〉0.05）,πabb/6、abb/2、aab/2法与近似真实体积有明显差异性（P〈0.05）。πabc/6法计算体积（cm3）、近似真实体积（cm3）与其重量（g）无明显差异性（P〉0.05）,而πabb/6、abb/2、aab/2法计算体积（cm3）与重量有明显差异性（P〈0.05）。在体体内外方法测得的数据通过四种方法计算出来的体积均无明显差异（P〉0.05）。结论4种不同的体积测量公式（πabb/6、abb/2、aab/2、πabc/6）,以V=πabc/6方法计测移植瘤体积最准确、客观。在体移植瘤亦可通过游标卡尺测量肿瘤高度,通过v=πabc/6法准确计算出移植瘤体积及推算出移植瘤重量。     

小鼠Lewis肺癌不同部位皮下移植瘤模型的比较

目的 探究不同部位肺癌皮下移植瘤存在的差异,为肺癌研究者提供提供基础依据。方法 将稳定表达虫萤光素酶的小鼠Lewis肺腺癌细胞（ll2-luc-m38）分别注射于C57 BL/6小鼠的右腋皮下、右腹股沟皮下、脚垫皮下,定期利用小动物活体成像系统观察小鼠皮下移植瘤成瘤情况及转移情况,观察不同部位荷瘤小鼠的生存时间和死亡率,肿瘤组织取材,采用石蜡包埋、切片、HE染色做出病理学诊断。并将小鼠处死后立即进行肺部组织固定、观察转移灶。对皮下移植瘤行切除术观察小鼠术后生存情况和转移情况。结果 腋下组和腹股沟组成瘤时间较早,成瘤率为100%,脚垫组成瘤时间较晚,成瘤率为33%;腹股沟组和腋下组瘤体积增长迅速,其中腹股沟组瘤体积增长最快;接种后第21天腋下组70%的小鼠出现了肺转移,转移灶数目较多;腹股沟组50%小鼠出现肺转移,且转移灶数目较少;脚垫组小鼠未观察到肺转移灶。脚垫组小鼠死亡率最高。腹股沟组和腋下组小鼠可行皮下移植瘤切除术,术后存活率为100%。结论 小鼠lewis肺癌皮下移植瘤模型中,腹股沟组和腋下组成瘤率高,可耐受移植瘤切除术,手术死亡风险低,便于监测,操作简单且可重复性高,其中腋下组转移性更好。     

组织块移植法建立人肺癌裸鼠移植瘤模型

肺癌对人类的健康构成了严重的威胁,人肺癌裸鼠移植瘤模型的建立对于肺癌的研究是一项重要的工具.建立肺癌移植瘤模型的方法主要有细胞培养移植法、组织块移植法和匀浆液移植法.组织块移植法建立的模型能最大限度地模拟人体内环境,是一种理想的模型.就组织块移植法建模的操作方法及当前研究进展作一综述。     

血管抑素基因治疗Lewis肺癌移植瘤小鼠的实验研究

目的:观察血管抑素基因对Lewis肺癌小鼠移植瘤生长、转移的抑制作用。方法:建立C57BL/6j小鼠肺癌模型,30只荷瘤鼠按照随机数字表法分为生理盐水空白对照组、阳离子脂质体对照组、血管抑素基因(PAng)治疗组,每组10只。以阳离子脂质体为介导,将血管抑素基因的重组质粒直接注入移植瘤内,每周3次,共5周,每周测瘤体大小1次,第7周末处死所有小鼠,观察瘤体大小变化、肺表面转移灶数、小鼠生存期等。结果:治疗组小鼠移植瘤生长速度减慢,瘤体缩小,肺内转移少,与对照组比较差异有统计学意义(P0.05),小鼠活动能力、饮食、对外界刺激的反应能力均无明显改变,生存期明显长于对照组(P0.05)。结论:阳离子脂质体介导血管抑素基因可有效地抑制Lewis肺癌移植瘤的生长、转移。     

