白藜芦醇诱导肺腺癌A549细胞凋亡的作用机制

目的探讨白藜芦醇(Res)对肺腺癌A549细胞凋亡的作用及其机制。方法常规培养肺腺癌A549细胞(购于中国科学院细胞生物学研究所)至对数生长期,加入不同浓度的Res(终浓度分别为3、10、30、60、100、200、300 mg/L),以Res 0 mg/L为对照组,采用噻唑蓝(MTT)比色法检测不同浓度的Res对A549细胞的吸光度值,计算细胞的生长抑制率;采用Annexin-Ⅴ/PI双染法检测Res对肺腺癌A549细胞凋亡的影响;采用逆转录酶-聚合酶联反应(RT-PCR)检测端粒酶mRNA和β-actin mRNA的相对活性。结果 MTT检测显示Res呈剂量依赖性抑制A549细胞增殖。与对照组比较,不同浓度(10、30、100 mg/L) Res可抑制A549细胞增殖; Annexin-Ⅴ/PI检测结果显示,与对照组比较,随着Res剂量(10、30、100 mg/L)的增加,A549细胞的凋亡数升高,差异有统计学意义(P <0. 05);与对照组比较,不同剂量Res(10、30、100 mg/L)诱导端粒酶mRNA相对含量明显下降,差异有统计学意义(P <0. 05)。结论 Res可诱导肺腺癌A549细胞凋亡,其机制可能与抑制端粒酶活性有关。     

胰岛素对肺腺癌A549细胞放疗增敏作用的研究

目的探讨胰岛素能否提高体外肺腺癌A549细胞的放疗敏感性。方法将胰岛素直接作用于体外培养的A549细胞，再将此细胞放于直线加速器下行X线照射，采用甲基噻唑基四唑（MTT）、流式细胞仪等检测肺腺癌A549细胞的凋亡情况。结果仅给予胰岛素作用该细胞时，MTT检测结果表明，给予胰岛素的细胞光密度（OD）值与未给予胰岛素的细胞OD值之间无明显差异（P〉0．05）。同时给予胰岛素及X线照射后，给予不同浓度胰岛素的细胞与未给予胰岛素的细胞相比凋亡率有差异（P〈0．05），其中4、8、16mU／mL浓度组有明显差异（P〈0．01）。结论不同浓度的胰岛素液并不会长时间地促进A549细胞的增殖，胰岛素可提高该肿瘤细胞的放疗敏感性，促进肿瘤细胞的凋亡，为胰岛素充当放疗增敏剂运用于临床治疗提供一定的理论依据。     

维甲酸联合低浓度化疗药物对肺腺癌A549细胞的作用

 目的：观察全反式维甲酸和低于临床用药浓度不同剂量的化疗药物吉西他滨、顺铂等及两者联合处理A549人肺腺癌细胞株,以了解不同药物、不同剂量及不同作用时间对A549细胞增殖、细胞周期的影响。方法：用MTT法测定不同药物组相对于对照组的A549细胞增殖抑制率,并用流式细胞学方法检测各药物组及对照组的细胞周期分布。结果：维甲酸联合应用低浓度的顺铂和吉西他滨可显著抑制A549细胞的增殖,随着化疗药物的浓度的增加,抑制率也一并增加,并在达到同样增殖抑制率的效果下降低顺铂和吉西他滨的药物浓度。结论：维甲酸与低浓度化疗药物联合应用有希望显著减少药物的剂量,降低化疗药物的毒性,增强疗效。     

RNA干扰介导ABCE1基因沉默对人肺腺癌A549细胞增殖的影响

目的ABCE1在人肺腺癌A549细胞增殖中的作用进行初步探讨。方法以人肺腺癌A549细胞系为研究对象,针对其ABCE1基因序列设计小干扰RNA片段,重组其短发夹状RNA（shRNA）表达载体,转染入细胞。用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）和免疫印迹（Western blot）方法分别检测转染后ABCE1的mRNA和蛋白的表达水平,MTT法检测增殖能力。结果RT-PCR和Western blot显示shRNA对ABCE1基因和蛋白水平均有显著的下调作用。人肺腺癌A549细胞的生长速度减慢。结论下调ABCE1基因后,A549细胞的增殖能力得到了明显的抑制,有可能成为临床治疗A549的靶点之一。     

