结肠特异性基因RELMβ的克隆及其真核表达载体构建

目的:观察克隆小鼠结肠特异性基因RELMβ,并构建其真核表达载体.方法:采用Western blot、Northern blot方法检测RELMβ基因在小鼠不同脏器中的表达;从小鼠结肠组织中提取总RNA,采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)扩增RELMβ全长cDNA,克隆至T载体后进行核酸序列分析,并将其正向插入到真核表达载体pcDNA3.1/Zeo( )的限制性内切酶位点EcoR I:重组子在阳离子脂质体Lipofectamine 2000的介导下瞬时转染小鼠胚胎纤维母细胞NIH/3T3、结肠癌细胞系CT26,Western blot及RT-PCR法检测细胞RELMβ表达水平.结果:RELMβmRNA和蛋白特异表达于小鼠结肠,而其他脏器未见表达.成功克隆了小鼠RELMβ全长cDNA(318 bp),与已报道序列的同源性高达99%,获得GenBank登录号DQ157777.真核表达载体pcDNA3.1-RELMβ转染细胞后,细胞内RELMβmRNA和蛋白水平均显著增高(P<0.01).结论:从小鼠结肠组织中克隆出RELMβ特异性表达基因,为深入研究RELMβ基因的生物学作用及其在结肠疾病靶向治疗中的作用奠定了基础.     

抵抗素样分子β与炎症反应

目的 RELMβ(Resistin-like molecule beta)又称为FIZZ2(found in inflammatory zone 2),是近年来发现的参与多种慢性炎性疾病的炎症因子,在炎症反应上游及下游均发挥了重要作用。目前关于RELMβ与呼吸系统及胃肠道相关疾病的研究报道较多,且在其他疾病中的作用也陆续见诸报道,RELMβ已成为研究的热点,具有广阔的研究前景。本文就RELMβ的生理作用和其在炎症反应中的作用机制进行综述,旨为今后研究提供参考。     

RELMβ、JAM-A、Kif2c蛋白表达水平与非小细胞肺癌患者病理分期的相关性研究

目的探讨RELMβ、JAM-A、Kif2c蛋白表达水平与非小细胞肺癌(NSCLC)患者病理分期的相关性。方法选取2014年10月-2017年7月我院92例NSCLC患者,术中切取NSCLC病灶组织设为研究组,另切取周边正常组织设为对照组,测定RELMβ、JAM-A、Kif2c蛋白表达水平。统计对比两组及不同病理分期NSCLC患者RELMβ、JAM-A、Kif2c蛋白表达水平,并分析RELMβ、JAM-A、Kif2c蛋白表达水平与NSCLC病理分期相关性。结果研究组RELMβ、JAM-A、Kif2c蛋白表达水平较对照组高,差异均有统计学意义(P0.05);Ⅰ期、Ⅱ期、Ⅲ期、Ⅳ期NSCLC患者RELMβ、JAM-A、Kif2c蛋白表达水平比较,差异均有统计学意义(P0.05);Spearman检验证实RELMβ、JAM-A、Kif2c蛋白表达水平与NSCLC病理分期均存在明显正相关关系(P0.05)。结论 NSCLC患者RELMβ、JAM-A、Kif2c蛋白表达水平异常增高,且其与疾病病理分期存在正相关关系,可通过检测其表达水平对NSCLC进行疾病诊断及病理分期评估。     

高糖诱导下人肾小球系膜细胞抵抗素样分子β表达变化及西格列汀干预作用的研究

目的探讨高糖培养条件下人肾小球系膜细胞(HMC)、α平滑肌激动蛋白(α-SMA)、抵抗素样分子β(RELMβ)蛋白表达的变化及西格列汀的干预作用。方法体外培养HMC,观察24、48、72h,检测细胞上清液RELMβ含量。根据HMC培养条件不同分为对照(Con)组、高糖(HG)组[选择最佳高糖浓度(C)]、HG+西格列汀(Sit)干预组(西格列汀终浓度分别为0.1、1、10μmol/L),培养时间选择最佳时间点(T),检测HMCα-SMA及RELMβ蛋白的表达。结果与Con组比较,D-葡萄糖呈浓度依赖方式促进RELMβ的产生(P0.05);高浓度D-葡萄糖作用24、48、72h均引起RELMβ升高(P0.05),48h达高峰(P0.05),72h有所下降;故选择最佳时间点(T)为48h,最佳高糖浓度(C)为30mmol/L。与Con组比较,高糖(30mmol/L)作用48h能上调HMCα-SMA、RELMβ蛋白的表达[(16.333±0.653)vs(3.270±0.166),(62.996±1.086)vs(207.263±1.237),P0.05],而加入西格列汀(1、10μmol/L)干预能抑制HMCα-SMA、RELMβ蛋白表达,且10μmol/L西格列汀抑制作用更强[(6.447±0.468)vs(2.993±0.303),(104.859±1.301)vs(82.435±1.174),P0.05)]。结论高糖能诱导HMC RELMβ、α-SMA蛋白表达,而西格列汀可能通过减少HMC RELMβ蛋白的产生,下调HMCα-SMA蛋白表达,起到肾脏保护作用。     

