ROCKⅠ及TGF-β1在慢性血栓栓塞性肺动脉高压大鼠肺小动脉的表达

目的：观察Rho激酶（ROCKⅠ）及转化生长因子β₁ (TGF-β₁)在慢性血栓栓塞性肺动脉高压大鼠肺小动脉表达的动态变化。方法: 雄性Wistar大鼠64只,随机分为8组,每组8只：初始对照组、栓塞3 d组、1周组、2周组、4周组、8周组、12周组、终末对照组。采血制备血栓,颈静脉注入,2周后第2次栓塞,全程腹腔注射氨甲环酸。达实验设定日期后,测各组大鼠平均肺动脉压（mPAP）、肺动脉相对中膜厚度（PAMT）、管壁面积/管总面积(WA/TA) 、右室肥厚指数（RVHI）,原位杂交检测ROCKⅠmRNA表达,免疫组化检测TGF-β1蛋白表达。结果: 栓塞4周组至12周组大鼠随时间延长mPAP明显增高（均P<0.01）;PAMT、WA/TA在4周后随时间延长显著增高（4周组P<0.05,8周、12周组P<0.01）;8周后RVHI较对照组明显增高(8周组P<0.05,12周组P<0.01);栓塞后ROCKⅠmRNA原位杂交染色强度随时间延长出现增高趋势（3 d组至2周组P<0.05,4周组至12周组P<0.01）, TGF-β₁蛋白免疫组化染色强度随时间延长出现增高趋势（1周组、2周组P<0.05,4周组至12周组P<0.01）。相关分析表明,ROCKⅠmRNA 及TGF-β₁蛋白与mPAP、RVHI及血管重构指标均呈正相关(均P<0.01);ROCKⅠmRNA与TGF-β₁蛋白表达呈正相关(r=0.612,P<0.01) 。结论: ROCKⅠ和TGF-β₁均可能参与慢性血栓栓塞性肺动脉高压、肺血管重构的病理生理过程,此过程中Rho/Rho激酶信号通路可能是TGF-β1发挥生物学效应的重要途径之一。     

ROCKI及TGF-β1慢性血栓栓塞性肺动脉高压大鼠肺小动脉的表达

目的:观察Rho激酶(ROCK I)及转化生长因子β1(TGF-β1)在慢性血栓栓塞性肺动脉高压大鼠肺小动脉表达的动态变化.方法:雄性Wistar大鼠64只,随机分为8组,每组8只:初始对照组、栓塞3 d组、1周组、2周组、4周组、8周组、12周组、终末对照组.采血制备血栓,颈静脉注入,2周后第2次栓塞,全程腹腔注射氨甲环酸.达实验设定日期后,测各组大鼠平均肺动脉压(mPAP)、肺动脉相对中膜厚度(PAMT)、管壁面/积管总面积(WA/TA)、右室肥厚指数(RVHI),原位杂交检测ROCK I mRNA表达,免疫组化检测TGF-B,蛋白表达.结果:栓塞4周组至12周组大鼠随时间延长mPAP明显增高(均P<0.01);PAMT、WA/TA在4周后随时间延长显著增高(4周组P<0.05,8周、12周组P<0.01);8周后RVHI较对照组明显增高(8周组P<0.05,12周组P<0.01);栓塞后ROCK I mRNA原位杂交染色强度随时间延长出现增高趋势(3 d组至2周组P<0.05,4周组至12周组P<0.01),TGF-β1蛋白免疫组化染色强度随时间延长出现增高趋势(1周组、2周组P<0.05,4周组至12周组P<0.01).相关分析表明,ROCK I mRNA及TGF-β1,蛋白与mPAP、RVHI及血管重构指标均呈正相关(均P<0.01);ROCK I mRNA与TGF-β1蛋白表达呈正相关(r=0.612,P<0.01).结论:ROCK I和TGF-β1均可能参与慢性血栓栓塞性肺动脉高压、肺血管重构的病理生理过程,此过程中Rho/Rho激酶信号通路可能是TGF-β1发挥生物学效应的重要途径之一.     

慢性血栓栓塞性肺动脉高压病例——与子宫肌瘤相关?

