改良大鼠双侧颈总动脉结扎方式建立血管性痴呆模型的评价研究

目的:通过比较不同造模方法建立的血管性痴呆模型大鼠在学习记忆能力、术后死亡率、海马组织学检查等方面变化,探讨改良颈部小切口双侧颈总动脉永久性双重结扎血管性痴呆模型建立的可行性,为建立操作简单、死亡率低的血管性痴呆模型提供客观依据。方法:将经水迷宫筛选的36只雄性SD大鼠随机分为假手术组、小切口双重永久性结扎模型组及分期永久性结扎模型对照组,每组各12只。小切口双重永久性结扎模型组在麻醉下一次性结扎后剪断大鼠双侧颈总动脉;分期永久性结扎模型对照组在麻醉下先分离结扎大鼠一侧颈总动脉,1周后再次在麻醉下行另一侧颈总动脉结扎;假手术组操作基本同模型组,但分离颈总动脉后不予以结扎。在术后48h及30d内记录各组大鼠死亡率,30d后对各组大鼠行水迷宫测试检测大鼠学习记忆能力,水迷宫测试结束后处死大鼠,观察大鼠脑海马组织的形态学变化。结果:小切口双重永久性结扎模型组与分期永久性结扎模型对照组术后48h内死亡率比较无明显差异(P0.05),但前者大鼠死亡数量较后者少;术后30d内小切口双重永久性结扎模型组与对照组比较死亡率明显降低,差异有显著性意义(P0.05);两种模型组大鼠与假手术组比较,学习记忆能力明显下降,差异有显著性意义(P0.05),而两种模型组大鼠学习记忆能力比较,差异无显著性意义(P0.05);两种模型组大鼠大脑海马组织较假手术组大鼠均发生明显病理形态学改变。结论:小切口双重永久性结扎方法可以较好地复制大鼠大脑永久性慢性灌注不足引起的血管性痴呆模型,引起与记忆相关的大鼠脑海马组织损害;小切口双重永久性结扎方法与分期永久性结扎方法在造模效果上没有本质的区别,但大鼠的死亡率却显著性降低。     

血管性痴呆大鼠模型的改良

目的采用改良2-血管阻断法(2-VO)+硝普钠降压法制作血管性痴呆(VD)大鼠模型。方法夹闭双侧的颈总动脉20 min后,复灌10 min,连续3次,同时硝普钠降压。结果 2-VO+硝普钠降压法制作VD模型动物存活率高,海马神经元损伤明显,行为学异常。结论改良2VO+硝普钠降压法是制作大鼠血管性痴呆模型的理想方法之一。     

电针对血管性痴呆模型大鼠记忆能力的影响

摘要 目的：观察电针（EA）对血管性痴呆（VD）大鼠记忆能力的影响。 方法：将Wistar大鼠随机分为假手术组、模型组和电针组,每组8只。假手术组暴露双侧颈总动脉,但不结扎;模型组和电针组采用双侧颈总动脉永久性结扎法建立VD大鼠模型。三组大鼠均采用柔软型大鼠固定器固定。电针组选取百会、足三里穴,接通电流,1次/d,每次留针30min,连续治疗14d;模型组与假手术组只给予固定。治疗结束后采用新事物识别实验评估大鼠的记忆能力。 结果：与假手术组比较,模型组大鼠对新事物的探索指数（RI）、识别指数（DI）均降低,差异有显著性意义（P＜0.05）。与模型组比较,电针组大鼠对新事物的RI、DI均升高,差异有显著性意义（P＜0.05）。 结论：电针可有效改善VD模型大鼠记忆能力。     

康复训练对血管性痴呆大鼠学习记忆能力及海马区神经细胞黏附因子表达的影响

目的探讨康复训练对血管性痴呆(VD)大鼠学习记忆的功能恢复及海马区神经细胞黏附因子(NCAM)表达的影响。 方法选择SD雌性大鼠45只,随机分为康复组20只、制动组20只和假手术组5只,采用双侧颈总动脉反复缺血再灌注加降血压法制作VD大鼠模型。3组分别于术后第27,28天以水迷宫试验评价大鼠学习记忆能力,采用核糖核酸逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）法检测不同时间点海马区NCAM的表达。 结果水迷宫试验结果显示,康复组学习记忆能力优于制动组,康复组NCAM在海马区的表达在术后第1天达到高峰,在第7,14天时间点康复组较制动组和假手术组均有明显增加。 结论康复训练可改善VD大鼠空间学习记忆能力,其分子机制可能与其海马上NCAM的表达水平的增高有关。     

