芩百清肺浓缩丸对肺炎支原体感染的影响

目的探讨芩百清肺浓缩丸对肺炎支原体感染的影响。方法采用MTT、流式细胞术考察体外芩百含药血清对肺炎支原体感染的A549细胞增殖能力和凋亡的影响。运用RT-PCR、免疫组织化学检测体内小鼠肺组织MEK、c-jun mRNA及蛋白表达,HE染色观察肺组织病理改变。结果与模型组比较,芩百含药血清(10%、20%)组能促进肺炎支原体感染的A549细胞增殖并抑制细胞凋亡(P<0.05)。体内实验表明,芩百清肺浓缩丸能减轻MP感染小鼠肺组织损伤;促进肺组织MEK、c-jun mRNA及蛋白表达(P<0.05)。结论芩百通过激活MEK和c-jun因子表达促进肺炎支原体感染肺上皮细胞的修复。     

芩百清肺浓缩丸含药血清促进肺炎支原体感染细胞增殖作用的实验研究

目的:观察芩百清肺浓缩丸含药血清对肺炎支原体感染A549细胞增殖作用的影响。方法:利用流式细胞技术鉴定分裂期A549细胞,免疫组化法测定芩百清肺浓缩丸含药血清对肺炎支原体感染A549细胞及分裂期A549细胞MEK、ERK表达的影响。结果:芩百清肺浓缩丸含药血清组A549细胞和分裂期A549细胞的MEK和ERK蛋白表达明显增强,与模型组组比较差异显著。结论:芩百清肺浓缩丸含药血清通过MEK、ERK通路促进细胞增殖,特别是分裂期细胞。     

芩百清肺浓缩丸对肺炎支原体实验动物模型的影响

目的建立实验动物肺炎支原体感染模型,通过对模型药效实验证明芩百清肺浓缩丸具有抗肺炎支原体作用。方法 BALB/c小鼠滴鼻法感染肺炎支原体,各组小鼠肺组织冲洗液培养,颜色改变测定各组中肺炎支原体。结果模型组培养基由红变黄,芩百组培养基颜色无变化表明。结论实验动物模型造模成功,芩百清肺浓缩丸具有治疗肺炎支原体感染作用。     

芩百清肺浓缩丸对感染肺炎支原体小鼠TRPA1、P物质的影响

目的:研究芩百清肺浓缩丸治疗小鼠感染肺炎支原体后咳嗽的作用机制。方法:实验分为正常对照组、模型组、阳对组(阿奇霉素0.03 g/kg)和芩百组(2.34 g/kg),通过BALB/c小鼠鼻腔滴入20μL106CCU肺炎支原体造模,各组小鼠灌胃给予相应药物7 d。引咳实验观察各组小鼠咳嗽情况,HE染色观察各组小鼠肺组织变化,免疫组化观察各组小鼠肺组织TRPA1(瞬间受体电位离子通道)蛋白表达,RT-PCR检测小鼠肺组织TRPA1及P物质m RNA表达。结果:与模型组相比,芩百组和阳对组均能降低小鼠咳嗽次数,HE染色显示芩百组小鼠肺组织支气管黏膜水肿减轻,免疫组化结果显示芩百组小鼠肺组织TRPA1蛋白表达减弱(P<0.05),RT-PCR结果显示芩百组小鼠肺组织TRPA1和P物质m RNA表达减少(P<0.05)。结论:芩百清肺浓缩丸通过降低咳嗽蛋白TRPA1和气道神经源性炎症介质P物质的表达治疗肺炎支原体感染后咳嗽。     

芩百清肺浓缩丸含药血清抗甲型流感病毒的实验研究

目的:观察芩百清肺浓缩丸(黄芩.百部等)含药血清(S-QQCP)对甲型流感病毒的抑制作用。方法:应用体外细胞培养技术进行MDCK细胞培养,运用血清药理学方法制备芩百清肺浓缩丸(QQCP)低、中、高剂量含药血清,观察S-QQCP对甲型流感病毒生物合成、吸附和直接杀伤的作用。结果:与空白血清比较,QQCP各剂量含药血清对甲型流感病毒生物合成均有抑制作用(P<0.01);高剂量含药血清对甲型流感病毒吸附MDCK细胞有明显的抑制作用(P<0.01);各剂量含药血清对甲型流感病毒未显示出直接杀伤作用(P>0.05)。结论:S-QQCP对甲型流感病毒生物合成和吸附有一定的抑制作用。     