2型糖尿病合并结肠癌老年患者肿瘤组织中晚期糖基化终产物受体及转化生长因子-β1的表达及临床意义

目的探讨2型糖尿病合并结肠癌老年患者肿瘤组织中晚期糖基化终产物受体(RAGE)及转化生长因子(TGF)-β1的表达及临床意义。方法 120例结肠肿瘤老年患者,分为糖尿病合并结肠癌组、结肠癌组及结肠腺瘤组,每组40例。采用免疫组化法检测结肠病理组织标本中RAGE及TGF-β1表达水平,并对患者至少随访2年,分析RAGE及TGF-β1表达与临床参数的相关性及对生存期的影响。结果 RAGE及TGF-β1表达在三组中差异具有统计学意义(P0.05),糖尿病合并结肠癌组RAGE及TGF-β1阳性率与结肠癌组及结肠腺瘤组相比差异均具有统计学意义(P0.05)。RAGE及TGF-β1的表达在80例结肠癌组织标本中存在正相关关系(r=0.341,P=0.002)。RAGE、TGF-β1表达与结肠癌分化程度低,淋巴结转移阳性,临床分期(Duke分期)C期以上,细胞免疫功能低下(外周血T细胞总数及CD4~+T细胞减少),患者发生远处转移及生存期较短有关(P0.05)。Kaplan-Meier生存曲线分析表明RAGE及TGF-β1表达阳性率越高,患者中位生存期越短(P0.05)。结论 RAGE及TGF-β1在结肠癌组织中的表达与患糖尿病有关,且能够促进结肠癌的发生、发展及转移,可能是治疗结肠癌的重要靶点。     

结肠癌组织中BRMS1的表达及临床意义

目的 探讨BRMS1在结肠癌发生发展中的作用.方法 采用免疫组织化学方法检测98份结肠癌组织及癌旁正常结肠组织(距肿瘤＞5 cm)BRMS1蛋白表达,分析其与结肠癌临床病理参数的相关性.结果 结肠癌组织BRMS1阳性率显著低于癌旁正常结肠组织(P＜0.01);结肠癌组织中BRMS1表达与肿瘤浸润深度、淋巴结转移及临床分期密切相关,而与性别、年龄、肿块的大小和分化程度无关(P＜0.01).结论 BRMS1蛋白在结肠癌中表达降低与结肠癌的侵袭转移密切相关,检测BRMS1表达有助于判断结肠癌的侵袭转移情况及预后.     

蛋白酶活化受体-4在结肠癌组织中的表达及意义

目的探讨蛋白酶活化受体-4（PAR-4）在结肠癌发生、发展中的作用。方法采用Real-time RNA法检测28份结肠癌组织及其相应癌旁组织中PAR-4表达,并采用2-ΔΔCt方法进行比较。结果 PAR-4在结肠癌组织中表达量明显增高,平均高出癌旁组织4.03倍;两者ΔCt比较,P〈0.05;低分化结肠癌组织PAR-4表达量明显高于高分化及中分化组织（P〈0.05）;高分化与中分化组织PAR-4表达无显著差异。结论 PAR-4在结肠癌组织中尤其是低分化组织中呈高表达;PAR-4可促进结肠癌的发生及发展。     

PUMA蛋白在结肠癌组织中的表达及其临床意义

目的检测PUMA蛋白在结肠癌组织和癌旁正常组织中的表达水平,从而探讨其在结肠癌发生、发展中的作用及其临床意义。方法针对40例结肠癌组织标本及30例癌旁正常组织标本,通过免疫组化方法对其PUMA蛋白的表达进行测定。结果 PUMA蛋白在结肠癌组织中的表达阳性率为22.5%（9/40）,在癌旁正常结肠组织中表达阳性率为66.7%（20/30）,PUMA蛋白的表达与结肠癌临床病理分期、肿瘤病理分化程度、是否伴有淋巴结转移有关。结论 PUMA蛋白在结肠癌的发生、发展中起重要作用,可能成为结肠癌的分子标记物或结肠癌治疗的新分子靶点。     

