HIF-1α基因转染人胃腺癌SGC7901细胞对裸鼠移植瘤的影响及机制

目的 探讨低氧诱导因子(HIF)-1α基因转染人胃腺癌SGC7901对裸鼠移植瘤血管生成及EphA2表达的影响及其可能机制.方法 采用HIF-1α基因重组质粒pGCsi-shHIF-1α,转染胃腺癌SGC7901细胞并接种裸鼠(SGC7901/shRNA,实验组),建立裸鼠皮下人胃腺癌移植瘤模型,动态观测裸鼠肿瘤体积和质量;设SGC7901(未转染组)、转染空质粒的SGC7901(SGC7901/Neo,空载体组)为对照.观察移植瘤生长情况,8周后,获取移植瘤模型瘤组织,称取湿重,免疫组化SP法检测移植瘤组织的微血管密度,Western blot检测上皮细胞激酶A2(EphA2)表达.结果 与未转染组比较,空载体组瘤体积、质量改变不明显,HIF-1α转染的实验组的瘤体积、质量明显降低;HIF-1α转染的实验组诱导血管增生、形成血管生成拟态和EphA2蛋白表达较未转染组组、空载体组明显降低(P<0.05,P<0.01).结论 HIF-1α基因转染可明显抑制裸鼠人胃腺癌移植瘤的生长,该作用可能与其抑制肿瘤血管新生、形成血管拟态及EphA2蛋白表达有关.     

重组凋亡素对人卵巢癌裸鼠移植瘤生长抑制作用的影响

目的 观察凋亡素(VP3)基因真核表达质粒对人卵巢癌裸鼠异种移植瘤生长的抑制作用.方法 建立人卵巢癌(COC1)细胞裸鼠异种移植瘤模型.实验裸鼠分为四组:高剂量实验组(pcDNA-VP3质粒DNA,瘤内注射,100μg/只);低剂量实验组(pcDNA-VP3质粒DNA,瘤内注射,50μg/只);空载体对照组[pcDNA3.1(+)质粒DNA,瘤内注射,100μg/只];脂质体对照组(脂质体,瘤内注射,0.2mL/只).每3d测量皮下移植瘤长、宽径,按标准公式V=L×W2X0.52计算移植瘤体积.12天后处死裸鼠,称取瘤重.使用TUNEL法观察凋亡素对皮下移植瘤细胞凋亡程度的影响.结果 pcDNA9·vP3高剂量组和低剂量组卵巢癌裸鼠皮下移植瘤生长明显受抑制.高剂量组和低剂量组肿瘤生长抑制率分别为76%和52%;瘤重抑制率分别为71.9%和49.5%(P<0.05).TUNEL实验结果表明凋亡素在体内以凋亡方式诱导肿瘤细胞死亡.结论 重组凋亡素基因真核表达质粒具有抑制人卵巢癌裸鼠异种移植瘤生长作用.凋亡素在瘤组织中以诱导凋亡方式抑制卵巢癌裸鼠异种移植瘤生长.     

siRNA对VEGF蛋白表达的影响及对裸鼠移植肾癌的抑制作用

目的探讨siRNA沉默血管内皮生长因子(VEGF)基因对人肾癌裸鼠移植瘤VEGF蛋白的表达水平及生长抑制作用的影响。方法化学合成针对VEGF的siRNA序列,通过脂质体将VEGF-siRNA转染到ACHN细胞中,将转染VEGF-siRNA的ACHN细胞(A组)、转染空质粒的ACHN细胞(B组)及未转染的ACHN细胞(C组)分别接种于裸鼠背部皮下。在SPF环境中饲养裸鼠并观察各组裸鼠移植瘤的生长情况,每隔5d测定移植瘤体积大小(肿瘤的长轴L,短轴W,肿瘤体积V=1/2LW2),绘制肿瘤生长曲线,采用免疫组化及Western blot法测定裸鼠移植瘤组织切片中VEGF蛋白的表达水平。结果 A组小鼠移植瘤成瘤及生长明显缓慢,移植瘤的体积和质量均低于B、C组,差异有统计学意义(P<0.05);移植瘤组织切片免疫组化及Western blot法检测结果提示:与B、C组相比,A组中VEGF蛋白表达量降低,差异有统计学意义(P<0.05);而B、C组间瘤体的体积重量及VEGF蛋白表达差异均无统计学意义(P>0.05)。结论 VEGF在肾癌的发生、发展中起着重要作用,化学合成的VEGF-siRNA可特异性抑制肾癌细胞中VEGF的表达,抑制肿瘤的生长增殖。     