阿魏酸抑制A549肺癌移植瘤生长及其机制研究

目的探究阿魏酸对A549裸鼠肺癌移植瘤的抑制作用及其可能机制。方法将40只构建成功的肺癌移植瘤BALB/c裸鼠采用随机数字表法分为模型对照组、阿魏酸25mg/L组、阿魏酸50mg/L组和阿魏酸100mg/L组4组,每组10只,通过腹腔注射给药。通过计算肿瘤的瘤体积,称重瘤体质量,计算各组抑瘤率;qRT-PCR检测移植瘤组织中哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）的mRNA表达水平,Westernblot法和免疫组化法检测移植瘤组织中mTOR、增殖蛋白Ki-67和凋亡蛋白半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3（Caspase-3）的蛋白表达水平。结果与模型对照组相比,不同剂量的阿魏酸（25、50和100mg/L）组裸鼠的移植瘤组织生长受到抑制,抑瘤率分别为32.82%、43.75%和62.51%。与模型对照组相比,不同剂量的阿魏酸组mTOR的mRNA和蛋白表达水平均下降（均P＜0.05）,Ki-67蛋白表达水平均下降（均P＜0.05）,Caspase-3蛋白表达水平均升高（均P＜0.05）。结论阿魏酸对A549肺癌移植瘤生长具有显著抑制作用,可能与下调mTOR表达,抑制Ki-67蛋白表达和促进Caspase-3蛋白表达有关。     

用溶瘤病毒治疗P615移植瘤的初步实验研究

Ec■13株病毒和P75株病毒都能溶解鼠P615移植瘤,而且Ecco-18株病毒的溶瘤作用较P75株病毒的溶瘤作用略强。     

阳离子脂质体转染效率影响因素的研究进展

目前用于基因转染的载体主要有病毒载体和非病毒载体两大类。病毒载体的转染效率最高,但由于其容易造成感染和致癌性等安全性问题限制了它在临床中的应用。阳离子脂质体(cationic liposomes)是一种非常具有发展前景的非病毒基因载体。其生物膜特性,能使其转运的基因保持生物活性,保护基因免受溶酶体的降解,且具有无免疫原性、操作简单、对转移基因大小没有限制、重复性好、可自然降解等优点,而成为世界性的研究热点。     

MicroRNA-16抑制人卵巢癌在裸鼠皮下移植瘤生长的研究

目的:探讨microRNA-16(miRNA-16)转染对人卵巢癌细胞株SKOV-3在裸鼠皮下移植瘤形成的抑制作用。方法:将成熟miRNA-16双链模拟物及其阴性对照序列转染人卵巢癌SKOV-3细胞株,然后分别接种于裸鼠皮下,观察两组肿瘤出现时间及肿瘤体积变化,接种20d后取出肿瘤组织称重,计算抑瘤率。采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测肿瘤组织中Bcl-2mRNA表达,并进行免疫组化检测两组肿瘤组织中Bcl-2蛋白表达。结果:miRNA-16转染组肿瘤生长相对延缓,种瘤20d后miRNA-16转染组移植瘤重量明显小于阴性对照组,差异有统计学意义(P<0.05),抑瘤率达38.46%;PCR结果显示miRNA-16转染组Bcl-2 mRNA表达量与阴性对照组相比差异无统计学意义(P>0.05);移植瘤组织免疫组化分析两组Bcl-2蛋白表达差异无统计学意义(P>0.05)。结论:miRNA-16对人上皮性卵巢癌裸鼠移植瘤生长有抑制作用,可能成为卵巢癌基因治疗的新靶点。     

