表皮生长因子对HaCaT细胞miR-21/PCD4的表达研究

目的 探讨表皮生长因子(EGF)对角质形成细胞(HaCaT细胞)miR-21/PDCD4表达的调控作用.方法 聚合酶链反应(PCR)法检测不同浓度EGF(0、5、15、25 ng/mL)对HaCaT细胞miR-21表达的影响;蛋白免疫印迹法检测不同浓度EGF(0、5、15、25 ng/mL)对HaCaT细胞PDCD4蛋白表达的影响.结果 EGF浓度依赖性促进HaCaT细胞miR-21的表达,与对照组比较,5 ng/mL EGF组、15 ng/mL EGF组、25 ng/mL EGF组HaCaT细胞miR-21表达分别为1.46±0.11、2.44±0.05、3.19±0.08(P＜0.05);EGF浓度依赖性抑制HaCaT细胞HaCaT细胞PDCD4表达,跟对照组比较,25 ng/mL EGF组能显著抑制HaCaT细胞PDCD4表达.结论 EGF促进HaCaT细胞miR-21的表达,抑制HaCaT细胞PDCD4的表达水平.     

二甲双胍对HaCaT细胞增殖及miR-21-5p和PDCD4表达的影响北大核心CSCD

目的 探讨二甲双胍对角质形成细胞增殖的影响及其可能的作用机制.方法 以HaCaT细胞为研究对象,分别给予不同浓度二甲双胍（25、50、75、100 mmol/L）刺激24 h,CCK8法检测HaCaT细胞增殖活性;实时定量PCR法检测HaCaT细胞中miR-21-5p及其下游靶基因PDCD4 mRNA表达水平;蛋白免疫印迹法检测HaCaT细胞中PDCD4蛋白表达水平.多组间比较采用单因素方差分析,组间两两比较采用SNK-q检验.结果 二甲双胍可抑制HaCaT细胞增殖,25、50、75、100 mmol/L二甲双胍作用于HaCaT细胞24 h后,细胞抑制率分别为5.43％±3.67％、19.61％±6.95％、45.93％±9.56％、61.91％±6.93％,各组细胞抑制率差异有统计学意义（F=246.90,P＜0.05）;25 mmol/L组与对照组（0.00％±3.00％）相比,差异无统计学意义,其余各组抑制率均较对照组显著增高（P＜0.05）;实验组不同浓度组间比较,差异也均有统计学意义（P＜0.05）.25、50、75、100 mmol/L二甲双胍实验组miR-21-5p mRNA相对表达量（2-△△Ct）分别为0.90±0.11、0.33±0.05、0.21±0.07、0.14±0.04,PDCD4mRNA相对表达量（2-△△Ct）分别为2.11±0.64、7.22±1.13、11.16±1.23、19.12±3.16,各组细胞miR-21-5p mRNA和PDCD4 mRNA的表达差异均有统计学意义（F值分别为36.99和96.26,均P＜0.05）;25 mmol/L组与对照组相比,差异无统计学意义,其余各组miR-21-5p及PDCD4 mRNA的表达均较对照组显著下调或上调（均P＜0.05）;实验组不同浓度组间比较,差异也均有统计学意义（P＜0.05）.与对照组相比,25、50、75、100 mmol/L二甲双胍实验组PDCD4蛋白表达明显升高,其相对表达量分别为1.22±0.08、2.09±0.20、2.26±0.11、2.37±0.07,组间表达差异有统计学意义（F=75.37,P＜ 0.05）.25 mmol/L组与对照组相比差异无统计学意义,其余各组均较对照组明显升高（P＜0.01）.结论 二甲双胍在体外能够显著抑制HaCaT细胞的增殖,可能通过下调miR-21-5p的表达,使其下游靶基因PDCD4表达上调,从而发挥抑制细胞增殖的作用.     