目的:通过分析2例慢性血栓栓塞性肺动脉高压(chronic thromboembolic pulmonary hypertension, CTEPH)的女性病人的病例报告以及循证国内外研究结果,提高对罕见的与子宫肌瘤相关的CTEPH的认识,提高肺动脉高压的诊治水平.方法:病例报告及文献检索.结果:既往有子宫肌瘤的女性肺动脉高压患者,临床发现肺动脉血栓形成,诊断为CTEPH,CTEPH发病可能与子宫肌瘤相关.结论:慢性血栓栓塞性肺动脉高压和/或肺动脉高压可能是子宫肌瘤一种罕见的并发症.在临床实践中应考虑其可能性,尽早给予病人子宫肌瘤剔除术治疗及抗血栓治疗,提高治疗水平.     

肺动脉高压的血栓栓塞的机制

肺动脉高压是一种严重的临床疾病,常常并发血栓形成,其背后的机制可能与缺氧,内皮功能异常,炎症因子激活,血小板活化及凝血功能异常有关。本文拟探讨肺动脉高压患者的血栓形成机制,为临床治疗和预防肺动脉高压并发的血管栓塞提供理论依据。     

慢性肺动脉高压大鼠肺小动脉内HIF-1α的表达增强并与NO有关

慢性低氧引起肺血管收缩、肺血管重建而致肺血管阻力持续升高,最终可导致肺动脉高压和右心室肥大,其发病机制至今尚不十分清楚。低氧诱导因子-1α(H IF-1α)作为一种转录因子,是一种重要的肺动脉对低氧反应的中介物。本实验采用慢性低氧伴高二氧化碳性肺动脉高压大鼠模型,观察H     

慢性血栓栓塞性肺动脉高压患者血管平滑肌细胞中FoxO3a和MMP2表达升高

目的研究FoxO3a及MMP2在慢性血栓栓塞性肺动脉高压(CTEPH)中的表达和作用。方法收集CTEPH患者20例,选取5例清洁手术标本,原代培养得到患者肺动脉血管平滑肌细胞(VSMCs);利用供体肺动脉主干作为对照,原代培养得到正常肺动脉VSMCs。免疫组织化学染色及Western blot检测血管组织及VSMCs中FoxO3a和MMP2表达。结果疾病组FoxO3a的积分吸光度值(IA)为:3 269±338,显著高于对照组的420±46(P0.01);疾病组和对照组的MMP2的IA分别为4 936±521、1 799±139(P0.01);FoxO3a和MMP2在疾病组表达较对照组明显升高(P0.05)。结论 CTEPH患者肺血管中FoxO3a和MMP2高表达,这两种信号分子可能参与了CTEPH血管重塑的过程。     

慢性肺动脉血栓栓塞动物模型的建立

背景：目前国内外接近人体生理学的慢性肺动脉血栓栓塞的动物模型较少见。 目的：采用自体血栓反复注射法建立慢性肺动脉血栓栓塞的动物模型。 方法：将家兔随机分为栓塞组和假栓塞组,栓塞组家兔肺动脉多次注入自体血栓,假栓塞组用生理盐水替代血栓。 结果与结论：栓塞组干预4周后解剖肺动脉并经病理检测可发现有血栓机化,肺动脉CT造影均可见局部肺动脉截断征,以及炎症、梗死、胸膜增厚等间接征象,肺动脉解剖及病理均可发现实验兔肺动脉血栓形成机化及慢性炎症改变。结果证实,采用兔自体血栓反复注射法可成功建立慢性肺血栓栓塞动物模型。     

人脐带血干细胞抑制大鼠肺纤维化及肺巨噬细胞TGF-β1的表达

目的 研究人脐血间充质干细胞对博来霉素所致的大鼠肺纤维化及TGF-β1的影响.方法 取清洁级健康雄性SD大鼠60只随机分为博来霉素组(P组)、干细胞治疗组(M组)、地塞米松治疗组(D组)和阴性对照组(N组),取第2代人脐血间充质干细胞培养至第4代;P组、M组和D组分别经气管注入博来霉素制造肺纤维化模型,M组造模后立即经鼠尾静脉注入5-溴-2-脱氧尿嘧啶核苷(BrdU)标记的干细胞,D组造模后第2天开始连续7d腹腔注射地塞米松,N组经气管注入等量生理盐水,在第7、14、28天处死各组大鼠,行HE、Masson染色,免疫组织化学法观察TGF-β1表达及标记细胞情况.结果 M组第7、14、28天肺组织均可见标记的干细胞;HE及Masson染色后观察,与N组相比,P组7d时肺泡炎最明显,28 d肺纤维化程度最重,M、D组较P组轻且病理切片可见M组较D组肺泡炎及纤维化程度稍轻;肺组织中TGF-β1在P组7d时最高,M、D组明显少于P组,M组减少更明显,组间差异有统计学意义.结论 人脐血间充质干细胞可以定植于肺组织中,在肺纤维化早期通过抑制TGF-β1的表达,可能减轻肺泡炎及肺纤维化.     