芩百清肺浓缩丸对肺炎支原体肺炎作用机制的网络药理学分析

目的基于网络药理学方法探讨芩百清肺浓缩丸治疗肺炎支原体肺炎(MPP)的作用机制。方法通过检索文献数据库获得芩百清肺浓缩丸的入血活性成分;利用反向分子对接服务器PharmMapper获得入血活性成分的潜在靶标;通过生物信息数据库Genecards获取MMP相关基因,与芩百清肺浓缩丸潜在靶标映射取交集得到靶标基因;使用Cytoscape软件的Network Analyzer程序分析并构建芩百清肺浓缩丸入血成分与作用靶标的关系网络;运用STRING软件构建靶蛋白的相互作用(PPI)网络;通过京都基因和基因组百科全书(KEGG)数据库对获得的靶蛋白进行相关通路分析。结果共获得O-甲基绿原酸、黄芩苷、花生四烯酸、金刚大碱、香叶木素等28个芩百清肺浓缩丸入血活性成分;预测得到GSTP1、CDK2、HSP90AA1、LCK、F2等117个作用靶标;PPI网络中ALB、PI3KCG、EGFR、MAPK1、MAPK8、AKT1、HSP90AA1等靶标连接度最高;通过影响B细胞受体、T细胞受体、Toll样受体、TNF、NF-κB、PI3K-Akt以及MAPK等免疫、炎症通路发挥治疗MPP的作用。结论芩百清肺浓缩丸可能主要通过调节免疫功能、抑制炎症反应来发挥对MPP的治疗作用。     

芩百清肺浓缩丸对肺炎支原体感染大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞修复作用的研究

通过对转化生长因子-β(TGF-β)和表面活性相关蛋白A(SP-A)给药前后的表达变化及分布,探讨芩百清肺浓缩丸对肺炎支原体(MP)感染大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞的修复作用机制。取60只Wistar大鼠,雌雄各半,体重80~100 g,随机分为6组,每组10只,分别为空白组,模型组,阳性对照组,芩百清肺浓缩丸高、中、低剂量组,采用滴鼻法造模;给药10 d后收集大鼠肺泡灌洗液、血清、左肺及右肺组织中叶,采用免疫组化法检测肺组织中TGF-β及SP-A的蛋白表达及分布;实时荧光定量PCR法测定肺组织中TGF-β,SP-A mRNA的表达;酶联免疫法测定血清及肺泡灌洗液(BALF)中SP-A的含量。通过数据分析可知,芩百清肺浓缩丸能够下调肺组织中TGF-β的表达,增加SP-A的表达,其中TGF-β主要分布于肺间质,SP-A主要分布于AEC-Ⅱ及部分肺泡巨噬细胞内;同时,能够降低血清中SP-A含量,增加BALF中SP-A含量。通过以上结果可知,芩百清肺浓缩丸通过降低TGF-β的表达抑制AEC-Ⅱ发生上皮间质转化,并增加SP-A的表达,恢复肺的正常形态与功能;同时,对MP引起的肺组织毛细血管损伤具有一定的修复作用。     

芩百清肺浓缩丸对MP感染小鼠SP、NK-1R表达的影响

目的:探讨芩百清肺浓缩丸(芩百)对MP感染BALB/c小鼠肺组织SP、NK-1R表达的影响。方法:SPF级雌性BALB/c小鼠40只,随机分为正常组、MP模型组、罗红霉素组及芩百高、低剂量组,每组8只。滴鼻法复制MP感染模型,给予药物,给药后7天,脱颈椎处死小鼠,留取肺组织,ELISA方法检测SP分泌量、荧光实时定量PCR法检测NK-1R mRNA相对表达量。结果:与正常组比较,MP模型组BALF中SP分泌量增加、肺组织NK-1R mRNA相对表达量有升高的趋势;与模型组比较,芩百组均可降低SP分泌量、并有下调NK-1R mRNA相对表达量的趋势。结论:芩百抗MP的作用机制可能与调节肺组织SP及NK-1R mRNA相对表达量有关。     