姜黄素对肿瘤坏死因子-α诱导的HaCaT细胞增殖及凋亡的影响

目的 探讨姜黄素对肿瘤坏死因子（TNF）-α诱导的HaCaT细胞增殖及凋亡的影响。方法 MTT法检测不同浓度重组TNF-α（0、1、5、10、25、50、100 ng/ml）、姜黄素20 μmol/L对HaCaT细胞增殖的影响。蛋白印迹实验检测25 ng/ml TNF-α和20 μmol/L姜黄素作用下HaCaT细胞PCNA、 Notch-1 的蛋白表达。使用Annexin-V/PI试剂盒在流式细胞仪上检测25 ng/ml TNF-α和20 μmol/L姜黄素作用下HaCaT细胞早期凋亡情况。结果 TNF-α呈浓度依赖性促进HaCaT细胞增殖,25 ng/ml TNF-α对HaCaT细胞的促增殖基本达到最大,20 μmol/L姜黄素有效抑制25 ng/ml TNF-α对HaCaT细胞的促增殖作用,25 ng/ml TNF-α对HaCaT细胞无明显促凋亡作用,而20 μmol/L姜黄素有效促进HaCaT细胞发生凋亡,并可激发25 ng/ml TNF-α对HaCaT细胞的凋亡诱导作用。 结论 姜黄素可激发TNF-α对HaCaT细胞的促凋亡作用,同时抑制TNF-α对HaCaT细胞促增殖作用。     

甘草次酸抑制表皮细胞生长因子对HaCaT细胞促增殖作用的机制研究

目的 探讨甘草次酸对表皮细胞生长因子（EGF）诱导的HaCaT细胞增殖的影响,并对其可能机制进行相关研究。方法 MTT法检测不同浓度EGF （0、1、5、10、25、50、100 ?滋g/L） 以及不同浓度甘草次酸（0、0.1、1、10、25、50、100 ?滋mol/L）对HaCaT细胞增殖的影响,25 ?滋mol/L甘草次酸、10 ?滋mol/L MEK1/2抑制剂 （U0126） 对25 ?滋g/L EGF促HaCaT细胞增殖的抑制作用。蛋白免疫印迹法检测25 ?滋g/L EGF对ERK1/2磷酸化的促进作用,25 ?滋mol/L甘草次酸、10 ?滋mol/L U0126对ERK1/2磷酸化的抑制作用,25 ?滋g/L EGF、25 ?滋mol/L甘草次酸、10 ?滋mol/L U0126分别或同时作用下HaCaT细胞增殖细胞核抗原（PCNA）、Notch-1蛋白的表达情况。使用SPSS17.0统计软件对实验数据进行t检验、方差分析和相关分析。结果 EGF在0 ～ 100 ?滋g/L范围内促进HaCaT细胞增殖（r = 0.798,P ＜ 0.05）,在0 ～ 50 ?滋g/L 范围内与HaCaT细胞增殖呈线性相关（r = 0.859,P ＜ 0.05）。甘草次酸在10 ～ 100 ?滋mol/L范围内浓度依赖性地抑制HaCaT细胞增殖（r = －0.945,P ＜ 0.01）;25 ?滋mol/L甘草次酸明显抑制25 ?滋g/L EGF对HaCaT细胞的促增殖作用以及对ERK1/2的促磷酸化作用。同时,25 ?滋mol/L甘草次酸、10 ?滋mol/L U0126均抑制25 ?滋g/L EGF对HaCaT细胞PCNA、Notch-1蛋白的促表达作用。结论 甘草次酸可抑制EGF对HaCaT细胞的促增殖作用,其机制可能与甘草次酸抑制EGF对HaCaT细胞ERK1/2信号通路的激活有关。     