不同造模方法对血管性痴呆大鼠模型行为学的影响

目的:采用Morris水迷宫实验比较不同造模方法对血管性痴呆大鼠模型行为学表现的影响。方法:采用同时结扎并剪断双侧颈总动脉,只结扎不剪断双侧颈总动脉和反复夹闭一侧颈总动脉并结扎剪断、1周后反复夹闭结扎剪断另一侧颈总动脉3种方法复制大鼠血管性痴呆模型,Morris水迷宫图像自动采集和软件分析系统记录大鼠的逃避潜伏期和穿越平台次数。结果:在定位航行试验中,分别双侧缺血再灌注后结扎剪断组大鼠的逃避潜伏期比假手术组大鼠的逃避潜伏期长,结果比较有显著统计学差异,2组直接结扎、剪断双侧颈总动脉的大鼠与假手术组大鼠比较,差异不明显;造模成功率比较,缺血再灌注后结扎剪断组的成功率明显高于其他两个模型组。结论:双侧缺血再灌注后结扎剪断的造模方法可以作为血管性痴呆大鼠模型复制的一种相对理想的方法。     

老年期痴呆大鼠模型的制备及其神经行为学研究

目的制备老年期痴呆大鼠模型，并将其应用于老年期痴呆发病机制及其药物疗效方面的研究。方法选取雄性Wistar大鼠52只，将其随机分成5组，分别为双侧颈总动脉永久结扎（2VO）＋腹腔注射半乳糖模型组（共有2组，其处理顺序相反）、双侧颈总动脉永久结扎组、腹腔注射半乳糖组及正常对照组；采用Morris水迷宫行为学测试法比较各组大鼠学习和记忆功能间的差异。结果与正常对照组及颈总动脉结扎组大鼠比较，2VO后＋腹腔注射半乳糖模型组及半乳糖腹腔注射后＋2VO模型组大鼠均出现明显的学习、记忆功能减退现象，差异有统计学意义。结论联合采用双侧颈总动脉永久结扎及半乳糖腹腔注射方法制备的老年期痴呆大鼠模型能有效重现老年期痴呆患者的发病特点，可将其进一步应用于血管性痴呆、阿尔茨海默病及混合性痴呆等老年期痴呆疾病的基础研究中。     

电针对慢性脑缺血大鼠学习记忆及海马神经组织形态学的影响

目的 观察电针对慢性脑缺血大鼠学习记忆功能和海马神经组织形态学的影响。方法 雄性Sprague-Dawley( SD)大鼠120只,采用改良永久性结扎双侧颈总动脉法造成慢性脑缺血模型,将造模成功的104只分为模型组和电针组,每组52只,每组再分为术后第1,2,4,6周4个时间点,每个时间点13只。电针组采用电针治疗;利...     

康复训练对血管性痴呆大鼠学习记忆能力及海马区神经细胞黏附因子表达的影响

目的 探讨康复训练对血管性痴呆(VD)大鼠学习记忆的功能恢复及海马区神经细胞黏附因子(NCAM)表达的影响.方法 选择SD雌性大鼠45只,随机分为康复组20只、制动组20只和假手术组5只,采用双侧颈总动脉反复缺血再灌注加降血压法制作VD大鼠模型.3组分别于术后第27,28天以水迷宫试验评价大鼠学习记忆能力,采用核糖核酸逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测不同时间点海马区NCAM的表达.结果 水迷宫试验结果 显示,康复组学习记忆能力优于制动组,康复组NCAM在海马区的表达在术后第1天达到高峰,在第7,14天时间点康复组较制动组和假手术组均有明显增加.结论 康复训练可改善VD大鼠空间学习记忆能力,其分子机制可能与其海马上NCAM的表达水平的增高有关.     

