高效液相色谱定量分析比较4种虫草药材的核苷类成分

为比较4种常见虫草类药材(冬虫夏草、蛹虫草、虫草菌丝体和蝉花)中核苷类成分的差异,该研究以0.5%磷酸溶液提取样本,色谱柱为Zorbax SB-Aq(4.6 mm×150 mm,5μm),流动相为0.04 mol·L-1磷酸二氢钾溶液(A)和乙腈(B),梯度洗脱,流速为0.8 m L·min-1,检测波长260 nm,柱温30℃,对4类药材产品进行分析。已知核苷以外标一点法进行计算,未知成分以腺苷为对照进行计算,并对测定结果进行聚类分析,同时利用指纹图谱相似度软件对不同样本进行了比较。结果显示,冬虫夏草、蛹虫草、虫草菌丝体、蝉花4种药材中的核苷类成分差异较大,聚类分析和指纹图谱分析均可有效区分冬虫夏草和其他3种虫草药材。该研究建立的核苷测定方法准确可靠,可用于虫草类产品的品质评价。     

虫草类产品中5种核苷类成分的测定及蛹虫草质量分析

目的建立HPLC法对4种常见虫草类样本[蛹虫草、发酵虫草菌粉(Cs-4)、中华被毛孢和冬虫夏草]中尿苷、鸟苷、腺苷、虫草素和N6-(2-羟乙基)-腺苷5种核苷类成分进行含量测定,比较成分差异,确定蛹虫草的特征成分,为控制蛹虫草及其提取物的质量提供科学依据。方法采用岛津ODS-3 C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为乙腈-水进行梯度洗脱,体积流量为0.8 mL/min,检测波长为260 nm,柱温为30℃。结果蛹虫草样品均含有尿苷、鸟苷、腺苷、虫草素和N6-(2-羟乙基)-腺苷,而CS-4、中华被毛孢和冬虫夏草中未检测到虫草素和N6-(2-羟乙基)-腺苷。供试品制备方法对核苷类成分的影响较大,蛹虫草粉采用6种方法制备供试品溶液,发现用水超声提取180 min获得的尿苷、鸟苷和腺苷的含量最高,且在24 h内稳定。虫草素性质稳定,而N6-(2-羟乙基)-腺苷对热和酸都不太稳定;其中4种制备方法测得的虫草素和N6-(2-羟乙基)-腺苷含量一致。结论为蛹虫草及其提取物的质量分析提供了依据,以特征成分虫草素和N6-(2-羟乙基)-腺苷为指标可更好地对蛹虫草及其提取物的质量进行控制。     

何首乌中核苷类成分QTRAP UPLC-MS/MS分析

目的:建立同时测定何首乌中10种核苷类成分的QTRAP UPLC-MS/MS分析方法,分析比较生何首乌和制何首乌中核苷类成分的差异。方法:采用QTRAP UPLC-MS/MS技术,Waters Atlantis T3色谱柱(2.1 mm×150 mm,3μm),流动相甲醇-5 mmol·L-1乙酸铵(含0.1%冰乙酸),0.4 m L·min-1梯度洗脱,采用正离子多反应监测模式测定何首乌商品药材中10种核苷类成分的含量。结果:10种核苷类成分具有良好的线性关系,相关系数均0.99;何首乌商品药材中核苷类成分尿苷、腺嘌呤、鸟苷、胞苷含量均较高;生何首乌与制何首乌中核苷类成分含量差异明显。结论:该方法简便、灵敏、准确。该研究为何首乌药材内在质量的评价和控制提供可靠的检测方法。     

九州虫草中核苷类成分的HPLC法测定

虫草属[Cordyceps （Fr．） Link]真菌是一大类昆虫病原真菌，迄今记载的已有360多种，在我国分布的有70多种。冬虫夏草为我国传统的名贵药材，具有很好的强壮滋补功效和多种医疗保健作用。由于其生长环境独特，加之人们盲目挖采，资源已临近枯竭。因此寻找冬虫夏草的替代品以满足市场需求已刻不容缓。     