Wnt5a对HaCaT细胞的增殖、周期及血管内皮生长因子的影响

目的:以HaCaT细胞为细胞模型,探讨Wnt5a能否激活非经典Wnt5a/Ca~2+信号传导途径,并检测其对HaCaT细胞增殖、周期和对血管内皮生长因子(VEGF)的影响,探讨Wnt5a在银屑病发病中的作用机制。方法:采用CCK-8检测不同浓度Wnt5a重组蛋白对HaCaT细胞增殖的影响;利用流式细胞仪技术测定Wnt5a对HaCaT细胞周期和Ca~2+浓度的影响;不同浓度Wnt5a和Frizzled5分别刺激HaCaT细胞后,分别采用RT-PCR和Western blot技术检测HaCaT细胞内VEGF在mRNA和蛋白水平的表达变化。结果:5μg/mL、15μg/mL和25μg/mL的Wnt5a能够不同程度的提高HaCaT细胞的增殖能力,促进细胞周期从G1期向S期分化,其中15μg/mL和25μg/mL组与空白组相比具有明显差异(P0.01)。同时,15μg/mL和25μg/mL的Wnt5a可增加HaCaT细胞内Ca~2+浓度(P0.05)。RTPCR和Western blot结果显示,Wnt5a和Frizzled5能不同程度的促进VEGF的表达,其中Wnt5a的效果更显著(P0.05)。结论:外源性Wnt5a能促进HaCaT细胞增殖和周期,并增加细胞内Ca~2+浓度,进而激活Wnt5a/Ca~2+非经典信号传导途径,从而促进VEGF的表达。     

棕榈酸对HaCaT细胞增殖及产生炎症因子的影响

目的 探讨棕榈酸对HaCaT细胞增殖及产生炎症因子的影响.方法 将不同浓度棕榈酸(0、25、50、75、100、125、150、175、200 μmol/L)刺激HaCaT细胞3～ 24h,用细胞计数试剂盒CCK8检测HaCaT细胞增殖情况.选取一定浓度棕榈酸(0、75、100、125、150 μmol/L)刺激HaCaT细胞24 h后,分别用免疫组化荧光染色法在共聚焦显微镜下观察核因子(NF)-κB p65细胞核转位情况.酶联免疫吸附试验检测细胞培养上清液中白介素6(IL-6)分泌量,实时PCR法检测过氧化物酶增殖体激活受体α(PPARα)mRNA及IL-6mRNA的表达,免疫印迹法检测PPARα、总蛋白NF-κB p65及核蛋白NF-κB p65表达量.用GraphPad Prism 5.0软件进行单因素方差分析.结果 与空白对照组相比,50～175 μmol/L棕榈酸均可刺激HaCaT细胞增殖(均P＜ 0.05).75、100、125、150 μmol/L棕榈酸可剂量依赖性增强HaCaT细胞NF-κB p65向细胞核内转位,各浓度组核蛋白的相对表达量分别为0.4536±0.0173、0.5184±0.0206、0.5333±0.0231、0.6160±0.0297,与空白对照组相比,差异有统计学意义(均P＜0.01).PPARα mRNA及其蛋白产物、IL-6 mRNA及分泌量呈剂量依赖性增加,各浓度组IL-6分泌量分别为(31.5677±0.2268)、(32.3773±0.4156)、(32.9837±0.0029)、(33.6890±0.0936) ng/L,与空白对照组相比,差异有统计学意义(P＜0.05或0.01).结论 棕榈酸可促进HaCaT细胞增殖,并在一定浓度内剂量依赖性增强NF-κB核转移、IL-6及PPARα表达量,在激活和促进相关炎症因子表达中起到一定作用.     

苦参碱对HaCaT细胞Bcl-2/Bax和Fas/FasL的调控

目的:明确苦参碱对HaCaT细胞Bcl-2/Bax和Fas/FasL表达的影响。方法:体外培养HaCaT细胞,选择第二代细胞对数生长期HaCaT细胞作为研究对象,将细胞随机分为4组:苦参碱2mg/mL、10 mg/mL和50 mg/mL 3组及对照组(加入相同体积的0.9%盐水),孵育48 h后,MTT法测定各浓度下细胞增殖,RT-PCR检测Bcl-2/Bax和Fas/FasL的表达。结果:与对照组相比,当苦参碱浓度为2 mg/mL时,HaCaT细胞增殖活性无明显变化;Bcl-2、Bax、Fas、FasL表达也无明显变化(P0.05)。当苦参碱浓度为10 mg/mL时HaCaT细胞增殖活性较对照组明显下降(P0.001);Bcl-2表达明显下降,Bax表达上升(P0.001);Fas、FasL表达上升(P0.05)。当苦参碱浓度为50 mg/mL时,MTT法检测HaCaT细胞增殖明显抑制(P0.001);同时Bcl-2、Bax、Fas和FasL的变化与10 mg/mL时相似(P0.05)。结论:苦参碱能够调控上皮细胞致炎因子的表达,抑制细胞的增殖。     