经皮穿刺瘤内注射医用臭氧治疗兔VX2移植瘤实验

目的 经皮穿刺瘤内注射医用臭氧,观察医用臭氧对兔VX2移植瘤的作用.方法 34只VX2移植瘤模型兔随机分为4组:空白对照组(不做任何治疗);臭氧50 μg组(注射臭氧浓度为50 μg/ml);臭氧75 μg组(注射臭氧浓度为75 μg/ml);纯氧组(注射医用纯氧).治疗组每天注射1次,每次2 ml,连续注射14 d.治疗结束后测量各组瘤兔肿瘤体表长径、短径及瘤重,观察肿瘤标本形态并取材行HE染色检查.结果 臭氧治疗组肿瘤长径、短径及瘤重均明显低于空白组和纯氧组(P<0.05),HE染色结果表明臭氧治疗组肿瘤细胞坏死明显.结论 采用经皮穿刺瘤内直接注射医用臭氧治疗兔VX2移植瘤,可有效控制肿瘤的生长.     

不同转染法用于第三代慢病毒包装系统包装效率的比较

目的 比较分别经磷酸钙转染法和脂质体转染法建立的第三代慢病毒包装系统的包装效率.方法 制备并纯化完整的重组慢病毒三质粒系统：转移质粒（PXZ171）、包装质粒（△NRF）以及包膜蛋白质粒（VSV-G）.分别用磷酸钙法和脂质体法将三质粒共转染包装细胞293T,72 h后收集病毒上清,批量快速测定法测定病毒滴度并进行比较.结果 磷酸钙转染法所产病毒滴度约达到脂质体转染法的1/10.结论 磷酸钙转染法获取的病毒滴度稍低,但价格相对便宜,病毒产量亦可满足实验要求.比较适合在普通实验室中开展.     

不同培养方法对乳腺癌MDA-MB-231细胞DNA甲基化状态的影响

目的: 探讨不同细胞培养方法对乳腺癌MDA-MB-231细胞全基因组DNA甲基化状态的影响,阐明基因组甲基化状态与细胞生长环境的关系及其在肿瘤发生发展中的作用。方法: 采用二维(2D)、三维(3D)细胞培养模型及小鼠肿瘤细胞原位移植(Ti)模型培养MDA-MB-231细胞并收集,分别用DNA提取试剂盒对收集的细胞进行DNA提取,DNA甲基化芯片检测3种模型培养后乳腺癌MDA-MB-231细胞全基因组DNA甲基化状态,应用Genomestudio软件计算每1个基因CpG位点的β值、DiffScore和Delta_Beta,并在2种模型之间比较,筛选出差异甲基化基因;采用DAVID在线分析工具对筛选的基因进行GO和Pathway分析。结果: 3D与2D模型培养的MDA-MB-231细胞共发现480个差异甲基化基因(P<0.05),3D与Ti模型有86448个差异甲基化基因(P<0.05),Ti与2D模型有90005个差异甲基化基因(P<0.05); 3D与2D、3D与Ti和Ti与2D模型的差异甲基化基因在多细胞生物体发育和细胞分化条目上有富集(P<0.05);亦在MAPK信号通路、细胞黏附分子和肌动蛋白骨架调节通路上有富集(P<0.05)。结论: 采用2D、3D和Ti模型3种方法培养MDA-MB-231细胞其全基因组DNA甲基化状态存在差异。     

U937单核细胞几种不同转染方法的比较

 目的 采用不同质粒转染方法介导重组pIRES2-EGFP-TFPI-2质粒转染U937单核细胞,以获得较高转染效率的方法。方法 分别采用电穿孔法、Effectene转染试剂、Lipofectamine 2000转染试剂、电穿孔+Effectene转染试剂、电穿孔+Lipofectamine 2000转染试剂及HilyMax转染试剂等不同方法介导质粒进行转染,测定不同方法的转染效率、目的基因mRNA表达水平及其对细胞活力的影响。结果 电穿孔+Effectene转染试剂组、电穿孔+Lipofectamine 2000组及HilyMax组的转染效率和目的基因mRNA表达较高,且HilyMax组对细胞活力影响较小。结论 将重组pIRES2-EGFP-TFPI-2质粒体外成功转染入U937单核细胞中,通过优化转染方法提高转染效率、降低对细胞活力的影响,为基因治疗提供了实验基础。     