结肠癌组织中ALDH1的表达及临床意义

目的探讨结肠癌组织中乙醛脱氢酶1(Aldehyde Dehydrogenase 1,ALDH1)的表达及其与结肠癌发生、发展和转移的关系。方法选取哈尔滨医科大学附属第二医院2013年8月-2014年5月结肠癌标本78例,采用免疫组织化学(IHC)方法检测ALDH1的表达,分析其表达水平与临床病理参数之间的关系。结果结肠癌组织中ALDH1表达水平与癌细胞分化程度、淋巴结转移及临床分期显著相关(P0.05),而与性别、年龄、肿瘤大小、肿瘤部位、浸润深度、Dukes分期无明显相关(P0.05)。结论 ALDH1在结肠癌组织中有一定高表达率,其高表达与结肠癌发生、发展和转移密切相关。     

转化生长因子β1和Smad4在老年结肠癌中的表达

目的 探讨转化生长因子(TGF)-β 1.和Smad4与老年结肠癌发生发展的关系.方法 采用免疫组化和分子原位杂交的方法 ,对98例老年结肠癌,40例结肠炎和34例正常结肠黏膜的TGF-β1蛋白和Smad4 mRNA表达进行检测.结果 结肠癌组织中TGF-β1蛋白表达明显增强,其阳性率(79.2%)明显高于正常结肠黏膜组(35.2%)及结肠炎组(40.0%);Smad4 mRNA表达则明显降低,其阳性率(56.1%)明显低于结肠黏膜组(95.1%)及结肠炎组(850%)(均P＜0.01),结肠癌侵及越深,TGF-β1蛋白的阳性率越高,Smad4 mRNA阳性率越低.结论 TGF-β1蛋白的高表达和Smad4 mRNA的低表达,对细胞的恶性转化及增殖有一定的生物学意义.     

Mina53在结肠癌组织中的表达意义及与肿瘤增殖的关系

目的:研究Mina53在结肠癌中的表达及与各临床病理特征和肿瘤增殖活性的关系.方法:运用实时定量PCR分别检测51例结肠癌、19例结肠腺瘤和20例正常结肠组织Mina53mRNA的表达,及结肠癌组织中Ki67mRNA的表达.结果:结肠癌、结肠腺瘤和正常结肠组织中Mina53mRNA的表达水平分别为1.369±0.874、0.453±0.233、0.347±0.128,结肠癌组织Mina53mRNA的表达明显高于结肠腺瘤及正常结肠组织;而与肿瘤的组织分化程度、临床分期、远处转移和淋巴结转移均相关(均P<0.05);结肠癌中Ki67mRNA表达水平为1.117±0.805,通过相关分析Mina53mRNA的表达与Ki67mRNA呈正相关(r=0.727,P<0.01).结论:Mina53在结肠癌中高表达,其表达与肿瘤的增殖活性相关,在结肠癌发生发展中Mina53可能起着重要作用.     

星形细胞上调基因-1和p53在结肠癌中的表达及临床意义

目的 通过检测结肠癌组织中星形细胞上调基因-1（AEG-1）和p53的表达,探讨其与临床病理特征的关系.方法 采用免疫组化法检测63例结肠癌和30例癌旁正常组织中AEG-1和p53的蛋白表达,并分析其与结肠癌临床病理特征之间的关系.结果 结肠癌组织中AEG-1和p53阳性表达率分别为68.3％（43/63）和61.9％（39/63）,正常结肠组织阳性表达率分别为26.7％（8/30）和0.00％（0/30）.AEG-1和p53在癌组织中的表达均高于正常结肠组织（P＜0.05）.AEG-1的表达与结肠癌组织分化程度、TNM分期呈正相关,与患者性别、年龄及肿瘤大小无相关性.结论 AEG-1在结肠癌中表达增强,其异常表达与结肠癌的发生、发展相关.     

不可逆电穿孔对不同分化结肠癌细胞杀伤作用的实验研究

目的 通过体外模型研究不可逆电穿孔(IRE)对不同分化程度结肠癌细胞株增殖的抑制效果及作用机理,考察IRE对抑制消化道肿瘤生长的有效性.方法 脉冲发生装置设置不同电击参数,对不同分化程度的结肠癌细胞HCT116(低分化)、SW480和SW620(中分化)、LoVo(高分化)进行电击,24 h后通过MTT细胞增殖实验检测...     

