红细胞膜带3蛋白的研究进展

正常红细胞呈双凹圆盘状,形态柔顺,在循环血流中能抵抗血管和脏器壁的切应力而不致碎裂,能把氧气运输给组织的各部位,再从各部位运送出代谢产物二氧化碳,是机体不可缺少的“运输队”.红细胞特有的柔韧性和变形性源自本身的膜结构和细胞骨架支撑,根据膜蛋白在红细胞超微结构上功能的不同,膜蛋白分为骨架蛋白、整合蛋白和锚定蛋白.带3蛋白是整合蛋白的代表性蛋白,对红细胞结构的稳定性和生理功能的正常发挥起着至关重要的作用.     

人透明带蛋白3重组表达载体的构建与鉴定

目的：构建高效表达人透明带蛋白3的真核重组表达载体。 方法：利用PCR、T-A载体克隆和亚克隆等技术。 结果：构建成pGEM-ZP3重组质粒及pcDNA3.1ZP3dhfr真核重组表达载体。 结论：经酶切鉴定构建的人透明带蛋白3重组表达载体可高效表达重组人ZP3蛋白。     

人卵透明带3蛋白的二级结构和B细胞抗原表位预测

目的:预测并综合分析人卵透明带3(human zona pellucida 3,hZP3)蛋白的二级结构及其B细胞抗原表位。方法:以hZP3蛋白的基因序列为材料,采用Garnier-Robson法、Chou-Fasman法和Karplus-Schulz法预测其结构蛋白的二级结构及蛋白骨架区的柔韧性,采用Kyte-Doolittle法对蛋白的亲水性进行分析,Emini法预测蛋白的表面可能性,Jameson-Wolf法预测蛋白的抗原指数。结果:hZP3蛋白含有较多的β折叠和转角结构。该蛋白第27~31、36~46、114~133、140~151、237~240和324~329区段可能是α-螺旋中心;hZP3蛋白分子第52~54、60~67、74~78、100~111、158~169、181~185、190~193、210~218、226~229、311~317、335~349和353~360区段可能是β-折叠中心。hZP3蛋白具有多处抗原指数较高的区段,其中近中部区段和近羧基端的第92~95、132~137、171~178、239~245、252~255、279~286、292~305和319~324区段含有潜在的B细胞优势抗原表位。结论:以蛋白质的二级结构预测作为辅助手段,用抗原指数、亲水性参数和表面可能性参数预测hZP3蛋白的B细胞抗原表位,为实验确定hZP3蛋白的B细胞抗原表位并以此进行免疫避孕研究奠定基础。     

非小细胞肺癌红细胞膜带3蛋白功能的观察

目的 观察早晚期非小细胞肺癌患者红细胞膜带3蛋白功能变化.方法 正常对照组:健康成年人15名;早期组:Ⅰ、Ⅱ期非小细胞肺癌15例;晚期组:Ⅳ期非小细胞肺癌15例.应用Cl-荧光探针6-甲基-3-磺丙基-1-喹啉-水化合物(SPQ)分别检测3组红细胞膜带3蛋白的阴离子转运活性.结果 晚期组患者红细胞膜带3蛋白的离子转运活性明显比早期组升高.结论 晚期非小细胞肺癌红细胞膜带3蛋白的离子转运活性升高.提示带3蛋白的阴离子转运活性与非小细胞肺癌的发生、发展有关.     

重组人透明带蛋白3诱导精子的顶体反应

目的：在体外条件下检测重组人透明带蛋白诱导的顶体反应。 方法：体外采集已生育健康男子精液,采用非连续密度梯度法分离精子,将获能的精子悬液分成阴性对照组(C组,200 μL精子悬液加1 μL DMSO)、阳性对照组(A组,200 μL精子悬液加A23187至终浓度为10 μmol•L^-1)和ZP3组(200 μL精子悬液加ZP3至终浓度为10 mg•L^-1),考马斯亮蓝染色法检测重组人ZP3蛋白诱导的顶体反应。结果：C组、A组和ZP3组发生顶体反应的精子百分率分别为(5.00±1.70)%、(46.10±7.49)%和(13.20±2.70)%,各组间比较差异有显著性(P<0.05)。 结论：重组人透明带蛋白能够诱导人精子发生顶体反应。     

碳酸酐酶,带3蛋白在肺气体交换中作用的实验研究

目的；探讨细胞膜带３蛋白介导的ＨＣＯ＾－３／Ｃｌ＾－交换和碳酸酐酶（ＣＡ）催化的ＨＣＯ３脱水反应在肺气体交换中的作用。方法：通过麻醉犬右心房适时灌注，４，４′－二硫氰基－２，２′－二磺基芪（ＤＩＤＳ）抑制带３蛋白，乙酰唑胺（ＡＣＴＺ）抑制红细胞和肺组织ＣＡ活性来完成，结果：（１）ＤＩＤＳ可导致灌注后１５，３０ｍｉｎ的ＣＯ２产量（Ｖｃｏ２）较灌注前显著减少（Ｐ〈０．０５），心输出量（Ｑ）显著地增高（     