野百合碱致肺动脉高压大鼠肺组织中IL-1β和IL-18表达增加

目的探讨野百合碱致肺动脉高压(PAH)大鼠IL-1β和IL-18表达的变化。方法将雄性大鼠随机分为对照组和实验组(n=10),建立野百合碱致PAH大鼠实验模型,应用B超、心肌细胞HE染色和TUNNEL染色检测;ELISA检测血清NF-κB、COX2、IL-6、IL-1β、TNF-α和NO浓度;免疫组化法检测肺组织IL-1β和IL-18表达;Western blot检测肺组织NLRP3蛋白表达。结果 PAH大鼠血清中NF-κB、COX2、IL-6、IL-1β、TNF-α和NO均显著增加(P0.05);肺组织IL-1β和IL-18的表达明显增加(P0.05),PAH大鼠肺组织IL-1β和IL-18阳性细胞百分比显著增加,IL-1β的增加更明显;NLRP3蛋白表达实验组比对照组有明显增加(P0.05)。结论野百合碱致肺组织IL-1β和IL-18表达增加。     

急性肺动脉血栓栓塞症的诊断及外科治疗

目的探讨急性肺动脉血栓栓塞症的快速诊断、手术治疗和围手术期处理方法。方法 15例急性肺动脉栓塞症患者均在全麻体外循环下行肺动脉血栓切除术。结果术后10 d动脉血氧分压、动脉血氧饱和度均显著高于术前（P〈0.05）;术后10 d心脏超声右室横径、主肺动脉宽度、三尖瓣反流压差和反流面积均明显缩小（P〈0.05）。全组无手术死亡、并发症,术后全部病例心功能完全恢复正常。结论术前及时明确诊断、严格掌握手术适应证和手术时机、手术彻底清除血栓是治疗急性肺动脉血栓栓塞症成功的关键。     

肝素抑制低氧性肺动脉高压大鼠肺血管内皮生长因子1的表达

目的： 观察肝素抑制大鼠低氧性肺动脉高压过程中,血管内皮生长因子1（VEGF-1）在肺小动脉血管内皮细胞和肺组织中的表达变化。方法：成年雄性SD大鼠24只,随机分为对照组（A组）、低氧4周组（B组）和低氧+肝素4周组（C组）,每组8只。测各组大鼠平均肺动脉压（mPAP）、右室肥大指数（RVHI）和血管形态学指标;HE染色观察肺动脉血管形态学改变,免疫组化法检测肺动脉血管内皮细胞VEGF-1蛋白表达;RT-PCR检测肺组织VEGF-1基因表达。结果：mPAP、RVHI、肺小动脉重塑指标、肺小动脉血管内皮细胞VEGF-1蛋白表达和肺组织VEGF-1基因表达水平在C组高于A组,低于B组。相关分析表明,VEGF-1蛋白表达与肺血管重塑呈正相关（r=0.974,P<0.01）。VEGF-1mRNA与VEGF-1蛋白呈正相关（VEGF120 mRNA,r=0.919, P<0.01;VEGF164 mRNA,r=0.896, P<0.01）。结论：肝素可能在转录和翻译水平抑制VEGF-1的表达,从而抑制大鼠低氧性肺动脉高压的形成。     