miR-34a-5p对HaCaT细胞增殖及其靶基因Notch1表达的影响

目的: 检测miR-34a-5p对人角质形成细胞株HaCaT细胞体外增殖及其靶基因Notch1 mRNA表达的影响。方法: HaCaT细胞体外培养,优化转染浓度,分为4组进行转染：miR-34a-5p 模拟物组（minic 组）,阴性对照组（NC组）,miR-34a-5p 抑制物组（inhibitor组）,抑制物阴性对照组（inhibitor NC组）。MTT检测细胞增殖情况; RT-qPCR检测Notch1的mRNA表达情况。结果: 转染后48小时minic 组、inhibitor组细胞增殖活力分别为39.7%和15.7%,minic 组、inhibitor组与NC组（21.3%）相比,差异有统计学意义(Ps<0.05)。HaCaT细胞转染后,minic 组和inhibitor组Notch1表达量分别为2.78±1.30和0.37±0.46,与NC组(1.0±0.06)比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论: miR-34a-5p促进HaCaT细胞体外增殖,机制可能与Notch1 mRNA表达上调有关。     

金黄色葡萄球菌肽聚糖对HaCaT细胞Toll样受体2和4的影响

目的观察金黄色葡萄球菌胞壁成分肽聚糖对HaCaT细胞Toll样受体(TLR)2和TLR4表达的影响。方法用不同浓度的肽聚糖(10μg/mL、30μg/mL、100μg/mL)处理培养的HaCaT细胞,用RT-PCR检测TLR2 mRNA和TLR4 mRNA含量变化,用流式细胞术检测HaCaT细胞表面TLR2和TLR4蛋白的表达。结果30μg/mL肽聚糖处理组HaCaT细胞的TLR2 mRNA和TLR4 mRNA相对表达水平分别为0.826±0.06和0.801±0.04,明显高于未处理的对照组的TLR2 mRNA(0.433±0.04,P<0.05)和TLR4 mRNA(0.351±0.05,P<0.01)。各浓度的肽聚糖处理HaCaT细胞24h,及100μg/mL浓度的肽聚糖处理HaCaT细胞12h、24h、36h和48h时,及100μg/mL肽聚糖处理24h后,HaCaT细胞表面TLR2和TLR4蛋白表达量均最高。结论肽聚糖可以上调HaCaT细胞TLR2和TLR4的mRNA和蛋白的表达。     

喜树碱对HaCaT细胞自噬的影响

目的 探讨喜树碱对HaCaT细胞自噬的影响.方法 将HaCaT细胞分为对照组和实验组,对照组用0.1％二甲基亚砜处理,实验组分别用5、10、25、50、100、200 nmol/L浓度的喜树碱处理.不同浓度喜树碱作用于HaCaT细胞24、48 h,用CCK8法检测细胞增殖情况,流式细胞仪检测药物作用24 h后细胞凋亡情况,免疫印迹法检测自噬相关微管相关蛋白1轻链3(LC3)、p62的变化;选取10 nmol/L喜树碱作用于HaCaT细胞24 h,间接免疫荧光法检测细胞自噬蛋白LC3的变化.结果 5、10 nmol/L喜树碱对HaCaT细胞增殖、凋亡无显著影响,50、100、200 nmol/L喜树碱作用HaCaT细胞24 h,增殖抑制率分别为(31.23±1.00)％,(54.21±8.10)％,(66.75±10.70)％;25、50、100、200 nmol/L喜树碱作用HaCaT细胞48 h,增殖抑制率分别为(25.81±5.99)％、(44.35±5.32)％、(65.81±8.28)％、(73.23±9.59)％,与同时段对照组相比,差异有统计学意义(均P＜0.001).50、100、200 nmol/L喜树碱作用HaCaT细胞24 h,凋亡率分别为(14.46±2.38)％、(19.15±1.59)％、(29.88±1.37)％,与对照组(3.80±0.13)％比较,差异有统计学意义(均P＜ 0.001).5、10 nmol/L喜树碱处理HaCaT细胞24 h后,LC3Ⅱ表达上调,p62蛋白表达下调.间接免疫荧光显示10 nmol/L喜树碱作用HaCaT细胞24h后,实验组与对照组自噬体阳性细胞百分率分别为(36.67±4.55)％、(6.23±0.92)％,两组差异有统计学意义(t=6.546,P=0.003).结论 5、10 nmol/L喜树碱可诱导HaCaT细胞发生自噬,但对细胞增殖、凋亡无影响.50、100、200 nmol/L喜树碱抑制HaCaT细胞增殖,促使细胞发生凋亡,自噬水平降低.     