北虫草中核苷类成分的含量测定与质量评价

目的 建立北虫草中尿苷、腺嘌呤、腺苷、虫草素4种核苷类成分的含量测定方法,确定其含量测定指标成分及其限量标准.方法 Agilent TC-C 18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),甲醇-水为流动相梯度洗脱,柱温30℃,流速1.0 mL/min;检测波长260 nm,进样量20 μL.结果 线性关系良好,精密度高,重现性好,回收率均在95.39％～103.3％;不同产地的北虫草中各核苷类成分含量变异较大.结论 该方法简便、灵敏、准确、重现性好,适用于北虫草中核苷类成分的含量测定;建议以腺苷和虫草素作为北虫草中核苷类成分的含量测定指标成分,其含量限量分别为不低于0.07％、0.27％.     

基于HILIC-UPLC-MS/MS测定酸枣仁核苷及碱基类成分

目的:建立HILIC模式超高效液相色谱串联三重四级杆质谱法(HILIC-UPLC-MS/MS)同时测定酸枣仁中11种核苷及碱基类成分的含量。方法:采用Acquity UPLC BEH Amide色谱柱(2.1 mm×100 mm,1.7μm),配有Amide 1.7μm Van Guard保护柱,以10 mmol·L-1乙酸铵-0.8%乙酸水(A)和0.1%乙酸-乙腈(B)为流动相,梯度洗脱(0~5 min,10%A;5~7 min,10%~40%A),流速0.3 m L·min-1,柱温35℃,进样体积1μL,Waters XevoTMTQ质谱仪以多反应离子监测(MRM)方式,进行正离子检测。结果:所测成分在7 min内实现分离,各核苷及碱基类成分在0.002 32~8.66 mg·L~(-1)与峰面积呈良好的线性关系,相关系数均0.992 2;加样回收率(n=6)为92.1%~108.2%,RSD均7%。各批次各核苷及碱基类成分的含量具有一定的差异。10批样品总核苷及碱基类质量分数在24.5~48.48μg·g-1,其中以10号样品含量最低,2号样品最高。各种核苷类成分中,尿苷含量最高(平均值14.84μg·g-1),胸苷质量分数最低(平均值0.14μg·g-1)。结论:该方法具有简便、快速、重复性好,专属性强等特点,适用于酸枣仁中核苷及碱基类成分的快速定量分析。     

UPLC-MS/MS法测定不同产地浮萍中9种核苷类成分的量

目的建立超高效液相色谱三重四级杆串联质谱法(UPLC-MS/MS)同时测定浮萍中9种核苷类成分的方法,分析比较不同产地样品中9种成分的差异。方法采用Waters XbridgeTM Amide色谱柱(150 mm×4.6 mm,3.5μm);以0.1%甲酸的水(A)-0.1%甲酸的乙腈(B)溶液为流动相,梯度洗脱,体积流量为0.5 m L/min;柱温30℃,采用电喷雾离子源,正离子检测方式,得到相应的提取离子流图,以峰面积进行定量,用主成分分析和聚类分析方法进行综合评价。结果 9种核苷类成分具有良好的线性关系,r值均大于0.998 9,方法精密度、重复性和稳定性的RSD值均小于3.5%,加样回收率在94.4%~101.9%,RSD在1.73%~3.58%。不同产地浮萍药材中9种核苷在组成和量上均有差异,其中2′-脱氧尿苷、2′-脱氧肌苷在13个产地样品中量均较低,以胞嘧啶最低;尿苷、肌苷、黄嘌呤量较高;13个产地中安徽黄山浮萍中9种核苷总量最高。结论该方法操作简便、准确、重复性好,可为浮萍药材的质量标准制定提供依据。     