康复训练对血管性痴呆大鼠学习记忆能力及海马区神经细胞黏附因子表达的影响

目的 探讨康复训练对血管性痴呆(VD)大鼠学习记忆的功能恢复及海马区神经细胞黏附因子(NCAM)表达的影响.方法 选择SD雌性大鼠45只,随机分为康复组20只、制动组20只和假手术组5只,采用双侧颈总动脉反复缺血再灌注加降血压法制作VD大鼠模型.3组分别于术后第27,28天以水迷宫试验评价大鼠学习记忆能力,采用核糖核酸逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测不同时间点海马区NCAM的表达.结果 水迷宫试验结果 显示,康复组学习记忆能力优于制动组,康复组NCAM在海马区的表达在术后第1天达到高峰,在第7,14天时间点康复组较制动组和假手术组均有明显增加.结论 康复训练可改善VD大鼠空间学习记忆能力,其分子机制可能与其海马上NCAM的表达水平的增高有关.     

康复训练对血管性痴呆大鼠学习记忆能力及海马区神经细胞黏附因子表达的影响

目的 探讨康复训练对血管性痴呆(VD)大鼠学习记忆的功能恢复及海马区神经细胞黏附因子(NCAM)表达的影响.方法 选择SD雌性大鼠45只,随机分为康复组20只、制动组20只和假手术组5只,采用双侧颈总动脉反复缺血再灌注加降血压法制作VD大鼠模型.3组分别于术后第27,28天以水迷宫试验评价大鼠学习记忆能力,采用核糖核酸逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测不同时间点海马区NCAM的表达.结果 水迷宫试验结果 显示,康复组学习记忆能力优于制动组,康复组NCAM在海马区的表达在术后第1天达到高峰,在第7,14天时间点康复组较制动组和假手术组均有明显增加.结论 康复训练可改善VD大鼠空间学习记忆能力,其分子机制可能与其海马上NCAM的表达水平的增高有关.     

西洛他唑对慢性脑缺血大鼠学习记忆能力的影响

目的观察慢性脑缺血致大鼠学习记忆功能及西洛他唑对其的影响。方法结扎大鼠双侧颈总动脉（2VO）建立慢性脑缺血模型。雄性Wistar大鼠随机分为假手术组、缺血组和西洛他唑组,每组又分为3、6、9周三个时间点;应用Morris水迷宫评定不同时期大鼠认知功能,通过HE染色观察神经细胞形态学改变。结果Morris水迷宫表明,各时间点西洛他唑组和假手术组大鼠游迷宫平均潜伏期均明显低于缺血组（P〈0.05）;HE染色显示假手术组和西洛他唑组皮层、海马CA1区神经元缺血性改变较缺血组改变轻,6、9周较3周给药组缺血改变明显。结论西洛他唑能改善慢性脑缺血大鼠的学习记忆能力,可能通过减轻神经元损伤作用改善慢性脑缺血大鼠学习记忆障碍。     

血管性痴呆大鼠海马突触结构参数的变化

目的观察血管性痴呆大鼠海马突触结构特点,探讨血管性痴呆学习记忆障碍的神经病理机制. 方法采用永久性结扎双侧颈总动脉的方法建立血管性痴呆动物模型,利用 Morris水迷宫和 Y型电迷宫检验大鼠的学习记忆能力,应用透射电镜和形态计量法分析血管性痴呆大鼠海马 Gray Ⅰ型突触结构参数的变化. 结果血管性痴呆大鼠海马 CA1区 Gray Ι型突触的体积密度、面积密度、比表面、面数密度、突触界面曲率、突触间隙宽度和突触后致密物厚度分别为 [0.051± 0.016,(0.298± 0.130) μ m2/m3,(5.884± 1.203) μ m2/m3,(3.285± 1.113)个 /85.05 μ m2,1.048± 0.060,(13.97± 0.386) nm和 (33.33± 0.86) nm],比假手术对照组 [分别为 0.088± 0.019,(0.712± 0.815) μ m2/m3,(9.020± 1.915) μ m2/m3,(6.330± 1.258) 个 /85.05 μ m2,1.103± 0.268,(25.40± 0.92) nm和 (47.73± 1.15) nm]减小,血管性痴呆大鼠与假手术对照组突触平均面积分别为 (1.573± 0.343) m2和 (1.202± 0.145) m2. 结论永久性结扎双侧颈总动脉使大鼠海马 CA1区 GrayΙ型突触数量减少和形态结构发生显著变化,导致学习记忆障碍.     