siRNA IRAK1基因转染人子宫内膜样腺癌HEC-1-B和JEC细胞对裸鼠成瘤的影响

目的探讨siRNA IRAK1基因转染人子宫内膜样腺癌细胞对裸鼠成瘤的影响。方法体外培养子宫内膜样腺癌细胞系HEC-1-B和JEC,随机分为空白对照组(Con组)、阴性对照组(siNC组)和siRNA IRAK1组,siNC组和siRNA IRAK1组分别转染空载质粒慢病毒、siRNA IRAK1慢病毒。采用Western blotting法检测各组IRAK1蛋白表达情况。将体外转染siRNA IRAK1慢病毒、siNC空载质粒慢病毒的人子宫内膜样腺癌细胞系HEC-1-B和JEC接种到裸鼠皮下,制备皮下移植瘤模型,观察各组小鼠状态及移植瘤的生长情况,50 d后处死裸鼠,剥取移植瘤观察其体积大小,并用Western blot检测各组移植瘤组织IRAK1的表达。结果与对照组比较,siRNA-IRAK1组在HEC-1-B和JEC中均有效地下调了IRAK1的表达,差异有统计学意义(P0.01);稳定转染siRNA IRAK1或siNC的HEC-1-B和JEC悬液,皮下注射裸鼠,24只裸鼠成瘤率为100%。与siNC组比较,稳定转染siRNA IRAK的HEC-1-B和JEC组裸鼠精神及活动能力良好,未见明显活动异常,体重未见进行性下降;第50天平均体重分别为(16.3±3.5)、(16.6±4.1)g,高于siNC组的(13.1±4.2)、(13.6±3.8)g,差异有统计学意义(P0.05)。50 d后观察siRNA-IRAK1组裸鼠成瘤的体积明显小于对照组,差异有统计学意义(P0.01);与siNC组比较,siRNA-IRAK1组肿瘤的生长速度慢,差异有统计学意义(P0.01)。Western blot结果显示,与siNC组比较,siRNA IRAK1处理的HEC-1-B和JEC组小鼠肿瘤组织中IRAK1蛋白表达水平分别降低59.3%和64.5%,差异有统计学意义(P0.05)。结论抑制IRAK1表达能降低子宫内膜样腺癌细胞增殖速度,抑制裸鼠移植瘤生长。     

AEG-1对裸鼠肝癌模型中肝癌细胞生长及肺转移的影响

摘要:目的 研究过表达和沉默 AEG-1基因对肝癌细胞生长的影响,以及 AEG-1基因在调节肝癌细胞定向肺转移 中的作用。方法 分别以携带过表达 AEG-1序列及对照基因序列的慢病毒(lentivirus)转染 SMMC-7721肝癌细胞株 (SMMC-7721-AEG-1-L;SMMC-7721-control-L);以携带shRNAAEG-1及对照shRNA 质粒(plasmid)转染SMMC-7721 细胞株(SMMC-7721-shAEG-1-P;SMMC-7721-control-P);使用实时定量 PCR 和 Westenblot检测 AEG-1的表达;随后 使用荧光素酶基因慢病毒包装颗粒转染上述4种稳定转染细胞株。使用上述细胞株分别建立3种裸鼠肝癌模型:皮下 移植瘤模型,原位移植瘤模型和血行播散模型;每种细胞株每一模型5只 Balb-c裸鼠,共60只。建立皮下移植瘤模型, 观测肿瘤的生长情况并绘制肝细胞肿瘤生长曲线;建立肝癌原位移植瘤和血行播散模型,采用生物发光活体成像技术及 组织病理学方法监测造模成功率及肿瘤在肝内、肝外转移情况。结果 通过肝癌皮下移植瘤模型可观察到 AEG-1过表 达组肿瘤体积显著高于对照组,且裸鼠肝脏组织出现弥漫性侵袭转移灶;在肝癌原位移植瘤和血行播散模型中可观察到 AEG-1过表达/沉默可以导致肝癌细胞肝内转移、肺转移率和转移灶数量显著增高/降低。结论 过表达 AEG-1基因可 促进肝癌细胞生长以及定向肺转移,沉默 AEG-1基因抑制肝癌细胞生长及定向肺转移。     

