人肝癌中IGF—2表达与基因印迹异常调控的关系

研究人肝癌中ＩＧＦ－２表达特性及与其“基因印迹”状态变化的关系。方法采用Ｎｏｒｈｅｒｎｂｌｏｔ限制性片段长度多态性结合ＰＣＲ、ＲＰＡ等方法对１７例ＨＣＣ和６例ＨＣＣ细胞系进行了ＩＧＦ－２基因表达,启动子特异性等位基因的表达和ＩＧＦ－２“基因印迹”状态变化的研究。结果ＨＣＣ中ＩＧＦ－２表达的多样性（低表达,近似正常表达和过度表达）和胚胎性（启动子Ｐ３、Ｐ４重新活化和表达）;１例ＨＣＣ中ＩＧＦ－２双等     

RT-PCR结合RFL P技术分析胰岛素样生长因子-2基因的印迹丢失

目的　建立逆转录聚合酶链反应 (RT PCR)结合限制性片段长度多态性 (RFLP)技术 ,分析急、慢性髓性白血病的胰岛素样生长因子 2 (IGF 2 )基因的印迹丢失 (Lossofimprinting ,LOI)。 方法　利用IGF 2基因第 9外显子具有ApaⅠ酶多态性 ,首先进行PCR RFLP筛选杂合子信息个体 ;RT PCR RFLP结合银染技术分析杂合子信息个体IGF 2基因的LOI。结果　 2 6例AML患者中 11例为杂合子信息个体 ;其中 8例为双等位基因表达 ,即发生了LOI ;35例CML患者中 18例为杂合子信息个体 ,其中 8例为双等位基因表达。被检患者IGF 2基因第 9外显子ApaⅠ位点杂合子频率为 47 5 %(2 9/ 6 1)。结论　RT PCR RFLP能简便、快速、准确地检测IGF 2基因的LOI。     

人原发性肝癌胰岛素样生长因子2基因的印迹状态

目的研究人原发性肝癌中胰岛素样生长因子2(insulin like growth factor Ⅱ,IGF2)基因印迹状态,为进一步研究肝癌发生机理提供线索。方法用限制性片段长度多态性检测IGF2基因杂合状态,用逆转录-酶联聚合反应半定量检测IGF2基因在肝癌及癌旁组织中的表达,分析IGF2印迹状态、表达量与人原发性肝癌的关系。结果55．6％(10／18)的肝癌组织存在IGF2基因印迹的重新获得,与之相对的远癌组织有60％(6／10)也发生了IGF2基因印迹的重新获得。50％(9／18)的癌组织IGF2基因过度表达,但表达量与基因印迹的改变没有显著相关性。结论IGF2基因印迹的重新获得可能参与了肝癌的发生。     

人原发性肝癌胰岛素样生长因子2和H19基因印迹研究

目的 研究人原发性肝癌中胰岛素样生长因子2(insulin-like growth factor Ⅱ,IGF2)和H19基因的印迹状态,为进一步研究印迹调控机制打下基础.方法 采用聚合酶链反应-限制性片断长度多态性(PCR-RFLP)筛选IGF2和H19基因杂合标本,并用逆转录PCR-RFLP检测杂合标本IGF2和H19基因的印迹状态.结论 正常人肝组织中,IGF2呈双等位基因表达,H19呈单等位基因表达;47.1%(8/17)的肝癌标本中检测到IGF2基因的印迹获得,45.5%(5/10)的肝癌标本中检测到H19基因的印迹丢失;IGF2和H19的印迹改变没有相关性.结论 IGF2和H19的印迹异常与肝癌有关,成人肝组织中IGF2与H19的印迹调控可能相对独立.     

IGF2基因印迹丢失与消化道肿瘤的关系

肿瘤易感性由原癌基因和抑癌基因决定,癌基因的激活和抑癌基因的失活与肿瘤的发生密切相关.     

印迹基因胰岛素样生长因子-2在胎儿生长发育中的作用

基因组印迹是哺乳动物正常生长发育和行为的基础，一些遗传性疾病和肿瘤的形成与其异常表达相关。胰岛素样生长因子-2(IGF-2)是具有促进胎儿生长发育作用的印迹基因，通过调节胎盘营养转运控制胎儿生长。IGF-2过度表达与新生儿低血糖、巨舌内脏肥大、脐膨出综合征(BWS)相关，父系单亲二倍体、部分三体、印迹丢失是引起IGF-2过度表达的分子机制。辅助生育相关技术可能会引起表遗传改变，影响胎儿发育及未来的成长。     