纳洛酮对血管性痴呆大鼠学习记忆能力和海马神经细胞内钙离子浓度的影响

背景:脑缺血时阿片受体发生变化并可导致痴呆,阿片受体拮抗剂纳洛酮对脑缺血时阿片受体变化起调控作用,故纳洛酮对血管性痴呆可能起预防作用。目的:研究阿片受体拮抗剂纳洛酮对血管性痴呆大鼠空间学习记忆减退的防治作用,探讨防治作用的神经机制。主要涉及海马神经细胞内钙离子浓度。设计:随机对照的实验研究。地点和对象:在汕头大学医学院清洁级实验动物饲养中心,30只雄性SpragueDawley大鼠。采用持久性结扎双侧颈总动脉方法制备血管性痴呆模型,随机分为假手术对照组、模型组和防治组。干预:防治组于术后即连续7d腹腔注射纳洛酮,其他两组腹腔注射等体积生理盐水。8周后用Morris水迷宫训练方法。主要观察指标:假手术对照组、模型组与防治组大鼠的隐匿平台逃避潜伏期,空间探索实验穿越平台次数,可见平台实验逃避潜伏期。三组钙离子荧光像素值。结果:假手术组和防治组与模型组的实验大鼠相比,其Morris水迷宫隐匿平台逃避潜伏期明显缩短犤假手术组为(7.80±4.70)s,防治组为(8.10±2.93)s,模型组为(21.26±17.41)s,F=15.028,P<0.01犦,前两者差异无显著性意义(P>0.05);空间探索实验穿越平台次数明显增加犤假手术组为(8.45±1.19)次/min,防治组为(8.00±1.17)次/min,模型组为(4.44±1.74)次/min,F=23.257,P<0.     

西洛他唑对慢性脑缺血大鼠皮层HIF-1α、HO-1影响

目的观察西洛他唑对慢性脑缺血大鼠皮层中低氧诱导因子-1α（HIF-1α）和HO-1表达的影响并探讨其发病机制。方法采用大鼠双侧颈总动脉永久性阻断法（2-VO）建立动物模型,Wistar大鼠随机分为假手术组、2-VO组和西洛他唑组,选取9周（n=10）时间点,应用Morris水迷宫实验测定大鼠的学习记忆能力,采用免疫组化法检测大鼠皮层HIF-1α和HO-I蛋白的表达。结果 2VO组和西洛他唑组大鼠逃避潜伏期和游泳路程均显著增加,但西洛他唑组大鼠的学习记忆成绩显著优于2VO组;2VO组和西洛他唑组大鼠皮层HIF-1α和HO-1的表达均较假手术组明显增高,但西洛他唑组两种蛋白的表达均较2VO组明显降低。结论西洛他唑可提高缺血脑组织细胞内氧浓度,改善学习记忆功能,对慢性脑缺血具有确切的保护作用。     