重组大鼠TGF-β1在大肠杆菌的表达及初步鉴定

β型转化生长因子 (ＴＧＦ β)有 5种不同的异构体 ,其中ＴＧＦ β1研究最为深入 ,由于ＴＧＦ β1对多种脏器纤维化及肿瘤的发生、发展有关而倍受关注。哺乳动物细胞合成的ＴＧＦ β1前体含 390个氨基酸 ,其中包含Ｎ 端信号肽(ａａ 1 2 3) ,ＬＡＰ(ｌａｔｅｎｔａｓｓｏｃｉａｔｅｐｅｐｔｉｄｅ) (ａａ2 3 2 78)和 112个氨基酸的Ｃ端肽 (ａａ2 79 390 ) ,在ａａ 2 75～ 2 78有四个碱性氨基酸组成的酶解位点 ,Ｃ端肽可从该位点酶解释放最终形成成熟态的ＴＧＦ β1单体 ,活性ＴＧＦ β1即为该单体的同种二聚体。本文克隆了编码 2 79～ 390氨…     

CCl4促进大鼠肝星状细胞增殖及TGF-β1基因表达

目的进一步阐明四氯化碳(CCl4)引起肝纤维化的分子机制。方法用RT-PCR方法检测转化生长因子β1(TGF-β1)mRNA在肝星状细胞(HSC)的表达,用Western blot检测TGF-β1蛋白表达。用MTT法和流式细胞术检测细胞增殖和周期分布。结果CCl4作用于HSC后,细胞的增殖能力增加,细胞周期分布显示G0/G1期细胞减少而G2/M期细胞增多。同时,TGF-β1蛋白及mRNA的表达量明显增加。结论一定浓度的CCl4能够促进HSC增殖,上调TGF-β1蛋白及mRNA的表达,这可能是CCl4导致肝纤维化的分子机制之一。     

TGF-β1 shRNA真核表达质粒抑制人肺成纤维细胞TGF-β1的表达

目的:观察构建成功的三个针对人转化生长因子β1(TGF-β1)的小发夹RNA(shRNA)真核表达质粒抑制人肺成纤维细胞TGF-β1的表达.方法:将真核表达载体psiSTRIKE-RNAi1、psiSTRIKE-RNAi2、psiSTRIKE-RNAi3和对应的阴性对照载体经酶切鉴定和测序分析后,以Lipofectamine2000介导转染人肺成纤维细胞,48小时后应用实时荧光定量PCR检测人肺成纤维细胞TGF-β1 mRNA的表达并用ELISA检测细胞上清液中TGF-β1蛋白质的浓度.结果:重组质粒经酶切和DNA测序证实插入片段的碱基序列与预期设计一致.转染组细胞TGF-β1表达受到明显抑制,以psiSTRIKE-RNAi2的抑制效应最为显著(P＜0.01).结论:三个针对TGF-β1shRNA的重组质粒均能抑制TGF-β1在人肺成纤维细胞中的表达.     

ERK1/2和TGF-β1在自发性高血压大鼠心脏中的表达上调

目的 探讨自发性高血压大鼠(SHR)心脏细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)和转化生长因子β1(TGF-β1)表达的意义.方法 采用免疫组化和Western blot方法检测心脏ERK1/2和TGF-β1的表达.结果 在SHR8、SHR16、SHR20三个周龄组中,心肌间小动脉内皮细胞中的ERK1/2阳性率分别为15.38%、76.97%和72.72%,SHR16和SHR20组心肌间血管平滑肌细胞(VSMC)ERK1/2染色阳性率为5.49%和6.83%,均显著高于对照组(P＜0.05).在SHR16和SHR20组中ERK1/2蛋白含量明显高于对照组(P＜0.05);心脏中TGF-β1含量明显高于同周龄的SD大鼠(P＜0.05).心脏中ERK1/2和TGF-β1表达量与平均动脉血压正相关(P＜0.05).结论 在SHR心脏组织中TGF-β1表达增加并与ERK1/2相互作用,可能参与了心脏病变的形成.     

TGFβ1及其受体在大鼠整胚及胎肺发育过程中的表达

目的：观察TGFβ1及TβRⅠ、 TβRⅡ在大鼠整胚及胎肺发育中的表达, 探讨它们与大鼠整胚及胎肺发育间的相互关系和作用机制.方法：半定量RT-PCR分析3种因子在13 ～17 d 全胚中的变化情况;免疫组化法检测3种因子在15 ～17 d 胎肺中的表达及该组织发育结构特点.结果：半定量RT-PCR示, 3种因子在发育13 ～15 d表达呈递增趋势, 16 ～17 d 出现下降.免疫组化结果显示, TGFβ1主要位于发育中支气管上皮细胞内, TβRⅠ、 TβRⅡ位于原始肺泡组织.结论：TGFβ1及TβRⅠ、 TβRⅡ在大鼠整胚及胎肺发育过程中起着重要的调控作用, 尤其是对组织器官形态的发生.     