凉血消风汤对HaCaT细胞NF-κB信号通路表达的影响

目的探讨凉血消风汤对HaCaT细胞NF-κB信号通路表达的影响。方法在HaCaT细胞中加入不同浓度凉血消风汤(2、1、0. 25μg/mL),干预体外培养HaCaT细胞模型。采用MTT法检测凉血消风汤对HaCaT细胞存活率的影响; RealtimePCR检测细胞IKKβ、IκBα、p50、p65转录水平的变化情况; Western blot检测细胞IKKβ、p-IκBα、p50、p65、p-p65的蛋白表达水平。结果与空白组比较,凉血消风汤组NF-κB通路相关蛋白的基因和蛋白表达水平均下调(P 0. 05)。结论凉血消风汤通过调节NF-κB通路抑制HaCaT细胞的活化可能是其发挥治疗银屑病作用机制之一。     

P物质对HaCaT细胞核因子-κB的激活作用

目的:确定P物质(substance P,SP)对HaCaT细胞核因子κB(nuclear factor-kappa B,NF-κB)激活的量效和时效。方法:采用免疫细胞化学法和Western-blot法检测不同作用浓度和时间的SP组和对照组HaCaT细胞中NF-κB阳性细胞和核蛋白的表达。结果:作用30 min时,对照组和10~(-9)mol/L浓度的SP组细胞生长状态良好,并可见核分裂相;与对照组相比,10~(-9) mol/L浓度的SP对HaCaT细胞NF-κB表达无明显影响(P0.05);10~(-8)mol/L至10~(-5)mol/L的SP组HaCaT细胞中NF-κB阳性细胞表达率分别为16.22%±1.20%、22.94%±2.21%、29.24%±2.63%、31.45%±2.75%,均高于对照组(P0.05);核蛋白表达量分别为0.20±0.11、0.44±0.11、0.62±0.04、0.69±0.04,也显著高于对照组(P0.01),且随作用时间延长,阳性细胞表达率和核蛋白表达量逐渐增加。结论:P物质对HaCaT细胞的NF-κB具有激活作用,并有剂量和时间依赖性。     

低剂量5-氨基酮戊酸光动力疗法对HaCaT细胞皮肤屏障相关蛋白表达的影响

目的 通过研究低剂量5-氨基酮戊酸(5-aminolevulinic acid, ALA)光动力疗法(photodynamic therapy, PDT)对HaCaT细胞中皮肤屏障相关蛋白表达的影响，探讨低剂量光动力改善皮肤屏障功能的潜在机制。方法 以0、0.01、0.05、0.1、0.5及1 mmol/L ALA孵育HaCaT细胞后分别予以0、0.5、1.85、3.72及10 J/cm²的(635±3)nm红光照射，CCK-8检测细胞存活率，摸索低剂量ALA-PDT促进HaCaT细胞活力的最佳ALA浓度及照光能量参数。将细胞分为对照组、光照组、ALA组、低剂量PDT组，分别予以相应处理后，用实时荧光定量PCR、Western blot实验检测细胞中丝聚合蛋白(filaggrin, FLG)、内皮蛋白(involucrin, IVL)、水通道蛋白3(aquaporin 3,AQP3)、紧密连接蛋白-1(claudin-1, CLDN1)、闭锁蛋白(occludin, OCLN)mRNA及蛋白表达。结果 不同ALA浓度及不同照光能量处理HaCaT细胞的结果显示，在0...     