肾移植术后并发原发性肺癌的单中心研究

目的 回顾性分析肾移植术后原发性肺癌的临床特点及预后.方法 自1988年1月~2015年4月期间,2793例患者在我院接受肾移植手术.14例(0.5%)患者随后发展为肺癌,其中10例(71.4%)接受了手术治疗.结果 肾移植时患者的平均年龄为50.2±8.3岁.14例肺癌患者中,10例(71.4%)有吸烟史.9例(64.3%)为偶然发现,而有症状者仅为5例.从移植手术到肺癌诊断的平均时间间隔为65.7±20.1个月.统计结果显示,不同肿瘤分期病人的生存率具有统计学差异(P=0.001).随访期间有11例死于肿瘤转移或器官衰竭,3例存活.肺癌诊断后的总体5年生存率为17.9%.结论 肾移植术后原发性肺癌的危险性可能高于一般人群.肾移植术后常规胸部检查可早期发现原发性肺癌,对于及早施行手术、改善预后很有必要.     

MDR-1基因骨髓造血干细胞移植抑制大鼠肝癌移植术后复发的研究

目的探讨MDR-1基因骨髓造血干细胞移植对大鼠肝移植术后复发转移的影响。方法选用雄性Wistar大鼠30只为肝移植供体,另选雌性SD大鼠30只为异基因肝移植受体(将HCCLM6肿瘤组织原位接种于大鼠肝脏,10 d后行肝移植,2周后处死大鼠)随机分为两组,A组MDR-1基因骨髓造血干细胞移植联合肝移植组,B组为单纯肝移植组。比较两组大鼠肝移植术后2周生存率、肝内复发和肝外转移情况。结果术后两周,A组大鼠存活14只,B组存活10只(P<0.05)。两组大鼠肝内复发率均为100%,但复发瘤大小差异有统计学意义(P<0.05),A组为(323.23±29.56)mm3,B组为(692.73±142.56)mm3。A组肺转移率为22%,B组为70%,A组淋巴结转移率为15%,B组为50%,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 MDR-1基因骨髓造血干细胞移植对大鼠肝移植术后复发转移有一定抑制作用。     

两种不同固定方式在肺癌调强放疗中的应用分析

目的:利用锥形束CT(cone beam CT,CBCT)分析头颈肩网和负压真空垫在肺癌调强放疗中的临床应用价值。方法:选取2018年4月～2018年6月行调强放射治疗的肺癌患者20例(病变均位于肺上叶),依据固定方式不同分为两组,常规组采用负压真空垫固定,观察组采用头颈肩网固定。所有患者在前3周治疗时,每周特定时间做一次CBCT扫描,利用CBCT系统采集的数据分析两组患者的摆位误差大小。结果:两组患者在X、Y、Z三个方向均有不同程度的移动,其中观察组在X、Y、Z方向摆位误差为(1.41±0.53)mm、(2.05±0.72)mm、(0.83±0.25)mm;常规组为(1.82±0.26)mm、(3.02±0.21)mm、(1.19±0.52)mm,两组患者X、Y、Z方向摆位误差比较,差异有统计学意义(均P<0.05);两组患者的急性放疗不良反应≥3级的发生率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:原发于肺上叶的肺癌患者做调强放疗时采用头颈肩网固定可明显减小摆位误差,提高放疗的质量,具有一定的临床应用优势。     