芩百浓缩丸体内外抗肺炎支原体作用的实验研究

目的 研究复方中药芩百浓缩丸的体内外抗肺炎支原体作用.方法 采用微量稀释法检测芩百浓缩丸的体外最小抑菌浓度(MIC);采用滴鼻法建立大鼠肺炎支原体感染模型,以PCR检测造模情况,以细菌培养、器官指数测定、病理学观察评价药物疗效.结果 芩百浓缩丸的MIC为100μg/mL,能降低感染动物体温和肺指数,提高胸腺指数,减轻肺组织的病理组织学改变.结论 芩百浓缩丸在体内外均具有抗肺炎支原体作用.     

板蓝根含药血清对病毒感染RAW264.7细胞的TLR3信号通路的影响

目的:研究板蓝根含药血清对呼吸道合胞病毒(RSV)感染RAW264.7细胞中干扰素-β(IFN-β),Toll样受体3(TLR3),TBK1,干扰素调节因子3(IRF3)表达的影响,阐释其可能的抗RSV机制,为临床使用提供实验依据。方法:本实验分为6组,分别为空白组,RSV感染细胞模型组,板蓝根含药血清低、中、高体积分数组(40%,50%,60%板蓝根含药血清),利巴韦林含药血清组(70%利巴韦林含药血清)。除空白组外,其余各组接种RSV造成病毒感染模型,采用板蓝根含药血清或利巴韦林含药血清进行干预,12 h后收集细胞及其上清液,酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测细胞上清液中IFN-β含量;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测RAW264.7细胞中TLR3,TBK1,IRF3和IFN-βmRNA的表达;蛋白质免疫印迹(Western blot)法检测TLR3,TBK1,IRF3和p-IRF3蛋白的表达。结果:RSV感染RAW264.7细胞12 h后,与空白组比较,模型组TLR3,TBK1和IFN-βmRNA的表达显著升高,IFN-β,TLR3,TBK1和p-IRF3蛋白的表达也显著升高(P0.01),IRF3 mRNA和蛋白均无明显变化;与模型组比较,板蓝根含药血清中、高体积分数组能够显著下调RSV诱导的TLR3,TBK1和IFN-βmRNA的高表达(P0.05,P0.01),同时明显下调RSV诱导的TLR3,TBK1和p-IRF3蛋白的高表达(P0.05,P0.01),板蓝根含药血清各体积分数组的下调作用低于利巴韦林含药血清组,两者对IRF3 mRNA和蛋白均无明显调控作用。结论:RSV能够诱导TLR3信号转导通路的激活从而促进IFN-β的表达,而板蓝根含药血清通过下调TLR3信号通路关键信号分子TLR3,TBK1,p-IRF3使IFN-β适度表达。     

呼畅清肺浓缩丸对肺炎支原体感染鼠免疫功能影响的研究

目的研究呼畅清肺浓缩丸提高肺炎支原体感染大鼠免疫功能的作用及机制。方法采用滴鼻法建立大鼠肺炎支原体感染模型,通过放射免疫法、速率散射比浊法和流式细胞仪技术研究呼畅清肺浓缩丸对模型大鼠体液免疫和细胞免疫功能的影响。结果与模型组比较,呼畅清肺浓缩丸能明显提高感染大鼠血清中IgG,IgM,IL2和IL6水平,降低TNFα和C₃补体含量,并使CD⁺₄/CD⁺₈比值增高。结论呼畅清肺浓缩丸能够明显改善支原体感染大鼠体液免疫和细胞免疫功能低下的状态,具有提高机体抗病原体感染的免疫作用。     