结肠癌中DCC基因启动子甲基化及其临床意义

目的探讨DCC基因启动子甲基化在结肠癌发生发展过程中的作用及其临床意义。方法采用RT-PCR方法检测DCC基因表达,用甲基化特异性PCR(MSP)方法检测DCC基因启动子甲基化。结果在结直肠癌组织中DCC基因甲基化启动子甲基化频率与浸润深度无关(P0.05);而与肿瘤组织分化程度、临床分期密切相关(P0.05)。DCC基因启动子甲基化频率在低或未分化组、C、D期组均高于其对应的高或中分化组和A、B期组(P0.05)。结论 DCC基因启动子甲基化和DCC蛋白表达在正常组织,结肠癌的癌旁组织和原发癌灶间存在显著的差异,可能与结肠癌的发生发展有关,可作为判断结直肠癌生物学行为的一个指标。     

抵抗素样分子β在肠上皮化生型Barrett食管中的诊断价值

Barrett食管(Barrett's esophagus,BE)是一种镜下活检可见的食管黏膜肠上皮化生病变.抵抗素样分子β(resistin-like molecule beta.RELMβ)是一种新近发现的杯状细胞特异性蛋白[1].     

ASPP1蛋白抗体制备及ASPP1在结肠癌组织中的表达

目的 制备ASPP1多克隆抗体,研究ASPP1在结肠癌组织中的表达,探讨其表达与结肠癌的组织分化程度、浸润深度、淋巴结转移的关系,阐明ASPP1在结肠癌中的作用.方法 根据生物信息学软件分析人ASPP1蛋白的二级结构、亲水性、疏水性和抗原性等理化性质,经同源性检索,综合考虑抗体设计的其他因素,设计一段多肽,制备多克隆抗体.利用ELISA、Western印迹、免疫组织化学方法测定其效价和特异性.应用免疫组化SP法检测30例结肠癌组织及15例正常结肠组织中的ASPP1表达,判定ASPP1表达与结肠癌的组织分化程度、浸润深度、淋巴结转移等临床病理学特征的关系.结果 成功分析预测ASPP1的抗原性；制备了抗人ASPP1多克隆抗体；利用ELISA、Western印迹和免疫组织化学染色方法证实此抗体效价较高,特异性较强.ASPP1在癌组织的高、中、低分化程度上的表达表现为分化程度越低,其表达越弱.在浸润深度及有无淋巴结转移中的表达无显著性差异,在结肠癌与正常结肠组织中比较无显著性差异(P＞0.05).结论 利用生物信息学软件较好地预测出人ASPP1的抗原性,并成功制备了较高特异性的人ASPP1多克隆抗体.ASPP1的表达异常与结肠癌进展有关,其表达的失调在结肠癌的预后中发挥重要作用.     

缺氧诱导丝裂原因子的研究进展

缺氧诱导丝裂原因子（hypoxia—inducedmitogen—icfactor,HIMF）,又称为发现于炎症区域1（foundininflammatoryzone1,FIIZ1）或抵抗素样分子α（resistin．1ikemoleculeαRELMα）,是近年来从缺氧的小鼠肺组织中分离出的一种分泌蛋白,具有肺组织特异性表达特点,与新近从人类缺氧肺组织中发现的具有丝裂原活性的抵抗素样分子β（resistin—likemoleculeβ,RELMβ）高度同源。     

β-catenin和维生素D受体在结肠癌中表达的意义

目的:分析β-catenin和维生素D受体(vitamin D receptor,VDR)在结肠癌中表达的意义.方法:通过免疫组织化学法检测65例结肠腺癌组织和癌旁组织(距肿瘤边缘5 cm)标本中β-catenin和VDR的表达情况,探讨了β-catenin和VDR在结肠癌中表达的意义.结果:β-catenin的膜表达缺失,异位表达在结肠癌和癌旁组织中(P0.01);VDR的强阳性表达在结肠癌和癌旁组织(P0.01);β-catenin的异常表达与VDR的表达在结肠癌组织中表达呈正相关(r=0.98,P0.01),并被发现与肿瘤的淋巴结转移和浆膜浸润有关.结论:VDR表达的降低使得维生素D与VDR的复合物减少,可能使得β-catenin改变,激活Wnt通路,在多种因素作用下导致结肠癌的发生;VDR和β-catenin的异常表达的检测对结肠癌的诊断和预后判断有提示意义.     

结肠癌P16与bax基因检测的临床意义

结肠癌是我国最常见的恶性肿瘤之一 ,其发病率逐年升高。结肠癌的发病机制目前尚未完全清楚。本研究通过检测 64例结肠癌标本的抑癌基因 P1 6与凋亡相关基因 bax的表达 ,探讨其与结肠癌临床病理特征的关系及其在结肠癌发生发展中的作用。现报告如下临床资料 :64例标本来自山东省立医院 1996年～ 1998年手术治疗的结肠癌患者 ,男 3 7例 ,女 2 7例 ;年龄 16～ 76岁 ,平均 5 5 .8岁。其中高分化的腺癌 3 8例 ,低分化的腺癌 2 6例 ;属Dukes A和 B期者 3 5例 ,Dukes C和 D期者 2 9例。术后化疗药物主要为 5 -氟尿嘧啶和丝裂霉素。其中 5 5例 (…