茶多酚对长波紫外线诱导HaCaT细胞急性光损伤的防护作用

目的探讨茶多酚对长波紫外线(UVA)诱导HaCaT细胞急性光损伤的防护作用及其机制。方法用光学显微镜、MTT法检测UVA对细胞形态及增殖活性影响,构建UVA致HaCaT细胞急性光损伤模型;用MTT法检测茶多酚对细胞增殖活性影响,获得茶多酚对HaCaT细胞最适浓度;检测茶多酚处理前后细胞增殖活性(MTT法)、细胞膜损伤(LDH)情况;Western blot、RT-PCR检测茶多酚处理前后核因子NF-E2相关因子2(Nuclear factor erythroid 2-related factor 2,Nrf2)蛋白胞内分布、Nrf2 mRNA及下游Ⅱ相解毒酶表达情况。结果 20 J/cm~2 UVA致HaCaT细胞形态学改变且抑制细胞增殖活性(0.11±0.50;P0.05),可用于构建UVA致HaCaT细胞急性光损伤模型;茶多酚剂量依赖性抑制细胞增殖活性,11μg/mL为本实验最适茶多酚浓度;相比对照组、UVA组的细胞增殖活性(1.043±0.203;0.113±0.050)和LDH(1.000±0.092;1.858±0.016),照射前加入茶多酚可显著提高细胞增殖活性(1.322±0.080;均P0.05)和减少LDH释放(0.500±0.079;均P0.05);Western blot、RT-PCR结果显示,茶多酚可显著增加核内Nrf2蛋白表达,上调Nrf2 mRNA(1.804±0.229)及下游Ⅱ相解毒酶SOD mRNA(1.172±0.148)、CAT mRNA(1.617±0.259)、GCLC mRNA(1.183±0.083)、GCLM mRNA(1.228±0.256)的表达。结论茶多酚可有效防护UVA诱导HaCaT细胞急性光损伤,且茶多酚可增加核内Nrf2蛋白及其mRNA和下游Ⅱ相解毒酶mRNA的表达,茶多酚的光防护作用可能与Nrf2信号通路有关。     

新型维A酸ECPIRM及全反式维A酸对白细胞介素17刺激HaCaT细胞白细胞介素1β表达的影响

目的 探讨新型维A酸ECPIRM及全反式维A酸（ATRA）对白细胞介素17（IL-17）刺激人表皮角质形成细胞株（HaCaT细胞）IL-1β表达的影响。 方法 MTT法检测不同浓度ECPIRM及ATRA与IL-17共同作用于HaCaT细胞后对其细胞增殖活力的影响;IL-17（20 μg/L）刺激HaCaT细胞或与ECPIRM（80 μmol/L）、ATRA（5 μmol/L）共培养24 h,收集细胞培养上清液并提取总RNA,分别进行酶联免疫吸附实验（ELISA）和荧光定量PCR,检测IL-1β蛋白及IL-1β mRNA水平的变化。数据处理采用单因素方差分析,组间比较采用LSD法。 结果 低浓度ECPIRM可促进HaCaT细胞增殖,随着药物浓度和时间的增加,对HaCaT细胞生长出现抑制现象,并呈浓度及时间依赖性。ATRA抑制HaCaT细胞生长呈浓度及时间依赖性。IL-17刺激HaCaT细胞后细胞培养上清液中IL-1β蛋白及IL-1β mRNA水平（20.312 ± 2.053 ng/L、4.05 ± 0.47）与对照组（11.427 ± 0.929 ng/L、1.00 ± 0.03）相比明显升高,差异有统计学意义（P < 0.05）;ECPIRM作用后IL-1β蛋白及IL-1β mRNA水平（12.470 ± 1.897 ng/L、0.82 ± 0.12）与IL-17刺激组（20.312 ± 2.053 ng/L、4.05 ± 0.47）相比降低,差异有统计学意义（P < 0.05）;ATRA作用后IL-1β蛋白及IL-1β mRNA水平（12.694 ± 1.478 ng/L、0.87 ± 0.16）与IL-17刺激组（20.312 ± 2.053 ng/L、4.05 ± 0.47）相比明显降低,差异有统计学意义（P < 0.05）,同时ECPIRM处理组、ATRA处理组与溶媒对照组比较差异无统计学意义。 结论 IL-17可促进HaCaT细胞分泌IL-1β,ECPIRM及ATRA对其诱导的HaCaT细胞IL-1β的表达具有明显的抑制作用。     