阿糖胞苷对人肺腺癌细胞A549凋亡和脂质过氧化的影响

目的探讨阿糖胞苷（Ara-C）对人肺腺癌细胞A549凋亡和脂质过氧化的影响。方法采用四唑氮蓝（MTT）法测定不同浓度和时间阿糖胞苷对A549细胞的生长抑制作用;采用羟胺比色法对超氧化物歧化酶（SOD）活性进行测定,硫代巴比妥酸比色法进行丙二醛（MDA）含量测定,5.5-二硫代双（2-硝基苯甲酸）比色法进行还原性谷胱甘肽（GSH）含量、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）活力测定。吖啶橙（AO）/溴乙锭（EB）混合染色检测A549细胞凋亡。结果 Ara-C对A549细胞的增殖有明显抑制作用,并具有明显的时效和量效关系。随着干预剂量的增加,细胞内MDA含量水平逐渐升高,与对照组比较（P〈0.05,P〈0.01）;GSH含量,SOD、GSH-Px活性则逐渐下降,与对照组比较（P〈0.05,P〈0.01）;阿糖胞苷作用A549细胞后可以出现凋亡增高和形态学改变。结论阿糖胞苷对人肺腺癌A549细胞有生长抑制作用,并引起脂质过氧化水平改变,其机制可能与诱导A549细胞周期阻滞和凋亡有关。     

Survivin siRNA对肺癌A549细胞吉西他滨化疗敏感性的影响

目的：探讨SurvivinsiRNA对肺癌A549细胞吉西他滨化疗敏感性的影响。方法：肺癌A549细胞分为siRNA转染组、吉西他滨组、siRNA转染＋吉西他滨组和正常对照组;噻唑蓝比色法（MTT法）检测各组细胞增殖率的变化,流式细胞仪分析各组细胞的细胞周期和存活率。结果：SurvivinsiRNA＋吉西他滨组细胞的增殖率和存活率均明显低于siRNA转染组和吉西他滨组（P〈0．01）;且siRNA＋吉西他滨组与siRNA转染组、吉西他滨组比较,更高比率的A549细胞被阻滞于S期（P〈0．01）。结论：siRNA沉默Survivin表达,增加了肺癌A549细胞对吉西他滨的化疗敏感性。     

槲皮素对肺腺癌A549细胞生长的影响

目的 观察槲皮素对肺腺癌A549细胞生长及对hTERT基因表达的影响. 方法以台盼蓝拒染法计数肺腺癌细胞的生长抑制率,透射电镜和DNA Ladder实验了解A549细胞凋亡的发生;PCR-TRAP法检测端粒酶活性,实时RT-PCR检测hTERT mRNA表达.结果 台盼蓝拒染法计数显示槲皮素抑制肺腺癌A549细胞增殖的作用明显,且呈剂量和时间依赖性,槲皮素处理48 h后的IC50为22.5 μmol/L.DNA Ladder实验和透射电镜形态学检测显示出细胞凋亡的特征性变化,细胞呈现核固缩、染色质边集、凋亡小体形成等典型凋亡表现.经槲皮素处理后肺腺癌A549细胞hTERT mRNA表达降低,端粒酶活性受抑制. 结论槲皮素能抑制肺腺癌细胞的生长,呈时间、剂量依赖性,能诱导A549细胞凋亡,其抑制增生与诱导凋亡的机制可能与下调hTERT 基因表达,抑制端粒酶活性,破坏端粒稳定性有关.     

褪黑素联合顺铂对肺腺癌A549细胞生长的影响

目的:探讨褪黑素联合顺铂对肺腺癌A549细胞增殖的影响。方法:分别将不同浓度褪黑素(100、300、500、7001、000μmol/L)及顺铂(2.55、、10μg/mL)联合与肺腺癌A549细胞共培养48 h,MTT法检测细胞抑制率。结果:不同浓度顺铂(2.5、5、10μg/mL)与500μmol/L的褪黑素联合使用对肺腺癌细胞生长抑制率([71.25±5.01)%(、86.37±7.10)%(、97.63±8.65)%)]明显高于单独使用顺铂(P<0.05)。结论:褪黑素和顺铂均可抑制肺腺癌A549细胞增殖,二者联合可协同抑制肿瘤细胞增殖。     