RNA干扰介导的Cdx2沉默对人胃癌细胞MGC-803裸鼠移植瘤生长的影响

目的 建立人胃癌裸鼠移植瘤模型,探讨Cdx2基因RNA干扰(RNAi)的重组慢病毒载体(pLL-Cdx2-siRNA)对人胃癌细胞MGC-803裸鼠移植瘤Cdx2基因表达和肿瘤生长的影响.方法 建立人胃癌细胞MGC-803裸鼠移植瘤模型,随机分为实验组(pLL-Cdx2-siRNA组),空载体组(pLL3.7组)和生理盐水组.隔天向各组动物肿瘤内分别注射Cdx2基因沉默的重组慢病毒载体pLL-Cdx2-siRNA、空载体pLL3.7或生理盐水0.2 mL,共6次,测量各组肿瘤体积的大小;11d后处死裸鼠,应用半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot技术检测移植瘤中Cdx2基因的表达,脱氧核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记(TUNEL)技术检测肿瘤细胞的凋亡.结果与生理盐水组和空载体组相比,实验组的肿瘤生长速度明显减慢(P＜0.05),肿瘤细胞Cdx2 mRNA和蛋白表达明显下降(P＜0.05);实验组肿瘤细胞的凋亡指数(16.7±5.6)％明显高于空载体组( 10.5±4.1)％和生理盐水组(11.2±4.3)％(P＜0.05).结论慢病毒载体pLL-Cdx2-siRNA瘤内注射可抑制人胃癌细胞MGC-803裸鼠移植瘤的生长.     

HIF-1α沉默对食管鳞癌血管生成拟态相关基因影响的体内研究

目的:探讨缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)基因沉默对人食管鳞癌细胞体内血管生成拟态相关基因表达的影响.方法:将食管鳞癌Eca109细胞株分为空白对照组(未转染组)、阴性对照组(转染空质粒组)和实验组(稳定转染重组质粒pGCsi-shHIF-1α组).接种裸鼠,观测裸鼠皮下移植瘤生长情况;HE染色观察各组肿瘤的异型性及...     

miR-614过表达抑制肺腺癌A549细胞增殖、侵袭及裸鼠移植瘤生长

目的:探讨miR-614过表达对肺腺癌A549细胞增殖、侵袭及裸鼠移植瘤生长的影响.方法:将培养至对数生长期的人A549细胞分为对照组、miR-NC组(脂质体转染miR-NC mimic)和miR-614组(脂质体转染miR-614 mimic).RT-qPCR检测每组A549细胞中miR-614的表达,CCK-8法检测每组A549细胞增殖活性;Transwell法检测检测每组A549细胞侵袭细胞数,Western Blot法检测每组A549细胞血管内皮生长因子(VEGF)、基质金属蛋白酶(MMP)-2、金属蛋白酶组织抑制因子-2(TIMP-2)和Ki-67蛋白的相对表达量.皮下种植0.2 mL各组A549细胞悬液(5 ×106/mL),构建裸鼠移植瘤的模型,每周测量1次移植瘤组织的体积,造模5周后进行移植瘤组织称重.结果:miR-614组A549细胞增殖活性和侵袭细胞数低于miR-NC组(P＜0.05),细胞VEGF、MMP-2和Ki-67蛋白表达低于miR-NC组(P＜0.05),TIMP-2蛋白表达高于miR-NC组(P＜0.05);miR-614组裸鼠移植瘤质量低于miR-NC组,且造模3周、4周和5周后,移植瘤体积低于miR-NC组(P＜0.05).结论:miR-614过表达可抑制A549细胞的增殖和侵袭,进而抑制肿瘤生长.     