大麻素2型受体激动剂JWH133对人永生化角质形成细胞体外增殖以及细胞因子表达影响的研究

目的探讨JWH133对人永生化角质形成细胞(HaCaT细胞)体外增殖以及经肿瘤坏死因子(TNF)-α诱导后细胞因子表达的影响。方法首先用不同浓度JWH133(15、30、60μmol/L)分别作用于Ha Ca T细胞。采用CCK-8法检测JWH133作用12、24、36 h后对HaCaT细胞体外增殖的影响,流式细胞仪检测JWH133对HaCaT细胞凋亡率的影响。其次采用抗体芯片检测技术分别检测20 ng/ml TNF-α组、20 ng/ml TNF-α+30μmol/L JWH133组中细胞因子表达的变化,并采用双抗体夹心酶联免疫吸附试验(ELISA)法进行定量分析,以验证抗体芯片检测结果的可靠性。结果 15、30、60μmol/L JWH133作用12、24、36 h后对HaCaT细胞体外增殖均有不同程度的抑制作用。随着时间延长和JWH133浓度的增加,JWH133对HaCaT细胞体外增殖的抑制作用均逐渐增强(F=187.1、2678.9,P 0.05)。60μmol/L JWH133作用24 h后,凋亡率由(4.34±0.07)%(阴性组)增加至(21.77±0.40)%(JWH133组)(P 0.05)。20 ng/ml TNF-α能够诱导HaCaT细胞不同程度增加白细胞介素19(IL-19)、IL-22、IL-23等细胞因子的高表达,而30μmol/L JWH133处理后可降低上述细胞因子的表达。结论大麻素2型受体激动剂JWH133可抑制HaCaT细胞体外增殖、促进凋亡,且能够抑制TNF-α诱导的HaCaT细胞中一些重要免疫分子的表达。     

黑果枸杞水提取物抑制UVB辐射后HaCaT细胞的凋亡及p16、p53蛋白表达

目的：明确黑果枸杞水提取物对中波紫外线(UVB)辐射引起的HaCaT细胞凋亡及p16、p53蛋白表达的影响。方法： 体外培养HaCaT细胞,分为对照组、UVB组、UVB+黑果枸杞水提取物组,UVB照射剂量为30 mJ/cm2 UVB,黑果枸杞水提取物浓度为2 mg/mL。流式细胞仪检测各组UVB照射后24 h细胞凋亡率,Western blot检测各组HaCaT细胞p16、p53蛋白的表达水平。结果：与对照组（6.12±1.19）%比较,UVB组HaCaT细胞凋亡率为(74.89±3.90)%、UVB+黑枸杞水提取物组为（57.52±2.93）%,差异有统计学意义（P<0.05）。对照组p16和p53蛋白水平为0.1±0.03和0.21±0.07,UVB组为0.28±0.06和0.5±0.04、UVB+黑枸杞水提取物组为0.15±0.025和0.25±0.01,差异均有统计学意义（Ps<0.05）。结论：黑果枸杞水提物可抑制UVB引起的HaCaT细胞凋亡以及p16、p53蛋白表达。     