人透明带蛋白3真核表达载体的构建

目的 构建人ZP3蛋白(从第23位到348位氨基酸)真核表达载体,用于在毕赤酵母中表达重组人ZP3蛋白.方法 通过PCR方法扩增编码人ZP3蛋白的基因,并将其克隆入毕赤酵母表达载体pPICZ构建真核表达质粒pPICZα-hZP3.结果 经PCR扩增获得的hZP3基因大小为978 bp,其DNA测序结果分析表明:pPIC...     

三氧化二砷诱导表达带3蛋白膜段结构域K562细胞凋亡作用的研究

目的 探讨三氧化二砷诱导表达带3蛋白膜段结构域K562细胞凋亡的作用。方法 将纯化的表达载体pYDl—mdb3转染K562细胞，Western Blot检定有带3蛋白膜段结构域的表达；通过光学显微镜、DNA电泳和线粒体膜电位的测定，观察三氧化二砷对表达带3蛋白膜段结构域的K562细胞凋亡的影响。结果 表达带3蛋白膜段结构域的K562细胞的上述凋亡特征均比未表达带3蛋白的K562细胞明显。结论 表达带3蛋白膜段结构域的K562细胞对三氧化二砷更敏感。     

解偶联蛋白2与衰老

解偶联蛋白（uncoupling protein,UCP）属于线粒体内膜上的一类载体蛋白,其生理作用是消除线粒体膜电位,使物质氧化磷酸化解偶联,从而抑制二磷酸腺苷（adenosine diphosphate,ADP）合成,能量以热能形式散发。研究发现UCP2具有一种质子漏功能,表现对线粒体呼吸链上活性氧（reactive oxygen species,ROS）产生的调控和降低ROS的功能。但在不同组织器官,不同代谢状态下UCP,的生理功能对细胞的影响不完全相同。特别是近年来的研究发现,ucP,参与了能量代谢、ROS的产生、子宫内膜退化、衰老等过程,并且与非酒精性脂肪肝、抗肥胖、动脉粥样硬化、局部缺血以及缺血再灌注损伤和2型糖尿病等有一定的相关性,倍受人们的关注。     

细胞复制衰老过程中STAT3的变化及血管紧张素Ⅱ对STAT3活性的影响

目的 研究细胞复制衰老过程中JAK/STAT信号转导系统中STAT3的变化及血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）对STAT3活性的调节作用。方法 选用人胚肺二倍体成纤维细胞WI-38细胞株,通过β-半乳糖苷酶（β-gal)染色并测定其活性来鉴定衰老细胞;采用凝胶阻滞电泳（EMSA）和Western印迹观察细胞复制衰老过程中STAT3的变化及AngⅡ对STAT3活性的影响。结果 细胞复制衰老过程中STAT3蛋白合成增多,磷酸化的STAT3转位入核减少,近而与DNA结合活性下降;AngⅡ通过其AT1受体诱导年轻和衰老细胞STAT3的活化,年轻和衰老细胞STAT3蛋白含量无明显变化,p-STAT3均有增加,但年轻细胞p-STAT3增加速率高于衰老细胞,衰老细胞对AngⅡ的反应性弱于年轻细胞。结论 细胞复制衰老过程中STAT3活性降低,阻滞部位可能发生在核转位;AngⅡ能够诱导年轻和衰老WI-38细胞STAT3的活化。但衰老细胞对AngⅡ诱导STAT3活化明显障碍。     

G6PD缺乏红细胞膜Band3蛋白阴离子转运功能的改变

目的：探讨葡萄糖-6-磷酸脱氢酶（G6PD）缺乏红细胞膜Band3蛋白阴离子转运功能的改变及影响因素。方法：利用测定细胞在等渗氯化铵溶液中的溶血t1/2来揭示正常与异常红细胞阴离子转运动能的改变及巯基还原剂的修复。结果：G6PD缺乏红细胞。Band3蛋白阴离子转运活性较正常对照明显减弱。而DTT或巯基乙醇可恢复其阴离子转运活性。结论：氧化通过修饰G6PD缺乏红细胞膜蛋白巯基来降低阴离子转运活性。这可能成为红细胞溶血的一个重要机制。而巯基还原剂则可修复其转运活性。     