自发荧光支气管镜在肺癌早期诊断中的应用

目的探讨自发荧光支气管镜(AFB)检查在肺癌早期诊断中的应用价值。方法 297例肺癌患者,其中行AFB检查并经病理检查确诊者96例,行普通电子支气管镜检查并经病理检查确诊者201例,比较AFB与普通电子支气管镜检查对肺癌的诊断价值。结果中央型肺癌以鳞癌最多见,其次是腺癌、小细胞肺癌。鳞癌、小细胞肺癌以增生型表现为主,腺癌以增生型及浸润型表现为主。AFB活体组织检查肺癌确诊率与普通电子支气管镜比较差异无统计学意义(P>0.05);AFB刷片细胞学检查肺癌确诊率显著高于普通电子支气管镜(P<0.05)。AFB下增生型肺癌活体组织检查和刷片细胞学检查确诊率显著高于浸润型(P<0.05)。AFB下增生型肺癌活体组织检查确诊率与普通电子支气管镜比较差异无统计学意义(P<0.05),AFB下增生型肺癌刷片细胞学检查确诊率显著高于普通电子支气管镜;AFB下浸润型肺癌活体组织检查和刷片细胞学检查确诊率与普通电子支气管镜比较差异均无统计学意义(P>0.05);AFB下间接征象活体组织检查和刷片细胞学检查肺癌确诊率与普通电子支气管镜比较差异均无统计学意义(P>0.05)。结论AFB检查可以通过荧光染色明确病变部位、范围,提高镜检阳性率,是肺癌早期诊断的重要手段之一。     

Dermcidin作为新的肺癌生物标志物的研究

目的研究Dermcidin(DCD)作为新的肺癌生物标志物的可行性。方法收集病理确诊肺癌的患者手术前血清、肺癌组织和癌旁组织共31例,用ELISA方法对肺癌患者和健康对照组血清中DCD浓度作比较;利用定量聚合酶链反应(quantitative polymerase chain reaction,q PCR)方法对同一患者肺癌标本和癌旁标本进行ΔCt值的比较;利用Western blot方法对同一患者肺癌标本和癌旁标本DCD的表达量进行比较;同时利用免疫组化方法对同一患者肺癌组织和癌旁组织DCD的表达程度进行比较。结果 ELISA结果发现肺癌血清中DCD浓度高于健康对照组,差异有统计学意义(P0.05);q PCR结果显示肺癌组与癌旁组ΔCt值的差异有统计学意义(P0.05);Western blot结果进一步表明肺癌组织中DCD的表达量高于癌旁组织,差异有统计学意义(P0.05);免疫组化结果也发现肺癌组织中DCD表达水平高于癌旁组织,差异有统计学意义(P0.05)。结论 DCD与肺癌密切相关,可能成为肺癌潜在的分子标志物。     

骨髓间充质干细胞对小鼠Lewis肺癌皮下移植瘤的作用

目的 研究骨髓间充质干细胞(MSCs)对小鼠Lewis肺癌皮下移植瘤的影响。方法 自C57BL/6小鼠骨髓分离MSCs,制备单细胞悬液并于体外传代培养,取第4～5代细胞用于实验。56只C57BL/6小鼠经Lewis肺癌细胞皮下接种建立小鼠肺癌皮下移植瘤模型,根据MSCs给予时间分为D0组(接种同时给予MSCs)和D10组(接种后第10天给予MSCs）,其中D0组分为3个亚组（n=8）：组1单纯接种肿瘤细胞,组2肿瘤细胞和MSCs共同接种,组3肿瘤细胞接种及尾静脉注射MSCs;D10组分为4个亚组（n=8）：组4(肿瘤细胞接种及瘤体内注射MSCs)及其等量PBS对照组（组5）,组6（肿瘤细胞接种及尾静脉注射MSCs）及其等量PBS对照组（组7）。观察各组移植肿瘤的生长情况,包括肿瘤形成时间及不同时间点的瘤体大小,并进行组间分析比较。结果 在D0组,组1、2、3肿瘤形成时间分别为（9.37±1.41）d、（7.62±1.40）d和（9.25±1.49）d,与组1和组3比较,组2的肿瘤形成时间明显缩短（P<0.05）;而各时间点三组瘤体大小比较,差异无统计学意义（P>0.05）。组4的瘤体显著大于其对照组（P<0.05）;而组6与其对照组的瘤体大小比较,差异无统计学意义（P>0.05）。结论 MSCs与Lewis细胞同时接种可加速小鼠肺癌皮下移植瘤形成,而成瘤后MSCs瘤体内注射具有促进移植瘤生长的作用。