α-内收蛋白基因及G蛋白β3亚单位基因多态与原发性高血压的关系

目的探讨α-内收蛋白（ADD1）基因G460W和G蛋白β3亚单位（GNB3）基因C825T多态与高血压的关系。方法 运用多聚酶链式反应-限制性内切酶片段长度多态分析方法（PCR-RFLP）对来自山东省青岛港的正常血压（495例）和高血压（256例）人群进行基因分型。结果 高血压组和对照组ADD1基因G460W和GNB3基因C825T多态型及等位基因频率分布均符合Hardy—Weinberg平衡。高血压患者中具有WW基因型个体的频率（35．2％）高于对照组（27．4％）,差异有统计学意义（X^2=4．768,P=0．029,OR=1．43）。在高血压组和对照组中GNB3基因CC、CT、TF基因型频率和C、T等位基因频率差异无统计学意义（基因型,P=0．755;等位基因,P：0．561）。结论 ADD1基因G460w多态可能是高血压的危险因素,460W等位基因可能与收缩压的增加有关,而GNB3基因C825T多态可能在高血压的发生中不起主要作用。     

N-乙酰基转移酶2基因多态性与大肠癌遗传易感性的相关性研究

目的：探讨N-乙酰基转移酶2（NAT2）基因多态性和大肠癌遗传易感性的关系。方法：采用PCR．RFLP方法调查NAT2基因多态性在大肠癌组和对照组的分布，对患者临床资料进行统计分析。结果：基因型WT／M2在大肠癌组明显高于对照组（Χ^2=10．22，P〈0．01）。快速型和慢速型在大肠癌组和对照组的分布差异无显着性（Χ^2=0．13，P〉0．05）。吸烟者在大肠癌组的出现频率显着高于对照组，Χ^2=5．42，P〈0．05。高吸烟指数者中，WT／M2基因型在大肠癌组的分布频率显着高于对照组，Χ^2=5．45，P〈0．05。患者中WT／M2基因型频率在≥60岁组高于〈60岁组，差异有显着性（Χ^2=4．69，P〈0．05），在病理类型、性别、淋巴结有无转移、肿瘤浸润广度等方面差异无显着性。结论：NAT2 WT／M2基因型可能是大肠癌发生的高危因素，该基因型的个体吸烟剂量大、高龄可能增加大肠癌发病风险。     

载脂蛋白E基因多态性与阿尔茨默病的关系探讨

目的 :探讨阿尔茨默病 (AD)患者的载脂蛋白E(ApoE)基因的分布 ,分析它们的相互关系。方法 :利用聚合酶链式反应 -限制性片段长度多态性 (PCR RFLP)技术对AD患者和相应健康对照的ApoE基因进行分型 ,从而进行AD与ApoE等位基因多态性的关联分析。结果 :AD病人ApoE等位基因ε4 占 2 0 .74% ,明显高于正常人对照组的 7.6 4% ,而ε3 则占 6 4.6 3% ,低于正常人对照组的 84.12 % ,均有极显著性差异 (P <0 .0 1)。结论 :ApoE等位基因中 ,ε4 可能为AD的易感因子 ,而ε3 则为保护因子。     

利用杆状病毒载体在家蚕幼虫中高效表达人胰岛素样生长因子-2(hIGF-2)

目的 :研制有生物活性的可溶性分泌型重组人胰岛素样生长因子 -2 (rh IGF-2 )。方法 :将 14 k Dh IGF -2前体 c DNA基因插入家蚕核型多角体病毒 (Bm NPV )转移载体 p Bak PAK8中 ,经与野生型病毒 DNA共转染家蚕细胞后 ,通过体内同源重组的方式获得重组病毒 Bm NPV/ IGF-2。以 Bm NPV/ IGF-2感染 5龄家蚕幼虫 ,分别在感染后 2 4,48,72 ,96,10 8,12 0 h提取家蚕血淋巴液 ,以 ELISA法测定不同时象家蚕血中 IGF-2浓度 ,采用 Western-blot分析鉴定 IGF -2免疫学活性 ,MTT法观察其对 NIH3 T3细胞增殖的影响。结果 :ELISA测定显示 ,Bm NPV/ IGF-2感染家蚕幼虫 96h后 IGF-2表达率最高 ,每毫升血淋巴中约含 IGF-2 14 μg,Western-blot分析发现表达产物在蚕体内被加工成 7.0 k D成熟 h IGF-2 ,并对 NIH3 T3细胞具有良好促增殖效应 ,其促细胞生长能力明显优于来源于 E.coli的 IGF-2标准品。结论 :本研究实现具有免疫学活性及生物学活性的rh IGF-2在家蚕杆状病毒表达系统的高效表达     