1,25-二羟维生素D3对HaCaT细胞增殖活性及基因组DNA和增殖相关基因启动子甲基化水平的影响

【摘要】 目的 探讨1,25-二羟维生素D3［1,25（OH）2D3］对人表皮角质形成细胞株HaCaT细胞增殖活性、基因组DNA总体甲基化水平及增殖相关基因启动子甲基化水平的影响。 方法 10-6、10-7、10-8 mol/L 1,25（OH）2D3作用HaCaT细胞24 h后,噻唑蓝（MTT）法检测不同浓度1,25（OH）2D3对HaCaT细胞增殖活性的影响;总体DNA甲基化试剂盒检测基因组DNA总体甲基化水平。10-6 mol/L 1,25（OH）2D3作用HaCaT细胞24 h后,实时定量聚合酶链反应（PCR）法检测DNA甲基转移酶（DNMT）和甲基结合蛋白（MBD）mRNA表达水平,甲基化特异性PCR（MS-PCR）检测凋亡相关基因程序化细胞死亡因子5（PDCD5）和基质金属蛋白酶组织抑制因子2（TIMP2）启动子区DNA甲基化状态。 结果 与溶媒对照组比较,10-6 mol/L 1,25（OH）2D3处理组HaCaT细胞增殖活性及基因组DNA总体甲基化显著降低（细胞活力：0.152 ± 0.027比0.290 ± 0.017,P < 0.01;总体甲基化：0.187 ± 0.071比0.316 ± 0.049,P < 0.05）,DNA甲基转移酶DNMT3a和DNMT3b mRNA水平显著降低（P值 < 0.01或0.05）,甲基结合蛋白MECP2和MBD2、凋亡相关基因PDCD5、TIMP2 mRNA水平显著升高（P值 < 0.01或0.05）。此外,MS-PCR结果显示,1,25（OH）2D3处理组PDCD5、TIMP2基因启动子区DNA甲基化水平（0.380 ± 0.135,0.460 ± 0.172）较溶媒对照组（0.720 ± 0.121,0.680 ± 0.133）显著降低（均P < 0.05）。 结论 1,25（OH）2D3可降低HaCaT细胞基因组DNA总体甲基化水平,调控DNA甲基化修饰基因表达。此外,1,25（OH）2D3可降低凋亡相关基因PDCD5、TIMP2特异性启动子区甲基化水平,诱导PDCD5、TIMP2基因表达增加,抑制HaCaT细胞增殖。 【关键词】 骨化三醇; 角蛋白细胞; DNA甲基化     

犀地凉血方通过LncRNA NEAT1/miR-485-5p/STAT3调控网络对HaCaT细胞增殖、凋亡影响的研究

目的探讨犀地凉血方对HaCaT细胞LncRNA NEAT1/miR-485-5p/STAT3调控网络及细胞增殖、凋亡的影响。方法以IL-17诱导的HaCaT细胞为研究对象, 通过qPCR、Western印迹法检测LncRNA NEAT1、miR-485-5p、STAT3 mRNA和蛋白在HaCaT细胞和正常人表皮角质形成细胞(NHEK细胞)中的表达。采用荧光原位杂交技术(FISH)观察LncRNA NEAT1、miR-485-5p在HaCaT细胞中的表达;采用双萤光素酶报告基因实验验证LncRNA NEAT1、miR-485-5p、STAT3之间的靶向调控关系。犀地凉血方煎煮取汁给予大鼠灌胃后采集含药血清, 以含药血清干预和/或LncRNA-NEAT1过表达载体转染HaCaT细胞, 将HaCaT细胞分对照组、过表达LncRNA NEAT1组、犀地凉血方组、犀地凉血方+过表达LncRNA NEAT1组, 采用qPCR、Western印迹法、流式细胞仪、CCK8等实验技术分别检测LncRNA NEAT1、miR-485-5p、STAT3表达及细胞增殖、凋亡情况。采用独立样本t检验、单因素方...     

角质形成细胞生长因子受体反义寡核苷酸对HaCaT细胞增殖的影响

目的 研究角质形成细胞生长因子受体反义寡核苷酸(KGFR ASODN)对角质形成细胞生长因子(KGF)促HaCaT细胞增殖效应的抑制作用。方法 HaCaT细胞体外培养,采用绘制生长曲线、MTT实验、集落形成实验研究KGFR ASODN对KGF促增殖效应的抑制作用。采用流式细胞仪研究KGFR ASODN对KGFR表达的影响。结果 反义序列1和反义序列2均可抑制HaCaT细胞的生长速度(P<0.05)。高于0.25μg/mL质量浓度反义序列1和反义序列2均可抑制KGF介导的HaCaT细胞增殖(P<0.05)。高于0.25μg/mL质量浓度反义序列1和反义序列2都可抑制KGF诱导的HaCaT细胞集落形成(P<0.05)。HaCaT细胞存在KGFR基础表达,高于0.25μg/mL质量浓度反义序列1和反义序列2均可抑制HaCaT细胞KGFR表达(P<0.05),抑制率呈浓度依赖性,正义序列核苷酸(S-ODN)对KGFR表达无抑制作用(P>0.05)。结论 KGFR ASODN可有效抑制KGFR表达,进而抑制KGF介导的HaCaT细胞过度增殖。