RNA干扰血管内皮生长因子受体表达对人肺腺癌细胞的抑制作用

目的:观察人血管内皮生长因子受体(VEGFR)RNA干扰重组腺病毒(Ad-VEGFRshRNA)对人肺腺癌细胞株A549生长的抑制作用.方法:制备携带人VEGFR的RNA干扰重组腺病毒,转染A549细胞,通过荧光显微镜观察转染效率.应用Western印迹法检测A549细胞VEGFR蛋白的表达,MTT比色法测定活细胞数并绘制细胞生长曲线,细胞周期及集落形成试验测定细胞生长抑制情况.同时,制备裸鼠A549细胞移植瘤模型,观察肿瘤生长情况.结果:Western印迹法显示RNA干扰组VEGFR表达水平明显降低;细胞生长曲线表明,RNA干扰后细胞生长明显减缓;细胞周期及集落形成试验提示RNA干扰后肿瘤细胞生长受到明显抑制.裸鼠皮下移植瘤生长情况提示RNA干扰可以显著抑制肿瘤生长.结论:RNA干扰重组腺病毒Ad-VEGFRshRNA能有效抑制A549细胞中VEGFR的表达,并能抑制肿瘤生长.     

重组腺病毒Ad-IFN-λ1对荷瘤鼠肺腺癌A549细胞增殖的影响及其作用机制

目的:研究重组腺病毒Ad-IFN-λ1对肺腺癌A549细胞皮下移植瘤的影响及其作用机制.方法:建立A549荷瘤裸鼠模型后,随机分为3组,分别注入含有IFN-λ1的腺病毒(Ad-IFN-λ1组)、Ad-LacZ(空质粒组)和PBS(对照组).各组每周干预1次,共干预3次.每7天测量肿瘤体积,末次处理1周后全部处死小鼠,通...     

Survivin反义核苷酸对宣威肺腺癌移植瘤裸鼠模型作用的研究

目的选用宣威肺腺癌细胞裸鼠移植瘤模型,采用survivinmRNA的反义寡核苷酸(ASODN)抑制宣威肺腺癌细胞,观察其疗效,为进一步临床研究提供实验依据。方法建立宣威肺腺癌细胞XWLC-05裸鼠皮下移植瘤模型,选取48只成瘤裸鼠,随机分为:对照组、单纯脂质体转染(LIP)组、survivin正义寡核苷酸(SODN)组、survivinASODN组,通过皮下移植瘤内多点注射后,观察裸鼠一般情况、移植瘤体积,计算抑瘤率等。病理学检测各组肿瘤的变化以及对心脏、肝脏、肾脏的影响。结果 sur-vivinASODN组注射survivinASODN后,裸小鼠表现为生长速度较为缓慢,质量低于其他3组(P>0.05),其生长抑制率高于其他3组(P>0.05)。而对照组、LIP组、survivinSODN组在肿瘤质量及生长抑制率方面均无明显差异。病理检查见瘤组织中有大量的细胞坏死灶。各组裸鼠均未出现死亡,病理检查重要脏器未见明显损害。结论 survivinASODN能够抑制裸鼠皮下移植瘤的生长,未对其他脏器产生明显损害。     