芩百清肺浓缩丸HPLC-UV-ELSD指纹图谱的建立

目的:研究芩百清肺浓缩丸高效液相色谱指纹图谱,建立整体特征的质量评价方法。方法:采用UV-ELSD串联检测技术,Zorbax色谱柱,以乙腈-1.5%冰醋酸为流动相,梯度洗脱,检测波长280nm。结果:本色谱条件下芩百清肺浓缩丸各成分得到了较好的分离,标准指纹图谱均由10个特征峰组成,相似度>0.05。结论:所建立的HPLC指纹图谱表达了芩百清肺浓缩丸可测组分的整体特征。具有重复性好、特征性强、方法简便等特点,可用于芩百清肺浓缩丸的质量评价。     

基于代谢组学的芩百清肺浓缩丸治疗支原体肺炎小鼠的作用机制研究

目的研究芩百清肺浓缩丸治疗支原体肺炎的作用机制。方法采用超高效液相色谱与串联四级杆飞行时间质谱(UPLC-Q-TOF-MS)联用技术的代谢组学方法,分析肺炎支原体感染小鼠肺组织中内源性化合物的变化。采用Progenisis QI软件进行色谱峰识别及匹配,并采用主成分分析(PCA)和偏最小二乘-判别分析(PLS-DA)对获得数据进行降维,通过分析对不同组间分离贡献度较大(VIP1,P0.05)化合物的串联质谱数据,经HMDB等数据库检索,确定潜在生物标志物。结果从肺组织中共鉴定出视黄醛、全反式维甲酸、焦谷氨酸、白三烯C4、维生素A、花生四烯酸、前列腺素I2等20个潜在生物标志物。与模型组比较,芩百清肺浓缩丸对20个潜在生物标志物均具有回调作用。结论芩百清肺浓缩丸通过影响视黄醇代谢、亚油酸代谢、花生四烯酸代谢等通路发挥治疗支原体肺炎的作用。     

清肺透邪汤对肺炎支原体感染小鼠CARDS TX/NLRP3炎性小体相关因子表达的影响

目的探讨清肺透邪汤对肺炎支原体(MP)感染后CARDS TX及NLRP3炎性小体相关因子的变化及相关性,试图进一步明确清肺透邪汤防治肺炎支原体肺炎(MPP)的效应靶点。方法随机将48只Balb/c幼鼠分成正常组、模型组、清肺透邪汤组、阿奇霉素组4组,每组12只。除正常组外,对其余3组Balb/c幼鼠采用滴鼻法进行MP感染。造模后,清肺透邪汤组每只幼鼠给予15 g/kg的对应方剂进行灌胃,1次/d,连续14 d;阿奇霉素组,每只幼鼠给予阿奇霉素90 mg/kg灌胃,1次/d,连续3 d,停药4 d,2个周期,停药期间给予蒸馏水灌胃;正常组、模型组每只幼鼠均给予0.3 mL蒸馏水灌胃。在感染后的第3、7、10、14天进行取材,运用Real-time PCR法检测肺组织CARDS TX、NLRP3、ASC及Caspase-1的表达,采用ELISA法检测血清中IL-1β表达水平,采用免疫组化法检测肺组织中NF-κB表达。结果 MP感染后,幼鼠肺组织出现炎症改变,镜下可见肺泡壁增厚、肺泡上皮细胞破坏、浸润。MP感染后,幼鼠肺组织中的CARDS TX、NLRP3、ASC及Caspase-1基因表达明显升高;与模型相比,清肺透邪方组幼鼠肺组织中的CARDS TX、NLRP3、ASC及Caspase-1基因表达明显下降,其上游调控因子NF-κB减少,下游促炎因子IL-1β降低(均P0.05)。结论清肺透邪汤可以有效地下调CARDS TX基因表达,降低MP毒力作用的主要效应靶点;初步证实了清肺透邪汤可以通过NF-κB通路调控,影响NLRP3炎性小体合成,促使IL-1β所致炎性反应减弱,可能是保护肺损伤的相关机制。     