虫草属核苷类成分分析方法的研究进展

为加强对虫草属核苷类化合物的研究开发,对国内外近15年虫草属核苷类成分的多种检测方法进行综述。以虫草属核苷为研究对象,对HPLC测定法、毛细管电泳法及薄层色谱扫描法等3种检测方法进行整理,并将HPLC法按不同检测器进行分类对比。HPLC法用于核苷类成分的定性、定量分析,具有灵敏度高、分离速度快和分离效率高的特点,其中,LCMS检测方法适应性广、分离能力强、检测限低,此外,还可以提供每一个组分丰富的结构信息和相对分子质量。LC-MS检测方法在核苷类成分检测中越来越广泛的应用,它不仅仅局限于虫草属核苷类成分含量测定的目的,更有利于研究人员从分子水平上开展对虫草属核苷或其他含有核苷药材的深入研究。     

UPLC-MS/MS法快速检测减肥类保健品中13种非法添加化学成分

目的 建立保健品中非法添加13种减肥类化学成分的UPLC-MS/MS检测方法。方法 以甲醇超声提取样品,UPLC法进行色谱分析,采用串联四级杆质谱多反应监测（MRM）模式进行定性定量检测。结果 建立了快速检测保健品中13种减肥化学成分的方法,检测限低于2 ng。结论 本方法专属性强,灵敏度高,操作简单,快捷,可作为减肥类保健品中非法添加化学成分的有效检测方法。     

RP-HPLC测定天然虫草与人工虫草中核苷类成分的含量

 目的分析不同来源的天然虫草与人工虫草中主要核苷类成分的差异。方法应用RP-HPLC检测18个样品中尿苷、腺嘌呤、腺苷、虫草素的含量。Symmetry Shield Rp18柱(3.9 mm×150 mm,5μm),以乙腈-水为流动相,梯度洗脱。流速0.2～1.2mL·min^-1,检测波长260 nm,柱温30℃。结果本法高效灵敏,重现性好。所测人工虫草核苷类成分的含量较天然虫草高,不同产地天然虫草4种主要的核苷类成分的差异较不同来源人工虫草的小。结论本法能有效鉴别虫草的核苷类成分,可用于天然虫草和人工虫草中核苷类成分的分析,评价不同来源虫草的质量。     

冬虫夏草及人工虫草核苷类成分的TLCS研究

目的：以腺苷、尿苷、鸟苷为指标测定天然虫草与人工虫草菌丝体中核苷类有效成分的含量,并对不同虫草样品进行薄层色谱指纹图谱对比研究,探求虫草中核苷类化合物鉴别的专属性。方法：采用高效薄层色谱扫描法进行含量测定,同时建立了不同虫草样品的荧光淬灭薄层色谱指纹图谱。结果：虫草菌丝体中测得腺苷、尿苛鸟苷成分高于天然虫草。结论：该法快速简便,重现性好,能有效鉴别出虫草中核苷类成分以及评价不同电菌样品的质量。     

基于UHPLC-QTRAP-MS/MS的石斛中氨基酸和核苷类成分分析与评价

使用超高效液相色谱-三重四极杆离子阱质谱联用技术(UHPLC-QTRAP-MS/MS)快速、准确、高效直接测定8种不同石斛(共9批次)中21种氨基酸和10种核苷类成分的方法,结合多元统计分析进行综合质量评价,为石斛资源综合利用提供科学依据。使用Waters XBridge Amide色谱柱(2.1 mm×100 mm,3.5μm),以0.2%甲酸水-0.2%甲酸乙腈为流动相进行梯度洗脱,流速0.2 mL·min~(-1),柱温30℃;电喷雾离子源(ESI)正离子模式下,多反应监测(MRM)模式测定。采用主成分分析(PCA)和逼近理想点排序法(TOPSIS)对实验数据进行综合评价。21种氨基酸和10种核苷类被测成分在一定浓度范围内线性关系均良好,相关系数大于0.999,稳定性、精密度、重复性RSD均小于3.0%,加样回收率在93.31%～107.5%,RSD 1.1%～3.7%。PCA结果显示,以氨基酸为指标,评分最高为霍山石斛(S1);以核苷类成分为指标,评分最高为铁皮石斛(S6);TOPSIS法中C_i最大差异达68.7%,综合评价显示霍山石斛整体品质最优。该实验方法准确、快速、高效;熵权TOPSIS分析方法将多维问题转变为一维问题,提高了决策分析的准确性与科学性。为进一步探索评价石斛品种的内在质量及控制提供依据,同时为其资源的进一步开发与利用提供借鉴。     