充血性心力衰竭大鼠的大脑海马区TGF-β1表达的变化

目的研究充血性心力衰竭大鼠的大脑海马区TGF-β1变化。方法将85只成年雄性sD大鼠随机分为正常组5只、假手术组40只、模型组40只,假手术组和模型组观察时间点为术后1、2、4、8周。采用腹主动脉部分缩窄术。建立大鼠慢性充血性心力衰竭模型。应用超声心动图动态监测左室舒张末期内径（LVEDd）,舒张末期室间隔厚度（IVSd）和左室后壁厚度（LVPWd）;解剖心脏,计算心肌质量指数[心质量／体质量（HW／BW）和左室质量／体质量（LVW／BW）],免疫组织化学染色法检测大脑海马区TGF-β1表达变化。结果模型组LVEDd、IVSd、LVPWd高于正常组和假手术组,且呈时间依赖性上升趋势（P〈0．01）。模型组心肌质量指数与正常组和假手术组比较,差异有统计学意义（P〈0．01）。模型组TGF-β1表达量明显高于假手术组。结论压力超负荷性心力衰竭发生过程中大脑海马区TGF-β1表达量明显增高。     

博莱霉素致肺纤维化中TGF-β1表达

25只大鼠随机分为正常对照组和灌注博莱霉素实验组。在 3d ,7d ,14d ,30d分别取肺组织 ,以免疫组织化学技术测定TGF β1蛋白表达。结果显示未经博莱霉素处理正常对照组大鼠的少数细支气管粘膜上皮细胞的胞浆有TGF β1蛋白弱表达 ;博莱霉素处理大鼠的支气管、细支气管粘膜上皮细胞则TGF β1表达更明显和范围更广 ;特别是在 3～ 7d肺泡腔和间质中出现大量的TGF β1强阳性的肺泡巨噬细胞 ,14～ 30d时在肺泡腔和间质中只有少量TGF β1阳性的肺泡巨噬细胞。提示TGF β1蛋白表达阳性的肺泡巨噬细胞在急性肺泡炎期明显增加 ,对肺纤维化的发生和发展可能起重要的作用     

TGF-βRI与Fascin1的相互作用

目的探讨TGF-βRI和Fascin1的相互作用。方法用免疫荧光证实TGF-βRI和Fascin1的共定位。用GST pull-down和Co-IP的方法验证TGF-βRI和Fascin1的相互作用及其相互作用的位点。结果 TGF-βRI和Fascin1能共定位。Fascin1与TGF-βRI相互作用,相互作用位点是Fascin1的氨基端和TGF-βRI的膜内区。结论 TGF-βRI与Fascin1存在相互作用,相互作用位点是Fascin1的氨基端和TGF-βRI膜内区。     

低氧诱导肺动脉内皮细胞转分化的初步机制研究

目的观察低氧培养下肺动脉内皮细胞转分化现象及转化生长因子β1（TGF-β1）对内皮细胞转分化的作用机制。方法通过组织贴壁法分离培养的肺动脉内皮细胞,分别在常氧（含21％O2、5％CO2、74％N2混合气体）和低氧（含1％O2、5％CO2、94％N2混合气体）条件下培养1、4、7d,检测细胞形态表型变化和TGF—β1表达水平。不同TGF—β1或其抑制剂SD-208刺激肺动脉内皮细胞,检测平滑肌细胞标准蛋白仅．平滑肌肌动蛋白（α—SMA）的表达,来判断肺动脉内皮细胞转分化情况。结果低氧培养铺路石样肺动脉内皮细胞逐步向α—SMA高表达的多角形细胞改变,且TGF-β1表达水平明显增高。TGF—β1能刺激肺动脉内皮细胞可出现αSMA表达的增加,SD-208可抑制上述改变。结论低氧可促进肺动脉内皮细胞向平滑肌样细胞转分化;TGF-β1在此讨稃中发挥重萼作用。