霍乱弧菌抑制子基因及间隔区(rstR-ig2)多态性研究

目的研究霍乱弧菌CTXφ基因组抑制子基因及间隔区（rstR-ig2）多态性。方法聚合酶链反应（PCR）及限制性片段长度多态性分析（PCR-RFLP）、型特异性引物PCR分型。结果霍乱弧菌（VC）01群古典型（CVC）5株均为class类型。VC01群埃尔托型（EVC）155株共分为4个类型：class、ET、class＋ET、class ＋newET,后2个类型为首次发现。不同地区分离的EVC均以ET类型为主,以class和class＋ET类型为辅。O139群VC82株共分为4个类型：ET、ET＋new O139、ET＋calc、ET＋calc＋newO139,后3个类型为首次发现;福建省分离的菌株以ET4-newO139类型为主,其它地区分离的均以ET类型为主。结论EVC和O139群VC的rstR-ig2基因均以ET类型为主．首次发现5种不同类型rstR-ig2基因共存的新类型。     

广东地区人群CYP2C9基因启动子区-1189C/T位点的多态性

目的:检测中国广东地区人群CYP2C9基因启动子区-1189C/T位点的多态性并调查其等位基因及基因型频率.方法:提取152例广东药学院新生外周血基因组DNA,PCR扩增含CYP2C9基因-1189C/T位点的DNA片段,用MboⅡ酶切PCR产物,通过聚丙烯酰胺凝胶电泳-银染判断基因型.结果:在检测的152例样本中,CYP2C9基因-1189C/T位点基因型:C/C 21例、C/T 82例、T/T 49例,其相应的频率分别为0.14、0.54、0.32,符合Hardy-Weinberg平衡;等位基因-1189C和-1189T的频率分别为0.41和0.59,与日本人群和西班牙人群相比,差异没有统计学意义.结论:本研究建立了一种基于PCR-RFLP的简单、快速、灵敏的检测CYP2C9基因-1189C/T位点多态性的方法;CYP2C9基因-1189C/T位点多态性在中国广东地区人群中极为常见,是一个较好的遗传标志.     

人VIGILIN参与调控肝癌细胞H19和IGF2印记基因表达的研究

目的 探讨人高密度脂蛋白结合蛋白基因(VIGILIN)是否参与肝癌细胞在细胞周期中印记基因H19和胰岛素样生长因子2(IGF2)表达的调控.方法 通过流式细胞术检测人肝癌细胞HepG2细胞周期选择周期点,采用RT-PCR、RNA干扰、实时荧光定量RT-PCR检测各周期点VIGILIN、H19、IGF2基因表达.结果 ① HepG2细胞周期约为20 h;其中0～9 h、20～28 h约为S期,9～20 h、28～39 h约为G2/M、G1期,并选定6 h、20 h、43 h、60 h,分别代表S期中期、G1～S期、S期中期和G1期末; ②细胞周期同步化后加入血清,刺激VIGILIN转录,上调VIGILIN的表达,从G2/M至G1期,逐渐增加,G1期末达高峰,S期逐渐减少;与之相反,H19的表达,在S期逐渐增加,在G2/MG1期逐渐减少,在S期中期达到高峰.而IGF2的表达也增加但没有明显的周期性.H19与VIGILIN mRNA表达呈负相关(r=-0.6941,P<0.05).③用VIGILIN shRNA(pSIREN-VIG shRNA)重组载体转染HepG2细胞48 h后,相对于3个对照组(未转染组, 脂质体转染组和转染pSIREN-GFP shRNA组), 实验组VIGILIN mRNA的表达受到明显抑制,此时,IGF2 mRNA表达增加30.13%,H19 mRNA表达减少12.08%.结论 VIGILIN和H19 mRNA表达与细胞周期有关;VIGILIN参与调控H19、IGF2印记基因的表达.     

构建RNA干扰真核表达载体抑制肝癌细胞IGF1R表达的研究

目的 构建胰岛素样生长因子-1受体(IGF1R)RNA干扰真核表达载体,探讨人肝癌细胞株MHCC-97H在IGF1R基因抑制前后黏附和侵袭能力的变化及相关信号分子的变化。方法 以pGCsi-U6-Neo-GFP为空白质粒载体,以IGF1R为靶基因,按GeneBank IGF1R基因核苷酸序列和Tusch1设计原则,选择5对2条互补的带发夹结构的核苷酸序列,连接到pGCsi-U6-Neo-GFP空载体中。转化大肠杆菌Stable3,扩增后提取质粒,进行酶切鉴定和测序分析。转染模型细胞（293T）,进行RT-PCR及Western blotting检测,筛选出沉默效果最好的质粒载体。用脂质体转染MHCC-97H肝癌细胞,G418筛选并建立IGF1R基因沉默的MHCC-97H肝癌细胞株。检测MHCC-97H细胞株黏附和侵袭能力及FAK蛋白的表达变化。结果 构建的IGF1R pGCsi-U6-Neo-GFP shRNA,经酶切和DNA测序证实与设计完全一致;RT-PCR及Western blotting检测发现IGF1R沉默效率达88%。MHCC-97H细胞IGF1R被沉默后黏附和侵袭能力下降,FAK蛋白表达下降。结论 IGF1R pGCsi-U6-Neo-GFP shRNA能够降低MHCC-97H细胞黏附和侵袭能力并抑制FAK蛋白的表达。     