UPLC-MS/MS法同时测定生地黄饮片中7种核苷类成分的含量

目的:建立UPLC-MS/MS法同时测定生地黄饮片中7种核苷类成分(2′-脱氧腺苷、次黄嘌呤、腺嘌呤、腺苷、肌苷、尿嘧啶、尿苷)的含量。方法:采用Waters BEH C_(18)(50 mm×2.1 mm,1.7μm)色谱柱,以0.1%甲酸溶液﹣甲醇为流动相,梯度洗脱;正离子多反应监测(MRM)模式来检测生地黄饮片中7种核苷类成分的含量。结果:7种核苷类成分在相应的浓度范围内线性关系良好,相关系数均不低于0.9913,加样回收率为98.54%～102.07%,RSD值均小于3.19%。结论:该方法可快速、准确地对生地黄饮片中7种核苷类成分进行定性定量分析。     

不同产地泽泻药材中核苷类成分定性定量分析

该文通过UPLC-Q-TOF-MS指认了泽泻水提物中核苷、氨基酸等10个成分。首次建立了泽泻药材中核苷类成分的HPLC指纹图谱,结合指纹图谱相似度评价、聚类分析比较核苷类成分在不同产地泽泻药材中的差异。同时首次建立泽泻药材中5种主要核苷(胞苷、尿苷、腺嘌呤、鸟苷、腺苷)的含量测定方法。结果显示,川泽泻与建泽泻的相似度在0.96以上,广泽泻相似度小于0.87;聚类分析中川泽泻与建泽泻聚为一组,广泽泻聚为另一组,提示在核苷类成分上川泽泻与建泽泻较为相似,与广泽泻差异较大。含量测定结果显示,川泽泻与建泽泻上述5种成分质量分数总和为0.81~1.30 mg·g^-1,广泽泻为0.35~0.50 mg·g^-1。在川泽泻与建泽泻药材中含量由高到低依次为鸟苷>胞苷>尿苷>腺嘌呤>腺苷;在广泽泻中依次为尿苷>腺嘌呤>鸟苷>胞苷>腺苷。川泽泻与建泽泻中上述5种化合物的含量均高于广泽泻;川泽泻与建泽泻相比,除腺嘌呤外,均为川泽泻略高于建泽泻。研究结果为进一步揭示泽泻药效物质及药材质量的全面控制提供参考。     

UPLC-QTRAP-MS/MS分析不同采收期何首乌核苷类成分动态变化

目的:分析何首乌中核苷类成分积累的动态变化,以确定何首乌的适宜采收期。方法:采用UPLCQTRAP-MS/MS技术测定不同采收期何首乌中9种核苷类成分的含量。结果:何首乌核苷类成分中,以尿苷、腺嘌呤、鸟苷、胞苷含量较高;不同采收期何首乌中核苷类成分含量呈峰谷状变化,12月份含量相对较高。结论:何首乌核苷类成分的积累与生长期密切相关,其积累高峰期与当地传统采收期基本一致。     

不同种质太子参核苷类成分QTRAP LC-MS/MS分析

目的:分析太子参中核苷类成分,比较不同种质太子参间的差异。方法:采用QTRAP LC-MS/MS技术同时测定5个种质太子参中13种核苷类成分的含量,用SPSS 16.0对数据进行聚类分析。结果:不同种质太子参核苷含量存在一定差异,核苷总量以福建柘荣(ZS2)最高,贵州施秉(SB)最低。福建柘荣(ZS1)与安徽宣城(XC)间核苷含量差异较小。结论:为进一步阐明生态环境对太子参代谢物合成积累的影响提供了基础资料。     