黄芪对新生鼠乏氧缺血脑损伤后海马区神经的保护及学习记忆能力的干预

背景:黄芪可通过减轻兴奋性氨基酸的释放及在细胞间的堆积、缓解Ca2 超载、抗氧化等途径抑制凋亡的发生。目的:将黄芪用于未成熟脑缺氧缺血脑损伤的治疗,一方面检测其对海马缺氧缺血后半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3mRNA表达水平的影响,另一方面通过迷宫实验观察黄芪对缺氧缺血脑损伤的成熟鼠学习记忆能力的干预。设计:随机对照实验。单位:东南大学临床医学院/附属中大医院儿科,基础医学院病理科。材料:实验于2002-10/2003-06在东南大学临床医学院实验中心完成。选取出生7d的同窝SD大鼠114只,随机分成3组:假手术组18只,模型组48只,黄芪治疗组48只。黄芪注射液由成都地奥九泓制药厂生产,规格为10mL/支,含生药20g。方法:模型组与黄芪治疗组建立缺氧缺血脑损伤模型,假手术组不造模。黄芪治疗组于造模后即刻及每天同一时间腹腔注射0.08mL黄芪注射液,7d后停药,模型组于同时间腹腔注射等量生理盐水,假手术组不给药。黄芪治疗组及模型组在缺氧缺血后24h,5d断头取脑,假手术组于假手术后24h断头取脑。各组海马区脑损伤行组织病理学检测,半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3mRNA的表达采用半定量反转录-聚合酶反应方法进行检查,成年90d龄的大鼠进行三等分迷宫测试其学习记忆能力,3个实验各自独立。主要观察指标:①各组海马区脑损伤组织病理学检测。②各组结扎侧海马半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3mRNA的表达。③三等分迷宫试验结果。结果:实验纳入大鼠114只,全部进入结果分析。①各组海马区脑损伤组织病理学检测:假手术组双侧海马区组织无水肿、坏死,神经细胞形态正常,神经细胞数为(87.7±0.6)×103/高倍视野。模型组24h时结扎侧海马区水肿,细胞周围间隙增宽,神经细胞数减少为(68.8±3.0)×103/高倍视野,与假手术组比较差异显著(P<0.01);5d时结扎侧海马体积缩小,锥状细胞层紊乱,神经细胞稀少至(48.7±2.2)×103/高倍视野,与假手术组及同侧24h时比较均有显著差异(P<0.01)。黄芪治疗组24h时结扎侧海马区组织水肿较模型组明显减轻,5d时可观察到完整的海马形态,此两时间点神经细胞死亡率均较模型组明显减低(P<0.01)。②各组结扎侧海马半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3mRNA的表达:假手术组以低水平表达,吸光度值为0.220±0.009。模型组于缺氧缺血后逐渐升高,6h时比假手术组升高11%,至24h时mRNA水平达高峰,较假手术组约升高260%(P<0.01),高峰持续至48h后下降,5d和7d时恢复基础水平。黄芪治疗组变化趋势与模型组相似,但在24,48h两时间点时峰值降低了44%～46%,与模型组比较差异显著(P<0.01)。③三等分迷宫试验结果:与模型组比较,黄芪治疗组达到学会标准所需训练次数明显减少犤(45.7±2.7),(16.1±2.5)次,P<0.01犦,缺氧缺血24h后记忆保持率显著提高犤(48.3±11.7),(80.0±9.0)%,P<0.01犦。结论:黄芪可以有效抑制未成熟脑缺氧缺血损伤后海马区神经细胞的凋亡,提高神经细胞存活率,此种保护作用与抑制半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3的表达有关。同时黄芪能够明显改善未成熟脑缺氧缺血损伤后的学习记忆能力。     

黄芪注射液对充血性心力衰竭患者细胞因子和血管紧张素Ⅱ的影响

目的:观察充血性心力衰竭患者细胞因子和神经内分泌激素的变化及黄芪注射液对其影响。方法:①选择1999-02/2000-01中山大学附属第二医院内科住院的心力衰竭患者49例,男31例,女18例,均对治疗方案知情同意。根据纽约心脏协会心功能分级标准,心功能Ⅱ级11例,Ⅲ级22例,Ⅳ级16例。随机将入选患者分为2组:常规治疗组24例和黄芪治疗组25例。选择同期本院门诊健康体检者20人为对照组,男12例,女8例。②常规治疗组采用西医常规治疗。黄芪组在常规治疗基础上给予黄芪注射液静脉滴注,40mL/d,疗程为15d。③采用双抗体夹心ELISA法测定血清肿瘤坏死因子α、白细胞介素6水平。采用放射免疫法测定血清血管紧张素Ⅱ水平。应用彩色心脏超声仪测定心功能指标左室射血分数。④计量资料组间比较采用t检验或单因素方差分析。两变量之间关系采用直线相关分析。结果:心力衰竭患者49例及健康者20人均进入结果分析。①血清肿瘤坏死因子α、白细胞介素6和血管紧张素Ⅱ水平:心力衰竭患者明显高于对照组(P<0.01),升高程度随心功能恶化而加重。常规治疗组和黄芪治疗组治疗后均较治疗前明显下降(P<0.05～0.01),以黄芪治疗组降低幅度更显著(P<0.05～0.01)。②左室射血分数:常规治疗组和黄芪治疗组治疗后均较治疗前升高(P<0.05,P<0.01),以黄芪治疗组升高幅度更显著(P<0.05)。③相关性分析结果:心力衰竭组肿瘤坏死因子α、白细胞介素6和血管紧张素Ⅱ与左室射血分数呈显著负相关(r=-0.63,-0.55,-0.77,P<0.01)。结论:①细胞因子和神经内分泌激素与心力衰竭的发生、发展有关。②黄芪注射液可能直接或间接降低血肿瘤坏死因子α、白细胞介素6和血管紧张素Ⅱ水平,有利于改善心功能。     