IGF-2、IGF-1R在早期宫颈癌中的表达及临床意义

目的检测胰岛素样生长因子-2(IGF-2)及其受体IGF-1R在早期宫颈癌组织中的表达,评价IGF-2和IGF-1R的临床意义。方法应用免疫组织化学方法检测15例正常宫颈组织及50例Ⅰb-Ⅱa期宫颈癌患者宫颈组织中IGF-2、IGF-1R的表达,同时对IGF-2和IGF-1R表达与宫颈癌各临床病理参数之间的关系进行分析。结果宫颈癌组织中IGF-2和IGF-1R阳性率分别为74%、76%,均显著高于正常宫颈组织的13.33%、26.67%(p<0.001)。宫颈癌组织中IGF-2、IGF-1R两者表达密切相关(P<0.05)。IGF-2的表达在不同肿瘤分期中差异有显著性(P<0.05),IGF-2与IGF-1R的表达在有淋巴结转移组和无淋巴结转移组中差异有显著性(P<0.05)。结论IGF-2与IGF-1R的高表达与宫颈癌的发生、发展及侵袭转移有关     

2型糖尿病病人血IGF-1及IGFBP-3水平与微血管病变的关系

目的 :观察 2型糖尿病病人血中胰岛素样生长因子 - 1(IGF- 1)及胰岛素样生长因子结合蛋白 - 3(IGFBP-3)水平与糖尿病及微血管病变的关系。方法 :用 EL ISA法对 76例 2型糖尿病病人血中 IGF- 1及 IGFBP- 3浓度进行测定。结果 :2型糖尿病病人血 IGF- 1、IGFBP- 3水平显著低于正常人 (P均 <0 .0 1) ;糖尿病合并微血管病变组血 IGF- 1、IGFBP- 3水平显著高于无血管病变者 (P <0 .0 1,P <0 .0 5 ) ;血 IGF- 1与 IGFBP- 3水平呈正相关 (r=0 .6 93,P <0 .0 1) ;但是 IGF- 1与 FPG呈负相关 (r=- 0 .391,P <0 .0 5 ) ;IGFBP- 3与 Hb Alc呈负相关 (r=- 0 .40 1,P <0 .0 1)。结论 :2型糖尿病病人血中 IGF- 1及 IGFBP- 3水平降低。糖尿病合并微血管病变时 ,血 IGF- 1及IGFBP- 3水平升高。 IGF- 1及 IGFBP- 3可能参与了糖尿病微血管病变的发生和发展。     

胰岛素样生长因子基因在人淋巴细胞表达的探讨

目的探讨胰岛素样生长因子（ＩＧＦｓ）多肽、受体和结合蛋白在免疫调节和免疫发育中的意义。方法采用逆转录聚合酶链反应技术在ｍＲＮＡ水平观察正常成人和新生儿淋巴细胞静息和ＰＨＡ刺激不同时间ＩＧＦｓ及其受体,结合蛋白基因的表达。结果在静息和活化的成人和新生儿淋巴细胞均有ＩＧＦ－Ⅰ、ＩＧＦ－ⅠＲ、ＩＧＦ－ⅡＲ、ＩＧＦＢＰ－２、３、４、６基因表达,并随ＰＨＡ刺激时间的延长表达水平有所变化;ＩＧＦＢＰ－５ｍＲＮＡ在活化的淋巴细胞表达;ＩＧＦ－Ⅱ、ＩＧＦＢＰ－ⅠｍＲＮＡ仅在新生儿淋巴细胞检测到。结论ＩＧＦｓ可能通过参与淋巴细胞的增殖、分化,影响免疫系统的功能和免疫发育过程。     

人β-NGF基因在大肠杆菌中的表达

目的:为β-NGF的基因制药选择一种新方法。方法：直接从人血细胞基因组DNA中PCR扩增出β-NGF基因片段，将构建的重组体pBV220-β-NGF转化大肠杆菌DH5α，并将筛选的阳性克隆通过4212诱导表达。结果经限制酶酶切电泳和DNA测序证实，确为β-NGF全长序列(约380bp)；全菌经SDS-PAGE电泳显示表达了β-NGF蛋白。结论：成功克隆了β-NGF基因全长序列并在大肠杆菌中获稳定表达。