不同采收期太子参中13种核苷类成分的含量测定研究

 目的 建立超高效液相色谱-三重四级杆线性离子肼复合质谱(QTRAP UPLC-MS/MS)同时测定太子参中13种核苷类成分含量的方法,分析不同生长期太子参中核苷类成分积累的动态变化。方法 采用Waters Atlantis T3色谱柱(2.1 mm×150 mm,3 μm),以5 mmol·mL^-1醋酸铵(B相)-甲醇(A相)为流动相,0.4 mL·min^-1梯度洗脱:0~4.5 min,3%~4%A;4.5~8 min,4%~18% A;8~10 min,18% A;10~10.1 min,18%~3% A;10.1~13 min,3% A。正离子多反应监测(MRM)模式测定。结果 13种核苷类成分的浓度与峰面积的线性关系良好(r>0.991 0);加样回收率为95.52%~105.07%。太子参核苷类成分中,以胞苷、尿苷、肌苷、鸟苷、胸苷含量较高;不同生长期太子参核苷类成分含量有所差异,6月中旬含量相对较高。结论 该方法简便、灵敏,结果准确、可靠,为探索太子参药材的品质形成机制及确定药材适宜采收期提供依据。     

冬虫夏草中核苷类成分的毛细管区带电泳定量分析研究

目的:建立冬虫夏草中核苷类成分(腺苷、鸟苷、尿苷和次黄嘌呤核苷)的毛细管电泳定量分析方法,研究青海产天然冬虫夏草和人工发酵虫草菌粉的核苷类成分差异。方法:采用0.025mol·L^-1硼砂缓冲液,pH9.5,工作电压为20kV,毛细管温度25℃,波长检测260nm,对4种核苷定量分析。结果:用毛细管区带电泳法定量分析冬虫夏草及人工发酵虫草菌粉中的腺苷、尿苷、鸟苷和次黄嘌呤核苷,平均加样回收率分别为98.9%,95.1%,97.8%和98.8%,RSD分别为0.4%,1.7%,1.3%和5.0%。在天然冬虫夏草中未检测到腺苷,而在人工发酵虫草菌粉中未检测到次黄嘌呤。结论:本研究方法可满意地用于腺苷、尿苷、鸟苷和次黄嘌呤核苷的定量分析。青海产地道药材冬虫夏草核苷类成分组成与人工发酵虫草菌粉有明显差异。     

蛹虫草菌丝与冬虫夏草中核苷类成分的含量测定

蛹虫草菌丝与冬虫夏草中核苷类成分的含量测定刘静明,刘岱,杨立新,钟裕容,崔淑莲(中国中医研究院中药研究所北京100700)蛹虫草CardycepsmiliLaris(L.)Link,为冬虫夏草同属真菌,近年来发现蛹草有重要的药用价值,越来越受到国内外的重视,国外报道从蛹虫草人工培养液中分离出虫草素,3′-氨基-3-去氧腺甙及肌氨酸氨基腺音。我们从蛹虫草菌丝中分离得6种成分:β-谷甾醇、麦角甾醇、D-甘露醇、腺嘌呤、腺苷和虫草素￣[1]。并对5批样品....     

UPLC-MS/MS同时测定蛹虫草中6种成分的含量

目的:建立同时测定蛹虫草中腺苷、胞苷、鸟苷、甘露醇、腺嘌呤、虫草素含量的方法。方法:液质联用技术,以甲醇-0.1%甲酸溶液为流动相等度洗脱,采用Agilent ZORBAX SB-C18色谱柱,通过电喷雾离子源,选择正离子模式多反应监测方式检测。结果:腺苷、胞苷、鸟苷、甘露醇、腺嘌呤、虫草素的线性范围分别为37.5~1 200μg·L-1(r=0.998 5),20~640μg·L-1(r=0.996 4),40~1 280μg·L-1(r=0.999 1),77.5~2 480μg·L-1(r=0.993 5),27.5~880μg·L-1(r=0.992 4),90~2 880μg·L-1(r=0.9937),加样回收率在92.1%~102.6%,RSD均8.1%。腺苷、胞苷、鸟苷、甘露醇、腺嘌呤、虫草素在蛹虫草中的平均质量分数分别为268.33,11.28,185.66,1 421.44,10.67,812.21μg·g-1。结论:该法专属性强、快速灵敏,可用于蛹虫草中腺苷、胞苷、鸟苷、甘露醇、腺嘌呤、虫草素的含量测定。