KISS-1对裸鼠胃癌移植瘤生长的抑制作用

目的探讨KISS-1基因对裸鼠胃癌移植瘤生长的影响。方法通过脂质体介导将pc DNA3.1-KISS-1转染人胃癌细胞BGC-823,用Western blot检测转染前后KISS-1蛋白的表达。将转染pc DNA3.1-KISS-1的BGC-823细胞(转基因组)、转染空质粒的BGC-823细胞(空质粒转染组)和单纯BGC-823细胞(对照组)分别接种于BALB/C裸鼠,构建裸鼠胃癌移植瘤模型,测量肿瘤体积和瘤质量,并绘制肿瘤生长曲线;采用免疫组织化学法和半定量反转录-聚合酶链反应检测肿瘤组织中KISS-1蛋白和mRNA的表达。结果 KISS-1基因成功转入胃癌BGC-823细胞,转基因组KISS-1蛋白的表达较空质粒转染组和对照组显著增加(P<0.05);与空质粒转染组和对照组比较,转基因组裸鼠肿瘤生长速度显著减慢、肿瘤体积显著减小,瘤体质量显著减轻(P<0.05)。结论通过基因转染的方法能表达有活性的KISS-1,并能抑制裸鼠胃癌移植瘤的生长。     

毛蕊异黄酮对肺腺癌SPC-A1细胞生长及凋亡的影响

目的 建立肺腺癌SPC-A1细胞裸鼠移植瘤模型，探讨毛蕊异黄酮对肺腺癌移植瘤生长及凋亡的影响。方法 30只裸鼠(6～8周龄)适应性饲养一周后，将制备好的SPC-A1细胞悬液(浓度为5×10⁵个/mL)经腋下皮下注射，拟建造SPC-A1肺腺癌细胞移植瘤模型；按照裸鼠的重量及瘤体的体积大小，随机分为模型组、毛蕊异黄酮组、顺铂组，每组6只；记录各组裸鼠实验前后的体质量、瘤重、瘤体横径和纵径，并分析各组裸鼠模型的肿瘤抑制率，测估SPC-A1裸鼠移植瘤的体积大小及生长状况；通过末端脱氧核苷酸转移酶介导的脱氧尿苷三磷酸缺口末端标记(TUNEL)测定法测定SPC-A1细胞裸鼠移植瘤的凋亡状况；蛋白免疫印迹法(Western blot)测定各组瘤体中凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2的表达水平。结果 顺利构建了肺腺癌SPC-A1细胞裸鼠移植瘤的模型。与模型组比较，毛蕊异黄酮组裸鼠瘤的瘤重[(1.20±0.19) g vs (0.98±0.14) g]明显降低，差异有统计学意义(P<0.05)，且抑瘤率为18.33%，表明毛蕊异黄酮能有效抑制SPC-A1细胞裸鼠移植瘤的生长；TU...     

Apoptin对人膀胱癌裸鼠皮下移植瘤的抑瘤作用研究

目的探讨Apoptin质粒对人膀胱癌裸鼠皮下移植瘤的抑瘤作用。方法皮下注射T24细胞,建立裸鼠移植瘤模型,于肿瘤直径0.5cm大小时,多点注射脂质体包裹质粒pApoptin-EGFP,设立空质粒组、生理盐水组作为对照组,观察裸鼠肿瘤生长情况;5周后处死,绘制肿瘤生长曲线,计算抑瘤率,肿瘤组织石蜡包埋,常规切片,TUNEL法检测移植瘤凋亡情况。结果成功建立移植瘤模型,注射脂质体包裹pApoptin-EGFP质粒能明显抑制移植瘤生长;TUNEL检测凋亡率为(23.24±6.12)%,与对照组相比,差异有统计学意义(P<0.01)。结论Apoptin通过诱导凋亡能明显抑制人膀胱癌裸鼠皮下移植瘤生长。     