抗病毒i-RNA对鼠肺泡灌洗液中IgG抗体水平和腹腔巨噬细胞C_(3b)受体表达的影响

目的：探讨抗呼吸道合胞病毒免疫核糖核酸有效控制婴幼儿下呼吸道感染的作用机理。方法：应用抗呼吸道合胞病毒免疫核糖核酸致敏ＢＡＬＢ／ｃ鼠以ＤＯＴ－ＥＬＩＳＡ法和ＹＣ花环法检测其肺泡灌洗液中ＩｇＧ抗体水平和腹腔巨噬细胞Ｃ３ｂ受体数量。结果：抗呼吸道合胞病毒免疫核糖核酸能增强ＢＡＬＢ／ｃ鼠肺泡灌洗液中ＩｇＧ抗体含量，并明显提高腹腔巨噬细胞ＹＣ花环形成百分率。结论：抗病毒ｉ－ＲＮＡ可增强宿主体液免疫和细胞免疫。     

慢性HBV感染者红细胞C3b受体活性与抗病毒治疗应答临床研究

为探讨慢性HBV感染红细胞免疫(RCIA)机制及其与抗病毒治疗应答的关系,应用基因工程α-2bIFN联合天然药物对52例慢性HBV感染患者进行治疗,另以39例未经上述治疗患者作对照。在治疗前后并随访一年观察两组HBVM变化情况,同时应用补体致敏酵母菌花环法测定红细胞C3b受体活性及免疫复合物粘附程度并与正常对照。结果显示:慢性HBV感染有显著异常的RCIA改变,IFN联合疗法可使患者HBVM阴转率明显提高,但对RCIA持续低下者的疗效明显欠佳,一年后重复测定结果相同。研究提示:RCIA功能紊乱参与了慢性HBV感染的免疫病理过程,改善RCIA功能有利于调整患者对抗HBV治疗的免疫应答。     

手足口病患儿免疫球蛋白IgG亚类和补体C3、C4及C反应蛋白水平分析

目的:探讨手足口病患儿免疫球蛋白IgG亚类和补体C3、C4及C反应蛋白(CRP)水平的变化及临床意义。方法:选取重型手足口病患儿103例作为重型组,普通手足口病患儿301例作为普通组,另选取同期健康体检的正常儿童50名作为对照组,检测3组免疫球蛋白IgG亚类和补体C3、C4及CRP水平。结果:重型组IgG1、IgG3和补体C3、C4水平明显低于对照组和普通组(P<0.01),CRP水平均明显高于对照组和普通组(P<0.01),普通组IgG1、IgG2、IgG3、IgG4和补体C3、C4及CRP水平与对照组差异均无统计学意义(P>0.05)。结论:重型手足口病患儿体液免疫应答存在异常,患儿可在病毒感染的基础上继发细菌感染,联合检测免疫球蛋白IgG亚类和补体C3、C4及CRP水平对手足口病患儿病情进展具有一定的临床指导意义。     

Survivin蛋白在翼状胬肉组织中的表达及其意义

目的探讨Survivin蛋白在原发性和复发性翼状胬肉组织中的表达及其对细胞增殖和凋亡的影响。方法采用免疫组化法检测40例翼状胬肉（原发性翼状胬肉25例,复发性翼状胬肉15例）和20例正常结膜组织中Survivin蛋白及增殖细胞核抗原（PCNA）的表达,观察原发性翼状胬肉、复发性翼状胬肉、正常结膜组织中细胞增殖指数（PI,PCNA标记指数）的差别及其与Survivin蛋白表达的关系。结果 （1）原发性翼状胬肉和复发性翼状胬肉组织中的Survivin蛋白阳性表达率均明显高于正常结膜组织（均P〈0.01）,而原发性翼状胬肉和复发性翼状胬肉之间的差异无统计学意义（P〉0.05）。（2）原发性翼状胬肉和复发性翼状胬肉组织中PI值均明显高于正常结膜组织（均P〈0.01）,但原发性和复发性翼状胬肉之间的差异无统计学意义（P〉0.05）。（3）Survivin蛋白表达阳性的胬肉组织中PI值较Survivin蛋白表达阴性的胬肉组织中高（P〈0.01）。结论翼状胬肉的发生发展可能与Sur-vivin蛋白的异常表达引起细胞增殖和凋亡失衡有关。     

去白细胞前后库存SAGM红细胞C3b受体功能的测定

目的揭示不同时期库存的SAGM红细胞悬液去除白细胞前、后其红细胞C3b受体(RBC-C3bR)及其介导的免疫粘附功能的改变,并了解SAGM红细胞悬液经过滤器去除白细胞后再保存不同时期对红细胞C3b受体及其介导的免疫粘附功能的影响.方法对60份库存血样行红细胞C3b受体(RBC-C3bR)花环试验和免疫复合物(RBC-ICR)花环试验测定,其中30份为保存第1、3、7、14、21天的库存SAGM红细胞悬液采用白细胞过滤器前、后的标本,另30份为SAGM红细胞悬液为去白细胞后保存1、3、7、14、21 d的标本.结果相同时期库存的SAGM红细胞悬液采用过滤器去除白细胞前、后其RBC-C3b受体花环率和RBC-ICR花环率无显著差异(P>0.05), SAGM红细胞悬液经过滤去除白细胞后再存放不同时期与保存同时期未过滤的SAGM红细胞悬液相比其RBC-C3b受体花环率和RBC-ICR花环率也无明显差异(P>0.05).结论使用白细胞滤器对红细胞C3b受体及其介导的免疫粘附功能无明显影响.     