补阳还五汤对沙土鼠脑缺血再灌注损伤后血清炎性细胞因子IL-1β、ＩＬ-6、TNF-α的影响

目的:探讨补阳还五汤对脑缺血再灌注损伤后炎性细胞因子IL-1β、IL-6、TNF-α蛋白表达的影响。方法:采用Kirino蒙古沙土鼠双侧颈总动脉夹闭脑缺血模型,缺血15min后进行再灌注;于再灌注48h后,测定血清IL-1β、IL-6、TNF-α的含量。结果:补阳还五汤组的IL-1β、IL-6、TNF-α均含量明显低于模型组(P <0.01)和标准对照组(P <0.01),但补阳还五汤组和标准对照组均显著高于假手术组(P <0.01)。结论:补阳还五汤可拮抗脑缺血再灌注损伤后的炎性细胞因子,因而减轻脑缺血再灌注引起的损伤。     

骨髓基质细胞植入对脑缺血大鼠海马齿状回突触形成及记忆能力的影响

目的探讨骨髓基质细胞(BMSCs)经侧脑室植入脑缺血大鼠后海马齿状回突触形成及大鼠记忆能力的变化。方法大鼠BMSCs培养3 代。60 只新生Sprague-Dawley大鼠分为假手术组、模型组、细胞组各20 只,后两组结扎左侧颈总动脉,细胞组于7 d 后经侧脑室植入BMSCs。8 周后行Morris 水迷宫测试。测试后取脑组织,免疫组织化学染色检测海马齿状回处突触素表达。结果模型组探查训练(T1)和对位探查训练(T2)时间均较假手术组缩短(P<0.05);细胞组T1 和T2 分别较模型组延长(P<0.05)。模型组大鼠海马突触素阳性细胞积分光密度值(IOD)较假手术组减小(P<0.05),细胞组IOD较模型组增加(P<0.05)。结论BMSCs经侧脑室植入可促进脑缺血大鼠海马齿状回突触形成,并改善其记忆功能。     

慢性脑缺血痴呆大鼠神经细胞凋亡的研究

目的:探讨细胞凋亡在慢性脑缺血导致大鼠痴呆中的作用。方法:Wister大鼠100只,雌雄各半,体质量350～400g。结扎大鼠双侧颈总动脉制备慢性脑确血致痴呆大鼠(vasculardementia,VD)模型;应用脱氧尿嘧啶缺口末端标记法(TUNEL)染色、流式细胞术及琼脂糖凝胶电泳方法检测VD大鼠的脑神经细胞凋亡情况。结果:流式细胞术检查发现额叶、海马在双侧颈总动脉结扎1周时细胞凋亡率分别为8.18%,21.92%;纹状体区2周时细胞凋亡率最高为9.22%,均明显高于对照组的2.84%,3.72%,2.18%(P<0.01),以后均逐渐下降。脑缺血一两周时TUNEL染色及额叶、海马及尾状核神经细胞凋亡明显高于对照组,4周以后与对照组差别不明显。琼脂糖凝胶电泳未见典型的细胞凋亡“梯形条带”。结论:神经细胞凋亡在大鼠双侧颈总动脉结扎后早期明显,晚期无明显改变。