短发夹RNA沉默hTERT基因抑制裸鼠皮下人脑胶质瘤生长的实验研究

目的研究靶向人端粒酶逆转录酶（hTERT）的短发夹RNA（shRNA）对裸鼠人脑胶质瘤中hTERT基因表达的抑制作用,以及影响肿瘤增殖并诱导细胞凋亡的作用,为脑胶质瘤的基因治疗探讨新的依据。方法体外培养人脑胶质瘤U251细胞株,建立人脑胶质瘤裸鼠皮下接种模型。将成功造模的36只裸鼠随机分为3组（每组12只）。hTERT shRNA组肿瘤体内原位注射hTERT质粒shRNA（pshRNA）20μg＋脂质体60μl＋PBS;PBS组肿瘤体内原位注射PBS 150μl;空质粒组肿瘤体内原位注射空质粒20μg＋脂质体60μl＋PBS。观察肿瘤生长情况。苏木精-伊红染色观察肿瘤组织的病理改变,Western blot检测hTERT蛋白的表达,钙依赖性磷脂结合蛋白V＋碘化丙啶双染流式细胞仪测凋亡率。结果成功建立稳定的裸鼠U251细胞皮下移植瘤模型。治疗5周后hTERT shRNA组肿瘤体积较PBS组和空质粒组明显缩小,抑瘤率为58.2%;病理学检查hTERT shRNA组肿瘤生长受到抑制,肿瘤细胞散在稀疏,可见大量肿瘤细胞坏死及凋亡;Western blot示hTERT shRNA组hTERT蛋白表达受抑制;流式细胞仪检测hTERT shRNA组肿瘤细胞凋亡率明显高于PBS组和空质粒组（P〈0.01）。结论hTERT shRNA可在裸鼠移植瘤体内有效发挥作用,抑制人端粒酶逆转录酶蛋白在体内表达,从而能有效抑制裸鼠胶质瘤增殖生长,促进肿瘤细胞凋亡。     

双脱甲氧基姜黄素对肺腺癌细胞A549生长活性影响的初步研究

目的初步探讨中药姜黄的主要活性单体成分双脱甲氧基姜黄素体内外抗肺癌生长活性的作用.方法(1)应用形态学观察、MTT、流式细胞仪技术等研究双脱甲氧基姜黄素对传代培养人肺腺癌细胞系A549的生长形态、细胞周期等生物学特性的影响;(2)建立裸鼠人肺腺癌细胞A549移植瘤模型,腹腔注射双脱甲氧基姜黄素,研究其对裸鼠移植瘤生长的影响,同时观察双脱甲氧基姜黄素与传统化疗药顺铂联用对抑制裸鼠移植瘤生长有无增效作用.结果(1)双脱甲氧基姜黄素对体外培养的A549细胞有增殖抑制效应,显微镜下可见明显的形态改变,其IC50为12.108μg/ml,流式细胞仪显示细胞周期主要阻滞在S期,浓度增至15μg/ml时,出现明显的细胞凋亡现象;(2)双脱甲氧基姜黄素具有较好的抗人肺腺癌细胞A549裸鼠移植瘤生长作用,移植瘤重量及体积显著低于阴性对照组(P＜0 01);(3)双脱甲氧基姜黄素与顺铂联合应用能显著抑制A549细胞裸鼠移植瘤的生长,裸鼠移植瘤体积及瘤重均显著低于双脱甲氧基姜黄素和顺铂单药治疗组(P＜0 01).结论(1)双脱甲氧基姜黄素有明确的抑制体外培养人肺腺癌细胞A549恶性表型的作用;(2)双脱甲氧基姜黄素能明显抑制人肺腺癌细胞A549裸鼠移植瘤的生长;(3)双脱甲氧基姜黄素与顺铂联用对抑制A549细胞裸鼠移植瘤的生长具有相加作用.     

野生型p53基因转染对人肺腺癌细胞系A549 VEGF表达和肿瘤生长的影响

目的:研究外源性野生型p53(wtp53)基因对人肺腺癌细胞系A549血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响. 方法:将含有wtp53基因的pcDNA3.1-wtp53和空载体pcDNA3.1-neo质粒,通过阳离子脂质体转染A549细胞,应用半定量RT-PCR和ELISA技术检测其对VEGF表达情况的影响;将A549,A549/pcDNA3.1-neo和A549/ pcDNA3.1-wtp53细胞分别接种至裸鼠皮下,观察成瘤时间及瘤块大小;免疫组化法计数VEGF阳性细胞百分数并进行半定量分级. 结果:pcDNA3.1-wtp53转染组VEGF mRNA和蛋白表达均明显低于其他2组. pcDNA3.1-wtp53转染后裸鼠成瘤时间延长,瘤块生长缓慢. 结论:wtp53基因转染可抑制VEGF表达和肿瘤的生长.