提纯G3PD的修饰蛋白

目的：从猴的肾上皮细胞（Vero-E6)内提取具有促进细胞生长作用的3－磷酸甘油醛脱氢酶（G3PD）的修饰蛋白（modifier protien,MP)。方法：将培养液中K^ 的浓度降低到3．2mmol/L,在Vero-E6细胞内将产生G3PD的修饰蛋白,用亲和层析及阴离子高效液相层析纯化而获取这种修饰蛋白。结果：蛋白的分子量大约为62kDa,Westem及免疫吸附实验证实：随着细胞外液中K^ 的浓度降低,该种蛋白也相应增多,在低k溶液2h后达最大值,与G3PD的活性相平行。结论：从猴的肾上皮Vero-E6细胞分离出G3PD的修饰蛋白,有促进G3PD的活性、增进细胞生长的作用。     

肾细胞癌增殖细胞核抗原P53蛋白的表达及意义

采用免疫组织化学ＬＳＡＢ法，对５４例肾细胞癌作了增殖细胞核抗原（ＰＣＡＮ）和Ｐ５３蛋白表达的研究。结果表明：ＰＣＮＡ阳性反应计算出的增殖指数（ＰＩ）在肾细胞癌Ⅰ、Ⅱ级与Ⅲ、Ⅳ级之间有显著性差异；Ｐ５３蛋白阳性１０例（１８．３％），而正常对照组无１例阳性；ＰＣＮＡ所表示的ＰＩ与Ｐ５３蛋白阳性表达呈正相关，认为ＰＣＮＡ的表达是评估肾细胞癌预后的有用指标，Ｐ５３蛋白可作为肾细胞癌的一个恶性依据。     

丙型肝炎病毒核心蛋白对肝癌细胞stat3通路及细胞周期蛋白cyclin D1的调控作用

[目的]探讨丙型肝炎病毒核心蛋白(HCVc)是否调控肝癌细胞中stat3通路及细胞周期蛋白cyclin D 1的表达,参与肝癌细胞的恶性生物学行为.[方法]将含HCVc基因的真核表达质粒pEGFP-N3-HCVc瞬时转染人肝癌细胞HepG2使HCVc过表达,用siRNA-HCVc敲除HepG2细胞中HCVc的表达,荧光显微镜检测绿色荧光蛋白(GFP)的表达,Western blot检测HCVc、总stat3(stat3)、磷酸化stat3(p-stat3)及cyclinD1蛋白的表达;流式细胞术及MTT法检测细胞周期变化及细胞增殖情况.[结果]Western blot结果显示,通过瞬时转染而过表达HCVc的HepG2细胞中,HCVc、p-stat3及cyclinD1的蛋白水平高于空白质粒转染组和未转染组;siRNA-HCVc敲除HCVc表达后,HCVc、p-stat3和cyclin D1蛋白的表达下调;酪氨酸磷酸化抑制剂AG490(JAK2特异性拮抗剂)处理可下调过表达HCVc的HepG2细胞中p-stat3和cyclin D1蛋白的表达.流式细胞术显示过表达HCVc可促进细胞向G2/M期进展.MTT法结果显示过表达HCVc使HepG2细胞增殖能力增加.[结论]HCVc可活化HepG2细胞中stat3通路,调控细胞周期蛋白cyclinD1的表达,促进细胞周期进展及细胞增殖,可能与肝癌的发展有关.     

红细胞免疫功能与几种老年病关系的研究

红细胞免疫功能与红细胞膜上的C_(3b)受体数目及活性有关,而且受年龄和疾病的影响.采用红细胞C_(3b)受体花环试验和红细胞免疫复合物(IC)花环试验,检测冠心病17例;肺心病15例;慢性肾炎12例;健康老年人15例;健康青年人30例.结果表明:慢性肾炎病人C_(3b)受体花环率下降,IC花坏率升高,经t检验与正常老年人及青年人均有明显差异;正常老年人与青年人比较IC花环率呈下降趋势,但差异无显著性意义;冠心病、肺心病病人住院稳定期无差异.