中药对人肺腺癌A549细胞的作用及机制研究进展

[目的]综述近5年中药单体及中药复方对人肺腺癌A549细胞的作用及机制的研究进展。[方法]通过对Pubmed、Springer、Cnki、VIP及万方数据库检索近5年来国内外关于中药对人肺腺癌A549细胞作用及机制的研究文献,用表格直观地总结中药单体及中药复方对人肺腺癌A549细胞抗肿瘤作用及机制的研究结果。[结果]中药单体及中药复方的抗癌作用及机制主要包括:①通过影响PI3K/Akt/mTOM通路和MAPK/ERK通路等信号通路,调节Caspase、Bax及Bcl-2的表达水平来抑制A549细胞增殖并诱导其凋亡;②通过调节多种细胞周期蛋白(Cyclin B、Cyclin D、Cyclin E)进而激活细胞周期素依赖性蛋白激酶,最终使各期细胞发生周期阻滞;③通过影响MMPs通路和STAT3通路来抑制A549细胞的侵袭和转移;④降低耐药相关基因的转录表达来逆转A549/CDDP细胞的耐药性。[结论]中药单体及中药复方均对A549细胞表现出抗癌作用,研究结果为筛选新型抗肺癌靶向药物提供理论依据。     

Survivin反义核酸影响A549肺癌细胞增殖和凋亡的研究

目的 研究Survivin反义寡核苷酸对A549细胞增殖和凋亡的影响.方法 针对Survivin mRNA序列设计了反义寡核甘酸,转染A549细胞,PT-PCR检测细胞中survivin基因的mRNA含量;Western印迹显示Survivin蛋白水平;以MTT法检测细胞增殖,TUNEL法检测细胞凋亡.结果 Survivin反义寡核苷酸可明显降低A549细胞中survivin的mRNA和蛋白水平.MTT比色法结果说明人Survivin反义寡核苷酸抑制A549细胞增殖,抑制率远高于无义寡核苷酸组和空白对照组.TUNEL法检测结果显示,反义寡核苷酸还显著增强A549细胞对抗肿瘤药高三尖杉酯碱的敏感性,在较低高三尖杉酯碱浓度下,反义寡核苷酸转染细胞的凋亡率明显高于其它对照组.结论 sur-vivin反义寡核苷酸有望应用于肿瘤的辅助治疗之中.     

腺苷对人肺腺癌细胞A549增殖和细胞周期的影响

目的：探讨腺苷对人肺腺癌细胞株A549增殖和细胞周期的影响。方法：体外培养肺腺癌细胞株A549,采用RT-PCR方法检测腺苷受体mRNA在A549细胞中的表达情况。以0、1、10、100和1 000μmol/L的腺苷分别作用A549细胞24、48和72 h后,采用MTT方法检测细胞光密度值,分析不同时间、不同浓度的腺苷对A549细胞存活率的影响。以100μmol/L的腺苷作用A549细胞24 h,采用流式细胞术检测其细胞周期。对上述所得数据进行单因素方差分析和独立样本t检验。结果：四种腺苷受体A1、A2A、A2B和A3在A549细胞中均有表达。MTT结果显示,作用时间24 h,各腺苷处理组（1、10、100和1 000μmol/L）细胞存活率分别为91%、84%、80%、73%;作用时间48 h,各腺苷处理组细胞存活率分别为82%、69%、58%、55%;作用时间72 h,各腺苷处理组细胞存活率分别为86%、56%、52%、38%,表明腺苷对A549细胞具有生长抑制效应,抑制率随着腺苷浓度升高而增强。与对照组相比,100μmol/L腺苷作用于A549细胞24 h后,能增加G1期细胞比例（对照组：59.07±0.70;100μmol/L：65.05±0.62,t=-11.04,P〈0.01）,并减少G2期细胞比例（对照组：6.67±0.95;100μmol/L：1.29±0.43,t=8.89,P〈0.01）。结论：腺苷能够抑制人肺腺癌细胞A549的生长,并改变其细胞周期分布。     