芩百清肺浓缩丸对感染后咳嗽大鼠SP、CGRP、NEP的影响

目的:观察芩百清肺浓缩丸(芩百)对感染后咳嗽(PIC)大鼠肺泡灌洗液和血清SP、CGRP及NEP含量及肺组织SP及NEP表达的影响,探讨芩百清肺浓缩丸对感染后咳嗽气道神经源性炎症的干预作用。方法:40只大鼠随机分为正常组、模型组、阳性对照组(孟鲁司特)和中药芩百组。采用烟熏加内毒素(LPS)滴鼻以及辣椒素雾化吸入法建立PIC大鼠模型。各组大鼠给予相应处理10 d,观察大鼠3 min咳嗽次数变化,ELISA法检测BALF、血清中SP、CGRP和NEP含量,免疫组化检测肺组织SP、NEP蛋白表达并进行半定量评分,HE染色光镜观察支气管和肺组织病理改变。结果:1)咳嗽次数比较:阳性对照组和中药组咳嗽次数低于模型组,差异有统计学意义(P0.05),两药物组间比较,差异无统计学意义(P0.05)。2)SP、CGRP及NEP含量比较:中药组BALF、血清中SP和CGRP含量均低于模型组和阳性对照组,差异有统计学意义(P0.05);中药组BALF中NEP含量接近正常组水平,高于模型组和阳性对照组,差异有统计学意义(P0.05);各组血清中NEP含量比较,差异无统计学意义(P0.05)。3)肺组织SP与NEP免疫组化检测结果显示:与模型组比较,中药组SP表达明显减弱、NEP表达增强,差异有统计学意义(P0.05);阳性对照组与模型组比较,差异无统计学意义(P0.05)。结论:芩百清肺浓缩丸能够降低感染后咳嗽大鼠血清及BALF中SP、CGRP的含量及肺组织SP的表达,提升BALF中NEP的含量及表达至接近正常水平。芩百清肺浓缩丸能够且不仅仅是通过NEP-SP途径来降低感染后咳嗽的气道神经源性炎症。     

基于UPLC-Q-TOF-MS技术的芩百清肺浓缩丸血清药物化学初步研究

应用UPLC-Q-TOF-MS技术和血清药物化学理论分析检测芩百清肺浓缩丸的入血成分。灌胃给予大鼠芩百清肺浓缩丸溶液后,肝门静脉采血,血清经SPE处理,采用ACQUITY UPLC BEH C_(18)色谱柱(2.1 mm×100 mm,1.7μm),0.1%甲酸水(A)-0.1%甲酸乙腈(B)流动相系统进行梯度洗脱,流速0.3 m L·min~(-1),柱温35℃。通过对比分析体外样品、空白血清及含药血清,同时结合Peakview和Metabolitepilot软件鉴定和表征其血中移行成分,在给药后的大鼠血清中分析鉴定了28个血中移行成分,其中18个原型成分,10个代谢产物。应用UPLC-Q-TOF-MS技术和血清药物化学理论较为全面地阐明了芩百清肺浓缩丸在大鼠血清中的移行成分,为进一步研究其体内代谢过程以及药效物质基础提供了科学依据。     

芩百清肺浓缩丸药物配伍对黄芩苷吸收的药动学比较

将芩百清肺浓缩丸按中药方剂理论拆方并分组,通过给大鼠灌胃各受试药物组,比较各组黄芩苷药动学参数的变化,阐明芩百组方的合理性及臣药在组方中的重要作用。对大鼠进行分组,分别灌胃君药组（黄芩粗提物,主要为黄芩苷）、与君药组黄芩苷含量相等的臣药组及芩百组（全方组）,在28 h内于不同时间点采集大鼠血浆,应用HPLC测定大鼠血浆中的黄芩苷的药时曲线,用3P97实用药动学计算程序对所得数据进行处理。通过对数据分析得出,芩百全方组大鼠血浆中黄芩苷的C_max是君药组的4倍,AUC是君药组的6倍;芩百全方组大鼠血浆中黄芩苷含量最高,臣药组大鼠血浆中黄芩苷含量不及全方组,但明显高于君药组。通过以上药动学结果得知,芩百能明显增加黄芩苷的C_max和AUC,芩百中的其他中药成分促进了黄芩苷在体内的吸收,表明芩百复方配伍的合理;臣药对黄芩苷的体内吸收有促进作用。