奥沙利铂对人肺腺癌A549细胞增殖凋亡及Survivin和CyclinD1表达的影响

目的 研究奥沙利铂(oxaliplatin,L-OPH)对人肺腺癌A549细胞株的生长抑制作用和对Survivin、CyclinD1基因表达的影响,探讨奥沙利铂抑制肺癌细胞增殖的机制.方法 以不同浓度(0、7.81、15.63、31.25、62.50和125.00μg/mL)的奥沙利铂干预体外培养的肺腺癌细胞株A549,分别于24、48和72 h后,采用MTT方法检测细胞光密度值,分析A549细胞的增殖活性.采用流式细胞术检测其细胞周期变化.采用Hoechst33342染色方法在荧光显微镜下观察细胞形态变化.采用RT-PCR、Westem-blotting方法检测Survivin和CyclinD1的mRNA及蛋白的表达情况.结果 ①奥沙利铂能有效抑制A549细胞的增殖(P＜0.05),呈时间-剂量依赖性.②奥沙利铂能改变A549细胞的周期分布并诱导其凋亡(P＜0.05),呈时间-剂量依赖性.③奥沙利铂作用48 h后A549细胞Survivin、Cyclin D1基因及蛋白的表达明显低于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05),且该抑制效应呈浓度依赖性.结论 奥沙利铂可以抑制A549细胞株的增殖、改变其周期分布、诱导其凋亡,且呈一定的剂量-时间依赖性;其机制可能与奥沙利铂下调Survivin和Cyclin D1基因的表达有关.     

柴胡皂甙D对肺腺癌A549细胞的影响

目的 研究柴胡皂甙D对A549细胞的抑制柞用及机制.方法 绘制生长曲线观察柴胡皂甙D对A549细胞的抑制作用,TUNEL法检测凋亡,免疫组化测P53表达.结果 不同浓度的柴胡皂甙D对A549均有抑制作用,且呈时间,浓度依赖性,其P53表达并无差异.结论 SSD能诱导A549细胞的凋亡,从而抑制肺癌A549细胞的生长.     

补肾疏肝方对肺腺癌A549细胞的凋亡作用及其机制研究

目的 探讨补肾疏肝方对肺腺癌A549细胞的凋亡作用,对肿瘤坏死因子（TNF）-α分泌、Survivin及半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶（Caspase）-3 mRNA表达的影响。方法 将补肾疏肝方制成低剂量（1.25 g/ml）、中剂量（2.50 g/ml）和高剂量（3.75 g/ml）药液。以随机数字表法将大鼠分为对照组、低剂量组、中剂量组、高剂量组、顺铂（DDP）组、联合组（中剂量药液联合DDP）,每组10只。对照组于第1～5天给予0.9%氯化钠溶液4 ml/d灌胃;低剂量组、中剂量组、高剂量组于第1～5天给予相应剂量药液4 ml/d灌胃;DDP组分别于第1、3、5天腹腔注射2 ml DDP（20%）;联合组于第1～5天给予中剂量灌胃药液灌胃4 ml/d及第1、3、5天腹腔注射2 ml DDP（20%）。末次给药2 h后采血,分离血清。A549细胞分别加入各组血清,培养72 h,倒置荧光显微镜下观察细胞凋亡情况。A549细胞分别加入各组血清,培养24、48、72 h后,采用酶联免疫吸附法（ELISA）检测TNF-α水平。A549细胞与各组血清共培养72 h后,采用荧光定量PCR检测Survivin mRNA、Caspase-3 mRNA的相对表达量。结果 各组血清作用于A549细胞72 h后,凋亡细胞核固缩,且随药液浓度增加凋亡细胞增多。各组血清作用于A549细胞24、48、72 h后TNF-α分泌水平比较,差异均有统计学意义（P＜0.05）。其中,低剂量组、中剂量组、高剂量组、DDP组和联合组作用于A549细胞24、48、72 h后TNF-α分泌水平高于对照组,差异均有统计学意义（P＜0.05）。各组血清作用于A549细胞72 h后Survivin mRNA相对表达量比较,差异有统计学意义（F=13.238,P＜0.05）。其中,高剂量组、DDP组和联合组血清作用于A549细胞72 h后Survivin mRNA相对表达量低于对照组,差异有统计学意义（P＜0.05）。各组血清作用于A549细胞72 h后Caspase-3 mRNA相对表达量比较,差异有统计学意义（F=10.814,P＜0.05）。其中,中剂量组、高剂量组、DDP组和联合组血清作用于A549细胞72 h后Caspase-3 mRNA相对表达量高于对照组,差异有统计学意义（P＜0.05）。结论 补肾疏肝方可促进肺腺癌A549细胞凋亡,其机制可能与抑制Survivin基因表达、促进TNF-α分泌和Caspase-3基因表达有关。     

肺腺癌A549细胞中Nestin的表达

目的探讨nestin在肺腺癌A549细胞中的表达及意义.方法体外培养肺腺癌A549细胞株,用免疫组化检测肺癌标记物及nestin表达.结果四个肺癌标记物中鼠抗人p63蛋白,鼠抗人细胞角蛋白7,鼠抗人甲状腺转录因子染色阳性,nestin在肺腺癌A549细胞中部分细胞表达.结论肺癌细胞中存在部分神经干细胞的标记物nestin.     

A549肺腺癌始动细胞的富集和鉴定

目的利用紫杉醇联合无血清培养完成对A549肺腺癌始动细胞的富集并鉴定富集亚群的干细胞特性。方法对数生长期的A549细胞经胰酶消化,干细胞培养基重悬,得到成球状生长的细胞;传至第2代时加入紫杉醇作用48h,离心去除死细胞和紫杉醇,换新鲜干细胞培养基培养,至存活细胞恢复克隆生长后鉴定其干细胞相关特性。结果紫杉醇联合无血清培养方式成功从A549细胞中富集得到肿瘤干细胞,该群细胞高表达分化抗原簇蛋白133/人上皮细胞黏附分子(CD133/CD326),具有多向分化潜能、高表达干细胞相关基因及更强的致瘤能力,具备干细胞相关特性。结论紫杉醇联合无血清培养富集得到高表达CD133/CD326分子的细胞亚群,该亚群具备干细胞相关特性,可用于后续肺腺癌干细胞生物学特性的研究。     

CD44v3的表达对肺腺癌A549细胞侵袭行为的影响

目的 研究肺腺癌细胞A549的侵袭能力和黏附分子CD44v3的关系.方法 用pRNAT-H 1.1/Neo(6.1 kb)质粒构建一个能够稳定转录短发卡RNA(shRNA)并干扰CD44v3分子表达的表达载体,将其转染A549细胞,用荧光免疫组织细胞化学法和免疫印溃(Western Blot)检测A549细胞表达CD44v3的变化.用Boyden室和人工基底膜构建癌细胞的离体侵袭模型,计数并比较各实验组穿过人工基底膜的细胞的细胞数.结果 实验中发现肺腺癌细胞A549表达CD44v3分子,分子量为130 kd.质粒表达载体能够有效的干扰A549细胞表达CD44v3,在转染率为34%时,蛋白表达下降46%.癌细胞的离体侵袭模型中发现干扰组癌细胞侵袭能力为(4.0±1.22),空载对照组为(13.20±4.92),前者的癌细胞侵袭能力较后者下降70%,两者比较差异有显著性,P＜0.01.抗CD44v3单克隆抗体(阳性对照组)也可降低A549细胞的侵袭能力,干扰组和阳性对照组比较,两者差异无显著性,P＞0.05.结论 肺腺癌细胞A549表达CD44v3分子,用RNAi技术可降低其表达.CD44v3表达降低的A549细胞侵袭能力受到抑制.     

三七皂苷诱导人肺腺癌A549细胞凋亡作用

目的 探讨三七皂苷（panax notoginseng saponins,PNS）对人肺腺癌A549（hA549）细胞的致凋亡作用.方法 体外培养的hA549细胞,经不同浓度的PNS或联合应用磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）特异性抑制剂LY294002处理.采用MTT比色法检测肺腺癌A549细胞存活率,Hoechst33258荧光染色法检测其细胞形态学变化,流式细胞术检测细胞凋亡率,Western blot检测凋亡抑制基因Bcl-2、Bax和蛋白激酶B（Akt）蛋白的表达.结果 PNS能降低肺腺癌细胞的存活率,且其效应随剂量和作用时间的增加有增强的趋势;在PNS组可见细胞核出现固缩、边集和凋亡小体,并发现肺癌细胞凋亡率提高,细胞内Bax蛋白表达上调,Bcl-2、Akt蛋白表达下调.各浓度PNS组与空白对照组及溶剂对照组相比,差异均有统计学意义（P＜0.05）;PNS与LY294002联合应用则具有协同作用,可进一步促进肺癌细胞的凋亡及其细胞内的Bax蛋白表达上调和Bcl-2及Akt蛋白表达下调,与单用PNS组相比差异具有统计学意义（P＜0.05）.结论 PNS具有降低肺癌细胞存活率、诱导癌细胞凋亡的作用,并与PI3K特异性抑制剂LY294002具有协同作用,这可能与抑制PI3K/Akt信号通路、促进凋亡蛋白表达有关.